（生物化学与分子生物学专业论文）中药天南星抗hiv1有效成分的研究.pdf

， 、 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京工业大学或其它教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 签名：班日期：三巫朋 关于论文使用授权的说明 本人完全了解北京工业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部 分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 ( 保密的论文在解密后应遵守此规定) 签名：趣聊签名： 日期：丝丝：丝 摘要 摘要 艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症( a c q u i r e di m m u i l o d e f i c i e n c ys y n d r o m e ， 舢d s ) ，是由人类免疫缺陷病毒( h 姗a l li i 姗u n o d e f i c i e n c yv i n 塔，h l v ) 感染 人体淋巴细胞等所致。自1 9 8 1 年艾滋病首次在美国发现以来，全球大约已有2 5 0 0 万人死于艾滋病相关疾病，3 3 4 0 万人感染艾滋病病毒，其中包括1 5 7 0 万妇女及 2 1 0 万1 5 岁以下儿童。理论上，病毒复制的每个步骤都可成为抗h i v 药物的研 究靶点，但实际上，目前抗h i v 药物的研究重点仍然聚焦于逆转录酶、蛋白酶、 整合酶及病毒吸附融合等几个靶点。自1 9 8 7 年第一个抗h i v 药物核苷类逆转录 酶抑制剂a z t 上市以来，已有3 2 种药物被f d a 批准使用。目前常用于临床治 疗趾d s 的方法，高效抗逆转录病毒疗法一h aa r t ( h i g l l l ya c t i v ea n t i r e t r o v i r a l t l l e r a p y ) 也称为鸡尾酒疗法，此疗法虽能显著延长病人的寿命，但仍不能彻底 清除病人体内的h i v ，且毒副作用大、费用高，使病人承受着巨大的经济和生理 负担。因此开发研究低毒、廉价、新型抗h i v 药物非常必要。 中药历史悠久，资源丰富，具有多功能、多成分和结构多样的特点，而且有 些传统中药经过临床试用，显示了一定的抗h i v 疗效，为开发新药和寻找新的 抗h i v 有效成分提供了宝贵的线索。天南星( 加a c e a e ) 中国药典描述其为 辛温，有毒，归胃、肝经，有祛风痰，定惊搐，解毒散结止痛之功效。民间广泛 用于治疗癌症，尤以生食治疗喉癌为多。天南星药理作用广泛，但对其抗h 活性除本实验室外没有报道，因此研究其抗h i v 活性意义重大。 本研究在体外药效学活性实验指导下，利用各种分离纯化手段，对天南星 3 0 乙醇提取物进行分离，找出具有抗h i v 活性的有效部位及有效化合物。前期 实验结果显示，e 2 、e 1 2 和e 1 2 b 都有很好的抑制h i v 1 活性，在浓度为3 1 2 5 、 1 2 5 、1 2 5 “咖l 时病毒抑制率达到7 1 4 3 、7 8 5 7 和7 4 8 8 ：本实验通过b i a c o r e 分子偶联技术进一步对有效部位抗h 活性加以证实，更重要的是研究其作用 靶点及作用成分。通过研究发现e 1 2 和e 1 2 b 都与整合酶有较好的结合情况， 其中e 1 - 2 在浓度为5 0 、1 0 0 、2 0 0 、3 0 0 p 幽：i l l 时，与烈的结合量为1 2 8 5 、1 6 5 4 、 2 1 4 9 、2 4 9 4 r u ，呈现剂量依赖性，e 1 2 b 在浓度是2 0 0 、3 0 0 p g n 儿时，结合量 为1 5 1 or u 和2 3 8 or u 。进一步利用各种柱色谱、重结晶等手段，从e 1 2 b 中 分离到4 个化合物，通过特征化学反应及光谱学方法，鉴定了其中2 个化合物的 结构，剩余2 个化合物结构正在鉴定中。并且在e 1 2 甲醇溶解部分也分离到4 个化合物，结构已经鉴定。 综上所述本文从3 0 乙醇有效部位得到8 个单体化合物，其中6 个结构已经 鉴定为氨基酸多肽类、有机酸等，另外2 个h p l c 显示为单体，结构正在鉴定中。 北京下业大学理学硕士学位论文 在已鉴定结构的这6 个化合物中，其中有3 个时首次在本植物中发现。对这8 个 化合物利用b i a c o r e 分子偶联技术检测其作用靶点，发现化合物1 在测试溶液p b s 中溶解度不好的情况下，当浓度为2 0 0 、4 0 0 ”咖l 时，与i n 的结合量为1 2 4 2 、 1 4 5 4r u 。化合物2 在浓度2 0 0 “g r n j 时，结合量为9 5 7 r u 。