（临床医学专业论文）tmprss2erg融合基因与psa及衍生物之间关系的相关研究.pdf

南开大学学位论文使用授权书 根据南开人学关于研究生学位论文收藏和利用管理办法，我校的博士、硕士学位获 得者均须向南开大学提交本人的学位论文纸质本及相应电子版。 本人完全了解南开大学有关研究生学位论文收藏和利用的管理规定。南开大学拥有在 著作权法规定范围内的学位论文使用权，即：( 1 ) 学位获得者必须按规定提交学位论文( 包 括纸质印刷本及电子版) ，学校可以采用影印、缩印或其他复制手段保存研究生学位论文， 并编入南开人学博硕士学位论文全文数据库；( 2 ) 为教学和科研目的，学校可以将公开 的学位论文作为资料在图书馆等场所提供校内师生阅读，在校园网上提供论文目录检索、文 摘以及论文全文浏览、下载等免费信息服务；( 3 ) 根据教育部有关规定，南开大学向教育部 指定单位提交公开的学位论文；( 4 ) 学位论文作者授权学校向中国科技信息研究所和中国学 术期刊( 光盘) 电子出版社提交规定范围的学位论文及其电子版并收入相应学位论文数据库， 通过其相关网站对外进行信息服务。同时本人保留在其他媒体发表论文的权利。 非公开学位论文，保密期限内不向外提交和提供服务，解密后提交和服务同公开论文。 论文电子版提交至校图书馆网站：h t t p ：2 0 2 1 1 3 2 0 1 6 1 ：8 0 0 1 i n d e x h t m 。 本人承诺：本人的学位论文是在南开人学学习期间创作完成的作品，并已通过论文答辩； 提交的学位论文电子版与纸质本论文的内容一致，如因不同造成不良后果由本人自负。 本人同意遵守上述规定。本授权书签署一式两份，由研究生院和图书馆留存。 作者暨授权人签字： 处童丝直、江垩 2 0 1 0 年0 5 月2 8 日 南开大学研究生学位论文作者信息 论文题目t m p r s s 2 e r g 融合基因与p s a 及衍生物之间关系的相关研究 姓名孙立锋学号 0 3 1 1 1 6 9 答辩日期 2 0 1 0 年0 5 月2 5 日 论文类别 博士口学历硕_ t 口硕士专业学位口高校教师口同等学力硕士口 院系所医学院专业临床医学 联系电话 1 3 8 1 0 7 5 8 7 7 8e m a i l a n d y s l f 16 3 c o r n 通信地址( 邮编) ：北京市海淀区复兴路2 8 号5 1 3 0 1 邮编1 0 0 8 5 3 备注：是否批准为_ f 公开论文 否 注：本授权书适用我校授予的所有博士、硕士的学位论文。由作者填写( 一式两份) 签字后交校图书 馆，非公开学位论文须附南开大学研究生申请非公开学位论文审批表。 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名：逊童丝2 0 1 0 年0 5 月2 8 日 非公开学位论文标注说明 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 口限制( 2 年)口秘密( 1 0 年)口机密( 2 0 年) 保密期限 2 0 年月日至2 0年月 日 审批表编号批准日期 2 0 年月 日 限制2 年( 最长2 年，可少于2 年) 秘密1 0 年( 最长5 年，可少于5 年) 机密2 0 年( 最长1 0 年，可少于1 0 年) 中文摘要 中文摘要 研究目的：回顾分析前列腺良性增生和前列腺癌患者的p s a 等相关病例资料， 在不同血清p s a 水平上，结合其不同的衍生物，得出不同p s a 水平患者融合基 因阳性率之间的关系。探索前列腺增生患者t m p r s s 2 e r g 融合基因表达情况 与前列腺切除术后的转归的关系。 研究方法：对1 9 9 6 年6 月2 0 0 2 年1 2 月之间来我院就诊并确诊的4 7 前列腺癌 和4 4 良性前列腺增生患者的相关病例资料进行回顾收集，并对前列腺增生患者 的预后进行随访。采用f i s h 法检测其前列腺穿刺标本或大体病理标本的 t m p r s s 2 一e r g 融合基因阳性表达情况。统计分析p s a 及其衍生物( p s a d 、 t p s a b m i 及p s a v ) 与t m p r s s 2 e r g 融合基因之间的关系。 结果：在4 7 例前列腺癌病理标本中，t m p r s s 2 一e r g 融合基因阳性病例占 7 4 4 7 ( 3 5 4 7 ) 。在融合阳性标本中，1 0 0 的前列腺癌病理标本( 3 5 3 5 ) 中e r g 基因发生断裂易位，并与t m p r s s 2 或其他基因发生融合；5 4 2 8 的病理标本 ( 1 9 3 5 ) e r g 基因发生缺失，e r g 残端与t m p r s s 2 基因发生融合；此外，另有 8 5 7 的病理标本( 3 3 5 ) 出现e r g 标记片段的重复。在4 4 例前列腺良性增生 患者中，有8 例伴发低分级的p i n ，其中有2 例t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性，融 合阳性率为2 5 ( 2 8 ) 。