（分析化学专业论文）药物的流动注射化学发光分析及其应用研究.pdf

摘要 摘要 一、f 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射( 化学发光) 确定物质含量 的一种痕量分析方法。化学发光分析具有灵敏度高、线性范围宽、分析速度 快以及仪器设备相对简单便宜等优点，并已经成为现代痕量分析中一个十分 活跃的研究和应用领域。目前，这种方法在痕量金属离子、无机阴离子、生 物分矛、致癌物质、药物化学、环境科学及临床医学等方面得到了广泛的应 肌了 本论文包括两部分。第一部分是综述，这部分结合各种化学发光反应体 系，评述了1 9 8 5 年以来，特别是最近5 年来国内外药物化学发光分析方面 的应用研究进展。 第二部分是研究报告。详细研究了铁氰化钾一鲁米诺体系和铁氰化钾一鲁 米诺一亚铁氰化钾体系的化学发光动力学性质，对影响体系化学发光强度及 信噪比的各种因素进行了研究。利用维生素k ，列铁氰化钟一鲁米诺体系化学 发光的抑制作用、异烟肼对k ，f e ( c n ) 6 - - l u m i n o l 体系化学发光的增强作用以 及尿酸对铁氰化钾一鲁米诺一亚铁氰化铡体系化学发光的增强作用，通过对实 验条件的优化，建立了简单、灵敏、快速测定v k 、异烟肼和尿酸的流动注 射化学发光新方法，并探讨了化学发光反应的机理。 ，一0 建立了微透析一流动注射一化学发光检测联用系统，并用来研究了赫酸四 环素与牛血清白蛋白的相互作用。首先利用k 3 f e ( c n ) 6 - - l u m i n o l k 。f e ( c n ) 6 化 学发光体系，通过对氧化剂浓度、背景抑制剂浓度和样品流速等实验条件的 优化，结合流动注射技术，建立了盐酸四环素的f i a c l 分析方法，然后对 微透析探针进行了校正，测定了不同灌流速率下探针的相对回收率。在选定 的实验条件下，对盐酸四环素一牛血清白蛋白之间的相互作用进行了体外研 究，结果表明简单、快速的微透析一流动注射一化学发光联用技术适用于药物 与蛋白的相互作用研究。 ( 1 ) 铁氰化钟溶液与鲁米诺碱性溶液混合时产生化学发光，维生素k ， 的水溶液抑制此反应的化学发光强度，基于此，建立了测定v k ，的流动注射 化学发光新方法，该法简单、快速。化学发光强度与维生素k ，的浓度在o l范围内成正比，检测限r3 ( ) 为 l ，相对标准偏差为1 6 , u g l m l0 0 l g m l 0 ( 1 1 = 1 1 ，0 4 , u g m lm s b ) 。用于v k ：片制及汴射液中m s b 的测定，结果满 意。 摘要 ( 2 ) 铁氰化钾与碱性鲁米诺溶液混合产生化学发光，异烟肼增强其化 学发光强度，基于此，建立了一种测定异烟肼的流动注射化学发光分析新方 法。在o l , u g m l 的异烟肼浓度范围内，化学发光强度与异烟肼浓度呈良 好的线性关系，检测n ( 3d ，为o 0 3n g m l ，对0 1 , u g m l 的异烟肼进行1 1 次 平行测定，相对标准偏差( r s d ) 为1 2 。用于异烟肼药片及针剂的测定，结 果令人满意。 ( 3 ) 在碱性条件下，铁氰化钟氧化鲁米诺，产生化学发光，尿酸对该 体系的化学发光有显著的增强作用( 亚铁氰化钾存在时) 。基于此，建立了 一种直接测定尿酸的流动注射化学发光分析法。方法的线性范围为2 0 1 0 一5 0 1 0 一g m l ，检测限( 3 0 7 ) 为67 1 0 一g m l ，相对标准偏差为1 1 ( 尿酸1 0 1 0 g m l ，n = 1 1 ) 。用于血清及尿样中尿酸的分析，结果令人满 意。 ( 4 ) 以盐酸四环素为例，利用微透析一流动注射一化学发光联用系统建 立了研究药物与蛋白相互作用的新方法。实验发现盐酸四坏素对铁氰化钾一 鲁米诺一亚铁氰化钟体系的化学发光强度有增强作用，在本实验条件下，此 体系对盐酸四环素的测定极限为0 2j u g m l ，线性范围为1 1 0 0 , u g m l 。将 所研究的药物与牛血清白蛋白按不同的摩尔比混合( 3 7 ) ，然后用微透析 探针在5 , u l m i n 的灌流速度下进行取样，微透析探针对盐酸四环素的回收 率为2 9 6 ；利用s c a t c h a r d 方法二= n k 一垅及k l o t z 方法 d f 上= 上+ 上上得到的盐酸四环素与牛血清白蛋白的结合参数值与文献值相 rn kdr 吻合，这晓明简单、快速的微透析一流动注射一化学发光联用技术适用于药物 与蛋白的相互作用研究一 a b s t r a c t c h e m i l u m i n e s c e n c ea n a l y s i s ，b a s e do nt h ee m i s s i o n d u r i n gs o m ec h e m i c a l r e a c t i o n s ，i sat e c h n i q u ef o rt h ed e t e r m i n a t i o no ft r a c e - a m o u n ts p e c i e s d u et oi t s h i g hs e n s i t i v i t y ，w