（农药学专业论文）重要食用林产品中农药多残留测定方法研究.pdf

捅要 竹笋、香菇等是我国传统的食用林产品。为了满足日益增加的消费需求，食 用林产品的种植面积和产量快速增长，食用林产品的质量安全问题也受到广泛关 注。农药残留是影响食品安全的重要因素，建立食用林产品中农药残留检测方法 对科学评价其安全性具有重要意义。 本文以建立竹笋、香菇等食用林产品中农药多残留检测方法为目标，采用 g c m s s i m 检测，研究、优化竹笋等样品前处理方法，通过添加回收试验，评 价了方法准确性、灵敏度等指标，并对实际样品中农药残留量进行检测。主要研 究结果如下： 1 以竹笋为基质，比较了机械振荡提取后柱层析净化、不净化直接检测以及 q u e c h e r s = 种不同的前处理方法，实验结果表明，机械振荡提取后柱层析净化 的平均回收率为3 2 2 - 41 7 0 ，实验过程中操作繁琐，耗时较多；机械振荡提 取后直接检测的平均回收率为2 6 4 哆扣1 1 0 6 ；q u e c h e r s 法的平均回收率为 7 1 9 1 0 8 3 ；确立以q u e c h e r s 法为前处理方法改进的基础。 2 对q u e c h e r s 法的优化包括：超声波提取时间的比较，选取3 m i n 、5 r a i n 、 1 0 m i n _ _ 三个提取时间，得到农药的平均回收率分别为7 8 1 0 o , - - 1 2 7 8 ，7 1 9 1 1 1 4 ，6 1 5 胁1 1 8 o ，优化后的提取时间为3 m i n ；提取溶剂用量的比较， 含1 h a c 的乙腈用量为1 0 m l 、1 5 m l 和2 0 m l ，对食用林产品中农药的平均 回收率分别为7 1 9 1 0 8 3 、6 4 1 0 o - , 1 4 6 9 和6 5 2 1 5 5 3 ，优化后的提 取溶剂用量为1 0 m l ；固相吸附剂p s a 的用量比较，分别为8 0 m g 、1 0 0 m g 、 1 5 0 m g 时，竹笋中3 3 种农药的平均回收率分别为5 3 1 - - , 1 3 5 7 、6 1 4 1 1 6 7 和6 2 0 1 0 2 3 ，优化后的p s a 用量为8 0 1 0 0 m g 。 3 添加回收实验结果表明，添加浓度为0 2 m g k g 、l m g k g 和2 m g k g 时， 竹笋中平均回收率分别为7 1 6 0 o - 1 0 2 9 、7 2 3 1 1 2 5 和7 1 9 0 o , 1 0 8 3 ，变 异系数分别为2 9 0 , - - - 1 7 1 、o 5 0 旷1 8 5 和2 2 0 o , 1 5 4 ；香菇中平均回收率分别 为7 0 1 1 2 2 8 、7 1 9 0 0 , - 1 1 3 2 、7 2 4 l1 5 4 ，变异系数分别为2 9 - 1 7 1 、 2 0 0 旷1 7 8 、1 5 0 o , - - 1 8 9 ，能够满足农药残留分析要求，3 3 种农药的最低检 出浓度在0 0 013 m g k g , - , 0 012 5 m g k g 之间。 4 以板栗、猕猴桃、山楂等食用林产品为对象，研究了方法的基质适用性， 结果表明，猕猴桃中平均回收率为7 5 1 1 1 4 1 ，变异系数在2 3 0 o - , 1 9 2 之间； 板栗中平均回收率为7 6 5 0 o , - , 1 1 2 9 ，变异系数在2 2 0 o , - , 1 8 8 之间；山楂中平均 回收率为7 0 3 0 o - - 1 0 3 3 ，变异系数在1 8 1 8 8 之间。 5 使用优化后的方法进行检测，分析了分别采自安徽省合肥市、北京市、 河北省保定市的农贸市场的样品。检测结果显示，在保定市的板栗中检出了灭菌 丹，残留量约为0 3 2 m g k g 。 关键词：农药多残留分析；重要食用林产品；竹笋：香菇；q u e c h e r s ： g c m s - s 蹦； i i a b s t r a c t b a m b o os h o o ta n dm u s h r o o ma r eb o t ht r a d i t i o n a le x p o r tp r o d u c t so fo u r c o u n t r y n o wt i m em o r ea n dm o r ep e r s o np a ya t t e n t i o nt ot h es e c u r i t yo ff o r e s t f o o d s s oe s t a b l i s h e dt h ea n a l y s i sm e t h o do ft h ed e t e r m i n a t i o no fp e s t i c i d e s m u l t i r e s i d u e si nf o r e s tf o o d si sv e r yi m p o r t a n t t h i sa r