前列腺癌患者所有阳性计数的4 0 5 个细胞核中，8 7 1 6 ( 3 5 3 4 0 5 ) 发生了易位，1 1 6 0 ( 4 7 4 0 5 ) 发生了缺失，1 2 3 ( 5 4 0 5 ) 发生了 重复融合。按照前列腺癌患者确诊时的血清p s a 水平进行分层分析后，各组之 间t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性率之间没有统计学上的差异( p 0 0 5 ) 。确诊时 p s a 水平融合基因阳性组( 4 0 2 8 6 7 3 7n g m 1 ) 明显高于阴性组( 1 5 6 5 7 2 9 n g m 1 ) 。t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性的前列腺癌患者p s a v 、p s a d 和 t p s a b m i ，均比融合基因阴性患者高( p 2 0n g m l 时， t p s a b m i 才具有判断t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性有意义的界点值。t p s a b m i 最佳界点为0 9 1n g i n k g ，以此为界点时，敏感性和特异性分别为9 2 3 和 1 0 0 。p s a d 和p s a v 预测t m p r s s 2 e r g 融合基因的阳性概率可以不必对患者 进行血清p s a 水平分层，其最佳界点值分别为0 4 ln g m 3 m l 。1 和3 5 4n g i l l d 年 一。在此界点时，p s a d 的敏感性和特异性为6 5 7 和9 1 6 ，p s a v 的敏感性和特 中文摘要 异性为8 2 9 和6 6 7 。将患者按p s a 水平分组以后，p s a d 和p s a v 判断患者 t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性的敏感性和特异性更高。在4 4 例前列腺良性增生 患者中，伴有p i n 改变的t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性患者中，有一例进展为前 列腺癌，占融合阳性病例的5 0 ( 1 2 ) 。 结论：在前列腺癌中t m p r s s 2 e r g 融合基因存在易位、缺失和重复形式，其 中以易位形式为主，而重复融合现象较少出现。而前列腺良性增生患者中存在 易位和缺失形式，其基因融合形式主要形式为缺失。( 至) t m p r s s 2 e r g 融合基因 的存在与前列腺癌患者的血清p s a 、p s a v 、p s a d 和t p s a b m i 水平较高具有相 关性( p 2 0n g m l 时，t p s a b m i 才具有判断 t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性有意义的界点值。p s a d 和p s a v 预测 t m p r s s 2 e r g 融合基因的阳性概率可以不必对患者进行血清p s a 水平分层。当 按p s a 水平分层后，p s a d 和p s a v 预测前列腺癌t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性率 的敏感性和特异性均显著提高。( 亘) t m p r s s 2 e r g 融合基因的存在，可能增加了 前列腺良性患者进展为前列腺癌的机率。 关键词：前列腺癌t m p r s s 2 e r gf i s hp s a i i a b s t r a c t a b s t r a c t o b j e c t i v e ：t oa n a l y z et h er e l a t i o n s h i pb e t w e e np r o s t a t e - s p e c i f i ca n t i g e na n di t s d e r i v a t i v e s 、析t ht h et m p r s s 2 一e r gg e n er e a r r a n g e m e n ts t a t u s a n a l y z e da n d c o m p a r e dt h ed i f f e r e n c e so f t m p r s s 2 一e r gg e n er e a r r a n g e m e n ts t a t u sb e t w e e n b e n i g np r o s t a t i ch y p e r p l a s i aa n dp r o s t a t ec a n c e rp a t i e n t s ，d i s c u s st h er o l eo f t m p