高中生物第十单元生物技术实践第35讲微生物的培养与应用课件.ppt

第35讲微生物的培养与应用,考情分析备考导航,知识梳理自主学习夯实基础,1.培养基(1)概念:人们按照微生物对的不同需求,配制出供其生长繁殖的。(2)成分:(3)分类:按照物理性质可以分为和固体培养基。,考点一微生物的实验室培养,营养物质,营养基质,水、碳源、氮源、无机盐,pH,氧气,液体培养基,2.无菌技术(1)目的:获得。(2)关键:防止的入侵。(3)无菌技术的主要方法及适用对象连线,答案：,纯净培养物,外来杂菌,3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算溶化.(2)纯化大肠杆菌的方法纯化培养原理:在培养基上得到的肉眼可见的,即可获得较纯的菌种。纯化大肠杆菌的关键步骤:。常用的微生物接种方法有两种。a.平板划线法:通过在琼脂固体培养基表面的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。b.法:将菌液进行一系列的,然后将.的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。(3)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种,可以采用的方法。对于需要长期保存的菌种,可以采用的方法。,称量,灭菌,倒平板,由一个细胞繁殖而来,菌落,接种,接种环,连续划线,稀释涂布平板,梯度稀释,不同,稀释度,临时保藏,甘油管藏,重点透析剖析考点拓展深化,微生物的纯化培养,题组例练分类例练提炼方法,1.(2016江西宜春模拟)回答下列问题:(1)微生物所需的营养成分一般包括、水和无机盐。(2)培养微生物时,除考虑微生物生长所需的营养外,还要考虑微生物生长所需的温度、以及是否需要O2等。,解析:(1)微生物的营养成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等。(2)微生物的培养需要考虑温度、pH和O2等条件。答案:(1)碳源氮源(2)pH,(3)对培养基进行灭菌时,多采用法,而对接种环灭菌时则用法。(4)平板划线时,为保证每次划线都从上次划线末端的微生物浓度开始,所以每次划线前都要,平板划线结束后,最后一次划的线不能与第一次划的线。,解析:(3)培养基由于含有微生物生活所必需的水,所以只能用高压蒸汽灭菌法灭菌,接种环属于金属接种工具,可以用灼烧灭菌。(4)平板划线法接种时,为保证每次划线都不能有杂菌污染,每次划线前都要对接种环灼烧灭菌;平板划线结束后,最后一次划的线不能与第一次划的线相交(相接、相连、交叉等)。答案:(3)高压蒸汽灭菌灼烧灭菌(4)对接种环灼烧灭菌相交(相接、相连、交叉等),2.(2016安徽名校联盟模拟)根据微生物分离和培养的知识,回答下列问题:(1)分离纯化大肠杆菌的关键步骤是,该步骤常用的方法有两种:和,其中后者是将菌液进行一系列的,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。,解析:(1)分离纯化大肠杆菌的关键步骤是接种,该步骤常用的方法有:平板划线法和稀释涂布平板法。其中稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。答案:(1)接种平板划线法稀释涂布平板法梯度稀释,(2)在微生物的实验室培养过程中,获得纯净培养物的关键是,因此需要对培养基和培养皿进行处理,操作者的双手需要进行清洁和。(3)分离分解尿素的细菌的培养基中要以尿素为唯一(填“碳源”或“氮源”)。,解析:(2)在微生物的实验室培养过程中,获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵,因此需要对培养基和培养皿进行灭菌处理,操作者的双手需要进行清洁和消毒。(3)分离分解尿素的细菌的培养基中要以尿素为唯一氮源。答案:(2)防止外来杂菌入侵灭菌消毒(3)氮源,知识梳理自主学习夯实基础,1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,考点二微生物的分离、计数及应用,脲酶,尿素,直接计数,稀释涂布平板法,2.分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶组成:纤维素酶是一种,一般认为它至少包括三种组分,即。作用:,复合酶,C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,纤维素.,纤维二糖,葡萄糖,(2)纤维素分解菌的筛选原理:,筛选方法:染色法,即通过是否产生来筛选纤维素分解菌。,红色复合物,透明圈,刚果红,透明圈,培养基:以为唯一碳源的选择培养基。实验流程:土壤取样:富含的环境选择培养:用培养,以增加纤维素分解菌的浓度:制备系列稀释液涂布平板:将样品涂布到的培养基上挑选产生的菌落,纤维素,纤维素,选择培养基,梯度稀释,鉴别纤维素分解菌,透明圈,重点透析剖析考点拓展深化,1.筛选微生物的两个实例比较,2.测定微生物数量的常用方法(1)显微镜直接计数法原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法:用计数板计数。缺点:不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式:每克样品中的菌株数=(CV)M,其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。操作:设置重复组,增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确,一般选择菌落数在30300的平板进行计数。,3.选择培养的作用原理(1)在培养基中加入某种化学物质,如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌;加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在满足基本所需培养成分的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分,如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物;以石油作为唯一碳源时,可以分离出能消除石油污染的微生物。