t i c l ed i s c u s sf o ran e w m e t h o dt od e t e c t i n g3 3p e s t i c i d e sr e s i d u e s ( i n c l u d e d ：o r g a n o p h o s p h o r u s ， o r g a n o c h l o r i n e s ，p y r e t h r o i d sa n dc a r b a m a t e se t c ) i nm a i nk i n d so ff o r e s tf o o d s t h em e t h o di sb a s e do nq u e c h e r sa n dg c m s s i m a n dw ea l s oo p t i m i z ef o r q u e c h e r s l a s t l yw ei n v e s t i g a t e dp e s t i c i d er e s i d u e si nm a i n k i n d so ff o r e s t f o o d s ，t h es m p l e sw e r ef r o ma n h u i ，b e i j i n g , h e b e he t c t h em a i nr e s u l t sw e r e s u m m a r i z e da sf o l l o w f i r s t l y ，w ec o m p a r ew i t h3m e t h o d sf o rs a m p l ep r e p a r a t i o n ，t h e3m e t h o d s a v e r a g er e c o v e r i e sw e r e3 2 2 - 1 1 7 0 ，2 6 4 一1 1 0 6 a n d7 1 9 一1 0 8 3 r e s p e c t i v e l y t h o u g ht h e r e s u l t sw ec h o o s eq u e c h e r sa st h ec o m p a t i a b l eo n ef o r s a m p l ep r e p a r a t i o n ，a n dt h e no p t i m i z i n gt h em e t h o da st h ef o l l o wa s p e c t s e x t r a c t i n gt i m e ：t h ea v e r a g e r e c o v e r i e sf r o mb a m b o os h o o te x t r a c t e dw i t h u l t r a s o n i cm e t h o db y3 , 5a n d1 0 m i nw e r e8 1 一12 7 8 ，7 1 9 111 4 ， 6 1 5 - 1 1 8 o r e s p e c t i v e l y , t h eo p t i m a le x t r a c t i n gt i m ew a s3m i l l s v o l u m eo f e x t r a c t i n gs o l v e n t ：t h ev o l u m eo fe x t r a c t i n gs o l v e n tw e r e10 m l ，15 m la n d 2 0 m l r e s p e c t i v e l y , a n dt h ea v e r a g er e c o v e r i e sf r o mb a m b o os h o o te x t r a c t e d w e r e7 1 9 - 1 0 8 3 ，6 4 1 - 1 4 6 9 ，6 5 2 1 5 5 3 r e s p e c t i v e l y , t h eo p t i m a l v o l u m eo fe x t r a c t i n gs o l v e n tw a s1 0 m l d o s a g eo fp s a ：t h ea v e r a g er e c o v e r i e s o fb a m b o os h o o t p u r i f i e db ya d d e d8 0 ，1 0 0a n d1 5 0 m gp s a w e r e5 3 1 - 1 3 5 7 - 6 1 4 1 1 6 7 a n d6 2 0 0 o 1 0 2 3 r e s p e c t i v e l y , t h eo p t i m a ld o s a g eo f p s aw a s8 0 1 0 0 m g a p p e n df o r3c o n s i s t e n c e si nb a m b o os h o o ta n dm