b i a c o r e 的实验结果 显示i n 可能是e 1 2 、e l 一2 b 以及化合物l 的作用靶点，本文为天南星抗h i v 进 一步研究提供了理论和实验依据。 关键词抗免疫缺陷病毒；天南星；有效成分：生物分子相互作用分析技术 a b s t r a c t a bs t r a c t a c q u i r e di m m u i l o d e f i c i e n c ys y n d r o m e ( a i d s ) i sad i s e a s eo ft h eh u m a i l i m 啪u 1 1 es y s t e mc a u s e db yh 啪a ni m m u n o d e f i c i e n c yv i r u s ( h i v ) 、) v _ m c hd e s t r o y s h u m a nl y m p h o c y t e s s i n c et i l ef i r s ta i d sc a s ew a sr e p o r t e di n19 8l ，t l l e r eh a v eb c e n m o r em a i l2 5m i l l i o np e o p l ed i e do fa i d s ，a n dn e a d y3 3 4m i l l i o np e o p l el i v i n g 讪t l l h l vi n c l u d i n g15 7m i l l i o nw o m e na 1 1 d2 1m i l l i o nc 1 1 i l d r e n 哪d e r l5w o r l d 晰d e 1 1 1 e w h o l el i f ec y c l eo fh i vc 锄b eu s e di na n t i h i vd r u g sd e v e l o p i n g ，b u tr e c e n t l yt h e m 1 培sr e s e a r c l l i n gs t i l jf o c i l so nh i v 位m s c r i p t a s e ，p r o t e a s e ，i 1 1 t e 孕。豁ea n dm e m b r 锄e 如s i o np r o c e s s s i n c el9 8 7z i d o v u d i n e ( a z t ) a s 吐i ef i r s ta i l t i h i vd r u gw a sl i c e n s e d f o rt h et r e a t m e n to fh i vi l 彘c t i o nb yf d a ，t h e r ei 刖eb e e n3 2d m g sa p p r o v e df o r u s a g e ，i n v o l v i n gi i l l l i b i t o r so fr e v e r s et r 孤s c r i p 乜峪e ，p r o t e a s e ，i n t e g r a s ea u l dm e m b r a n e f h s i o np r o c e s s h i 削ya c t i v a t ea n t i r e t r o v i r a lt h e r a p y ( h a a r t ) i su s e m lf o rt h e c l i i l i c a lt r e a t m e n to fa i d s h i vnp r o l o n g st 1 1 el i f eo fp a t i e n 毽b u ti tc 觚n o te l i m i n a t e t h ev i r a l 锄dh 2 l saf e wd r a w b a c k s ，s u c ha s1 1 i 曲p r i c ea n ds i d ee f i e c t s s or e s e a r c t l i n g a n dd e v e l o p i n gn e wl o w e rt o x i c ，h i g m ya c t i v i t ya n dc h e a pd 1 1 l g si se s s e n t i a l 赳l d n e c e s s a r y a si t sl o n gl l i s t o 叮砒1 dt h em o s tc o n s i s t e n t l ys u c c e s s m ls o u r c ei nd m gd i s c o v e c l l i n e s eh e r b a jm e d i c i n em a yo 舒玎m o r eo p p o r t l l l l i t i e sf o rf i n d i n ga n t i h i vd r u