（植物学专业论文）攀西地区麻疯树（jatropha+curcas+linn）生物学特点和活性成分的研究.pdf

四川大学硕士研究生毕业论文 攀西地区麻疯树生物学特点和活性成分的研究 植物学专业 研究生:廖金旭指导老师:陈放教授 摘要 麻疯树 ( j a t r o p h a c u r c a s l i n n ) ， 又名黄肿树 i ( 广东) 、 芙蓉树、 假花生 2 1 ( 广西) 、亮桐 ( 云南) 、吗哄罕 ( 傣名) 、桐油树 ( 台湾) 、南洋油桐 ( 日本) 、 p h y s i c n e t ( 英) ， 为 大 戟 科( e u p h o r b i a c e a e ) 麻 疯 树 属( j a t r o p h a l ) 植 物 3 1 麻疯树主要分布于热带和亚热带地区，绝大多数生长在美州和亚洲热带地区 1 7 1 。 在我国栽培或半野生于热带地区， 分布面积较广，资源丰富. 麻疯树在一 些国 家作为药用， 常用 于清热解毒、消肿散淤 8 1 等。 麻风 树枝叶的 水溶液的 提 取物对h i v诱导的细胞病变有强烈的 抑制作用， 而且其细胞毒性极小2 1 1 ， 近年 来又发 现麻风树具 有显著的 抗癌活性8 1 ， 在工 业用油 2 0 1 、 生物病虫害防治a 1 新药开发等方面有着潜在的价值， 同时它又是干热河谷地区荒山造林的好树种， 因此具有广泛的开发利用前景6 1 本文以产于攀枝花地区的麻疯树为研究对象， 对形态与分类的特点做了比 较分析:对其在攀枝花地区的地理分布作了初步的分析。 在活性成分研究方面，主要针对麻疯树的小分子菇类化合物进行研究。麻 疯树的菇类及一些衍生物均具有明显的抗癌、抗病毒、抗菌活性。如从棉叶麻 疯树 ( j . g o s s y p if o l ia ) 的 根中 分离鉴定的 麻疯树酮 在体外具有抗人体鼻a 癌细 胞的活 性， 在体内 具有抗小鼠 肺癌和白 血病( p - 3 8 8 ) 的 活性【2 6 1 。 由 于 砧类成分 分子量大且具有一定挥发性，为使获得的麻疯树成分相对稳定，本文对提取方 法进行了 研究， 实验采用了 经典的 溶剂提取法和目 前较先进的c 0 2 超临界萃取 法提取麻疯树的有效成分。二者相比，二氧化碳超临界萃取法具有提取完全、 四川大学硕士研究生毕业论文 效率高、耗时少等优点。两种方法所得到的提取物经薄层层析鉴定，确定提取 出 来的物质主要是菇类。 对提取物进行g c / ms 结构分析l 01， 作峰面积归一法 分析后计算各种化合物的相对比 例。结果显示，二氧化碳超临界萃取可得 巧 个化合物，己鉴定出8 个化合物，占色谱总面积的5 3 %;溶剂提取可得 2 7个 化合物，己鉴定出8 个化合物，占 色谱总面积的2 9 . 6 %. 经典的溶剂提取法所得到的提取物进行抑菌、抗病毒实验研究发现提取物 具有良 好的抑制白 色念珠菌的效果和抗单纯疙疹病毒i 型 ( h s v - i 1 0 0 t c i d . ) 或疙疹病毒i i 型 ( h s v - 1 1 1 0 0 t c i d . )的效果。 关键词:麻 疯树 ( j a tr o p h a c u r c a s l i n n ) 形态分 类 分布 常用溶剂提取法 g ums 分析抗病毒分析 四川大学硕士研究生毕业论文 t h e s t u d y o n t h e b i o i o g i c a !c h a r a c t e r 四川主栽在攀枝花、 盐 边、 米易、 盐 源、 德昌 、 西昌、 会理、 金阳等地” 2 1 . 海南主要产于澄迈、 澹县、东方、白 沙、乐东、 保亭、陵水、 崖县等地 1 3 1 ;云 南的西部、西南部、中部以 及元江、金沙江、 澜仓江流域均有栽培洲。 麻疯树可以 在年降雨量2 0 0 -2 3 8 0 毫米，年平均气温 1 8 . 0 -2 8 . 5 的 环境 下生存，常生于海拔 7 0 0 -1 6 0 0 米的平地、丘陵坡地及河谷荒山 坡地，或栽培 于园边作绿篱。 麻疯树喜光、 喜暖热气候; 耐干早痔薄， 在石砾质土、 粗骨土、 石灰岩裸露地均能生长。 大量的 栽培己 在相关国 家有报道。截止 1 9 9 7年底津巴 布韦种植量已 达 4 百万株。 麻疯树结实丰富， 种子大; 林下天然更新良 好， 每公顷2 -5 年生幼苗 可达1 . 5 万株。 种子栽培可在3 -4 年结果， 扦插的则可在一年左右结果。 其栽 培方式可为点 播造林 ( 萌芽 性强) ， 可扦插繁殖17 1 。 此外， 通过组织培养 技术育 苗也己成功1 4 , 1 7 1 四川大学硕士研究生毕业论文 2 相关科属特征 2 . 1 大戟科特征 大戟科 e u p h o r b l a c e a e 乔木、灌木或草本，稀为木质或草质藤本;木质根，稀为肉质块根;通常 无刺;常有乳状汁液，白 色，稀为淡红色。