r s s 2 - e r gf u s i o ni np r o s t a t ec a n c e l m e t h o d s ：f o l l o wu p4 7p a t i e n t so fp r o s t a t ec a n c e ra n d4 4p a t i e n t so fb e n i g np r o s t a t i c h y p e r p l a s i aa d m i t t e dt op l a g e n e r a lh o s p i t a lf r o mj u n e ，19 9 6t o d e c ，2 0 0 8 f l u o r e s c e n c ei ns i t uh y b r i d i z a t i o n ( f i s h ) a s s a y sw e r eu s e dt oa s s e s s t m p r s s 2 一e r g g e n er e a r r a n g e m e n ts t a t u si nt h eb e n i g np r o s t a t i ch y p e r p l a s i aa n d p r o s t a t ec a n c e r s s t a t i s t i c a l l ya n a l y s i st h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt m p r s s 2 - e r gg e n e r e a r r a n g e m e n ts t a t u sa n dp s a ，p s a d ，p s a v , t p s a b m i r e s u l t s ：0 ) i nt h ep r o s t a t ec a n c e r , f u s i o nw a se v a l u a b l ei n3 5 4 7c a s e s ( 7 4 4 7 ) ，a l lt h e c a s e ss h o w e ds p l i t a n df u s i o nw i t l lt m p r s s 2o ro t h e rg e n s f u s i o nw a sd u et oa d e l e t i o ni n5 4 2 8 ( 19 35 ) c a s e s d u p l i c a t e df u s i o n sw e r ee n c o u n t e r e di n 8 5 7 ( 3 3 5 ) c a s e s b u ti nt h eb e n i g np r o s t a t i ch y p e r p l a s i ag r o u p ，t w o 谢t l lp i ns h o w e d t h ef u s i o ns t a t u s ( 2 5 ) i nt h e4 7r o s t a t ec a n c e rc a s e s ，4 0 5c e l l sw e r e c a c u l a t e d 8 7 1 6 ( 3 5 3 4 0 5 ) o f t h e ms h o w e ds p l i ts t a t u s ，f u s i o nw a sd u et oad e l e t i o n i n11 6 0 ( 4 7 4 0 5 ) 1 2 3 ( 5 4 0 5 ) w e r es e e nd u p l i c a t e df u s i o n s t h e r ei sn o d i f f e r e n c eb e t w e e na l lt h eg r o u p s ，w h e nt h ep a i e n t sw e r eg r o u p e db yp s a ( p 0 0 5 ) t h er a t eo ft h ep o s i t i v et m p r s s 2 一e r gf u s i o nw a si n c r e a s i n gw i t ht h eg r o w t ho f p s a t h ep s ao ft m p r s s 2 一e r gf u s i o ng e n ep o s i t i v eg r o u p ( 4 0 2 8 土6 7 3 7n g m 1 ) w a sh i g h e rt h a nt h en e g a t i v eg r o u p ( 15 6 5 士7 2 9n g m 1 ) a l s o ，t h ep s a v , p s a da n d t p s a b m io f t m p r s s 2 - e r gf u s i o ng e n ep o s i t i v eg r o u pw e r eh i g h e rt h a nt