g so r l e a d i n gc o m p o u n d s ，a r l dt t l e r ca r es o m ec l i i l i c a le x a m p l e sf o ri t sa n t i - h i va c t i v i 妙 a 旺比e a ei su i l i q u ei 1 1c h i n 钆a n dm e r ea r em a i l yp h 咖a c o l o g i c a la c t i o n sd e p i c t i o n a b o u ti tb u tn o n eo fa n t i h i va c t i o n i nm es t u d y ，w et e s t e dt h e 锄1 t i h i v 二1e 任i e c t sa r l dn l e c h a m s mo fc o m p o u n d s i s o l a t e df r o m3 0 e t i m o le x t r a c t so fa r a c e a c t h r o u 幽也er e s e a r c h ，m ea n t i h i v p a r t si n c l u d i n ge 2 ，e1 2 l de 1 2 be x t r a c tw e r eo b t a i n e d ，a i l di i 埘b i t o 可r a t eo ft h e s e e x t r a c t sw a s7 1 4 3 ，7 8 5 7a n d7 4 8 8 r e s p e c t i v e l y b i a ( b i o m o l e c u l a ri n t e r a c t i o n a n a l y s i s ) t e s t e dt h 砒妞e 彘c t i v ep a r te 1 2b i n d 吨r a t ew i t l li n ( i n t e g r a s e ) w 嬲 l2 8 5 ，1 6 5 4 214 9a 1 1 d2 4 9 4r u ，w h e nt 1 1 ec o n c e n t r a t i o nw a s5 0 ，10 0 ，2 0 0a n d 3 0 0 “m 1 a n de 1 2 bb i n d i n gr a t e 晰mi nw a s15 1 oa j l d2 3 8 o ，a t2 0 0 ，3 0 0 p g m 1 b y c h r o m a t o 簪a p h y m e 也o d ss u c ha sv a r i o u sc o l 哪 c l l r o m a t o g r a p l l i e s ， t c l ( t l l i i l l a y e rc h r o m a t o g r a p h y ) 锄dh p l c ( h 啦 p e 墒肌a 1 1 c e l i q u i d c l l ：r o m a t o g r a p h y ) ，t h em r t h e rs t u d ys h o w e d l a t4c o m p o u n d s 、e r ei s o i a t e df 而m e1 2 be x l k 比t ，甜l d4c o m p o u n d s 、e r ei s o l a t e d 矗o mt h em e t h 觚0 lp a no fe 1 2 t bs u mu pt h ea b o v er e s u l t s ，8c o m p o u i l d sw e r ef o u r l df r o mm ee f r e c t i v ep a no f 3 0 e t h a n o le x 仃a c t ，a n dt h ec h e m i c a ls t m c t u r e so f4c o m p o u n d sw e r ei d e n t i f i e do n t h eb a s i so fc h e m i c a le v i d e n c ea i l ds p e c t r a l 趿a l y s i s t h e yw e r ea l s ot e s t e db yb i a w ef o u n d l ec o m p o u i l d1 sb i n d i n gr a t e 谢t l li nw a s1 2 4 2 r u 孤d1 4 5 4i w ，a t3 0 0 ， i i i 北京工业大学理学硕十学位论文 4 0 0 p m 1 a r l db i n d i n gr a t eo fc o m p o u n d2w a s9 5 7a t2 0 0 “m 1 t h eb i ar e s u l