叶互生，少有对生或轮生，单叶， 稀为复叶，或退化成鳞片状，边缘全缘或有锯齿，稀为掌状深裂;具羽状脉或 掌状脉: 叶柄长至极短， 基部或顶端有时具有1 -2 枚腺体; 托叶2 ， 着生于叶 柄基部的两侧，早落或宿存，稀呈鞘状，脱落后具有环状托叶痕.花单性，雌 雄同株或异株，单花或组成各种花序，通常为聚伞花序或者总状花序，在大戟 类中为特殊的杯状花序;花曹分离或者在基部合生，覆瓦状排列或者镊合状排 列，在特殊的花序中有时夸片极度退化或无;花瓣有或无:花盘环状或分裂成 为腺体状，稀无花盘; 雄蕊 1 至多枚，花丝分离或合生成柱状，在花蕾时内弯 或者直立，花药外向或者内向，基生或背部着生，药室2 ，稀3 一4 ，纵裂，稀 顶孔开裂或横裂， 药隔截平或突起: 雄花常有退化雌蕊: 子房上位， 3 室， 稀2 或a 室， 每室有1 -2 颗胚珠着生于中轴胎座上， 花柱与子房同数， 分离或基部 联合，顶端常2 至多分裂，直立、平展或卷曲，柱头形状多变，常呈头状、线 状、流苏状、折扇状或羽状分裂，表面平滑或者有小颗粒状凸体，稀被毛或有 皮刺。果为茹果， 常从宿存的中央轴柱分离成片 状，或为浆果状或核果状:种 子常有明显的种阜， 胚乳丰富、肉质或油质， 胚大而直或弯曲， 子叶常扁而平， 稀卷叠式. 在大戟科中， 麻疯树属于巴 豆亚科 c s l b f a m . c r o t o n o i i ) e a e p e x )花戟 族 ( t r ib . c l u y t i e a e p a x ) 植物。 2 . 1 麻疯树属特征 麻 疯树属7 a t r o p h a l . l . 5 p . p l . 1 0 0 6 . 1 7 5 3 ; b r i tt . f l . b e r m u d a 2 1 0 , 1 9 1 8 ; m . l . g r e e n , p r o p . b r i t . b o t . 1 8 9 . 1 9 2 9 . 乔木、 灌木、 亚灌木或为具根状茎的多年生草本。叶互生，掌状或羽毛分 四川大学硕士研究生毕业论文 裂，稀不分裂，被毛或无毛;具叶柄或无柄;托叶全缘或分裂为刚毛状或为有 柄的一列腺体，或托叶小。花雌雄同株，稀异株，伞房状聚伞圆锥花序，顶生 或腋生，在二歧聚伞花序中央的花为雌花，其他的为雄花:尊片 5 枚，覆瓦状 排列，基部多少联合;花瓣 5 枚，覆瓦状排列，离生或基部合生;腺体5 枚， 离生或合生成环状花盘; 雄花: 雄蕊8 -1 2 枚， 有时更多， 排成2 -6 轮， 花丝 多少合生，有时最内层花丝合生成柱状，不育雄蕊丝状或缺:不育雌蕊缺;雌 花:子房2 -3 ( -4 -5 )室，每室有 1 颗胚珠，花柱3 枚，基部合生，不分裂 或 2 裂。茹果;种子有种阜，种皮脆壳质，胚乳肉质，子叶宽且扁。 3 麻疯树属内几个常见种的分类检索 麻疯树 ( j a t r o p h a c u r c a s l . )，大戟科麻疯树属植物，在世界上有 1 7 0 多种，原产于美洲热带、亚热带地区，非洲和亚洲少数地区有零星分布。我国 常见栽培或逸为野生的主要有三个种:麻疯树 ( j . c u r c a s l . ) 、佛肚树 ( j . p o d a g r i c a h o o k . ) 、 珊瑚树 ( j . m u l t i f i d e l . )p a l ;其中佛肚树和珊瑚树两个 种是常见于我国南部的城市绿化和花卉观赏植物。此外，还有少量栽培种:棉 叶 珊瑚花 ( j . g o s s y p i i f o l i a l . ) l5 、 琴叶 珊瑚花 ( j . p e n d u r i f o l i a j a c q . ) 1 5 在国内的研究中， 仅对麻疯树、佛肚树、 珊瑚树等3 个种有报道3 ， ; 而没 有提到棉叶珊瑚花、琴叶珊瑚花这两个作为观赏植物的种类，也就谈不上对麻 疯树属几个常见种的分类检索分析。作者在对该属植物的学习和研究过程中， 对国内这5 个常见种的外部形态特征进行了分析比较和探讨，本文对常见五个 种的区别如下: 1 、 叶形似提琴，先端具明显的尾尖 ， 4 . 琴叶珊瑚花j . p e n d u r i f o l i a j a c q . i 、叶近圆形，全缘和浅裂至深裂。 2 、叶缘具短柔毛，叶柄有腺体 一 5 . 棉叶珊瑚花j . g o s s y p i i f o l i a l 2 、叶两面均无毛，叶柄无腺体。 3 、花瓣合生几达中部，黄绿色;叶全缘或 3 - 5浅裂 ， 一 四川大学硕士研究生毕业论文 ” ” ” ” 1 . 麻疯树j . c u r c a s l . 3 、花瓣离生或近离生，红色;叶浅裂至深裂。 4 、叶盾状着生，全缘或 2 - 6 裂，托叶分裂成刺状 ， 2 . 佛肚树j . p o d a g r i c a h o o k . 4 、叶非盾状着生，掌状9 - 1 1 裂， 裂片线状披针形， 托叶 细裂成分叉的刚毛 3 . 珊瑚树 j . m u l t i f i d a l 1 .