u s h r o o m ，t h e yw e r e 0 2 m g k g 1 m g k ga n d2m g k g t h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e7 1 6 一 1 0 2 9 ，7 2 3 一1 1 2 5 a n d7 1 9 一1 0 8 3 r e s p e c t i v e l y , a n dt h er e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o no f2 9 一1 7 1 ，o 5 - 1 8 5 ，2 2 - 1 5 4 r e s p e c t i v e l yi n b a m b o os h o o t t h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e7 0 1 - 1 2 2 8 ，7 1 9 一1 1 3 2 ， 7 2 4 - 1 1 5 4 r e s p e c t i v e l y , a n dt h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no f 2 9 一1 7 1 ，2 o 一1 7 8 ，1 5 一1 8 9 r e s p e c t i v e l yi nm u s h r o o m t h el o d f o r3 3p e s t i c i d e sh a v ear a n g ef r o m0 0 0 1 3 m g k gt o0 0 1 2 5 m g k g , f i tt ot h e c o u n t r y sd e m a n d s i u s ec h i n e s eg o o s e b e e r y , c h e s t n u t , a n dh a w k t h o r nt ot e s t i f yt h em e t h o d s a p p l i c a b i l i t y , d e t e c tt h e s es a m p l e sb yt h eo p t i m i z e dm e t h o da n dt h er e s u l t sw e r e s u m m a r i z e da sf o l l o w s ：t h ea v e r a g er e c o v e r i e so f3 3p e s t i c i d e sh a v ear a n g e f r o m7 5 1 t o1 1 4 1 ，a n dt h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no f2 3 一1 9 2 i n c h i n e s eg o o s e b e e r y , t h ea v e r a g er e c o v e r i e sh a v ea r a n g ef r o m7 6 5 t o1 1 2 9 a n dt h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no f2 2 - - - 18 8 i nc h e s t n u t , t h ea v e r a g e r e c o v e r i e sh a v ear a n g ef r o m7 0 3 t o1 0 3 3 ，a n dt h er e l a t i v es t a n d a r d d e v i a t i o no f1 8 户1 8 8 i nh a w k t h o r n l a s t l y , w ei n v e s t i g a t e ds a m p l e so f3 3p e s t i c i d e sc o n t a m i n a t e db ya n h u t , b e i j i n ga n dh e b e ip r o d u c eo nt h eb a s i so ft h eo p t i m i z e dm e t h o d t h er e s u l to f i n v e s t i g a t i o ni n d i c a t e d t h a tc h e s t n u to fh e b e ip r o v i n c ew a sd e t e c t e d , t h e p e s t i c i d ew a sf o l p e t , c o n c e n t r a t i o nw a so 3 2m g k g k e yw o r d s ：m u l t i r e s i d u e s ；m a i nk i n d so ff o r e s tf o o d s ；b a m b o os