t s i n d i c a t ei nm a yb et h et a 唱e to f e l 2 ，e 1 2 ba 1 1 dc o n l p o u n d1 k e y w o r d s 锄i h ；心a c e a e ；a c t i v ec o m p o s i t i o n ；b i a ( b i o m o l e c u l a ri n t e r a c t i o n a n a l y s i s ) 1 1 1 艾滋病的流行现状1 1 1 2h i v 的生物学特征1 1 2 抗h i v 的靶点及其药物研究3 1 2 1h i v 侵入融合抑制剂6 1 2 2 逆转录酶抑制剂7 1 2 3 蛋白酶抑制剂1 0 1 2 4 整合酶抑制剂1 1 1 2 5h i v 成熟抑制剂1 2 1 2 6 锌指抑制剂1 3 1 3 天南星的化学成分及生物活性1 3 1 3 1 天南星的化学成分研究概况1 3 1 3 2 天南星的生物活性1 5 1 4 本课题的研究内容1 5 1 5 本课题的实验路线1 6 第2 章实验部分1 9 2 1 实验材料1 9 2 1 1 细胞株1 9 2 1 2 病毒株及靶点蛋白1 9 2 1 3 药材1 9 2 1 4 仪器设备1 9 2 1 5 试剂及耗材一2 0 2 2 实验方法2 1 2 2 1 提取方法2 1 2 2 2 预实验方法2 1 v 北京工业大学理学硕士学位论文 2 2 3 分离纯化方法2 2 2 2 4 体外药效学实验方法2 4 第3 章实验结果3 1 3 1 天南星中有效部位的提取及其成分分析3 1 3 1 1 天南星3 0 有效部位的提取3 l 3 1 2 天南星3 0 乙醇提取物的化学成分分析3 1 3 2 天南星3 0 有效部位的分离纯化3 2 3 2 1 天南星有效部位e l 及e 2 的获得3 2 3 2 2 有效部位e 1 s e p h a d e xl h 一2 0 凝胶柱层析3 3 3 2 3 有效部位e 2s e p h a d e xl h - 2 0 凝胶柱层析3 3 3 2 4 有效部位e 卜2 的进一步分离纯化3 4 3 3 有效部位的抗h i v 作用3 5 3 3 1 细胞病变效应( c p e 法) 检测效果3 5 3 3 2p 2 4 抗原等检测法的检测结果3 6 3 3 3 各有效部位及部分单体化合物与靶点分子( g p 4 l 、i n ) 的结合3 6 3 4 实验讨论4 0 3 4 1 从天然产物获得抗h i v 有效成分的方法讨论4 0 3 4 2 天南星提取分离纯化方法的讨论4 0 3 4 3 柱色谱学方法讨论4 l 3 4 4 药效学实验方法讨论4 2 3 5 本章小结4 3 结论与展望4 5 参考文献4 7 攻读硕士期间发表的学术论文5 1 致谢5 3 v i 第1 章绪论 1 1 课题背景 1 1 1艾滋病的流行现状 第1 章绪论 艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症( a c q u n di 衄u n o d e f i c i e n c ys y n d r o l n e ， 趟d s ) ，是由人类免疫缺陷病毒( h u m a ni i n m u i l o d e f i c i e n c yv i n l s ，h i v ) 感染 人体淋巴细胞等所致，被病毒感染的患者会出现免疫功能下降，易于产生机会性 感染、肿瘤、皮肤感染等并发症。 自1 9 8 1 年艾滋病首次在美国发现以来，全球约有超过2 5 0 0 万人死于艾滋病。 根据联合国艾滋病规划署和世界卫生组织2 0 0 9 年1 1 月2 4 日在上海发布的 2 0 0 9 年艾滋病流行报告数据显示，全球约有3 3 4 0 万艾滋病病毒感染者，其 中女性感染者为1 5 7 0 万人，1 5 岁以下儿童2 1 0 万人，2 0 0 8 年新增人数2 7 0 万， 2 0 0 万人死于与艾滋相关疾病。我国至1 9 8 5 年发现首例艾滋病人到2 0 0 9 年年底， 估计存活的艾滋病感染者和病人达7 4 万多人。虽然全球合作采取了各种对抗艾 滋病的方式，但由于其在全球范围内迅速蔓延，现已成为2 1 世纪人类面临最严 峻的挑战之一。 1 1 2 v 的生物学特征 h i v 是a i d s 的病原体，在病毒分类学上属逆转录病毒科( r e 仃o v i r i d a e ) 慢 病毒属( l e n t i v i m s ) 灵长类慢病毒群( p r i m a i t el e “v i n l s 铲o u p ) 。目前已发现的 h i v 有分别为h i v - 1 型和h i v - 2 型，h i v 1 广泛分布于世界各地，是引起全世界 灿d s 流行的病原体，全球大约有9 5 以上的h 感染是由h i v - 1 造成的，目前 h i v 的研究也主要是以h i v - 1 为主。