麻疯树 ( 广州植物志)黄肿树，假白榄 j a t r o p h a c u r c a s l . s p . p l . 1 0 0 6 . 1 7 5 3 ; b e n t h . f l . h o n g k . 3 0 9 . 1 8 6 1 ; m u e l l . a r g . i n d c . p r o d r . 1 5 ( 2 ) : 1 0 8 0 . 1 8 6 6 : 广州植物志2 7 3 , 1 9 5 6 ; 中国 植物图鉴 2 : 6 1 0 . 灌木或小乔木，高2 -5 米。 幼枝粗壮， 绿色， 无毛， 疏生突起皮孔。叶互 生， 纸质，近圆形至卵状圆形，长宽略相等，1 0 -2 0 厘米，基部心形，不分裂 或. 3 -5 浅裂，幼时背面脉上被柔毛， 后无毛;叶柄长达 1 6 厘米。花单性，雌 雄同株;聚伞花序腋生，总花梗长，无毛或稍被白色短柔毛;雄花粤片及花瓣 各 5 枚;花瓣披针状椭圆形，长于粤片 1 倍:雄蕊 1 0 , 2 轮，内轮花丝合生; 花盘腺体 5 ;雌花无花瓣;子房无毛，2 -3 室;花柱 3 ，柱头2 裂。茹果卵形， 长2 -4 厘米， 直径2 -3 厘米; 种子椭圆形， 长 1 5 -2 0 毫米， 直径约 1 1 毫米。 花期4 -5 月，果期 1 0 月。 2 .佛肚树 j a t r o p h a p o d a g r i c a h o o k . i n c u r t . b o t . m a g . 7 4 : t . 4 3 7 6 , 1 8 4 8 ; m u e l l . a r g . i n d c . p r o d r . 1 5 ( 2 ) :1 0 9 3 . 1 8 6 6 ; 广州植物志2 7 3 . 1 9 5 6 直立灌木，高0 . 3 -1 .5 米，茎基部或下部通常膨大呈瓶状;枝条粗短，肉 四川大学硕士研究生毕业论文 质，具散生突起皮孔，叶痕大且明显。叶盾状着生， 近圆形至椭圆形，长 8 - 1 8 厘米，宽6 -1 6 厘米，顶端圆钝，全缘或2 -6 浅裂，两面无毛; 掌状脉6 -8 ; 叶柄长8 -1 6 厘米， 无毛; 托叶分裂呈刺状， 宿存。 花序顶生， 具长总梗， 红色，花芬长约2 毫米;花瓣倒卵状长圆形，红色; 雄花: 雄蕊6 -8 枚， 基部 合生， 花药与花丝近等长; 雌花: 子房无毛，花柱3 枚， 基部合生， 顶端2 裂。 茹果椭圆形，长 1 3 -1 8 毫米，具3 纵沟;种子长约 1 . 1 厘米，平滑。 花期几乎 全年。 3 .珊瑚树 ( 广州植物志) j a t r o p h a m u l t i f i d a l . s p . p l . 1 0 0 6 . 1 7 5 3 ; m u e l l . a r g .i n d c . p r o d r . 1 5 ( 2 ) :1 0 8 9 . 1 8 6 6 ;广州植物志2 7 2 . 1 9 5 6 灌木或小乔木，高2 -6 米:茎和枝具乳汁，无毛。叶近圆形，宽 1 0 -3 0 厘米，掌状9 -1 1 深裂，裂片线状披针形，长 8 -1 8 厘米:掌状脉9 -1 1 条: 叶柄长 1 0 -2 5 厘米; 托叶细裂成分叉的刚毛状， 长达2 厘米。 花序顶生， 花梗 短，花密集;雄花:花粤长2 -3 毫米，裂片5 枚，近圆形，无毛;花瓣5 枚， 匙形红色:雄蕊8 枚，花丝仅基部合生，花药伸长;雌花:花夸如雄花;花瓣 红色; 子房无毛， 花柱3 枚， 下半部合生。 茹果椭圆状至倒卵状， 长约3 厘米， 无毛。花期7 -1 2月。 4 .琴叶珊瑚花 ( 观赏植物实用图鉴) j a t r o p h a p e n d u r i f o l i a j a c q . i n d c . p r o d r . 1 5 ( 2 ) :1 0 9 0 . 1 8 6 6 :木 木花卉，7 : 1 6 8 , 2 0 0 1 灌木，高 1 -2 米，全株光滑; 茎和枝具乳汁。单叶互生， 倒阔披针形，形 似提琴，先端具明显的尾尖，全缘，叶基具有刺状齿。 二歧聚伞花序顶生，花 冠红色，花径2 厘米;雄花:花尊长2 -3 毫米，裂片5 枚， 近圆形，无毛;子 仁 瓣5 枚， 匙形红色;堆蕊1 0 枚， 花丝仅基部合生， 花药伸长; 雌花:花尊如雄 花;花瓣5 ，红色;子房上位，无毛，花柱 3 枚，下半部合生。茹果椭圆状至 四川大学硕士研究生毕业论文 倒卵状，长约3 厘米，无毛。花期近乎全年。 5 . 棉叶珊瑚花 ( 观赏植 物实用图 鉴) t 15 1 红叶麻疯树、 棉叶 羔桐 j a t r o p h a g o s s y p i i f o l l a l . i n d c . p r o d r . 1 5 ( 2 ) :1 0 9 1 . 1 8 6 6 :木木 花卉，7 : 1 6 8 , 2 0 0 1 小灌木，高0 .5 -1 .5 米; 茎和枝具乳汁。 