i d el i n e a rr a n g e ，r a p i d i t y ，s i m p l i c i t ya n dr e l a t i v e l yl o wc o s t ， c h e m i l u m i n e s c e n c ea n a l y s i sh a sf o u n da p p l i c a t i o ni na s s a yo ft r a c ea m o u n t so f m e t a li o n s ，i n o r g a n i ca n i o n s ，b i o l o g i c a lm o l e c u l e sa n d c a n c e r c a u s i n gs p e c i e s ，a n d i np h a r m a c e u t i c a lc h e m i s t r y ，e n v i r o n m e n t a ls c i e n c ea sw e l la sc l i n i c a lm e d i c i n e t h et h e s i sc o n s i s t so ft w op a r t s t h ef i r s to n ei sar e v i e wd e a l i n gw i t ht h e d e v e l o p m e n t o ft h ea p p l i c a t i o no fc h e m i l u m i n e s c e n c ei np h a r m a c e u t i c a la n a l y s i s e m p h a s i si sp l a c e do n t h ed e v e l o p m e n ti nt h er e c e n tf i v ey e a r s t h eo t h e r p a r t i sr e s e a r c h r e p o r t s t h e k i n e t i c p r o p e r t i e s o ft w o c h e m i l u m i n e s c e n c e s y s t e m s ，k 3 f “c n ) 6 - - l u m i n o ls y s t e m a n d k 3 f e ( c n ) 6 - - l u m i n o l k 4 f e ( c n ) 6s y s t e m ，w e r e s t u d i e di nd e t a i l v a r i o u sf a c t o r s w e r ea l s os t u d i e dt h a th a v ee f f e c to nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c ei n t e n s i t ya n d o ro n t h er a t i oo fs i g n a lt on o i s eo ft h et w os y s t e m s i tw a sf o u n dt h a tt h e a q u e o u s s o l u t i o no fv i t a m i nk 3h a sd e p r e s s i n ge f f e c to nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c ei n t e n s i t y o ft h ek 3 f e ( c n ) 6 - - l u m i n o ls y s t e m ，w h i l ei s o n i a z i dh a se n h a n c i n ge f f e c to ni t ，a n d u r i ca c i dh a se n h a n c i n ge f f e c to nt h ec li n t e n s i t yo ft h eo t h e rs y s t e m b a s e do n t h e s e d i s c o v e r i e s ，a s e r i e so f e x p e r i m e n t s w e r ec o n d u c t e dt o o p t i m i z e t h e c o n d i t i o n si np o i n ta n dt om a k ec l e a rt h em e c h a n i s m so ft h et h r e er e a c t i o n s s e n s i t i v e ，s i m p l ea n df a s tm e t h o d sw e r ep r o p o s e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fv k 3 ， i s o n i a z i da n du r i ca c i d a m i c r o d i a l y s i ss