（动物营养与饲料科学专业论文）水环境镉对罗非鱼的毒性作用和机理探讨.pdf

新扛大学博士学位论文英文缩写与译名 a c a c t h a d p a 口 a ：r p c a c a b p c c c c 0 c o r c y p 4 5 0 e c f a a f a d g 6 p d h g h g n r h g o t g r g r e g s h g s i g s s g g s t g t i 英文缩写与译名 a d e n y | a t ec y c l a s e a d r e n o c o r t i c o t r o p h i ch o r m o n e a d e n o s i n eb i p h o s p h a t e a d e n o s i n em o n o p h o s p h a t e a d e n o s i n e 仃i p h o s p h a t e c a r b o n i ca n h y d r a s e 。 c a l c i u mb i n d i n gp r o t e i n c h l o r i d ee e l l c y t o c h r o m ec o x i d a s e c o r t i s o l c y t o c h r o m ep 4 5 0 e n e r g yc h a r g e f r e ea m i n oa c i d f l a v i na d e n i n ed i n u c l e o t i d e g i u c o s e - 6 - p h o s p h a t ed e h y d r o g e n a s e g r o w t hh o r m o n e g o n a d o t r o p h i nr e l e a s i n gh o r m o n e g l u t a m a t eo x a i o a c e t a t et r a n s a m i n a s e g i u t a t h i o n er e d u e t a s e g l u c o c o r t i c o i dr e s p o n s i v ee l e m e n t r e d u c e dg l u t a t h i o n e g o n a ds o m a t i ci n d e x o x i d i z e dg l u t a t h i o n e g l u t a t h i o n es - t r a n s f e r a s e g o n a d o t r o p i ch o r m o n e 肾腺苷酸化酶 促肾上腺皮质激素 二磷酸腺苷 磷酸腺苷 三磷酸腺苷 碳酸酐酶 钙结合蛋白 c c 细胞色素氧化酶 c o t 细胞色素p 4 5 0 能量负荷 游离氨基酸 黄素腺嘌呤二核苷酸 葡萄糖一6 一磷酸脱氢酶 生长激素 促性腺激素释放激素 谷草转氨酶 谷胱甘肽还原酶 糖皮质激素调控元件 还原型谷胱甘肽 性腺指数 氧化型型谷胱甘肽 谷胱甘肽硫转移酶 促性腺激素 浙江大学博士学位论文英文缩写与译名 l c 5 0 l d l p 0 m d a m 呼t m i 也 m t n a d p h n d p k n o s p 5 3 p e p c k p f k p k c p o d r o s s d h s e g p x s o d x o d y g c s l e t h a lm e d j a nd o s e l a c t i ca c i d l i p i dp e r o x i d i z e m a l o n d i a l d e h y d e m i t o c h o n d r i a lp e r m e a b i l i t yt r a n s i t i o n m e t a lr e s p o n s i v ee l e m e n t s m e t a l l o t h i o n e i n n a d - i s o c i t r a t ed e h y d m g e n a s e n u c l e o s i d ed i p h o s p h a t ek i n a s e n i t r i co x i d es y n t h a s e t u m o r - s u p p r e s s o rp 5 3 p h o s p h o e n o l p y r u v a t ee a r b o x y k i n a s e p h o s p h o r f u c t ok i n a s e p r o t e i nk i n a s ec p e r o x i d a s e r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s s u c c i n a t ed e h y d r o g e n a s e s e l e n i u m - d e p e n d e n tg l u t a t h i o n ep e r o x i d a s e s u p e r o x i d ed i s m u t a s e x a n t h i n eo x i d a s e f g l u t a m y i g y s t e i n es y n t h e t a s e 2 半数致死浓度 乳酸 脂质过氧化 丙二醛 线粒体膜通透性跃迁 金属调控元件 金属硫蛋白 异柠檬酸脱氢酶 二磷酸核苷激酶 一氧化氮合酶 肿瘤抑制基因p 5 3 磷酸烯酵式丙酮酸羧激酶 磷酸果糖激酶 蛋白激酶c 过氧化物酶 活性氧 琥珀酸脱氢酶 硒依赖谷胱甘肽过氧化酶 超氧化物歧化酶 黄嘌呤氧化酶 t 一谷胺酰二酰基半眺胺酸合成酶 浙江大学博士学位论文摘要 摘要 重金属镉已成为世界各地水域主要污染物之一，严重影响水生生物的生长、发 育、繁殖，并通过食物链损害人类健康。