叶互生， 掌状3 -5 r裂， 两面无 毛，长1 0 -1 5 厘米，宽1 2 -1 8 厘米;叶缘锯齿状，被粗柔毛，具粘性;叶柄 有许多腺体。疏松的聚伞花序顶生。花小，赫红色，花瓣 5 ;雄花:花粤长 2 -3 毫米，裂片5 枚，近圆形，无毛:花瓣5 枚，匙形红色;雄蕊 8 枚，花丝 分离， 花药伸长;雌花: 花粤如雄花; 花瓣红色;子房无毛， 花柱3 枚。茹果 幼时翠绿油亮，无毛;成熟时深褐色，6 裂，种子3 粒。花期6 -9 月. q 麻疯树在攀枝花地区的分布 4 . 1 攀枝花的自然地理 攀枝花市位于四川省西南部， 地处川西南山地南缘和云贵高原西段，境内 金沙江西来，雅碧江南流，周边与四川境内的凉山自治州、云南省的华坪县相 毗 邻， 分 布 于 东 经1 0 1 , 1 0 二1 0 2 0 1 5 ， 北 纬2 6 0 0 4 -2 7 * 2 0 ， 土 地 面 积7 4 3 4 . 4 k m , 最高海拨2 7 3 2 m ， 最低海拨8 0 0 m ， 境内地形崎岖，山高谷深， 气 候垂直变化显著，属典型的南亚热带干燥气候。攀枝花境内年日照 2 2 2 0 . 3 - 2 4 3 5 . 8 h ， 年太阳总辐射1 2 6 9 5 0 -1 3 3 5 7 8 c a l / c m ; 年均气温2 1 . 9 0c ， 极端最低 温度一 3 . l c ， 极端最高温度3 4 . 4 0c ， 全年日 均气温 1 0 0c ， 年积温7 9 9 6 . 1 0c ; 全年无霜期3 0 0 d 以上， 儿乎无霜冻现象; 平均降雨量6 8 9 m m , 1 9 5 6 年以 来， 最 大降雨量为1 0 8 8 . 8 m m ( 1 9 8 3 年) ，最小降雨量为3 0 2 . l m m ( 1 9 6 3 年) 。 4 . 2 攀枝花境内麻疯树的分布 沿惠明河和鳃鱼河有德明、惠明、小镇子、渔门、鳝鱼、沙地等几个乡镇 均有分布。沿雅碧江流域则有以下地方可见:柏枝乡、胜利彝族乡、茅坪子、 力马乡、团结镇、二滩、得石镇、盐边县。沿安宁河谷在桂耪镇、米易县、丙 四川大学硕士研究生毕业论文 谷镇 族乡 撒莲镇、娅口镇等可见分布。沿金沙江则在银江镇、金江镇、大龙滩彝 巡不苦一带可见分布 ( 见下页图) 。从分布图上可以清楚的看到，攀枝花 境内，麻疯树主要分布于金沙江流域、雅碧江流域和安宁河流域的河谷地带， 分布区域十分广泛 ( 图1 7 a 4 . 3 讨论 攀枝花市区地处于四川省最南端，属于干热河谷气候。 其气候特点极度干 早千热，年降雨少而且集中，水土流失严重。加上土壤贫痔，承载力低，使得 在这一地区造林成为公认的世界性的难题。 攀枝花市林业科研所从8 0 年代末起作了大量的工作和艰苦细致的实验， 先 后选择了麻疯树等几种适合干热河谷生长的树种， 经过近1 0 年的栽培实验和观 察发现其中一些树种的优缺点。观察发现，在城区外部，可以广泛地栽培麻疯 树， 这一树种的绿叶期长， 而且叶子可以分泌化学物质， 用来抑制害虫的生长; 加上麻风树的药用价值高，其生态价值和经济价值显而易见。 四川省林业厅于2 0 0 0 年2月发布的 退耕还林还草工程科技指导纲要 ，从全 省退耕还林工程需要、各市 ( 州)生物气候特点及立地环境因子综合考虑，将 全省区划为7 个立地区，并提出了适生树种，为各地进行退耕还林还草的规划 提供了理论参考。在对川西南低中山区 ( 凉山州和攀枝花市)的概括中提出包 括 麻 疯树 ( 小 桐 子) 在内 一些 适生 树种 cs l 5 麻风树在攀枝花地区分布的适应性评价 麻风树传进我国已经有2 0 0多年的历史， 其资源量现在以云南最多， 四川、 海南次之。在四川境内主要在攀枝花地区广泛分布。结合攀枝花科技局的相关 调 查资 料， 参考 张 无 敌等 人的 文 献资 料p 6 1 ， 对 麻 疯 树 在 攀枝 花地区 的 适应 性作 了一个分析。 5 . 1 麻风树的种子含油率的比 较 麻风树因其生长地方的不同， 其种子的生物学性状也有差异，如百粒重、 含油率等等都存在差异。 表1 给出了1 2 个不同地区麻风树的种子的生物学性状。 四川大学硕士研究生毕业论文1 2 图1攀枝花地区麻疯树的地理分布图( 黑点表示分布) 四川大学硕士研究生毕业论文 从表 1 中不难看出攀枝花产的麻风树不论在种子含油率还是在种子百粒重和种 子出仁率等指标都处于1 2 个地区中的中上水平，具有开发和利用价值。 表 1伦个地区麻疯树的种子生物学性状 种子性状 云南元谋 云南双柏 云南永仁 云南芒市 云南打洛 云南永胜 云南宾川 云南六库 四川宁南 四川凉山 四川攀枝花 种子百粒重 ( 9 ) 5 2 . 5 6 8 . 9 5 0 . 9 5 9 . 3 7 2 . 3 t 4 8 . 2 1 6 7 . 8 7 1 . 0 5 7 . 3 6 1 . 2 6 6 . 1 种仁百粒重 ( 9 ) 3 3 . 5 4 5 . 3 3 1 . 31 3 9 . 3 4 7 . 2 t 3 3 . 2 4 6 . 0 4 4 . 2 3 8 . 