h e n e g a t i v eg r o u p ( p 2 0n g m l ，t p s a b m ic o u l dp r o g n o s i st h e p o s i t i v er a t eo ft m p r s s 2 - e r g f u s i o n t h es e n s i t i v i t ya n d s p e c i f i c i t yw e r e9 2 3 a n d1 0 0 w h e nt h ec u t - o f f p o i n to f t p s a b m lw a s0 9 1g m 2 k g 一( p s a da n d p s a vp r o g n o s i s i n gt h ep o s i t i v er a t eo f t m p r s s 2 一e r gf u s i o nw a si n d e p e n d e n to f i i i a b s t r a c t p a t i e n t sg r o u p e db yp s a l e v e l w h e np s a dw a s0 41n g c m im l - 17 t h eb e s tc r i t i c a l v a l u e t h es e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t yw e r e6 5 7 a n d9 1 6 w h e np s a vw a s3 5 4 n g m l - 1 y e a r - i , t h eb e s tc r i t i c a lv a l u e t h es e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t yw e r e8 2 9 a n d 6 6 7 g r o u p i n gt h ep a t i e n t sw i t hp s a c o u l di n c r e a s et h es e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t y i nt m p r s s 2 - e r gf u s i o ng e n ep o s i t i v eg r o u pa n dt h en e g a t i v eg r o u po fb e n i g n p r o s t a t i ch y p e r p l a s i a ，e a c hg r o u ph a do n ep a t i e n td e v o l o p e dp r o s t a t ec a n c e r c o n c l u s i o n s ：( t h i ss t u d yc o n f i r m st h a tt m p r s s 2 ：e r gi sf u s e di np r o s t a t e c a n c e r st h r o u g hd e l e t i o n ，s p l i t o fa n dd u p l i c a t e df u s i o n sb e t w e e ne r ga n d t m p r s s 2 t h ed e l e t i o na n ds p l i t o fw e r es i g n i f i c a n t l ym o r ef r e q u e n t l y o b s e r v e d ，d u p l i c a t e df u s i o nw a sr a r e l ys e e n t m p r s s 2 - e r gf u s i o na n di n c r e a s i n g t h el e v e lo fp s a 、p s a v 、p s a da n dt p s a b m iw a sr e l a t i v e ( p 2 0n g m 1 t p s a b m ic o u l dp r o g n o s i st h ep o s i t i v er a t eo ft m p r s s 2 一e r g f u s i o n p s a va n dp s a dp r o g n o s i s i n gt h ep o s i t i v er a t eo f t m p r s s 2 一e r gf u s i o n w a si n d e p e n d e n to fp a t i e n t sg r o u p e db yp s a l e v e l g r o u p i n gt h ep a t i e n t sb yp s a c o u l di n c r e a s et h es e n s i t i v i t ya n ds p e c i f i c i t y t m p r s s 2 - e r gf u s i o nm a yi n c r e a s e r i s kf o rac a n c e rd i a g n o s i s k e yw o r d s ：p r o s t a t ec a n c e rt m p r s s 2 - e r gf i s hp s a 目录 目录 第一章引言1 第二章实验设计7 第一节研究目的7 第二节研究意义。