h o o t ； m u s h r o o m ；q u e c h e r s ；g c m s s i m i v 术语及略语英文全称 g m g k g m l g m l m m h r r a i n g c m s e c d g c m s m 哏i ， l o d l o q s d r s d 术语及略语表 g r a m m i l l i g r a m k i l o g r a m m i l l i l i t e r g r a m m i l l i l i t e r m i n u t e h o u r r e v o l u t i o np e rm i n u t e g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t e r e l e c t r i cc a p t u r ed e t e c t o r g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r u m m a x i m u mr e s i d u el i m i t l i m i to fd e t e c t i o n l i m i to f q u a n t i f i c a t i o n s t a n d a r dd e v i a t i o n r e l a t e ds t a n d a r dd e v i a t i o n v i 中文全称 克 毫克每千克 毫升 克每毫升 分钟 小时 每分钟转数 气相色谱 质谱 电子捕获检测器 气谱与质谱联用 最大残留限量 检测限 定量限 标准偏差 相对标准偏差 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间：z 彦年月2 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 黼师签名：盥 帆炒年月肋 1 前言 覆盖在大地上的郁郁葱葱的森林，是人类拥有的一笔巨大而又最可珍贵的 “绿色财富 ，它不仅能够调节地球环境、气温，更重要的是可以提供给我们丰 富的食物来源大量可食用的林业产品。食用林产品是目前风行世界的健康食 品之一，他们以自身高营养、味鲜美等优点为大众所喜爱，其中竹笋、香菇等也 是近年来我国农产品出口创汇的重要组成部分。 1 1 选题背景 竹子是重要的森林资源之一，全世界竹类植物约有7 0 多属1 2 0 0 多种，主要分 布在热带及亚热带地区，中国竹类资源十分丰富，有适于热带生长的合轴型丛生 竹种、亚热带生长的单轴型散生竹种和高海拔高纬度地区生长的耐寒性强的复轴 型混生竹种。据统计，全国竹类植物共有4 8 个属，5 0 0 多种，这些竹种分布在北 纬4 0 0 以南的广大国土上。自古以来，人们对竹资源的利用就从来没停止过，竹 笋作为蔬菜来食用就是其中之一【i 】。竹笋的品种繁多，按季节分类有春笋、秋笋、 冬笋；按形状分类有笔杆笋、鞭子笋、打卦笋、龙须笋、牛角笋；按质地分类有 鲜笋、干笋；按产地分类有茅山笋、天目笋掣2 1 。中国可食用竹笋有2 0 0 多种， 品质优良的笋用竹3 0 多种，食用笋竹占竹林总面积6 9 3 9 【3 】。竹笋1 ：2 1 感风味独特， 含有丰富的食用纤维，蛋白质含量高达3 0 0 - 7 5 0 m g 1 0 0 9 鲜重，素有山中珍品的 美称【4 】。随着人们生活消费水平的提高，市场需求不断增加，各种竹林产品的生 产、加工与贸易已成为振兴山区经济、带领农民脱贫致富奔小康的重要经济支柱。 据不完全统计，目前我国竹笋业年产值已达约4 5 0 亿元，其中出口创汇近5 亿美元。 我国鲜笋产量逐年递增，已从1 9 8 0 年的3 9 万t 增加到1 9 9 0 年的1 2 0 万t ，猛增到目前 的2 5 0 万t 以上【5 卅。 食用菌在2 1 世纪已成为人类的营养性和功能性食品，近年来由于日本国内明 令禁止滥砍滥伐林木用于菇类的养殖，导致这个世界上香菇栽培技术最为先进的 国家之一的香菇产量直线下降；但是，由于香菇自身所具有的食疗保健等作用， 消费者对其青睐有加，需求量呈逐渐增长的态势，巨大的供求缺口，急需通过进 口来补充。统计数据显示，日本2 0 0 4 年从我国进口的干鲜香菇，分别较上年度增 长2 8 和4 9 ，该趋势将继续保持并加强。韩国原为我国出口香菇的市场竞争对 手，近年来也不断加大从我国进口的数量，借以维持其消费需求【7 】。多种食用林 产品的种植带动了加工行业的发展，竹笋、香菇、板栗等的栽培及加工产业更成 为浙江、福建、江西、安徽南部等省和地区的新经济增长点。但是，近年来森林 病虫害的发展已超过了森林火灾给林业发展带来的危害，导致国民资产的严重损 失，制约了林产业的发展速度【8 j 。 森林病虫害是森林生态环境恶化，由生物引起的一种严重的自然灾害，是制 约我国林产业可持续发展的重要因素，已严重威胁到我国森林资源和生态安全。 