a m p l i n g - f l o wi n j e c t i o n - c h e m i l u m i n e s c e n c e d e t e c t i o n s y s t e mw a ss e tu pa n dh a sb e e ns u c c e s s f u l l ya p p l i e dt o t h es t u d yo fi n t e r a c t i o n b e t w e e n t e t r a c y c l i n eh y d r o g e n c h l o r i d ea n db o v i n es e r u m a l b u m ( b s a ) i t c o m p r i s e d s e v e r a l s t e p s f i r s t l y ， v a r i o u sf a c t o r so ft h e k 3 f e ( c n ) 6 - l u m i n o l - k 4 f e ( c n ) 6 c h e m i l u m i n e s c e n c e s y s t e m ，s u c h a so x i d a n t c o n c e n t r a t i o n 、f l o wr a t ea n dr e p r e s s o rc o n c e n t r a t i o nw e r es t u d i e d i no r d e rt o o b t a i n o p t i m u me x p e r i m e n t c o n d i t i o n s a sa r e s u l t ， a f l o w - i n j e c t i o n c h e m i l u m i n e s c e n c e a n a l y s i s m e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f t e t r a c y c l i n e h y d r o g e nc h l o r i d ew a sd e v e l o p e ds e c o n d l y ，t h ed i a l y s i sp r o b e w a sc a l i b r a t e da n d i t sr e c o v e r i e sa td i f f e r e n tp e r f u s i o nr a t e sw e r em e a s u r e df i n a l l y ，t h ei n t e r a c t i o n 4 a b s t r a c t b e t w e e nt e t r a c y c l i n eh y d r o g e nc h l o r i d ea n db s aw a ss t u d i e di nv i t r ou n d e rt h e o p t i m i z e d c o n d i t i o n st h er e s u l t c o m p a r e d w e l lw i t ht h a ti nt h e l i t e r a t u r e ， i n d i c a t i n g t h a tt h e p r o p o s e ds y s t e m i ss u i t a b l ef o rt h e s t u d y o fd r u g - p r o t e i n j n t e r a c t i o n a c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) f l o ws y s t e mi sd e s c r i b e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f m e n a d i o n es o d i u mb i s u l f i t eb a s e do ni t s r e p r e s s i o no nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c e e m i s s i o np r o d u c e du p o nm i x i n gah e x a c y a n o f e r r a t e ( i i i ) s o l u t i o nw i t ha na l k a l i n e l u m i n o ls o l u t i o ni nt h ea b s e n c eo fc o o x i d i z e rt h es y s t e mr e s p o n d sl i n e a r l yt o m e n a d i o n es o d i u mb i s u l f i t ec o n c e n t r a t i o ni nt h e r a n g e0 1 , u g m l w i t