鱼类与哺乳动物( 包括人) 生理构造相似， 大多数污染物对鱼类和人类机体产生类似影响。因此，深入研究c d 2 + 对鱼类的毒害 作用以及机理对实现水产养殖业可持续发展和人类健康具有重要意义。本试验以世 界广泛养殖的罗非鱼( o r e o c h r o m i sn i l o t i c u s ) 为试验对象，通过对水环境c d 2 + 胁迫作 用下罗非鱼内分泌、血浆渗透压和离子组成调节能力、能量代谢、g s h 代谢等方面 的研究，对c d ”内分泌干扰作用以及r o s 诱导机制进行了搽讨。具体内容主要包 括以下几方面： l 罗非鱼对水环境c d 2 + 的敏感性 采用静水水生生物急性毒性试验方法，观察罗非鱼中毒症状并计算半数致死浓 度( l ( ) 。结果发现高浓度组鱼首先出现异常行为：游动急促，上下窜动；随后身体 失去平衡，游动缓慢，反应迟钝，最后星螺旋式运动，逐渐丧失运动能力而静止在底 部，直至死亡。低浓度组出现中毒症状需要时间较长，但一旦中毒症状相同。解剖显 示：血液暗红色：肝脏颜色加深，质地松软；腹腔内充满黄色胶胨状物质：鱼鳃水肿， 呈紫红色。计算结果显示，水环境c d 2 + 对罗非鱼鱼种2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 和9 6 hl c s o 分 别为2 7 7 3 m g l ，1 6 ，8 7 m g l ，1 2 4 3 m g l 和9 1 l m g l ，安全试验浓度为o 9 1 m g l i罗非鱼对水环境c d ”的蓄积和排放 采用室内模拟方法，将罗非鱼在不同浓度c d “( o 5 m g l 和1 o m g l ) 溶液中暴露 6 0 d 后再转移到清洁水体排放3 0 d 。结果表明，罗非鱼对水环境c d 2 + 蓄积具有时间和 剂量效应关系：蓄积速度因组织而异：鳃、肝、肾c d 2 + 浓度迅速增加，肌肉中增加 缓慢。6 0 d 后c d 2 + 蓄积量为肾 肝 鳃 肌肉。排放期间，鳃和肌肉c d 2 + 迅速降低， 肝c d 2 + 含量几乎维持不变，肾c d 2 + 含量略有增加。排放3 0 d 后，肌肉c d 2 + 排出率5 9 3 7 ( o 5 m g 几) 和8 0 4 4 ( 1 o m g l ) 。表明受c d ”污染罗非鱼经清洁水排放后有望达到食 用标准。 3 水环境c d 2 + 对罗非鱼渗透压和血浆离子组成的影响 将罗非鱼分别暴露在0 5 和1 ，5 m g ，l c d ”溶液中，分别在5 ，1 0 和2 0 d 后对血浆渗 斯扛大学博士学位论文摘要 透压、离子组成及调节系统进行了检测。结果显示，o 5 m g l c d z + 暴露5 d 后鳃扁平上 皮细胞( p c ) 微脊数量增加，泌氯细胞( c c ) 和a 1 1 p 墩无明显变化，促肾上腺皮质激素 ( a c t h ) 、皮质醇( c o r ) 和3 ，5 - 环化腺苷酸( c a m p ) 含量以及头肾腺苷酸化酶( a c ) 活性显 著升高p o 0 5 ) 。l 5 m g l c d o + 2 0 d 暴露期内p c 细胞个体清晰可辨，微脊明显增多； c c 数量和a l p a s e 活性在暴露5 d 后呈增加趋势 o 0 5 ) ，a c t h 、c o r 和c a m p 含量以 及a c 酶被显著诱导( p o 0 5 ) ，血浆k + 浓度显著升高，n a + 和c i 浓度显著下降p o 0 5 ) ， c 矿浓度和渗透压正常；1 0 d 后c c 数量明显增加，颗粒物排列密度明显降低，a t p a s e 显著升高f p o 0 5 ) 。由此可见，高浓度c d 2 + 长 时间胁迫干扰a c l h 信号传递，影响c o t = 6 成和释放，损害了鱼体修复能力。从而诱发 血浆渗透压和离子组成不可逆紊乱。因此，内分泌信号传递干扰作用可能是c d 2 + 毒 性机理之一。 4 水环境c d 2 + 对罗非鱼鲳能量代谢的影响 将罗非鱼分别暴露在0 m g l 、o 5 m g l ：9 1 2 5 m g l c d 2 + 7 舯7 d ，观察鳃线粒体超微 结构并对线粒体琥珀酸脱氢酶( s d h ) 、细胞色素氧化酶( c c o ) 、超氧化物歧化酶( s o d ) 活性、丙二醛( m d a ) 含量和鳃磷酸果糖激酶( p f k ) 、乳酸( l d ) 、游离氨基酸( f a a ) 、 总蛋白、谷丙转氨酶( g p d 、谷草转氨酶( g o d 、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶( p e p c k ) 、 血糖、血清f a a 和能量负荷( e c ) 进行了检测。结果显示。o 5 m g l c d ”胁迫作用下。 s o d 、s d h 和c c o 活性在前5 d 暴露时间内被持续诱导，7 d 后恢复正常：血糖仅仅在 暴露后的第3 d 和第5 d 显著商于对照( 萨0 0 5 ) ；其余检测指标无显著变化。2 5 m g l 处 理组7 d 后可见部分线粒体肿胀、空泡化、膜结构破损，线粒体计分显著升高o r o 0 5 ) s o d 活性被逐渐诱导，3 d 后达最高，但从第5 d 起开始下降，7 d 后显著降低( f o 0 5 ) 。 