松毛虫、杨树天牛等一批常发性病虫害尚未得到有效控制，一些次要病虫害在部 分地区逐渐形成新的威胁，外来害虫的入侵，使虫害不断发生，灾情十分严峻9 1 。 2 0 0 6 年全国林业有害生物发生属偏重发生年份，发生面积1 0 9 7 万公顷，较去年同 期增力n 2 0 。其中虫害8 2 8 万公顷，病害1 0 4 万公顷，另外，森林有害植物发生3 0 万公顷。2 0 0 7 年全年发生面积1 2 5 7 万公顷( 其中重度以上1 5 7 万公顷，成灾面积 3 0 万公顷) ，较上年增j 7 1 1 4 。其中：虫害面积9 0 0 万公顷，病害面积1 0 4 万公顷， 鼠( 兔) 害面积2 2 0 万公顷，有害植物面积3 3 万公顷。今年1 月以来，我国1 9 个省 区市发生历史罕见的低温雨雪和冰冻天气灾害，造成近19 0 0 万公顷林木和竹林受 害，为钻蛀性害虫、竹林病害等次生生物灾害的暴发提供了有利条件。有关专家 预测，2 0 0 8 年全国主要林业有害生物又将呈偏重发生。 面对如此严峻的森林病虫害形势，如何解决是我们必须认真思考处理的。以 颇具代表性的竹林为例，竹蝗、竹螟、竹蝉是危害竹林的三大害虫【1 0 】。危害轻使 竹林产量急剧下降，重则全林枯死。危害期尤以4 9 月最盛，影响竹林营养输导 造成竹鞭笋芽萎缩，竹材、竹笋产量下降，严重损害竹农的利益，而竹农为了稳 产，当林业病虫害大面积发生时，不得不施用能够尽快见效，最能减少经济损失 的化学农药。目前竹笋、香菇上危害较为严重，较常见的病虫害主要有：微红梢 斑螟、春尺蠖、红腹叶蜂、松疱锈病、各种螨虫、线虫以及木霉、细菌病害等i l l - 1 5 】。 随着国家对林业生态建设的不断加强和重视，我国每年林业生产中病虫害防 治使用的各类农药数以十万吨记【1 6 1 。以食用菌栽培为例，截止2 0 0 5 年我国在食用 菌生产方面登记的农药品种有7 种类型，表1 列出了登记于食用菌品种的农药种 类，其中杀虫剂2 个，杀菌剂8 个：防治对象有菌蛆、螨虫、褐腐病、木霉等4 种 食用菌生长中主要的病虫害类型【1 7 】。 表1 食用菌登记农药 t a b i e 1p e s t i c i d e so nf u n g u s 2 然而，随着化学农药的大量使用，农药对环境的污染及其在林产品中的残留 情况显得越来越严重，2 0 0 6 年春节期间，北京市有关部门对市售的猕猴桃、梨等 产品的调查检测结果显示，北京市售的猕猴桃等产品检出了禁用农药对硫磷【l8 1 。 在对外出口方面，近几年来，我国出口的竹笋、香菇等食用林产品因农药残留超 标而被退回或销毁的事件屡有发生，由此造成的损失数以百万计。与此同时我国 竹笋、香菇等林产品的主要出口国纷纷制定了更多更为严苛的残留限量标准，特 别是2 0 0 6 年5 月，日本正式实施食品中残留农药、兽药及饲料添加剂的“肯定列 表”制度，对7 9 9 种农药制定了农残标准，涉及水煮笋的为3 0 2 种，使上述问题更 显突出。据日本林政新闻2 0 0 6 年9 月1 3 日报道，中国自2 0 0 6 年8 月2 5 日起暂停 鲜香菇的对日出口，由于从中国产的进口鲜香菇中检测出超标的残留农药( 杀虫 剂、甲氰菊脂) ，日本厚生劳动省于8 月1 1 日依据食品卫生法实施了全面检查的 命令【l 卅；欧盟在2 0 0 7 年底对食用菌中“多菌灵的残留限量重新规定，新规定将 标准从原先的1 毫克千克提高n o 1 毫克千克，加严达1 0 倍【2 0 】。面对如此严峻的 国际形势，如何解决病虫害防治问题与农药残留超标的矛盾，是我们面临的十分 紧迫的任务。 在全球经济一体化不断加快的形式下，技术规范纳入法规的范畴已成为经济 发达国家发展经济和保护自身利益的行之有效的依据。各国政府纷纷修定了食品 中农药最高残留限量( m r l ) ，建立“绿色壁垒以维护本国的利益。1 9 9 5 年，各 w t o 成员发布的关于农药管理措施的通报仅4 件，2 0 0 0 年增至13 3 件，2 0 0 5 年更 达2 4 3 件，而2 0 0 6 年5 月2 9 日实施的日本“肯定列表制度更将农残技术壁垒推向 极致，而欧盟2 0 0 0 2 4 e c 和2 0 0 0 4 2 e c 规定了更为严格的残留限量规定，对农 产品中农药残留量的检测方法也给予高度的重视。 我国食用林产品及其制品的重要出口市场是日本，2 0 0 3 年5 月3 0 日日本政 府发布食品卫生法修正案并于2 0 0 6 年5 月2 9 日起正式施行，其在“肯定列 表制度”中明确制订了进口食品、农产品中可能出现的7 3 3 种农药、兽药和饲料 添加剂的近5 万个暂定标准，对其未设标准而欧美国家也无标准可参照的农药推 行“一律标准 2 q ，即0 0 1 p p m 水平。而我国目前仅制订了1 3 7 种农药的4 7 7 项残留限量标准，9 8 种兽药6 5 8 项残留限量标准，还有3 9 1 种农药、1 5 5 种兽药 没有残留检测方法标准l 2 2 j ，与日本“肯定列表制度 的差距极大。 日本、欧盟食品安全新法规的出台，进一步提高了中国农产品出口的技术门 槛。