ha d e t e c t i o nl i m i t ( 32o fo 01 p g m l r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ( r s d ) o f o 16 f o r0 4 p g m l m e n a d i o n es o d i u m b i s u l f i t e ( ”= 11 ) t h es y s t e m h a sb e e n s u c c e s s f u l l ya p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no f m e n a d i o n es o d i u mb i s u l f i t ei nt a b l e t s a n di n j e c t i o n s a c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) f l o ws y s t e mi sd e s c r i b e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f i s o n i a z i db a s e do ni t se n h a n c e m e n to nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c ee m i s s i o np r o d u c e d u p o nm i x i n gah e x a c y a n o f e r r a t e ( i i i ) s o l u t i o nw i t h a na l k a l i n el u m i n o ls o l u t i o n 1 1 h es y s t e mr e s p o n d sl i n e a r l yt oi s o n i a z i dc o n c e n t r a t i o ni nt h er a n g e0 - - ip g m l w i t had e t e c t i o nl i m i t ( 3 g ) o f0 0 3n g m l r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ( r s d ) o f 1 2 f o r01 p g m li s o n i a z i d ( h = 11 ) t h es y s t e mh a sb e e ns u c c e s s f u l l ya p p l i e dt o t h ed e t e r m i n a t i o no fi s o n i a z i di np h a r m a c e u t i c a lp r e p a r a t i o n s af l o wi n j e c t i o nc h e m i l u m i n e s c e n c em e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fu r i c a c i dw a sd e s c r i b e d t h em e t h o di sb a s e do nt h ec h e m i l u m i n e s c e n c ep r o d u c e d d u r i n gt h eo x i d a t i o no fl u m i n o lb yh e x a c y a n o f e r r a t e ( i i | ) i na na l k a l i n es o l u t i o n t h ee m i s s i o n i n t e n s i t y i s g r e a t l y e n h a n c e d b y u r i ca c i di nt h e p r e s e n c e o f h e x a c y a n o f e r r a t e ( i i ) a ss u p p r e s s o r t h ef l o ws y s t e mi sv e r ys t a b l e t h ep r o p o s e d m e t h o di s s i m p l e ，s e n s i t i v e ，a n di n e x p e n s i v e t h ec h e m i l u m i n e s c e n c ei n t e n s i t yi s p r o p o r t i o n a lt o u r i ca c i dc o n c e n t r a t i o no v e rt h er a n g e2 0 1 0 一5 0 1 0 “g m l w i t had e t e c t i o nl i m i to f67 1 0 一g m l t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ( r