(3)改变微生物的培养条件,如将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物,在高盐环境中培养可分离得到耐盐菌。,4.选择培养基与鉴别培养基的比较,【易错点拨】正确理解“选择菌落在30300的平板”计数(1)只得到1个菌落数在30300的平板是错误的。原因是不符合实验的重复原则,易受到偶然因素的影响。(2)并不是只要得到3个“菌落数在30300的平板”即可,而应该是涂布的同一稀释度的平板符合“菌落数在30300的平板”且无较大差异,才能按照计算公式进行计算,如得到3个平板菌落数分别为230,30,240,虽然菌落数均在“30300”之间,但“30”与“230”“240”差异太大,应重新实验找出原因。,题组例练分类例练提炼方法,1.(2016江西赣州一模)某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株。回答下列问题:(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲,该培养基属于培养基。(2)为避免培养皿污染,需将培养皿呈状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行处理。,解析:(1)欲筛选出能降解豆油的菌株,培养基中应只含有豆油而无其他碳源,不能降解豆油的细菌在此培养基上不能生存;从功能上讲,这类培养基属于选择培养基。(2)将培养皿呈倒置状态放置,可避免培养皿污染;为避免培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行梯度稀释处理。答案:(1)豆油选择(2)倒置梯度稀释,解析:(3)由于脂肪遇苏丹试剂会出现红色,遇苏丹试剂会出现橘黄色,所以为了筛选出菌株,可将适量的苏丹或苏丹试剂滴加在平板中的菌落周围,洗去浮色后,如果菌落周围的现象是出现透明圈、不出现红色圈或橘黄色圈,则说明此菌能够分泌脂肪酶。(4)分离纯化菌种时,需采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法,使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,以便纯化菌种。答案:(3)苏丹(苏丹)出现透明圈、不出现红色圈(橘黄色圈)(4)平板划线(或稀释涂布平板),(3)为了筛选出菌株,可将适量的试剂滴加在平板中的菌落周围,洗去浮色后,如果菌落周围的现象是,则说明此菌能够分泌脂肪酶。(4)纯化菌种时,为了得到单菌落,可采用法接种于新的培养基平板上。,2.(2016全国卷,39)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题:(1)分离纯化乳酸菌时,首先需要用对泡菜滤液进行梯度稀释,进行梯度稀释的理由是。(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有和。分离纯化时应挑选出的菌落作为候选菌。,解析:(1)在对泡菜滤液进行梯度稀释时,要防止杂菌污染,因此需要用无菌水;进行梯度稀释的原因是泡菜滤液中乳酸菌等菌的浓度高,若直接培养,很难分离得到单菌落。(2)已知分离纯化乳酸菌所用固体培养基,因含有碳酸钙而不透明,而乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙,因此培养基中加入碳酸钙的作用:一是可鉴别乳酸菌,二是能中和乳酸菌产生的乳酸。分离纯化时,挑选出具有透明圈的菌落即为乳酸菌,可作为候选菌。答案:(1)无菌水泡菜滤液中菌的浓度高,直接培养很难分离得到单菌落(2)鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈,(3)乳酸菌在-20长期保存时,菌液中常需要加入一定量的(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。,解析:(3)长期保存菌种时,常采用甘油管藏的方法,在菌液中加入一定量的甘油,充分混匀后放于-20的冷冻箱中保存。答案:(3)甘油,3.(2014全国卷,39)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题:(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将分解成。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时,CR可与纤维素形成色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的。,解析:(1)纤维素酶包括三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,C1酶、CX酶催化纤维素分解成纤维二糖,葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。(2)CR能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后,CR纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌的菌落为中心的透明圈。答案:(1)纤维二糖葡萄糖(2)红透明圈,(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表):,注:“+”表示有,“-”表示无。据表判断,培养基甲(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是;培养基乙(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是。,解析:(3)培养基甲中未添加琼脂,为液体培养基,液体培养基上不能形成单菌落,故不能用于分离和鉴别纤维素分解菌。培养基乙中未添加纤维素,不能和CR形成红色复合物,即使出现单菌落也不能确定为纤维素分解菌。答案:(3)不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素,不会形成CR纤维素红色复合物,即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌,构建知识网络强化答题语句,知识网络,填充:.,灭菌,平板划线法,选择培养基,间接计数法(活菌计数法),要语强记,1.两种无菌操作技术无菌操作技术包括消