势必削弱我国农产品出口竞争力，直接影响农民增收、农业生产和农产品加 工，对优势农产品出口产生重大影响。如何应对，是摆在我们每个人面前的课题。 1 2 农药多残留分析技术的研究现状 农药，作为重要的农业生产资料其毒性是其能否危害环境及人、畜安全的重 要指标【2 3 1 ，化学农药在人类农业文明和社会进步中起到了巨大的推动作用。然而， 科学技术是一把双刃剑，有史以来人类所创造的全部工具和产品，为人类进步作 出贡献的同时总是同某种程度的危险并存。技术的进步永远与新的风险相伴而 生，农药也难能避免。对于农药污染影响的广泛性与严重性，1 9 8 2 年，日本学者 见理朝正对其进行过总结，它涉及经济、环境以及社会生活的许多方面；从经济 学上p i m e n t e l 等对农药的使用造成的损失也进行过分析，结果表明农药的使用使 美国农户每年造成的直接损失( 杀伤天敌、抗性增强、作物损伤) 近3 0 亿美元：说 明化学农药在产生一份经济效益的同时，还产生半份的环境负效应，可见农药的 污染及其引起的损失是相当严重的。中国是一个农业大国，随着国民经济快速持 续发展，近1 0 年来我国农药生产量增长了近3 倍，从1 9 9 5 年的2 3 3 万t 增加到2 0 0 5 年的8 6 3 万t ；农药使用量从2 2 6 万t 增加到2 5 9 万t 【2 4 1 。我国农药工业基础薄弱， 农药科研技术水平落后。农药行业的现状可概括为：农药品种多，质量低，使用 方法简单，用量大、效率低，农产品中残留量高，对环境污染严重。 近年来，有关机构通过对生产基地和销售市场蔬菜、水果等农产品的监测分 析，发现虽然农产品质量安全日益提高，但农药残留超标问题依然存在，农药残 留超标情况由过去的单一高毒农药向多种农药残留超标方向发展，单一样品中往 往同时检出多种农药 2 5 】；近期，我国出口的竹笋、香菇屡次被查出农残超标，给 国家、竹农、菇农造成巨大的损失【1 8 2 0 】。因此农药残留分析检测技术，也必须与 时俱进，不断开发出新的方法以适应不同的要求，现阶段总体上来说，农药残留 分析正朝着安全、环保、高效、经济的方向快速发展，表现为分析样品量小型化、 溶剂用量减少、高毒性溶剂和氯代烃类溶剂的限用和慎用，分析时效提高和分析 成本下降等方面 2 6 - 2 引。 1 2 1 农药多残留分析的前处理技术 试样中被测组分浓度较低，需进一步富集才能检出，因此需要对试样进行适 当的前处理，传统对被测物的净化、富集常用的前处理技术是进行液液萃取 ( 1 i q u i d 1 i q u i de x t r a c t i o n ，l l e ) ，索氏提取法( s o x h l e te x t r a c t i o n ) 2 卅等，上述方法存 在操作繁琐、易产生乳化、回收率低、需要的样品量大等缺点。目前有许多新的 前处理技术己被广泛地用于食品中农药残留、生物样品等的检测中。 近几年样品前处理工作正朝着省时、省力、廉价、有机溶剂消耗少、对环境 4 友好、微型化和自动化的方向发展，提取和净化的界限越来越模糊【3 1 1 。目前国 内外广泛应用的新技术主要有：加速溶剂提取法( a c c e l e r a t e ds o l v e n te x t r a c t i o n ) 3 2 - 3 3 】、超声波提取法( u l t r a s o n i ce x t r a c t i o ) 3 4 - 3 5 】、固相萃取法( s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n ，s p e ) 3 6 - 3 8 1 、固相微萃取法( s o l i dp h a s em i c r oe x t r a c t i o n ) 3 9 - 4 0 、基质固 相分散法( m a t r i xs o l i dp h a s ed i s p e r s i o n ) 4 h 6 1 、超临界流体萃取法( s u p e r c r i t i c a l l i q u i de x t r a c t i o n ) 4 7 - 4 8 】、凝胶渗透色谱法( g e lp e r m e a t i o nc h r o m a t o g r a p h y ) i ：4 9 - 5 0 、 微波萃取法( m i c r o w a v ee x t r a c t i o n ) 、分子印记技术( m o l e c u l a ri m p r i n t i n g c h r o m a t o g r a p h y ) 等。这些前处理方法可在短时间内，经济有效地完成多种以及多 类多种农药在样品中的提取、分离和净化过程，提高了农药的提取率，保证了检 测数据的准确性和精确性。 1 2 2 农药多残留分析的检测技术 随着科学技术的发展，农药残留分析技术也有了很大的进步，一些特异性强、 灵敏度高，分析速度快的高端仪器也逐步应用到农药残留分析这个领域 5 卜5 2 1 。