s d ) i s 1 1 ( n = l1 ) t h em e t h o dh a sb e e ns u c c e s s f f d l ya p p l i e dt o t h ed e t e r m i n a t i o no f u r i ca c i di nh u m a nu r i n ea n ds e r u ms a m p l e s i na d d i t i o n ，t h ep o s s i b l er e a c t i o n m e c h a n i s mh a sb e e nd i s c u s s e da sw e l l an e wm e t h o df o rs t u d y i n gt h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nt e t r a c y c l i n eh y d r o g e n c h l o r i d ea n db o v i n es e r u ma l b u m ( b s a ) w a sd e v e l o p e d ，u s i n gm i c r o d i a l y s i s s a m p l i n g f l o wi n j e c t i o n c h e m i l u m i n e s c e n c ed e t e c t i o ns y s t e m i tw a sf o u n dt h a t t e t r a c y c l i n eh y d r o g e nc h l o r i d eh a sg r e a te n h a n c i n ge f f e c to nt h ei n t e n s i t yo ft h e c h e m i l u m i n e s c e n c ep r o d u c e db yk 3 f e ( c n ) 6 - - l u m i n o l - k 4 f e ( c n ) 6s y s t e m u n d e r t h e o p t i m i z e dc o n d i t i o n s ，t h e c h e m i l u m i n e s c e n c e i n t e n s i t y w a s p o s i t i v e p r o p o r t i o n a l t ot h ec o n c e n t r a t i o no ft h et e t r a c y c l i n eh y d r o g e nc h l o r i d eo v e rt h e r a n g eo f1 t o10 0p g m lw i t had e t e c t i o no f0 2l 唱m l t h ed r u go fi n t e r e s tw a s m i x e dw i t hb o v i n es e r u ma l b u ma td i f f e r e n tm o l a rr a t i o s ( 3 7 ) t h er e c o v e r yo f t h ed i a l y s i sp r o b et ot e t r a c y c l i n eh y d r o g e nc h l o r i d ew a s2 9 6 a tt h ep e r f u s i o n r a t eo f5 , u l m i n t h en k v a l u e ，o b t a i n e du s i n gs c a t c h a r dp l o te q u a t i o na n dk l o t p l o te q u a t i o n ，a g r e e dw e l lw i t ht h a ti nt h el i t e r a t u r e i ti n d i c a t e st h a tt h ep r o p o s e d s y s t e mi ss u i t a b l ef o rt h es t u d yo fd r u g p r o t e i ni n t e r a c t i o n 6 综述：药物的化学发光分析新j ! l 艟 第一部分药物的化学发光分析新进展 一引言 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射( 化学发光) 确定物质含量 的一种痕量分析方法。化学发光分析具有灵敏度高( 检出限常达1 0 “2 一1 0 1 8 m 0 1 ) 、线性范圈宽( 3 6 个数量级) 、分析速度快以及仪器设备相对简单便 宜等优点，使得这种方法已经成为现代痕量分析中一个十分活跃的研究和应 用领域。t 自于化学发光分析的这些优点恰好满足药物分析对分析方法提出的 要求，使得它在药物分析领域得到了较为广泛的应用。关于化学发光分析在 药物分析方面的应用，国内外已有多篇综述”5 1 。