p f k 、s d h 和c c o 活性逐渐增加，5 d 后活性最大，比对照分别高5 8 3 3 、3 7 0 0 和 5 9 6 2 ，同时f a a 、g o t 、g p t 和p e p c k 也显著高于对照p ( o 0 5 ) ；7 d 后，除p e p c k 4 浙江大学博士学位论文摘要 恢复正常外，其余酶活指标均显著降低而l d 显著增加p o 0 5 ) ；血糖持续升高，7 d 后浓度达到0 9 7 m g l ，比对照提高6 7 2 4 ( 7 g i l l m u s c l e d u r i n gt h ee l i m i n a t i o nd a y s ，t h el o s so f a c c u m u l a t e dc 矿 w a sr a p i da n di m m e d i a t ei ng i l lw h e r e a st h ec d 2 + c o n c e n t r a t i o ni n c r e a s e ds l i g h t l yi n k i d n e ya n dr e m a i n e dc o n s t a n ti nl i v e ra n dm u s c l e a tt h ee n do f t h ec l e a n i n gp e r i o d ，t i m e l i m i n a t i o nr a t ei nm u s c l ew a sa b o u t5 9 3 7 a t0 5 m g lc d 2 + a n d8 0 4 4 a t 1 0 m g l c d 2 + h e n c e ，i ti se x p e c t e dt h a tt h et i l a p i ac o n t a m i n a t e db yw a t e r b o r n ec dc a n r e a c ht h ee d i b l es t a n d a r da f t e re l i m i n a t i o ni nt h ec l e a n i n gw a t e r 3t h ee f f e c t so f w a t e r b o r n ec d 2 + o nt h ep l a s m ao s m o l a l i t ya n di o nc o m p o s i t i o n j u v e n i l et i l a p i a 嘲e x p o s e dt od i f f e r e n tc a 2 + c o n c e n t r a t i o n s ( o 5 ，1 5 r a g l ) f o r2 0 d a y s t h ep l a s m ao s m o l a l i t ya n di o nc o m p o s i t i o na sw e l la st h er e g u l a t i o ns y s t e mw e r e i u v e s t i g a t a da f t e rt h ee x p o s u r eo f 5 ，1 0a n d2 0d a y s t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ee x p o s u r e o t0 5 m g lc d ”f o r5d a y sc a u s e dt oa ni n c r e a s ei nt h em i c r o d i g eo f p a v e m e n tc e l l s ( p c ) a n dc o r t i s l ( c o o a d r e n o c o r t i c o t r o p h i ch o r m o n e ( a c t h ) c o n c e n t r a t i o n si np l a s m a 觞 w e l l 勰t h ea d e n y l a t ec y c l a s e ( a c ) a c t i v i t ya n dc a m pc o n t e n t si nh e a dk i d n e yb u tn o v a r i a t i o ni nc h l o r i d ec e l l s ( c c ) a n da t p a s e a f t e r1 0d a y so fe x p o s u r e ，t h em i c r o d i g eo f p cb e c o m e si r r g e l n a ra n dt h es u r f a c ea r e ao fc cw a se l e v a t e dw i t h o u ts i g n i f i c a n t c h a n g e si nt h en u m b e r , a t p a s ea c t i v i t i e sw e l - c re n h a n c e da n do t h e ri n d i c a t o r sr e i t | t l , r nt o n o r m a ll e v e l s u b s e q u e n t l y , t h ea m o u n t s 、 惴e n h a n c e dw i t l lad e c r e a si nt h ed e n s t i t yo f g r a n u l ei nt h ec c sw h i l et h es u r f 蹴a r e ao fp a r t i a lc c sw e r ei n c r e a s e da n ds h o w e d 7 渐扛大学博士学位论文a b s t r a c t h i l l o c kp r o m i n e n c ea f t e r2 0 - d a ye x p o s u r e ，m e a n w h i l e ，a t p a s ea n da ca e t i v i t i e sm a d a c t h , c o t , c a m p c o n c e n t r a t i o n sw e r eh i