h i v - 1 根据e n v 和g a g 基因序列的不同又可 分为3 个基因群( m 黟o u p 、og r o u p 和ng r o u p ) 。由于病毒基因的突变、插入、缺 失所引起的基因变异率非常高，不同h i v 病毒株之间的基因重组形成的嵌合体 被称为c i 沛( c i r c u l a t i n gr e c o m b i n a i l tf o m s ) ，与单纯的h 毒株相比c r f 毒株流 行性更强。 1 1 2 1h i v 的基本结构 h 病毒为2 0 面球状体，直径约1 0 0 衄，外层为脂质双层膜，膜上有7 2 北京工业大学理学硕士学位论文 个糖蛋白突起是由外膜蛋白g p l 2 0 和跨膜蛋白g p 4 1 组成，紧贴膜内侧的是基质 蛋白p 1 7 ，核心是呈锐头致密的圆锥形，由衣壳蛋白p 2 4 包裹着基因组两条单正 连r n a 以及病毒酶( 逆转录酶、整合酶及蛋白酶) 组成。h i v - l 结构示意图见图 1 1 ： 1 1 2 2h i v 的基因结构 图1 1h i v 结构示意图1 】 f i g 1 lt h es t n i c t l l r e0 f h i v h i v 基因组为两条+ s s i 斟a ，每条r n a 链长约9 8 k b ，两条链的5 端借氢键 形成二聚体。5 端有帽状结构m 7 g 5 p p p 5 g m p n p ，3 端有p o l y a 序列，两端具有 逆转录病毒的基本结构基因长末端重复序列( l o n gt e 砌l i i l a lr e p e a t ，l t r ) ，中间有 9 个开放读码框架( o p e nr e a d i n gf r 锄e ，o r f ) ，编码3 个结构基因g a g 、p o l 、e n v 以及6 个调节基因协t 、r e v 、n e f 、v p r ( v p x ) 、v p u 、和v i f oh i v 基因结构从5 端 到3 t 端依次为5 l 1 r g a g p 0 1 e n v 一3 l t r 。h 基因组结构示意图见图l 一2 ： 2 1 1 2 3h i v 复制周期 v g p l 2 0g p 4 1 一 一翱v i l n e f - 孙 图1 2h i v 基因组结构示意图1 2 1 f i g 1 2s t l l j c t u r eo fh i v g 肌o m e h i v 的复制周期包括吸附融合、脱壳、逆转录、基因的整合、大分子合成以 及病毒粒子包装出芽。h i v 复制周期见图l 一3 ： 图1 3h i v 复制周期3 1 f i g 1 3r 七p l i c a t i o nc y c i eo fh i v g e n o m e 1 2 抗m v 的靶点及其药物研究 理论上在h 复制周期的任一位点都可以作为药物研发的靶点，事实上抗 北京工业大学理学硕上学位论文 h i v 药物研究主要集中在吸附融合过程( e n t 珂a n df u s i o n ) 、逆转录酶( r e v e r s e t m s c r i p t a s e ，r t ) 、蛋白酶( p r o t e a s e ，p r ) 及整合酶( i m e g r a s e ，i n ) 等几个 靶点如图1 4 ，但近年来研究者也开始将h i v 复制周期的其他蛋白作为抗h i v 药物研发靶点，例如脱壳过程、逆转录酶的r n a s eh 的活性、脂筏模型、病毒 的成熟以及出芽等，所涉及到的新蛋白l e d g f p 7 5 、似p o b e c 一3 g 、 v p 毗e t h e r i n 、n e f 及g a g 等。 图l - 4 抗h 靶点及其药物【4 】 f i g 1 _ 4 坶t s 觚dd r u g so f a m i h i v 到目前为止已有3 2 种抗h i v 药物被f d a 批准上市其中包括病毒侵入抑制 剂( e n t r yi n h i b i t o r s )1 种、融合抑制剂( f u s i o ni n h i b i t o r s ，f i s ) 1 种，h i v 逆 转录酶抑制剂( r ti n h i b i t o r s ，刚s ) 1 7 种包括1 3 种核苷类抑制剂( n u c l e o s i d er t i n k b i t o r s ，n r t i s ) 和4 种非核苷类抑制剂( n o n n u c l e o s i d er l ti n h i b i t o r s ， n n r t i s ) ，h i v 蛋白抑制剂( p r o t e a s ei n m b i t o r s ，p i s ) 1 1 种，整合酶抑制剂( i i l t e 酉a s e i 1 1 1 1 i b i t o r s ，i i s ) 1 种以及m u l t i c l a s sc o m b i n a t i o np r o d u c t s1 种( 见表1 1 ) 【引。