本文结合各种化学发光反应 体系，评述了1 9 8 5 年以来国内外药物化学发光分析方面的应用研究进展。 二 常见化学发光反应体系在药物分析中的应用 1 鲁米诺类化学发光反应体系 鲁米诺( 5 - 氨基一邻苯二甲酰肼) 是使用最早应用最广泛的化学发光试 剂之一，它在碱性溶液中可以被强氧化剂氧化而处于激发态，激发态发射蓝 光同时回到基态( 如图示1 ) 。许多化合物的化学发光分析都是采用鲁米诺发 光体系。关于该体系在药物分析中的应用，根据药物对鲁米诺化学发光反应 体系的作用原理或者所采用的分析手段的差异，拟将此体系分为增强、抑制、 偶合、在线电生i 。i 制法及电化学发光法等，分别进行评述。 11 催化作用 最常用的氧化剂为过氧化氢，但鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应速度 很慢。一系列金属离子可以催化这一反应，使发出的光大大增强，且光强与 催化离予的浓度成1 f 比，由此可以对这些会属离子直接进行测定。如快速静 咏内血管舒张药硝普钠( s n p ) 的测定11 就是基于它在碱性介质中催化 h ol u m i n o l 化学发光反应这一原理。 综述：药物的化学发光分析新逃腱 ￥h n h o o 。一 n h 2 o n t 2 o + f i g 1 利用发光分析的高灵敏性对药物在动物体内的动态变化进行监测，绘制 药时曲线，计算系列药动学参数，可为临床上安全、合理、有效地用药提供 理论依据。例如：以l u m i n o l - h ，o ，一c o o d 为发光体系在柱层析分离的前提下， 对表静态兔血液中儿茶酚胺类神经递质肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺进 行监测，对几种结构相似的同类物质，进行同时测定的检出限为1 0 。2g m l ， 为生理学及临床研究提供了高灵敏检测方法 8 ( 抑制反应中有个与此同) 。 1 2 在线电生试剂一鲁米诺c l 体系 在鲁米诺化学发光反应体系中，常用的氧化剂过氧化氢、溴、次氯酸盐、 o ，一以及酸性高锰酸钾等不稳定，使其应用受到一定限制。z h a n g 等利用恒电 流电解产生试剂( 如c 1 0 一、m n ( i i i ) 等) 与流动注射化学发光分析方法结合， 提出电生不稳试剂化学发光分析法，很好地解决了七学发光反应中某些试剂 不稳定的问题，他们利用在线电生c i o 一一l u m i n o l 化学发光体系测定了酚磺乙 胺n 、多巴胺( 一种治脑神经病的药物) ，肾上腺素、喘息定( 异丙基肾上腺 素) i 、儿茶酚胺1 等。基于异烟肼 i2 】增强电生次氯酸根一鲁米诺化学发 光，l 一多巴 13 和抗肿瘤药盐酸阿糖胞苷刈抑制i u m i n o l 一电生c i o 一化学发 光，对这儿种药物进行了测定，检出限分别为异烟肼6 1 0 一g m l 、l 一多巴 80 x1 0 。1 o g m l 和8 1 0 4g l 的盐酸阿糖胞苷。 郑行望等53 利用潘生丁抑制在线电生次氯酸根一鲁米诺化学发光这一性 质，建立了心绞痛药潘生丁的c l 测定方法，d l = 00 0 4m g l 。同时，还基 于异烟肼增强在线电生b r o 一鲁米诺化学发光，测定了异烟肼的含量，检出 综述：药物的化学发光分析新进展 限达7 0 1 0 9g m l “。 1 3 偶合反应 所谓偶合反应就是将能产生或消耗化学发光反应物的一个( 或一系列) 反应与一个化学发光反应结合起来，实现某些物质的间接化学发光测定。 v k ，增敏乙醇的光氧化反应，产生的过氧化氢再与鲁米诺反应产生化学 发光( 以氯化血红素作此反应的催化剂) ，可测定维生素k ，线性范围为1 0 1 0 5 0 1 0 4m o l l ( 可将此法与其它方法作一比较，加以评述) 【” 。利 用f e ( i i i ) 一柠檬酸酯的光分解产物f e ( h ) 催化鲁米诺化学发光反应，无需氧 化剂，可实现对饮料及药物制剂中的柠檬酸酯的检测( 2 0 1 0 10 1 0 。 m o l l ) i “。同理，唐宏武等 1 们利用f e ( i i i ) 氧化抗坏血酸生成f e ( i i ) 的反应 与l u m i n o l 0 2 - - f e ( i i ) 化学发光反应偶合间接测定了抗坏血酸的含量( 检出限 为2 1 1 0 。g m l ) ，a l a p o n t 等利用异烟肼一二氧化锰反应产生的m n ( i i ) 抑 制l u m i n o l h 2 0 2 - - f e ( c n ) 6 。体系的c l ，测定了异烟肼 2 。v b l2 酸化释放的 g o o d 催化l u m i n o l h ，o ，体系c l ，由此可测v b ， 2 “。g r e g o r i o 等瞳2 1 则根 据扑热息痛被f e ( c n ) 6 3 - 氧化的产物抑制l u m i n o l h ，o ，化学发光这发现，建 立了测定扑热息痛的新方法。 1 4 增强反应 黄玉文等”基于葡萄糖对l u m i n o l k ，c u ( i o 。) ：体系化学发光的增强作 用，利用反相流动注射技术，测定了葡萄糖，检测限达1 8 1 0 m g l 。