g h e rs i g n i f i c a n t l yt h a nt h ec o n t r 0 1 t h e r ew a s n os i g n i f i c a n tc h a n g ei nt h ep l a s m ao s m o l a l i t ya n di o nc o m p o s i t i o nd u r i n gt h ew h o l e e x p o s u r ep e r i o d o nt h eo t h e rh a n d ，t h e r ew a s a l lo b v i o u si n c r e a s ei nt h em i c r o r i d g eo f t h es q u a m o u sp c s ，a n dt h ei n d i v i d u a lw a sd i s c r i m i n a b l ed u r i n gt h ew h o l ee x p o s u r e p e r i o da ti 5 m g l c d z + ，w h i l et h ec ca m o u n ta n da t p a s ea c t i v i t i e ss h o w e d 柏i n c r e a s e t r e n da r e r5 - d a ye x p o s u r ew i t h o u ts i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ，h o w e v e r , a c t h , c o r , c a m p , k + c o n c e n t r a t i o n 船w e l l 船a cw 黜e l e v a t e ds i g n i f i c a n t l y , i na d d i t i o n t h eo s m o l a l i t y a n dc 矿c o n c e n t r a t i o nr e a r n i n a d 啦n o r m o r a ll e v e lw h e r e a sn ea n dc i c o n c e n t r a t i o n s w e r ed e c r e a s e ds i g n i f i c a n t t y ( p o 0 5 ) a f t e r1 0d a y so fe x p o s u r e , c ca m o u n t si n c r e a s e d a n dt h ed e n s i t yo fg r a n u l ed e c r e a s eo b v i o u s l y , a t p a s ew e r ei n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yw i t h n o r m a lv a l u ei no t h e ri n d i c a t o r sa s s a y e d as i m i l a rc h a n g et ot h a to f5 - d a ye x p o s u r ei n k + n a 十a n dc i c o n c e n t r a t i o n sw a sd e t e c t e da f a r2 0d a y so fe x p o s u r e , m e a n w h i l ea s i g n i f i c a n td e c r e a s ei nc ca m o u n t , c a z * - a t p a s e o s m o l a l i t ya n dc a 2 + c o n c e n t r a t i o nw e r e o b s e r v e d ，w h e r e a s ，an o r m a lc u ra n da u g m e n t e da c t hc o n c e n t r a t i o ni np l a s m a 懈 d e t e c t e d f u r t h e r m o r e , t h em d al e v e l si nk i d n e yw e r ek e p ta tt h ec o n t r o ll e v e l si nt w o t r e a t m e n tg r o u p s 。t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ei m p a i r m e n to f 萄l l ，e s p o c i a lt h ei n h i b i t i o n o fa t p n s ew o u l dl e a dt ot h ed i s r u p t i o no fp l a s m ai o nc o m p o s i t i o na n do s m o l a l i t y , h o w e v e r , t h ef i s h 啪c o p ew i t ht h es t r e s st h r o u g he n h a n c i n gs e c r e t i o no fc u r , w h i c h 瑚 i n c r e a s ec ca m o u n ta n ds u r f a c ea n da t p a s ea c t i v i t ya n ds t r e n g t h e nt h er e g u l a t i o na b i l i t y b u te x p o s u r eo f f i s ht ot h eh i g h o rc o n c e n l s