7 第三节研究对象8 第四节病例资料收集及p s a 数据处理8 第五节f i s h 检测前列腺组织t m p r s s 2 e r g 融合基因表达9 第三章结果与分析2 1 第一节临床资料与f i s h 异常阂值的建立2 l 第二节前列腺癌组。2 2 第三节前列腺良性增生组2 8 第四章讨论3 1 第一节p s a 在前列腺癌中的研究应用3 l 第二节t m p r s s 2 基因与e t s 基因家族3 5 第三节小结4 0 第五章结论4 3 第一节血清p s a 水平和t m p r s s 2 e r g 融合基因的关系4 3 第二节前列腺良性增生中t m p r s s 2 e r g 融合基因的意义。4 4 参考文献4 5 致谢5 1 v 目录 附录5 2 综述5 3 个人简历6 1 v i 符号说明 p c a p 烈 b p h p s a p v p s a v p s a d t r u s b m i f i s h s d 符号说明 p r o s t a t ec a n c e r 前列腺癌 p r o s t a ti n t r a e p i t h e l i a ln e o p l a s i a 前列腺上皮内瘤 b e n i g np r o s t a t i ch y p e r p l a s i a良性前列腺增生 p r o s t a t e - s p e c i f i ca n t i g e n前列腺特异性抗原 p r o s t a t ev o l u m e 前列腺总体积 p r o s t a t e - s p e c i f i ca n t i g e nv e l o c i t y前列腺特异性抗原速率 p r o s t a t e - s p e c i f i ca n t i g e nd e n i s t y 前列腺特异性抗原密度 t r a n s r e c t a lu l t r a s o n o g r a p h ye x a m i n a t i o n 经直肠超卢检查 b o d ym a s si n d e x体重指数 f l u o r e s c e n c ei ns i t uh y b r i d i z a t i o n 荧光原位杂交技术 s t a n dd e v i m i o n 标准差 v i i 第一章引言 第一章引言 前列腺疾病是男性泌尿生殖系统中的常见疾病，是人类所特有的疾病。前 列腺疾病可大致分为前列腺炎、前列腺增生( b p h ) 和前列腺癌( p c a ) 等疾病。 良性l j i 列腺增生( b e n i g np r o s t a t i ch y p e r p l a s i a ，b p h ) 是一种老年男性常见的 泌尿生殖系统疾病，其以尿频、尿急、进行性排尿困难为主要的临床表现。有 研究显示年龄是前列腺增生发病的基本条件之一，男性步入老年期后，由于睾 丸功能退化、雄激素水平降低及雌激素水平的相对升高，使前列腺过度增殖， 从而导致良性前列腺增生的发病率明显升耐1 , 2 , 3 j ，一般男性4 0 岁以后开始出现 前列腺增生的病理性改变，5 0 岁之后出现相关症状【4 j 。据中国统计年鉴报道， 2 0 0 8 年中国5 5 岁以上人口比例已由1 9 9 0 年的7 0 4 升高到1 0 2 1 。据世界卫 生组织预计，中国中老年男性的人口于2 0 1 0 年将接近一个亿，成为全球拥有最 多老龄男性的国家。人口老龄化的加剧，人均寿命的不断提高，将会使越来越 多的中老年男性遭受前列腺增生的困扰。 随着人类寿命的延长，前列腺癌的发病率也将不断的增高，目前前列腺癌已 经成为老年男性常见的一种恶性肿瘤性疾病。现在男性泌尿生殖系统恶性肿瘤 中，前列腺癌已经跃居首位，在男性十大恶性肿瘤中也己排位第六。 在欧美国家，前列腺癌是最为常见的恶性肿瘤，其死亡率在各类恶性肿瘤 疾病中居于第二位【5 】。据统计2 0 0 9 年美国男性新增前列腺癌1 9 2 2 8 0 例，占新增 恶性肿瘤的四分之一，死亡2 7 3 6 0 例，占全部恶性肿瘤死亡的9 4 。不过前列 腺癌发病率在地区分布上并不一致，在发达国家中前列腺癌新发病例占所有肿 瘤的1 9 ，而在发展中国家仅占5 3 t 引。据报道2 0 0 2 年，中国的前列腺癌标化 发病率为1 1 6 1 0 万，远远低于美国的1 2 4 1 8 1 0 万，中国为前列腺癌发病率较低 的国家【7 】。