0 种子出仁率 ( % ) 6 3 . 8 6 5 . 8 6 1 . 51 6 6 . 3 6 5 . 3 6 8 . 9 t 6 7 . 9 种仁含油率 ( % ) 6 6 . 8 5 5 。 5 6 1 . 2 t 5 5 7 5 6 . 7 5 1 . 3 5 0 . 0 5 2 6 5 1 . 7 5 6 . 5 5 5 . 1 5 6 . 4 勺心六口2 ;. n乙64 blb6 曰1书n口 4j崎 表中4 表示在该项指标上最低，个 则表示最高) 5 . 2 麻疯树在攀枝花地区的生长 对不同地区麻疯树的生长和结实进行调查 ( 结果可见表 2 )发现，在生长 的前3 年， 攀枝花地区的麻疯树的生长速度在调查的1 2 个地区中位列第4 ， 从 结实上看则在第3 位;在前5 年的生长速度上则居于第3 ，结实则在第5 位。 因此，攀枝花地区比较适合麻疯树的生长。 6 麻疯树的栽培技术 麻疯树在攀枝花市现己 有大面积的栽培。 总结所得的资料， 参考部分文献， 对麻 疯树的 种植 方式 作了 归 纳(7 1 。 种植 方式 通常 有如 下几 种: 直 播 造林 法、 育 苗移栽法、缘篱式种植法、扦插法。 四川大学硕士研究生毕业论文 表2 麻疯树在不同地区的生长和结实情况 ( 表中的长度单位均采用厘米:c m ) 地区第三年株第三年茎3 0 株结实第5 年株第5 年茎3 0株结实 高粗数高粗数 四川攀枝 花 四川凉山 州 四川宁南 云南打洛 云南芒市 云南六库 云南双柏 云南永仁 云南宾川 云南永胜 云南元谋 6 3 . 6 54 . 4 41 4 3 . 0 27 . 1 2 6 0 . 3 24 . 1 01 3 0 . 4 56 . 8 9 01止oji工0口叮11c乃ou qdnolj任乃njq目，目d人 5 9 . 4 1 6 1 . 5 4 5 1 . 2 0 7 0 . 5 2 5 6 . 8 0 6 3 . 8 4 5 5 . 7 5 6 2 . 0 6 6 4 . 4 0 4 . 3 6 4 . 3 6 3 . 8 2 4 . 6 2 4 . 0 7 4 . 6 2 4 . 0 4 4 . 4 2 4 . 4 6 1 4 0 . 8 06 _ 7 8 1 3 0 . 916 . 3 8 5 . 7 0 7 . 0 2 6 . 5 6 7 . 1 8 6. 0 7 6 . 6 5 7 . 2 3 d人no勺j八曰卜卜匕n日 0月八j暇j八曰qdno .， rnj一了1人了dn乙 lid叮口d孟勺八j口 1书，.主.土11).j，11工 262115221226301928 6 . 1 直播造林法 选择麻疯树种子播种， 宜在雨季进行。 大面积播种种子发芽率在5 0 -7 0 % 之间;出苗时间长短不一， 多在 1 0 -4 0 天。 此法简单易行， 但幼苗往往受到地 面高温的烧灼和病虫害的影响。 6 . 2 育苗移栽法 先培养粗壮幼苗， 提高成活率。此法有利于抵抗病虫害，但要求具备一定 条件，定根比较重要。 6 . 3 缘篱式种植法 适合在肥力较高的农耕地旁，既可以将农作物和牲畜隔离，又可以充分利 四川大学硕士研究生毕业论文 用土地肥力来提高生物产量，同时也可以充分利用土地资源。 6 . 4 扦插法 是一种简单易行的种植方式。 厘米左右的树塘中， 一般容易成活。 在雨季，选择粗壮的枝条，插入深度为 3 0 麻疯树在干热河谷生长良好， 生长速度快， 采用扦插法第一年就可以有收成，产量逐年增加。 四川大学硕士研究生毕业论文 第二章 麻疯树活性成分的研究 1 引言 麻疯树的化学组成为: 水分6 . 2 %， 蛋白质8 %， 脂类3 8 %, 碳水化合物 1 7 %, 纤维1 5 . 5 %，灰分5 . 3 %.麻疯树含有各种化学成分， 主要分布于种子、 树皮、 叶、根和乳汁中， 其理化性质历来为研究人员所重视。 麻疯树是一种产籽率高的木本油料植物，其种子含油约 3 1 . 9 %，种仁含油 5 4 .8 % 。 麻疯树的树皮和叶含牡荆素、 异牡荆素及芹素9 1 。 已 从麻疯树中分离得 到的化学成分主要有菇类、黄酮类、香豆素类、脂肪类、w醇类和生物碱等物 质。 此外，蛋白 质的功能也在研究之中，如本实验室从麻疯树种子中分离得到 的一种具有抗癌活性的毒蛋白2 4 ,2 5 1 本文主要针对麻疯树的小分子h 7 类化合物进行研究。 麻疯树的菇类及一些 衍生 物均 具 有明 显的 抗 癌、 抗病毒、 抗菌 活性。 如 从棉叶 麻疯 树 b , c p u 提取方法: 取千燥叶子1 0 馆， 粉碎至6 0 目， 选用了 压力为3 5 m p a ; 温度为 4 0 c ; 时间为3 0 m i n 的萃取工艺进行萃取， 收得萃取液减压浓缩至1 g 原药材/ 1 m 1 溶液。备用。 四川大学硕士研究生毕业论文 表 4 a 收得率l . ( 3 ) 正交试验数据及 计算表 试验号提取率 ( % 7 1 1 1 1 1 1 1 . 2 6 1 0 . 5 6 1 0 . 1 3 1 2 . 6 2 1 2 . 