同 理，利用维生素b 。增强l u m i n o l h ：o ，- n a ：c ：0 4 一k o h 体系化学发光测定了维 生素b 。，可检测6 p g m l 的v b 6 【2 “。 异烟肼既增强l u m i n o l - n a c i o 体系51 的化学发光，又增强 l u m i n o l m n ( i i ) 一k i o 。体系 2 6 的化学发光，基于此，测定了异烟肼。前种 方法的检出限为l7 1 0 一g m l ；后一种方法由于是在碱性条件下进行，许 多金属离子都生成了沉淀，因此不干扰异烟肼的测定，选择性好。 1 5 抑制反应 基于一些生物样品分子、有机物、无机物对l u m i n o l 化学发光反应的抑 制作用，可对其进行测定。在药物分析中，相当数量的药物的测定，都是利 用它们抑制鲁米诺c l 反应这一性质。如庞志功等3 基于i 对 l u m i n o l h ! o ! 一a u c i 。的抑制作用，测定了药物和兔血浆中含碘药物盐酸胺碘 综述：药物的化学发光分析新进展 利。 含硫醇的药物能还原次氯酸盐，该作用将抑制l u m i n o l 一次氯酸盐体系的 化学发光，据此可检测这些药物 2 8 - 2 9 j 。 分子结构中含有酚羟基的有机物，与过氧化氢发生氧化还原反应，消耗 过氧化氢，这使得鲁米诺一过氧化氢一金属离子c l 反应的发光强度降低，其 降低程度在一定范围内与酚羟基有机物的浓度成正比。基于这一原理，可测 定中草药中含有的黄酮醇、甾体醇等酚羟基药物。庞志功等以 l u m i n o l h ，o ，一c o ( i i ) 体系测定了天麻素3 、穿心莲内酯3 “、厚朴酚 3 3 、 芦丁3 4 丹皮酚_ 3 “、儿茶酚胺类化合物等 3 7 】。与此类似，他们还利用 丹皮酚中的酚羟基可被过氧化氢氧化，猝灭上述体系化学发光的原理，测定 了在牡丹皮和徐长卿中丹皮酚的含量b “。 雷氏盐( n h 。 c r ( n h 3 ) 2 】( s c n ) 。 h 2 0 ) 对l u m i n o l h 2 0 ! 化学发光体系具 有催化作用。李建国等人发现，某些药物会与雷氏盐反应生成沉淀，导致化 学发光强度降低，据此可以实现对这些药物的检测。他们以此建立了测定多 巴胺、。肾上腺素及异丙肾上腺素的化学发光方法，检出限依次为4 1 0 4 g m l 、2 x 1 0 _ 8g m l 和2 1 0 “g m l 。另外，一系列生物碱类物质( 盐酸 吗啡、多巴胺、肾上腺素、异丙肾上腺素、青藤碱、磷酸可待因、黄连素和 普鲁卡因) 也具有这一性质，若与h p l c 技术联用，可对复杂样品中各生物 碱进行分析：。4 0 j 。 基于v c 抑制l u m i n o l k 、f e ( c n ) 。化学发光这一性质建立的测定v c 的c l 方法，检测限为4 0 1 0 m o l l ，并被用来测定了维生素片剂、针剂和血样 中的v cc 4 ”。将l u m i n o l 和k 3 f e ( c n ) 6 固定，作成传感器，可测5 5 1 0 - 9g m l 的v c “。h e 等人利用芦丁对l u m i n o l k 、f e ( c n ) 。体系化学发光的抑制 作用，对s o p h o r a i a p o n i c a l 中的芦丁的含量进行了测定，检出限为6 7 x 1 0 - 9 g m l 。 沈爱宝等 4 也用化学发光方法测定了v c ，不过他们用的是 l u m i n o l h e m i n h ，o ，化学发光体系，原理是v c 消耗过氧化氢导致化学发光 强度降低。他们建立的方法灵敏度有所提高，检测限为8 6 1 0 一m o l l 。不 过，与陈浩汉等人 4 53 提出的方法相比，灵敏度又大为不及。陈等人的方法 是：利用反相流动注射技术，基于维生素c 对l u m i n o l f e 2 - o ：体系化学发光 的抑制作用来对v c 进行测定，检测限达2 0 1 0 。og m l ，线性范围为1 0 1 0 一一10 1 0 g m l 。 将乙酰胆碱酶、胆碱酶装柱，当待测物乙酰胆碱s d n _ 碱经过酶柱时，便 产生过氧化氢，h ，0 ，与l u m i n o l 发生化学发光反应，由此可测乙酰胆碱、胆 综述：药物的化学发光分析新进展 碱6 “；基于同样原理，n a b i 等人测定了胆固醇“。乳过氧化物酶既催化 儿茶酚类药的氧化反应，又催化其氧化产物与鲁米诺的发光反应，据此测定 了儿茶酚类药多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素f j g o 利用l u m i n o l h 2 0 2 - - c o ( i i ) 一v b 。：化学发光体系，用阴离子交换树脂将 l u m i n o l 固定，在线电生过氧化氢，以c o ( i o 作催化剂，作成测v b ，的传感 器。k i b a 等人利用l u m i n o l h ，o ，体系作成葡萄糖传感器，检测限达3n m o l l is i 。 1 6 电致化学发光反应 电化学发光分析是对电极施加一定的电压进行电化学反应，反应的产物 之间或与体系中某种组份进行化学发光，通过测量化学发光光谱和强度来测 定物质含量的一种痕量分析方法。