不过近年来国内部分经济发达地区前列腺癌的发病率迅速增高，其 中以上海市增长最快，其1 9 9 7 1 9 9 9 年的发病率较1 9 8 5 1 9 8 7 年增加了3 5 倍峭j 。 另据报道，上海市2 0 0 5 年相对于1 9 7 3 年而言，男性癌症粗发病率上升了4 6 5 ， 男性常见癌症的标化发病率上升最多的是前列腺癌( 5 9 6 ) 。1 9 8 6 年以后2 0 年 其标化发病率呈大幅持续上升，年度变化百分l p , ( a n n u a lp e r c e n tc h a n g e ，a p c ) 增 长达到1 0 0 4 1 9 1 。2 0 0 4 年，在长春市进行的一项前列腺疾病筛查研究显示，5 0 岁以上的老年男性中，前列腺癌发病率为0 5 7 t i o l ，从而提示国内前列腺癌潜在 第一章引言 发病率并不低。前列腺癌发病率逐年上升，其生存率却仍较低。1 9 8 8 1 9 9 5 年上 海市调查发现，前列腺癌患者的5 年生存率仅为3 6 5 t 1 1 】。国内前列腺癌的分期 特点和生存率共同显示，就诊患者多为晚期的前列腺癌患者，治疗效果不佳。 因此，在早期检测前列腺癌已成为一项重要的课题。研究显示，p s a 筛查能够 发现相当部分的无临床症状的前列腺癌。 前列腺特异性抗原( p r o s t a t es p e c i f i ca n t i g e n ，p s a ) 检测，自上个世纪八十年 代中期开始应用于临床，自此以后血清p s a 水平检测作为一种筛查f j 列腺癌的 手段被广泛应用。 p s a 是一种3 4 k d 的单体糖蛋白，在血液中存在游离态和结合态二种不同 的形式，游离态的游离p s a ( f p s a ) 不具有酵素活性，而结合态的p s a 是与q 1 胰凝乳蛋白酶( a c t ) 或q 2 巨球蛋白等抗蛋白酵素相结合而成的2 1 。p s a 的 表达是受到雄激素调控的 1 3 , 1 4 j 。雄激素是通过和细胞浆中的雄激素受体 ( a n d r o g e nr e c e p t o r ，a r ) 结合，使a r 进入细胞核并作用于靶基因上的雄激素反 应元件( a n d r o g e nr e s p o n s ee l e m e n t ，a r e ) ，从而在转录水平来发挥调控功能【l 5 1 。 p s a 是在由前列腺柱状上皮和腺管上皮细胞分泌的。当破坏了前列腺上皮 的血屏障之后，上皮细胞产生的p s a 就进到了人体血液中，w a n g 等p s a 认为 具有肿瘤特异性及组织特异性【l6 1 ，故测定血清中p s a 的含量是公认的前列腺癌 指标之一。 血清p s a 水平升高可发生在前列腺癌、良性前列腺增生、前列腺炎和梗塞 等前列腺疾病中。临床上检测前列腺增生和前列腺癌病人的p s a 水平，重叠性 较大，几乎无法设定一个明确的界值以p s a 值来进行区分【l7 1 。 虽然如此，但是2 0 0 9 年3 月在瑞典斯德哥尔摩召开的欧洲泌尿外科学会 ( e a u ) 上，他们报告了欧洲前列腺癌筛查随机研究( 一项关于前列腺癌筛查的迄 今为止的世界上规模最大的前瞻性研究) 的成果：以p s a 为主进行的前列腺癌筛 查可以使前列腺癌相关病死率总体下降2 0 ，这是首次通过循证医学的研究方 法，证实了前列腺癌筛查是可以降低前列腺癌总体死亡率的，因而积极实施前 列腺癌筛查是有意义的。 现代致癌理论认为，肿瘤和癌症的发生是环境因素和遗传因素相互作用的 结果。随着生物信息技术的不断发展，越来越多的研究发现，基因变异或染色 体改变在癌症的发生发展中起着重要的作用。在肿瘤中，大多数都有基因或染 色体改变现象，并呈现出其特异性，如染色体重排是白血病、淋巴瘤和肉瘤具 2 第一章引言 有特征性的改变【l 引。染色体的重排一般有两种形式：一为染色体通过缺失、重 复、易位、倒位等形式，使某基因的启动子或者增强子任意连接到另一原癌基 因的启动区域，从而激活这一原癌基因，如t c r 或i g 基因启动区域嵌入原癌 基因m y c ，引起t 细胞或者b 细胞恶性肿瘤发生l l9 。另一种形式为两个基因通 过转位的方式形成融合基因，表达出其融合蛋白，从而促进了癌症的发生，如 淋巴瘤中特异性的基因改变b c l 一2 i g h 2 0 ，2 1 1 。t o m l i n s 等f 2 2 1 采用肿瘤异常基因描述 分析技术( c a n c e ro u t l i e rp r o f i l ea n a l y s i s ，c o p a ) ，在前列腺癌中发现了受雄激素 调控的基因t m p r s s 2 和e t s 家族( e r g 、e t v l 、e t v 4 ) 的融合基因，并通 过荧光原位杂交技术( f l u o r e s c e n c ei ns i r eh y b r i d i z a t i o n ，f i s h ) 证实。 