0 2 1 1 . 9 5 1 2 . 3 6 1 2 . 0 2 9 3 3 2 1 1 2 . 4 6 k l 3 1 . 9 5 3 6 . 2 4 3 5 . 2 3 3 5 . 7 4 3 4 . 6 0 3 4 . 5 4 1 . 7 0 3 5 . 6 4 3 5 . 5 1 0 - 4 1 3 4 . 8 7 3 4 . 7 7 0 . 9 7 kz朋r 3 提取物的薄层层析鉴定 3 . 1 材料 两种不同方法所得的提取物。 3 . 2 方法 取含0 . 5 %的梭甲基纤维素钠硅胶薄层板，于1 0 5 -1 1 0 活化3 0 分钟，将 提取物分别点于此硅胶薄层板上，以环己烷: 丙酮 ( 1 : 1 )为展开剂，展开后取 出， 喷以5 % o x 2 s o a 乙醇溶液显色， 放入烘箱 温度稳定在1 0 5 -1 1 0 0c )中 4 分钟。观察并记录结果。 四川大学硕士研究生毕业论文 33 结果 . . 巨 1 . 9 c m 2 . 3 c m 2_ 7 c m 4 . 8 c m 图2溶剂提取物薄层层析 r f a , = 0 .4 0 ; r f a = 0 . 4 8 ; r f o = 0 . 5 6 . . . 1 . 8 c m 2 . 3 c r 口 2 . 夕 c m 4 . 8 c m 图3 c 0 2 超临界萃取物薄层层析 r f b l = 0 . 3 8 ; r f b 2 = 0 .4 8 ; r f b 3 = 0 . 6 0 3 . 4 讨论 薄层层析结果显示两种提取方法所得化合物均分离出3 个点， 其r f 值均在 0 .3 - - 0 .6 之间。参考h . b e c k e r 的数据可以确定属于菇类物质。 四川大学硕士研究生毕业论文 4提取物的g um s 分析 4 . 1 材料 两次不同提取方法所得到的提取物。 4 . 2仪器 h p 6 8 9 0 / 5 9 7 3 g ums 联用仪 ( 美国惠普公司) 43方法 分别取麻疯树 s f e萃取物和 s d提取物 l u l( 乙醇溶液)，用g ums联 用仪分析鉴定， 通过h p ms d化学工作站检索v in标准质谱图库， 将两者结果 进行分析比较， 按峰面积归一化法进行计算各化学成分在提取物中的相对百分 含量。 实验条件如下: 色谱条件: h p 一 弹性石英 5 % 苯甲 硅烷毛细管柱 (c 3 0 m x (d 0 . 2 5 m m x 0 . 2 5 u m n o m i n a l li w l e t t一 p a c k a r d )。程序升温:柱温 1 5 0 c , 1 5 0c / m i n 上升至2 8 0 ， 保持1 0 m i n :进样口 温度: 2 6 0 c 载气: 氮气; 载气流速:1 . 0 m l / m i n ; 柱 前压: 7 1 k p a ; 分流比: 2 0 : 1 : 进样量:l o w 。 质谱 条件: 离子源: e l 源; 离子 源温度:2 3 0 0c :四极杆温度:1 5 0 1c ， 标准调节方式:电子能量:7 0 e v ;倍增 器电: 压: 1 1 2 0 v ; 接口 温度; 2 8 0 0c : 质量扫描方式: s c a n ; 溶剂延迟: 2 m i n ; 质量范围:3 0 - 4 0 0 a m u ;标准质谱检索库: v i n .结果见表5 0 4 . 4结果 由气相色谱和表5 可知， 二氧化碳超临界萃取可得1 5 个化合物， 可鉴定出 8 个化合物，占 色谱总面积的5 3 0% a ; 溶剂提取可得2 7 个化合物， 可鉴定出8 个 化合物，占色谱总面积的2 9 .6 %. 四川大学硕士研究生毕业论文 表5麻疯树s f 和s d 提取物的g um s 结果比较 序号化合s f e ( %)s d ( %) 麻疯树酮 麻疯树醇 昌酮 e 一 香树素 麻疯树菇醇 十六烷酸乙酣 麻疯树烷酮 麻疯树叫噪酮 庚二烯 菠烷 棕搁酸 十八烯酸 亚油酸 0 . 8 6 洲洲n 已20么 4 . 3 4 1 . 0 8 0 . 1 2 9 . 6 0 0 . 4 4 0 . 6 9 2 . 7 6 0 . 5 7 0 . 6 0 从连几乙 ，土八jl匀 .寸 .工乃j连占 1 0 1 1 1 2 1 3 4 . 5讨论 从表5 可知，二氧化碳超临界萃取所得的产物中菇类成分麻疯树酮、醇的 含量较高，而溶剂提取得到的产物该菇类成分含量相对较低:同时在化合物的 组成上有明显的差异，这是由于大多数猪类化合物分子量大、沸点高、挥发性 小，s d 很难提取完全，再加上s d 提取温度较高使某些化合物分解，以至无法 提取得到原有的真实化合物; 而采用s f b 时， 由于二氧化碳有很强的溶解能力， 又具有温度低、提取时间短的优点，使有效成分不易分解破坏，更能提取真实 有效的活性成分。 四川大学硕士研究生毕业论文 第三章 麻风树提取物的抑菌、抗病毒实验 基于为今后的工业生产打基础的目的，本实验室一直致力于四川攀枝花地 区麻疯树的研究工作，本论文的相关研究也遵循了这一原则。