目 前常用于临床治疗a i d s 的方法高效抗逆转录病毒疗法一h a a r t ( h i g i l l ya c t i v e a m t n 们v i r a lt h e r a p y ) 也称为鸡尾酒疗法，虽然显著的延长了病人的寿命，但此 疗法仍不能彻底清除病人体内的h i v ，且毒副作用大、费用高，使病人承受着巨 大的经济和生理负担。 4 第1 章绪论 表1 1f d a 批准的抗h l v 药物p l t a b i e lf d aa p p r o v e da n t i h l vd r u g s 商品名通用名 上币公司砒准日删 i 逆转录酶抑制剂( r e v e r s et 啪s c 却t a s ei n h i b i t o r s n r t i s ) 核苷类逆转录酶抑制剂( n u c l e o s i d er c v e r s et 瑚s c r i p t a s ei n h i b i t 0 幅n r t i s ) r e 仃o v i rz i d o d i n e a z t g 1 a ) 【o s m i t h k l i n e19 8 7 0 3 19 d e x d i d 龃o s i n e ，d i d e o x y i n o s i n e ，d d l b r i s t o im y e r s s q u i b l9 91 1 0 0 9 h l v i dz a l c i t a b i n e ，d i d e o x y c ”i d i n e ，d d c h o 肺1 a 彻一l ar o c h el9 9 2 0 6 19 z e r i ts t a 【v u d i n e ，d 4 t b r i s t o lm y e r s - s q u i b bl9 9 4 0 6 2 4 e p i v i rl 锄i v u d i n e ，3 t c g l a ) ( o s m i t h k l i 他 l9 9 5 1 1 17 c 0 m b i v i r l 锄i v u d i n ea n dz i d o v u d i n e g i a x o s m i t h i m l9 9 7 0 9 2 7 z i a g e n a b a c a v i rs u i 凤e ，a b c g l a ) 【o s m i t h k l i n e l9 9 8 12 17 d e xee n t e r i cc oa _ t e dd i d a n o s i n e ，d d ie c b r i s t o im y e r s s q u i b b2 0 0 0 10 3l t r i z i v ia b a c a v i r ，z i d o v u d i n e ，a n di a m i v u d i n e g l a x o s m i t h k l i n e 2 0 0 0 1 1 1 4 r e a d t e n o f o v i rd i s o p r o x i lf u m a r a t e ，t d f g i l e a ds c i e n c e s 2 0 0 1 1 0 2 6 e m t r i v ae m t r i c i t a b i n e ，f t c g i l e a ds c i e n c e s2 0 0 3 0 7 0 2 e p z i c o m a b a c a v i r 孤dl 锄i w d i n e g l a x o s m i t h l ( 1 i n e2 0 0 4 0 8 0 2 1 h v a d a t e n o f o v i rd i s o p r o x i l 凡m a r a t ea n d g i l e a ds c i e n c e s 2 0 0 4 0 8 0 2 e m t r i c i t a b i n e 非核苷类逆转录酶抑制剂( n o 眦u c l e o s i d cr c v e r s et 砌s c r i p t a s ei n h i b i t o r s r 锄啪e v i r a p i n e ，n v p b o e 晡n g e r i n g e l h e i m r e s c r i p t o r d e i a v i r d i n e ，d l v p f i z e r s u s t i v a e f a v i r e n z e f v b n s t o lm y e r s s q u i b b i n t e l e n c ee t r a v i r i