t m p r s s 2 基因定位于2 1 q 2 2 3 ，是一种前列腺特异性跨膜丝氨酸蛋白酶【2 3 】， 在人体正常的f i ；j y 0 腺细胞和前列腺癌细胞中均有表达。t m p r s s 2 基因的启动区 含有和雄激素反应因子相类似的序列结构，在雄激素敏感的前列腺癌细胞系中 受雄激素的诱导而表达 2 4 , 2 5 1 。在前列腺癌和前列腺良性增生组织中，t m p r s s 2 基因表达明显升高。 e t s 转录因子包括3 0 多个家族成员【2 酬，具有复杂的结构和功能，通过调节 细胞增生、分化、凋亡及细胞与细胞间相互作用，在许多生理和病理过程中发 挥重要作用1 27 。 近年来，在前列腺癌中发现了分别定位于2 1 q 2 2 2 、7 p 2 1 2 、1 7 q 2 1 的e r g 、 e ，l 、e t v 4 等基因的表达，其中e r g 在前列腺癌和e w i n g 肉瘤等均有表达， 而e t v l 、e t v 4 主要在前列腺癌表达1 2 引。 前列腺癌中t m p r s s 2 e t s 融合基因阳性率报道不一。t o m l i n s 等的研究发 现t m p r s s 2 e t s 融合基因的阳性表达率高达7 9 1 2 2 】，r u b i n 等发现检测的前列 腺癌组织标本中8 0 都有t m p r s s 2 e t s 融合基因【2 9 1 ，而亦有报道 t m p r s s 2 e r g 融合基因阳性率仅为4 3 t 3 0 】。r u b i n 等还报道了在病理诊断前 列腺上皮内瘤( p i n ) 组织中也存在融合基因的阳性表达，其阳性表达率近 2 0 【2 9 1 。 前列腺癌发生发展中可能存在着多种途径的激活，而融合基因可能在其中 发挥重要的作用。自t o m l i n s 等利用癌症异常基因描述分析技术在前列腺癌中发 现融合基因t m p r s s 2 e r g 及t m p r s s 2 e t v l 以来，越来越多的学者开始对 t m p r s s 2 e t s 融合基因进行研究。 e t s 基因重排可能是促进前列腺肿瘤发展的一个关键的事件：重排作为一 3 第一章引言 个早期事件出现，而且在肿瘤转移和去势耐受阶段持续表达。但是，e t s 基因 自身的改变不足以促进癌的产生1 2 引。t m p r s s 2 e r g 和中间缺失是前列腺癌中 具有侵袭性和致命性的分子亚型，与雄激素耐受疾病相关，提示在前列腺癌发 生发展中起着重要作用p 。t o m l i n s 亦发现f ； 列腺癌中e r g 存在过表达，其认 为t m p r s s 2 e t s 融合基因导致t m p r s s 2 基因中a r e 增强子被破坏，继而引 起e t s 基因的过表达，t m p r s s 2 e r g 融合基因是导致e r g 过表达的最可能原 因，是前列腺癌发生中的关键事件。e r g 过表达可能通过激活c m y c 和破坏 前列腺上皮细胞的正常分化过程来促进癌变。通过与未发现融合基因的前列腺 癌病例对照发现，以t m p r s s 2 与e r g 重复融合和e r g5 端中间缺失为特征( 被 称为2 + e d e l ) 的前列腺癌，更容易出现p s a 生化复发，其预后较差【3 2 】。 t m p r s s 2 e t s 融合基因在前列腺癌中具有高特异性，有望成为一项前列腺 癌诊断和治疗、判断预后的生物标记物，前列腺癌中t m p r s s 2 e t s 融合基因的 发现对于前列腺癌早期诊断具有重要意义。 正是由于t m p r s s 2 e r g 融合基因对于预后的预测作用和前列腺癌治疗的 指导意义，才得到了广泛的研究。在目前的研究中，t m p r s s 2 e r g 融合基因与 p s a 及其衍生物之间关系的相关报道并不多见。 p s a 的表达是受到雄激素调控的【1 3 , 1 4 j 。雄激素是通过和细胞浆中的雄激素 受体( a n d r o g e nr e c e p t o r ，a r ) 结合，使a r 进入细胞核并作用于靶基因上的雄激 素反应元件( a n d r o g e nr e s p o n s ee l e m e n t ，a r e ) ，从而在转录水平来发挥调控功能 【l 副。而t m p r s s 2 e r g 融合基因也在人体正常的前列腺细胞和前列腺癌细胞中 均有表达。与p s a 相类似，t m p r s s 2 基因的启动区含有和雄激素反应因子相类 似的序列结构，在雄激素敏感的前列腺癌细胞系中受雄激素的诱导而表达 2 4 , 2 5 】。 在前列腺癌和前列腺良性增生组织中，t m p r s s 2 基因表达明显升高。 在本课题的相关研究中，一方面基于两者的表达情况都与雄激素密切相关， 将结合前列腺癌和前列腺增生患者的相关病例资料，主要研究t m p r s s 2 一e r g 融合基因和p s a 水平之间是否相关。分析并比较两组之间t m p r s s 2 e r g 融合 基因阳性表达率以及其基因融合形式之间的差异。 