因此，在材料的 选择上，本文没有采用多个种类、不同产地的横向 对比实验，而是选择了单一 产地 ( 攀枝花)的一个种 ( 麻疯树)作为研究对象进行了一系列的深入研究。 本文在上一章中探讨了两种不同提取方法的异同，在这一章则希望讨论麻 疯树提取物的部分药理效应。二氧化碳超临界萃取虽然具有温度低、提取时间 短、有效成分不易被分解破坏等优点，但实验设备难以满足大生产的需要。而 溶剂提取法 ( s d ) 在实际生产过程中相对成熟， 所以本文仅作了s d 提取物的抑 菌和抗病毒实验。 由于条件限制，本文没有进行二氧化碳超临界萃取法提取物的抑菌和抗病 毒实验;但两种提取方法的结果比较显示，二氧化碳超临界萃取法提取有效成 分温度低、提取时间短、有效成分不易被分解破坏、提取比较完全。如果利用 二氧化碳超临界萃取法进行大生产，希望在改进生产设备和降低生产成本方面 有所突破。 1提取物抑制白色念珠菌实验 1 . 1白色念珠菌生长曲线的测定 1 . 1 . 1 培养基的制备 配置3 种不同状态的培养基 ( 固休、半固体、液体) ，1 2 1 灭菌2 0 分钟， 3 种培养基的比例如表6 : 1 . 1 . 1 白色 念珠菌生长曲线 取灭菌的锥形瓶3 个 ( 编号a , b , c ， 其中c是后面实验所用，中途不打 7 1 ) ， 倒入约7 0 毫升液体培养墓， 加入氯霉素 ( 按照5 0 毫克每4 0 0 毫升， 或者 说 是 1 2 .5 微克每毫升) ， 振荡混匀。接种一个单 菌落。 3 7 振荡培养。 每一小 时取样进行测量。 测定a b s 值时采用的紫外光分光光度计( s p e c t r o m e t e r ) 型号为 四川大学硕士研究生毕业论文 1 2 s d 提取物抑菌实验 1 . 2 . 1 材料 乙醇提取物，白色念珠菌 ( a t c c 1 0 2 3 1 )第1 0 代，用 1 %蛋白膝水溶液稀 释成应用液。 消毒剂则是乙醇。 中和剂采用3 %吐温- 8 0 + 2 %甘氨酸 + 0 . 5 % n a 2 s 2 0 3 p b s + 2 %卵磷脂。 以布片为载体。 1 . 2 . 2方法 1 . 2 . 2 . 1 中 和剂的鉴定实验 按 消毒技术规范第一分册 消毒剂浓度 4 0 %，杀菌时间 重复实验 3 次。 l mi n, 实验技术规范( 1 9 9 9 ) 2 .4 载体法进行， 中和时间 i o m i n ，该实验在 2 0 士2 温度下 1 . 2 . 2 . 2 提取物的杀菌实 验 按 消毒技术规范第一分册实验技术规范( 1 9 9 9 ) 2 .6 载体法进行， 该样品4 0 %, 2 0 %, 1 0 % 浓度，在2 0 12 温度下，重复实验3 次。 1 _ 2 . 3结果 1 . 2 . 3 . 1 中 和剂的鉴定实验 第1 , 2 , 3 , 4 , 5 组 平 均生 长菌 数分 别为。 、 1 2 6 7 , 1 .4 4 x 1 0 6 , 1 .4 7 x 1 0 6 c f n / 片，第3 , 4 , 5 组三者之间的误差为1 . 1 3 %，第6 , 7 , 8 组无菌生长 ( 表8 ) e 1 . 2 . 3 . 2对白 色念珠菌的 杀灭 效果 在2 0 士2 0c 温度下重复3 次证明， 4 0 %, 1 0 %的该提取物溶液作用白色念珠 菌 i m i n 到 7 m i n ，杀灭率可达 9 9 . 9 1 %到 1 0 0 %之间 ( 表9 ) a 四川大学硕士研究生毕业论文 裘8 中和剂鉴定实验结果 每次实验生长菌数 ( c f u / 片) 1 2 3 平均数 ( c f u / 片) 组别 1000n 1 1 5 5 1 .5 0 x 1 0 6 1 . 4 3 - 1 0 1 . 3 6 x 1 0 6 0 1 3 7 5 1 . 3 2 x 1 0 6 1 . 3 9 - 1 0 6 1 . 4 6 x 1 0 6 0 0 1 2 7 0 1 . 4 9 x 1 0 6 1 . 6 5 x 1 0 6 1 . 6 0 x 1 0 6 0 0 1 2 6 7 1 . 4 4 - 1 0 1 . 4 9 - 1 0 6 1 _ 4 7 x 1 0 6 8 0 0 0 0 表9 对白色念珠菌的杀灭效果 药物 浓 度 不同作用时间 ( m i n )的平均杀灭率 ( % ) 1 3 5 7 9 9 . 9 1 9 9 . 7 1 9 9 . 5 3 9 9 . 9 7 9 9 . 9 1 9 9 . 7 2 9 9 . 9 9 9 9 . 9 5 9 9 . 8 7 1 0 0 . 0 0 9 9 . 9 8 9 9 . 9 3 0%既俄 4c乙1. 1 . 2 . 4讨论 1 、 在载体法实验条件下用3 % 吐温一 幼+ 2 % 甘氨酸十 0 . 5 % n a 2 s z 0 3 p $ s + 2 % 卵磷脂溶液作为中和剂，可以有效中和该提取物4 0 %浓度对白色念珠菌的杀灭 作用，而且该中和剂对白色念珠菌的生长繁殖和培养基无影响。 