目 前用于农药残留量检测的方法有：气相色谱法( g c ) 、高效液相色谱法( 唧l c ) 、 超临界流体色谱法( s f c ) 、免疫分析技术( i a ) 、气一质联用法( g c m s ) 、液 质谱联用法( l c m s ) 、直接光谱分析技术、毛细管电泳法( c e ) 、生物传感器 等，其中多残留检测多以g c 、h p l c 、g c m s 和l c m s 为主。 g c 法的分析对象多是气体和可挥发物质，其优点是分离效能高、高选择性 和分析速度快【5 3 5 5 】。h p l c 法能对g c 法不能分析的沸点高或热不稳定的农药可以 进行分离检测，是农药残留定性、定量分析的有效手斟5 6 巧8 1 。与g c 相比，h p l c 的流动相参与分离机制，其组成、比例和p h 值可以灵活调节。g c m s 和h p l c m s 具有良好的灵敏性和选择性，具有较好的多残留检测能力，可以简化样品的检测 前处理过程等优点【5 9 拼】。 1 3 食用林产品中的农药残留研究现状 食用林产品产业相对来说还是个比较新兴的产业，目前研究的基质较少，主 要包括竹笋、栗子以及香菇，对于其他基质如猕猴桃、山楂等研究较少，国内有 关研究结果，见表2 ： 表2 近年来食用林产品中农药残留研究情况 t a b i e2s t u d yo nt h od e t e r m i n a t i o no fr f l u i t ir e $ i d u eir ts ii v a nf o o d s 由上表可见，目前国内对于重要林产品的研究多是单残留研究为主 6 5 确, 6 9 , 7 1 , 7 3 】，样品中的农药数量、种类较少：基质主要集中在菇类6 5 6 6 6 9 7 0 1 ，适 用性研究较少：提取方法方面，采用的还有传统的机械振荡提方法【6 9 】，不但耗 时而且提取效率不高；有些方法虽然在提取时采用了较先进的超声波振荡提取 7 0 , 7 2 、a s e 、匀梨7 1 】等方法但在实验过程中使用高毒溶剂的量较大，与目前农残 分析中倡导的对环境友好原则，格格不入；样品的净化方面，存在耗时、低效的 问题 6 7 - 6 9 , 7 1 - 7 2 】，采用的方法多为传统的液液萃取、柱层析净化，不可否认，传统 的方法在推动农残分析进步方面，曾经有着巨大的作用，但是在农药残留分析技 术日新月异的今天，耗时、低效、对环境不友好的传统提取净化方法已经不能满 足现阶段的要求；在农药残留检测技术方面，主要以气相色谱( ( ) 检测为主，气 相色谱虽然能够准确的对目标农药定量，但是却不能准确的对目标化合物进行定 性，目前g c m s 、h p l c m s 等具有良好的灵敏度和选择性，具有较好的多残留 检测能力，可以简化样品的检测前处理过程等优点的农药残留检测技术正越来越 6 多的应用于农药残留分析中。 1 4q u e c h e r s 法的国内外研究动态 近四十年来，大量的分析方法不断涌现及更新，但在这些方法中很难有同时 对绝大多数农药达到较高质量的分析方法。2 0 0 3 年，s j l e h o t a y 和m a n a s t a s s i a d a s 开发出基于分散固相萃取技术的q u e c h e r s 农药残留分析方法，1 1 1 q u i c k ，e a s y ， c h e a p ，e f f e c t i v e ，r u g g e da n ds a f e 英文单词的首缩写 7 4 - 7 5 】，是一种快速、简便、价 格低廉、质量高的农药多残留分析方法，此方法适合对高达2 0 0 种农药的残留分 析 7 6 1 ，基质适用性广 7 7 - 7 9 】。目前此方法已经在一些国家广泛用于农药监督机构的 评估和验证的各种试验中，总体来说此法使用单一的乙腈缓冲液进行浸提再用无 水硫酸镁与醋酸钠震荡促使其分层对净化过程而言简单快速价格低廉的分散固 相萃取技术，使用p s a ( p r i m a r ys e c o n d a r ya m i n e ) 去除组分中的脂肪酸无水硫酸 镁去除水分得到的浸提液可用带有m s 检测器的l c 或g c 进行农药多残留分析。此 方法的标准步骤见表3 ： 表3o u e c h e r s 法总流程 t a be 3t h ep r o c e s so fq u e c h e r s 步骤程序 0 取大于1k g 的样品用食品加工器粉碎称取其中2 0 0 9 试料放入匀浆机高速匀浆 1 ，2 准确称取1 5 0g 试料放入5 0m l 离心管中 3 - 5 加入1 5m l 含1 醋酸的乙腈溶液，1 5 9 无水醋酸钠，6 9 无水硫酸镁，内标溶液 以7 剧烈震荡l m i n ，然后以1 5 0 0r e f , 离心1m i n oo 移取1 8 m l 离心液至离心管中，每毫升离心液中加入1 5 0 培无水硫酸镁，5 0 m g p s a ， 轻微震荡 1 1 1 。 移取0 5 1m l 离心液到g c 进样瓶，加, k t p p i 作液 一。