a t i o nf o ral o n g e rt i m e ，t h er e g u l a t i o na b i l i t yo f p l a s m ao s m o l a l i t ya n di o nc o m p o s i t i o n t h en o r m a la c t hc o n c e n t r a t i o na n da c a e f i 、，i t ys u g g e s tt h a ti m p a i r m e n to fi o nr e g u l a t i o na n do s m o l a l i t ym a yb ea s c r i b e1 0t h e d i s r u p t i o nd f a c t hs i g n a lt r a n s d u c t i o na n d o ri n h i b i tt h es y n t h e s i so fc o r , w h i c hw o u l d l e a dt oad e c r e a s ei nt h er e p a i ra b i l i t y h e n c e , t h ed i s r u p t i o no fe n d o c r i n es i g n a l t r a n s d u c t i o nw o u l db eo n eo f t h ep o s s i b l em e c h a n i s m sf o rc a 2 + t o x i c i t y 4t h ee f f e c t so f w a t e r b o r n ec d ”o nt h ee n e r g ym e t a b o l i s mi nt h eg i l l so ft i l a p i aa n d t h ep o s s i b l em e c h a n i s m t h ea c t i v i t i e so fs u c c i n a t ed e h y d r o g e n a s e ( s d h ) ，c y t o c h r o m eco x i d a s e ( c c o ) ， 8 浙扛大学博士学位论文a b s t r a c t s u p e r o x i d ed i s m u t a s e ( s o d ) a n dm d ai nm i t o c h o n d r i ai nt h eg i l l so ft i l a p i aa n d p h o s p h o r f u c t ok i n a s e ( p f k ) ，g l u t a m a t eo x a l o a c e t a t et r a n s a m i n a s e ( o o t ) ，g l u t a m a t e p y r u v a t et r a n s a m i n a s e ( g p t ) p h o s p h o e n o l p y r u v a t ec a r b o x y k i n a s e ( p e p c k ) ，l a c t i c a c i d ( l d ) ，t o t a lp r o t e i n ，f r e ea m i n oa c i d ( f a a ) ，a t p 。a d p ，a m pi ng i l l sa n dp l a s m a g l u c o s ea sw e l la sf a ai np l a s m aw e md e t e r m i n e da f t e re x p o s u r et od i f f e r e n tc 矿 c o n c e n t r a t i o n s ( o m g l 、0 5 m g la n d2 5 m g lf o r7d a y s t h er e s u l t ss h o w e dt h a t5 - d a y e x p o s u r eo ff i s ht o0 5 m g lc d z + l e dt oac o n s t a n te l e v a t i o ni ns o d ，s d ha n dc c o a c t i v i t o sw h i l er e t u r n e dt on o r m a ll e v e la r e r7d a y so fe x p o s u r e ，m e a n t i m eat r a n s i t i o n a l i n c r e a s eh ap l a s m ag l u c o s eo nt h et h i r da n df i f t hd a yw e r ed e t e c t e d h o w v e r , e x p o s u r et o o 5 m g lc d 2 + h a dn os i g n i f i c a n te f f e c to i lo t h e ri n d e x t h ee x p o s u r eo ff i s ht o2 5 m g l l e a dt od a m a g et ot h em i t o e h o n d r i o ni nt h eg i l l ，a n ds o m es w o l l e na n db l a n kr e g i o n sa n d b r o k e nm e m b r a n e si nm i t o c h o n d r i aw e o b s e r v e da f t e r7d a y so fe x p o s u r e m e a n w h i l e