2 、 在2 4 士2 c温度下采用载体法， 该提取物的溶液4 0 % 浓度作用白色念珠 菌i m i n ，杀灭率为9 9 .9 1 % 1 4 % 浓度作用7 m i n ，杀灭率为9 9 . 9 3 %a 四川大学硕士研究生毕业论文 z 提取物抗病毒实验 2 . 1 实验材料 2 . 1 . 1 药物 本实验得到的s d 提取物， 药物浓度为1 0 0 0 m g 原生药/ m l , 阿昔洛韦 ( a c v )注射液，2 5 0 m g / 瓶，批号:9 7 0 1 0 5 ，由湖北医药工业研 究所科益制药厂生产，以l m g / m l 作为应用液。 2 . 1 . 2 病毒 单纯疮疹病毒i 型 ( h s v - i ) 和i i 型 ( h s v - i i ) ，由卫生部药品生物制品检 定所提供。 2 . 1 . 3 细胞 v e r o 细胞，由卫生部药品生物制品检定所提供。 2 . 1 . 4 其他主要试剂及仪器 c 0 2 孵化箱美国s h e l - l a b 公司 细胞培养板美国c o rn i n g 公司 细胞培养瓶美国c o m i n g 公司 r p m i 1 6 4 0 培养基美国g i b c o 公司 胎牛血清英国进口分装 2 . 2 实验方法 2 . 1 测定本提取液和阿昔洛韦对v e r 。 细胞的最大无毒浓度。 2 . 2采用c p e法测定上述两种药物对感染了h s v 病毒的单层v e r 。 细胞的保护 作用，根据药物抑制细胞病变的效果来确定上述两种药物的抗 h s v - i 和 h s v - h的药效。 四川大学硕士研究生毕业论文 2 7 表 1 0提取液对v e r 。 细胞的最大无毒浓度 浓度 ( m g / m l ) 5 0 2 5 1 2 . 5 6 . 2 5 3 . 1 2 1 . 5 6 0 . 7 8 细胞 对照 孔号 1+ 十 +一一一一一一一 + + q乙q曰 4+ + 十一一一一一一一 注: “ 一 ”无细胞病变，“ +十+ ”7 5 % 无细胞病变 表 1 1a c v 对v e r o 细胞的最大无毒浓度 浓度 ( m r / m l ) 0 . 50 . 2 50 . 1 2 50 . 0 6 2 0 . 0 3 10 . 0 1 5 细胞 对照 孔号 一一一一一一一. 1今+干丰+一一一 + 重 士 +十十十+ +十 十+十十+ + 十十 n乙介启 4+ + + + + +一一一 注: “ 一 ”无细胞病变， “ +， 5 0 % 无细胞病变，“ 十+ ”7 5 % 无细胞病变 表1 2 h s v - 1 1 o o t c d s o 感染细胞2 h 后，在加药物作用 对照 提取液 ( m g / m l )a c v ( m g / m l ) 5 0 2 5 1 2 . 5 6 . 2 53 . 1 21 . 5 60 . 0 0 5 0 . 0 0 2 5 0 . 0 0 1 2 5h s v -i 孔号 + 十+十+干 +十十 +十 +千十+ + + + +十十 q妇，曰 4+ +一一+ + + + + + +一一一+ + + +一 注: “ 一 ”无细胞病变， “ +十 ”5 0 % 无细胞病变，“ + ”7 5 % 无细胞病变， “ +十+ ”1 0 0 % 细胞病变 表1 3 h s v - i i i o o t c d s o 感染细胞2 h 后，在加药物作用 对照 提取液 ( m g / m l )a c v ( m g 加1 ) hs v 5 02 5 1 2 . 5 一+ 6 . 2 5 + + + + + 斗+ 3 . 1 21 . 5 6 0 . 0 0 5 0 . 0 0 2 5 0 . 0 0 1 2 5 i i 4 + + + + + + + +十+ + + + + + + + + + + + + + + + 十 十 + + 十 + + + + + + 十 + + 十 + 十 + 孔号一1 千+ +十 q乙勺曰 + + 十 + + 十 + + + 十 十 + + + 注: “ 一 ” 无细胞病变， “ 十十 ” 5 0 % 无细胞病变，“ + 7 5 % 无细胞病变， “ 十+ ”1 0 0 % 四川大学硕士研究生毕业论文 细胞病变 2 . 3 实验结果 2 . 3 . 1 本提取液和阿昔洛韦对v e r 。 细胞的最大无毒浓度 表1 0 和表1 1 说明本提取液对v e r 。 细胞的最大无毒浓度为2 5 m g / m l ; 阿昔 洛韦对v e r o 细胞的最大无毒浓度为0 . 0 3 m g / m l o 2 . 3 . 2 本提取液体外抗h s v 的结果 表 1 2 表明本提取液体外抗h s v - 1 1 0 0 t c i d ， 的浓度为1 2 . 5 m g / m l ;体外抗 h s v - 1 1 1 0 0 t c i d 的浓度为 2 5 m g /