“ 移取0 1 5 - 4 ) 3m l 离心液到l c 进样瓶，加入0 4 5 o 9m l 6 7 m m o l l 甲酸溶液 ， 移取0 2 5m l 离心液( 步骤1 0 ) 到l c 进样瓶，j j d a t p p i 作液和0 8 6m l 0 6 7m m o l l - - h 1 4 h 。 甲酸溶液 1 5 b 移取4m l 离心液( 步骤l o ) 至l j 锥形离心管加a t p p 和1m l 甲苯 1 6 b - - 1 8 b 在5 0 c 氮吹浓缩至0 3 o 5m l ，加甲苯定容至1m l 1 9 h 2 1 b 加入0 2m g 无水硫酸镁剧烈震荡，1 5 0 0r c f - f 离心lm i n ，移取约o 6m l 离心液至g c 进样瓶 17a 2 2b 用( l v i ) g c m s 或l c m s - m s 进行分析 近几年国内外学者根据具体实验要求，将q u e c h e r 法进行了多种改进，应用 到包括农残、医药等多种领域。s c p a n 和h z h a n g 笔j # o 】，用经优化后的q u e c h e r s 法研究了蜂蜜中氯霉素单残留问题，为了避免无水硫酸镁吸水使蜂蜜变成胶体阻 碍样品的混匀，最终去除了无水硫酸镁。f l o r i a np 1 6 s s l 引】运用这个方法分析了血 液里的医药残留。j u a nf g a r c i a 等【8 2 1 ，总结了近年来在橄榄油和橄榄果实中使用 的农药残留前处理方法，比较了液液分配、g p c 、s p e 、m s p d 、q u e c h e r s 法各 自的优缺点，认为经过优化的q u e c h e r s 法更值得考虑。曹磊等【8 3 】运用q u e c h e r s 法对菠菜和胡萝卜中1 6 种有机磷和有机氯农药进行添加回收，取得了满意的回收 率。刘敏等脚】同样利用q u e c l l e r s 法与l c m s 法对胡萝卜、苹果、西红柿和卷心 7 菜中1 4 种有机磷和氨基甲酸酯农药进行了添加回收实验，回收率在7 9 以上。胡 西洲等【8 5 j 利用同样的方法，对1 1 种有机磷农药进行残留分析，得出平均回收率在 6 7 7 0 旷1 0 5 3 之间，检出限在5 乱1 8 2 9 9 k g 之_ 间，且r s d 不大于1 0 6 。 由于q u e e h e r s 法的种种优点，目前这个方法正得到越来越多的应用，并且 出现了商品化的q u e c h e r s 法萃取小柱。当然，它也有缺点，就是加在基质里的 固相吸附剂的吸附容量是有限的，但相信根据不同的农药和基质对q u e c h e r s 法 进行优化和改造，使其能够达到我们预期的目标。 1 5 重要食用林产品中的部分农药的m r l 值 在我国，政府历来十分重视农药残留问题，先后颁布了农药安全使用规定 和农药安全使用标准。目前，尚无系统的食用林产品中的国家标准而主要执 行的是行业和地方标准【8 6 】。现就我国及国外对香菇( 日本、欧盟、中国) 、竹笋( 日 本) 、栗子( 欧盟) 等中的一些农药的最高残留限量规定列表，见表4 ： 表4 重要食用林产品中各种农药的最高残留限量标准 t a b i e 4t h em r lo fm a n yp e s t i c i d e si n i m p o r t a n ts ii v a nf o o d s 8 注：“j 表示未查阅到。 1 为弘六六六、p 一六六六、丫- 六六六、6 六六六合计浓度；【2 】为a 硫丹、p - 硫丹 合计浓度。 1 6 研究目的及意义 我国的香菇、竹笋等食用林产品出口的主要对象是日本，2 0 0 6 年，中国农 产品对日出口8 2 1 亿美元，同比增长3 6 ；自同年日本实施“肯定列表制度 以来，我农产品出口受到一定影响，部分产品出口受阻，市场份额被挤占。根据 海关统计，6 1 2 月我对日本出口农产品4 9 亿美元，同比增长3 1 ；其中对日出 口食品4 4 3 亿美元，增长3 6 ，而2 0 0 5 年同期增幅为4 2 。6 1 2 月，我对日 本市场农产品、食品的出口份额也分别下降到2 5 3 和2 6 5 。其中水煮笋对日 本出口数量同比下降5 6 。 日本、欧盟分别是中国农产品的第1 、第2 大出口市场，约占农产品总出口额 的4 3 3 ，仅日本就占约1 3 。以日本、欧盟为主销市场的出口企业，分别占农产 品出口企业总数的3 8 和2 7 。目前我国竹笋、香菇标准中大部分的农药限量都 高于欧盟标准，日本、欧盟食品安全新法规的出台，进一步提高了中国农产品出 口的技术门槛。势必削弱我国农产品出口竞争力，直接影响农民增收、农业生产 和农产品加工，对优势农产品出口产生重大影响。食用林产品行业的发展在w t o 市场背景下迎来了新一轮的机遇，但也面临着新的挑战。竹笋、香菇等食用林产 品本是天然无污染蔬菜，近几年来，随着集约经营程度的提高，化肥和农药的大 量施用，工业等其它行业对环境的污染影响加大，