t h em i t o c h o n d r i a ls c o r i n gw a ss i g n i f i c a n th i g h e rt h a nt h ec o n t r 0 1 t h es o da c t i v i t i e sw a s i n d u c e ds i g n i f i c a n t l yi nt h ei n i t i a lp e f i o da n dr o s et ot h em a x i m u ma f t e r3d a y so f e x p o s u r ea n ds h o w e dad e c r e a s i n gt r e n da n dt h ed i f f e r e n c eb e c a m es i g n i f i c a n ta n 盱7 - d a y e x p o s u r e p f k ，s d ha n dc c oa c t i v i t i e s a l s ow c r ee n h a n c e dc o n t i n u o u s l ya tt h e b e g i n n i n g a n d w e f ；e u p t o t h e h i g h e s t v a l u e a n de l e v a t e d b y5 8 3 3 ，3 7 0 0 a n d5 9 6 2 * * t h a nt h ec o n t r o l ，r e s p e c t i v e l y , a to n et i m e ，f a ac o n t e n t sa n dp e p c k , g p t , g o t a c t i v i t i e sw e 地i n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y h o w e v e r , a l li n d i c a t o r sa s s a y e dw 眦d e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l ya p a r tf r o mt h er o t l u l lo f p e p c k t on o r m a ll e v e l sa n ds i g n i f i c a n te l e v a t i o ni n l dc o n t e n t sa f t e r7d a y so f e x p o s u r e p l a s m ag l u c o s ew e 犯i n c r e a s e dc o n t i n u o u s l yd u r i n g t h ee x p o s u r ep e r i o da n dr e a c h e dt h eh i i g h e s tw i t h0 9 7 m g l ，w h i c hw a si n c r e a s e db y 6 7 2 4 够 o 0 0 5 ) ，a tt h ee n do f t h ee x p e r i m e n t t h es i g n i f i c a n ti n c r e a s ei np l a s m af a a c o n c e n t r a t i o nw a sd e t e c t e do ut h e5 t hd a ya n d7 也d a y , w h i c hw a si n c r e a s e db y3 0 9 1 a n d6 0 3 1 a sc o m p a r e dt ot h ec o n t r o l 。r e s p e c t i v e l y t h ep r e s e n tr e s u l t sd e m o n s t r a t e dt h a tt i l p i as p e e du pt h ep r o t e i nt u r n o v e rm e t a b o l i s m a n dc a r b o n # r a t ea e r o b i c sg l y c o l y t i ct os a t i s f yt h ee n e r g yr e q u i r e m e n ta f t e re x p o s u r eo f t i l a p i at ol o w e rc o n c e n t r a t i o no f c d z + f o ra s h o r tt i m e f o rt h es h o r t - t e r me x p o s u r eo f f i s h t oh i g h e rc o n c e n t r a t i o no fc d 2 十f i s ha l s oe n h a n c et h es u p p l yo f e n e r g yt h r o u g hs p e e d i n g 9 浙扛大学博士学位论文a b s t r a c t t h ec a r b o h y d r a t ea e r o b i c sg l y c o l y t i ca n dd e c o m p o s ep a r t i a lp r o 翻nt oc o p ew i t ht h e 鳓铘， b u tf o ral o n g - t e r me x p o s u r et h e r ei so b s t a c l ei nt h es u p p l yo f e n e r g yd u et ot h ed e c r e a s e i np f ka c t i v i t ya n dt h ei