它将电分析化学手段和化学发光方法相结 合，具有独特的优点，如重现性和灵敏度进一步提高，在多种组份同时存在 时，可施加不同波形、不同电压的信号进行选择性测量等，这使之不仅成为 潜在的分析手段之一，还为化学发光机理的探讨提供了种有利工具。k n i g h t 等2 】对电致化学发光的产生机理及其在分析中的应用作了比较详细的介绍。 傅志东等”详细研究了鲁米诺的e c l 行为及鲁米诺电致发光的种种影 响因素。王玉文等 5 4 探讨了流动系统中鲁米诺电生化学发光系统等等。利 用葡萄糖氧化酶在酶反应中生成过氧化氢的特性，使用l u m i n o l 电化学发光 法测定了水果及人体血清中葡萄糖的含量 s5 , 5 6 。利用鲁米诺e c l 还测定了 卡托普利旧 。 表l 其它l u m i n o l 化学发光体系在药物分析中的应用 待测物c l 体系 检测限参考 或线性范围文献 抗上1 、血酸l u m i n o l 一铜一抗坏血酸【5 8 】 葡萄糖l u m i n o l h ，o ，一葡萄糖 5 9 】 v c l u m i n o l k i o 。一v c 8 1 0 qg m l f 6 0 】 v b 6 l u m i n o l h 2 0 ，一k s c n c u s 0 4 - n a o h【6 l 】 异丙嗪l u m i n o l h ，o ，c r ( 1 l i ) 3n m o l 6 2 】 绿原酸l u m i n o l h 2 0 2 - c r ( 1 1 1 ) 6 - 3 1 0 。9g m l 6 3 】 3 , 4 一二羟基苯甲酸l u m i n o l h ，0 2 - - c o 27 1 0 7m o l l 6 4 】 芸香苜l u m i n o l h 2 0 2 - - c o ” 7 0 1 0 。9g m l 6 5 j 吗啡l u m i n o l h ，o ，雷氏盐 60 1 0 “g m l 6 6 】 青藤碱l u m i n o l h 二0 2 雷氏盐 7 0 1 0 4g m l 【6 6 】 可待冈l u m i n o i - h , 0 2 - 雷氏盐 6 0 1 0 。g m l 6 6 】 综述：药物的化学发光分析新进展 1 7 其它鲁米诺体系在药物分析中的应用 见表1 。 2 过氧草酰类化学发光体系 草酸盐类化学发光反应大都生成过氧草酰( p e r o x a l a t e ) 中间体，因此这 类反应亦称过氧草酰类化学发光反应。此类化学发光反应是在合适的荧光化 合物( 增敏剂) 的存在下，过氧化氢诱导氧化芳香基草酸酯而发光的过程。 发光的情况与增敏剂特性有关而与化学发光试剂种类、性质无关。该反应在 液相色谱化学发光( l c c l ) 检测技术中应用得最多，其次是在流动注射( f i ) 中。过氧草酰类化学发光反应在药物分析方面的较早时期的应用如表2 。 某些荧光化合物易被化学发光反应激发，因而，可直接用来分析这些荧 光化合物，如血清中免疫抑制剂环孢菌素a ( l c c l ) 的l c c l 监测 9 “； 也可直接用f i c l 法分析，如致幻剂哈马灵、哈梅醇、哈尔碱、骆驼蓬碱的 检测【9 “。但是，多数待测物质没有荧光或者荧光量子产率太低，需要经过 衍生化( 柱前或柱后荧光标记) 后，才能有效地进行分析。o h k u r a 9 钉等将 l ，2 一二苯乙烯二胺作为柱前衍生剂，检测儿茶酚胺( 去甲肾上腺素、肾上腺 素和多巴胺) 荧光衍生物，异丙基肾上腺素作为内标。通过l ，2 一二苯乙烯二 胺作为柱前衍生试剂将胺转化为相应的荧光衍生物，己用来测定人血浆及尿 液中的儿茶酚胺，检测限达到1 5 0 4 5 0a m o l 。其它衍生试剂，如4 ，5 一二氨 基邻苯二酰肼( d p h ) ，可以用来衍生乙二醛，从而可以间接测定可治疗内 分泌病、风湿病、肾病综合症的具有抗过敏和消炎作用的合成皮质类甾醇一一 地塞米松” 、类固醇”1 等，i s h i d a 9 7 还对4 ，5 一二氨基邻苯二酰肼( d p h ) 衍生的药物的液相色谱化学发光检测进行了评述。 c e p a s 等人用过氧草酰类化学发光体系分析了一系列药物。他们用 t c p o h ，o ，药物化学发光体系测定了吲哚衍生类精神作用药物如致幻生物 碱n 一甲基色胺，仪一甲基色胺，5 一甲基色胺，蟾毒色胺，二甲一4 羟色胺等， 检测限为p m o l 级 9 8 ：结合h p l c 技术，用伊咔啉生物碱 一h ，o ，一b i s ( 2 ，4 一d i n i t r o p h e n y l ) o x a l a t e ( d n p o ) 体系测定了h a r m o l 、h a r m a l o l 、 n o r h a r m a n e 、h a r m a n e 、骆驼蓬碱和二氢骆驼蓬碱。 s a t oe ta l 用t c p o h ，o ，药物化学发光体系结合h p l c 技术对氨甲环 酸、维生素u ，氯化氨基苯甲酸进行了测定，l o d 依次为5 0 1 0 ，4 0 1 0 ， 7 0 1 0 7m o