另一方面，大量研究发现，t m p r s s 2 e r g 融合基因在前列腺良性增生组织 中未见表达，而p i n 和前列腺癌组织中中表达率逐渐由2 0 升至7 0 左右， t m p r s s 2 e r g 融合基因可以促进前列腺正常细胞向癌细胞转化。对此本实验将 采用f i s h 技术，检测前列腺良性增生患者t m p r s s 2 e r g 融合基因表达情况， 4 第一章引言 并对其预后进行随访，以期探索t m p r s s 2 e r g 基因表达是否与前列腺良性增 生患者术后的转归相关。 5 第一章引言 6 第二章实验设计 第二章实验设计 弟一早 头题阪丌 第一节研究目的 2 1 1p s a 及其衍生物与t m p r s s 2 - e r g 融合基因阳性率的关系 在不同血清p s a 水平上，结合其不同的衍生物，得出不同p s a 水平患者融 合基因阳性率之间的关系。 2 1 2 前列腺增生患者t m p r s s 2 - e r g 融合基因表达情况与前列腺切除术 后的转归的关系 对前列腺良性增生患者t m p r s s 2 e r g 融合基因表达情况进行检测，并对 其术后的转归进行随访，以发生前列腺癌为随访终点事件，分析并比较有无癌 症发生两组之间的t m p r s s 2 e r g 基因融合特征，初步探讨t m p r s s 2 e r g 融 合基因与前列腺良性增生患者转归之间的关系。 第二节研究意义 本课题探索研究t m p r s s 2 e r g 基因表达在前列腺良性增生患者中与其前 列腺切除术后的转归是否相关，对前列腺良性增生患者的监测、筛查以及预后 预测有着重要意义。 由于基因检测存在其局限性，所以难以得到广泛的推广。 一方面是因为基因检测所需要的专业设备和相关技术人员要求都非常高， 一般医院难以实施；另一方面，基因检测的费用较高，患者和家属的经济负担 较重。 因而本课题也将同时研究p s a 与t m p r s s 2 e r g 融合基因发生的关系，利 用定期测定的p s a 水平来预测其融合发生率具有一定的临床意义。 7 第二章实验设计 2 3 1 前列腺癌患者 第三节研究对象 4 7 例于1 9 9 6 年4 月 - 2 0 0 2 年1 2 月间，在解放军总医院经前列腺穿刺活检 确诊时无远处转移( t 2 t 4 n x m o ) 并接受雄激素最大限度阻断治疗的前列腺癌 患者，平均年龄7 6 0 5 3 ( 6 1 - - 8 5 ) 岁。治疗前均经过c t 或核磁共振以及核 素骨扫描等影像学检查，排除了远处转移。全部病例诊断时未接受任何前列腺 疾病的相关治疗。 2 3 2 前列腺良性增生患者 检索1 9 9 6 年4 月 - - 2 0 0 2 年1 2 月间，且年龄在6 1 - - - 8 5 岁的，在解放军总医 院经前列腺切除术后病理确诊的前列腺良性增生患者，和上述前列腺癌患者进 行组间配对。 有以下任一情况的病例不予纳入。 ( 1 ) 病例确诊前曾有长期服用对血清p s a 有明显影响的药物史或前列腺相 关手术史。 ( 2 ) 病例资料不完整，以致不能提供本课题所需数据者。 ( 3 ) 失访。 第四节病例资料收集及p s a 数据处理 2 4 1记录各组患者的一般资料 收集并记录1 9 9 6 年4 月 - - 2 0 0 2 年1 2 月间，在解放军总医院经前列腺穿刺 活检确诊时无远处转移( t 2 一t 4 n x m 0 ) 并接受雄激素最大限度阻断治疗的前列 腺癌患者及经前列腺切除术后病理确诊的前列腺良性增生患者的相关病例资 料：年龄、身高、体重、血清p s a 及p s a 检测时前列腺体积、治疗手段及治疗 时间和预后。 各组数据来源如表2 1 所示： 8 第二章实验设计 表2 1 随访资料来源 数据项目 一般资料 病理确诊 前列腺体积 手术资料 化验资料 身高、体重 术后康复资料 预后资料 死亡患者资料 数据来源 病案 由两名医师根据患者的穿刺或术后病理共同评定 病案( 经直肠超声检查) 、门诊随访 病案( 手术记录、术中护理记录、麻醉记录、术后病程记录) 病案( 化验单、门诊病案) 病案( 护理记录、病程记录) 门诊随访、再次入院记录、门诊预约回访、 门诊随访、再次入院记录、电话随访 病案( 再次入院记录) 2 4 2 血清p s a 测定值的剔除标准 ( 1 ) p s a 检测时有急性尿储留； ( 2 ) p s a 检测时合并急性前列腺炎； ( 3 ) p s a 检测前一周曾行f j 列腺按摩、直肠前列腺穿刺活检、膀胱镜检查。 2 4 3p s a 衍生物的计算 ( 1 ) p s a d 计算：行经直肠前列腺b 超检查，分别测量前列腺的左右径( w ) 、 上下径( l ) 和前后径( h ) ，用公式v = ( w l h ) 6 计算前列腺体积。血清p s a 值除 以前列腺体积即得到p s a d ，即p s a d = p s v 。 ( 2 ) p s a v 计算：记录前列腺良性增生及前列腺癌