n e t i b o t e ct h e r 印e u t i c s i i 蛋白酶抑制剂( p r o t e a s ei 1 1 i l i b i t o r s p i s ) 1 1 1 v i r a s e n 0 i r c r i x i v a n r e p t f o r t o v a s e a g e n e r a s e k a l e t r a r c y a t a z l e x i v a a p t i j s p r e z i s t a s a q u i n a v i rm e s y l a t e ，s q v r j t o n a v i lr t v i n d i n a v i r i d v n e m n a v i rm e s y l a t e ，n f v s a q u i n a v i r a m p r e n a v i r ，a p v l 0 p i n a v i r 龃dr i t o n a v i r ， l p v 之t v a t a z a n a v i rs u i f a t e a t v f o s 锄p r e n a v i rc a i c i m n ，f o s a p v t i p 瑚a v i r t p v d a n m a v i r 融合抑制剂( f u s i o ni r i i i b i t o r s ) f u z e o ne n f u v i r t i d e ，t - 2 0 l 、r 卜浓t i s ) 1 9 9 6 0 6 2 l 19 9 7 0 4 0 4 1 9 9 8 0 9 1 7 2 0 0 8 0 6 1 8 h o 商m 舢l ar o c h e l9 9 5 12 0 6 a b b o t tl a b o r a t o r i e s 1 9 9 6 0 3 0 1 m e r c k1 9 9 6 0 3 1 3 a 2 0 u r o n 1 9 9 7 0 3 1 4 p h a n t i a c e u t i c a l 19 9 7 1 1 0 7 h o 商m m l ar o c h e l9 9 9 0 4 15 g l a x o s m i t h k l i n e2 0 0 0 0 9 15 a b b o t tl a b o r a t o r i e s 2 0 0 3 0 6 2 0 b r i s t o i m y e r ss q u i b b 3 0 0 2 1 0 2 0 g l 戤0 s m i t h k l i n e2 0 0 5 0 6 2 2 b o e h r i n g e ri n g e l h e i m 2 0 0 6 0 6 2 3 t i b o t c c i n c h o f f i m 猢l a r o c h e 种d2 0 0 3 0 3 13 1 h m e r i s 侵入抑制剂以c c r 5 为靶点( e 1 1 时i n h i b i t o 附c c r 5c 伊r e c e p t o ra n t a g o n i s t s ) s e i z e n t m a r a v i r o c p f i z e r 2 0 0 7 0 8 0 6 v 整合酶抑制剂( h i vi n t e 黟嬲e i i l h b i t o r s ) 5 北京工业大学理学硕士学位论文 l s e n t r e s s r a l t e g r a v i rm e r c k & c 0 ，i n c 2 0 0 7 12 0 7 v im u l t i c l 鹤sc o m b i n a t i o np r o d u c t s a t r i p l ae f a v i r e n z ，e m t r i c i t a b i n e 孤d 1 e n o f o v i rb r i s t o l m y e r ss q u - b b2 0 0 6 。0 7 1 2 d i s o p r o x i lf u m a r a t e a n dg i l e a ds c i e n c e s 1 2 1m v 侵入融合抑制剂 h i v - l 在侵入细胞时，通过膜蛋白g p l 2 0 、g p 4 l 与t 淋巴细胞的细胞受体c d 4 分子及一些辅助受体c c r 5 或c x c r 4 结合，吸附在宿主t 淋巴细胞上，然后通 过融合、脱壳进入宿主细胞内见图1 5 。因此与病毒的膜蛋白竞争受体也是抗 h i v - l 药物设计的主要方向，多糖、蛋白类等天然产物也成为药物研究的目标。 