m p a i r m e n to fm i t o e h o n d f i o nr e s u l t i n gf r o mt h ei n h i b i t i o no f s o d h e n c e , i te a r lb ec o n c l u d e dt h a tt h eo b s t a c l eo fe n e r g ym e t a b o l i s mw a so n eo ft h e p o s s i b l em e c h a n i s mf o rc d 2 + t o x i c i t y 5t h av a r i a t i o no fh e p a t i cg s hm e t a b o l i s ma n dt h ei n d u c t i o no fr o sa f t e r e x p o s u r et ow a t e r b o r n ec d 2 + t oe x p l o r et h ee f f e c t so fc d z + e x p o s u r eo ft i l a p i a ( o r e o c h r o m j sn # o t i e u s ) o nh e p a t i c g l u t a t h i o n e ( g s h ) m e t a b o l i s m ，t i l a p i a s 、鹏饬中o s e dt o3 0m 胡c df o r1 ，5 ，1 0 , 2 0a n d 4 0d a y s t h ec o n t e n t so fr e d u c e dg s ha n do x i d i z e dg s h ( g s s g ) a n dt h ea c t i v i t i o so f e n z y m e si n v o l v e di ng s hm e t a b o l i s ma n dt h eg s s g - g s hr a t i ow e r ei n v e s t i g a t e d t h e r e s u l t ss h o w e dt h a tr e d u c e dg s hw e r ed e # e t e dp r o g r e s s i v e l yw h e r e a st h eg s s g g s h r a t i oi n c r e a s e d t h ea c t i v i t i e so fs e l e n i u m - c l e p e n d o a tg l u t a t h i o n ep e r o x i d a s e , g l u t a t h i o n e s - t r a n s f e r a s ea n dg l u c o s e 6 p h o s p h a t ed e h y d r o g e r m a n dg s s gl e v e l si n c r e a s e d i n i t i a l l ya n dd e c r e a s e ds u b s e q u e n t l yb u ts t i l lh i g h e rt h a nt h ec o n t r o l s g l u t a t h i o n e r e d u c t a s ea c t i v i t yd r o p p e do nt h e4 0 n ld a y at r a n s i e n ti n c r e a s ei ny - g l u t a m y l c y s t e i n e s y n t h e t a s ea c t i v i t yw a sd e t e c t e do nt h e2 0 “d a y m i t o c h o n d r i o ns c o r i n gw ee l e v a t e d s i g n i f i c a n t l yo n l ya f t e r4 0d a y so fe x p o s u r e t h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a ts u b - c h r o n i c 懿p o 鲫陀t ow a t e r b o r n ec d 2 + a f f e c tt h eh e p a t i cg s hm e t a b o l i s m d u r i n gt h ei n i t i a lp e r i o d , t h es y n t h e s i sa n dt u m o v e tw e r es t r e n g t h e n e dt od e a lw i t ht h es t r e s sw h i l et h er e s p o n s e a b i l i t yw e a k e n e df o ral o n g e re x p o s u r e i na d d i t i o n , t h es i g n i f i c a n te l e v a t i o ni n m i t o c h o n d r i o ns c o r i n ga f t e r4 0d a y so fe x p o s u r ew h i l et h eg s hw a sd e p l e t e ds u g g e s t e d t h er o si nt h ei n i t i a lp e r i o dw a si n d u c e dv i ao t h e rr o u t i n e sn o tm i t o c h o n d r i o n i m