图1 5h i v 侵入模型【6 】 f i g 1 - 5m 0 d e lo ft h em u l t i s t e pp r o c 鹤so fh i ve n n y 2 0 0 3 年，h o f j f m a i u l l a r d c h 公司和t 血n e r i s 公司共同研制的病毒融合抑制剂 恩夫韦肽( e n 如v i t i i d e ，t - 2 0 ) l7 j 获f d a 批准，成为继逆转录酶抑制剂和蛋白酶 抑制剂之后的第三类抗病毒药，开创了抗逆转录病毒治疗的新纪元。美国辉瑞公 司2 0 0 7 年开发上市的m a m v i r o c ( u k - 4 2 7 8 5 7 ) 【圳，是一种可选择性而非竞争性 地拮抗辅助受体c c r 5 的一种小分子化合物，具有强效和广谱的抗h i v 活性及 优良的药动学特性和安全性。除了已上市的2 种这一阶段的抑制剂外，也有一些 其他的抑制剂正在研发中。与恩夫韦肽类似药物t 1 2 4 9 【8 l 正在临床研究中，2 0 0 5 年4 月获s f d a 批准进入i 期临床试验。美国b r i s t o lm y e r ss q u i b b 公司研制的 b m s 8 0 6 l m j 可选择性结合c d 4 分子，其结合位点靠近g p l 2 0 c d 4 ，而并非与g p l 2 0 竞争c d 4 结合位点，临床试验显示，b m s 8 0 6 可在低浓度时显著抑制h r v 二1 型 病毒株。在b m s 一8 0 6 的基础上，b r i s t o lm y e r ss q u i b b 公司又开发了第二代融合 抑制剂b m s - 4 8 8 0 4 3 。p l e r i x a f o r 又称m o b o z i l ，j m 3 1 0 0 或a m d 3 1 0 0 i l l j 化学 式为( 1 ，1 0 一 1 ，4 - p h e n y l e n e b i s 一( m e t i l y l e n e ) 】- b i s l ，4 ，8 ，1 1t e t r a a z a c y c l ot e 缸a d e c a n e ) 是 第一个小分子量的抗h i v 1 药物，也是第一个作用于c x c r 4 的拮抗剂，已进入 临床实验，主要用来抑制x 4 h i v 1 的感染，但临床实验证明其药动学效果并不 6 第l 章绪论 好，且毒副作用大，对心脏也有不良作用。在a m d 3 1 0 0 基础上，开发了第二代 c x c r 4 拮抗剂药物a m d 0 7 0 【1 2 】单独用来研究那些感染x 4 h 1 型病毒，可以 有效地减少病人的病毒载量，而在感染有x 4 和r 5 的病人中发现了x 4 向r 5 的 转变。 目前世界上处于临床试验的侵入融合抑制剂主要有以下9 个，见表1 2 表1 2 临床实验的抗h i v 侵入融合抑制剂 t a b l e1 - 2e n t 巧a n df u s i o ni n h i b i t o r so fa n t i - h i vi nc l i n i c a lt r i a l s 药品名研发机构临床阶段作用靶点 v i c r i v i r o c ( s c h d ) 1 1 3 l美国s c h e r i n gp i o u g h 公司i i i 期 c c r 5 p r 0 5 4 2 【1 4 】美国p m g e n i c s 公司 i i 期g p l 2 0 n 恹3 5 5 【1 5 】美国t 锄o x 公司 i i 期c d 4 分子 s p 0 1 a 美国s 锄撕t a i l 公司 li期gp41 西夫韦肽【1 6 l 中国扶素生物技术有限公司i i b 期结束g p 4 l a m d 0 7 0 加拿大a n o r m e d 公司i b i i a 期c x c r 4 p r 0 1 4 0 【1 7 】 美国p m g e n i c s 公司 i i 期 c c r 5 a k 6 0 2 日本k u m 锄0 t ou n i v e r s i t y i 期c c r 5 b m s 3 7 8 8 0 6 美国b r i s t o l m y e ms q u i b b 公司i期gp l2 0 a p l a r i r o c ( g w 8 7 3 1 0 4 ) 嘲 英国g l a x 0 s m i t h k l i 鹏公司 i i b 期c c r 5 许多天然产物具有抗h i v 1 侵入融合过程的作用，如b a l z 撕n ij 等【i 川从硼 a ( 胁阳p 删打w 聊 咖，耐) 和g n a ( g 口肠，z 历埘刀f 砌凰) 中提取到的5 0 k d 大小的植 物凝集素甘露聚糖四聚体，是h i v 侵入和h i vr t 的抑制剂。它们主要通过n 一 糖基化与膜蛋白g p l 2 0 的1 1 州s e r 或a s n 结合，从而抑制印1 2 0 与宿主的c d 4 + 分子结合，其e c 5 0 分别为o