14 生物化学习题与解析--基因重组与基因工程.doc

基因重组与基因工程一、选择题 （一） A 型选择题 1 关于基因重组的描述，下列哪项是错误的 A 外源 DNA 片段不能在原核细胞中表达 B 外源 DNA 片段可以在原核细胞中表达 C 基因重组可引起自然突变 D 整段 DNA 能在不同物种间进行交换 E 整段的 DNA 能在细胞间进行交换 2 在分子生物学领域，重组 DNA 技术又称 A 蛋白质工程 B 酶工程 C 细胞工程 D 基因工程 E DNA 工程 3 在重组 DNA 技术中，不常见到的酶是 A DNA 连接酶 B DNA 聚合酶 C 限制性核酸内切酶 D 反转录酶 E 拓扑异构酶 4 由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为 A 转化 B 转导 C 转染 D 转座 E 结合 5 可识别特异 DNA 序列，并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类酶称为 A 限制性核酸外切酶 B 限制性核酸内切酶 C 非限制性核酸外切酶 D 非限制性核酸内切酶 E DNA 内切酶 6 cDNA 是指 A 在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA B 在体内经转录合成的与 DNA 互补的 DNA C 在体内经转录合成的与 DNA 互补的 RNA D 在体外经反转录合成的与 DNA 互补的 DNA E 在体外经转录合成的与 RNA 互补的 RNA 7 基因组 DNA 代表一个细胞或生物体的 A 部分遗传信息 B 整套遗传信息 C 可转录基因的遗传信息 D 非转录基因的遗传信息 E 可表达基因的遗传信息 8 下列有关质粒的描述正确的是 A 质粒分子本身不含有具备复制功能的遗传结构 B 质粒是存在于酵母染色体外的小型环状双链 DNA 分子 C 质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞独立自主进行复制 D 质粒一般不携带遗传信息，不会赋予宿主细胞一些遗传性状 E 以上说法都不正确 9 重组 DNA 技术常用的限制性核酸内切酶为 A 类酶 B 类酶 C 类酶 D 类酶 E 类酶 10 在重组 DNA 技术中催化形成重组 DNA 分子的酶是 A DNA 聚合酶 B RNA 连接酶 C 核酸内切酶 E 反转录酶 E DNA 连接酶 11 已知人乳腺来源的某长度为 1.5 kb 的基因序列，获取该目的基因的最方便的方 法是 A 化学合成法 B 基因组文库法 C c DNA 文库法 D 聚合酶链反应 E 差异显示法 12 限制性核酸内切酶 Hind 切割 5-AA GCTT-3 后产生 A 平端 B 5 突出黏端 C 3 突出黏端 D 钝性末端 E 配伍 黏 末端 13 构建基因组 DNA 文库时，首先需分离细胞的 A 染色体 DNA B 线粒体 DNA C mRNA d tRNA E rRNA 14 以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称 A 转化 B 转染 C 感染 D 转导 E 转位 15 关于 E . coli 表达载体的描述错误的是 A 有大肠杆菌适宜的选择标志 B 有两套复制原点及选择标记，分别在大肠杆菌和真核细胞中起作用 C 具有能调控转录、产生大量 mRNA 的强启动子 D 含有适当的翻译控制序列 E 还有合理设计的多克隆位点 16 - 互补筛选法属于 A 抗药性标志筛选 B 酶联免疫筛选 C 标志补救筛选 D 原位杂交筛选 E Southern 杂交筛选 17 下列常用于原核表达体系的是 A 酵母细胞 B 昆虫细胞 C 哺乳类细胞 D 真菌 E 大肠杆菌 18 真核表达载体不含有 A 选择标记 B 启动子 C 转录翻译终止信号 D mRNA 加 poly A 信号 E 3- 加帽信号 19 就分于结构而论，质粒一般是 A 环状双链 DNA 分子 B 环状单链 DNA 分子 C 环状单链 RNA 分子 D 线状双链 DNA 分子 E 线状单链 DNA 分子 20 一般不用作基因工程载体的是 A 质粒 DNA B 昆虫病毒 DNA C 基因组 DNA D 噬菌体 DNA E 逆转录病毒 DNA 21 用于重组 DNA 的限制性核酸内切酶识别核苷酸序列的 A 正超螺旋结构 B 负超螺旋结构 C 螺旋结构 D 回文结构 E 锌指结构 22 用来鉴定 DNA 的技术是 A Northern 印迹杂交 B Western 印迹杂交 C Southern 印迹杂交 D 离子交换层析 E SDS-PAGE 23 建 cDNA 文库时，首先需分离细胞的 A 染色体 DNA B 线粒体 DNA C 总 m RNA D t RNA E r RNA 24 如果克隆的基因能够在宿主菌中表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那我们可以 A 用营养突变菌株进行筛选 B 用营养完全株进行筛选 C 通过 - 互补进行蓝白筛选 D 免疫组化筛选 E 抗药性标志 25 限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生 A 3- 磷酸基末端和 5- 羟基末端 B 5- 磷酸基末端和 3- 羟基末端 C 3- 磷酸基末端和 5- 磷酸基末端 D 5- 羟基末端和 3- 羟基末端 E 以上都不是 26 针对载体携带某种或某些标志基因和目的基因而设计的筛选方法称 A 非直接选择法 B 直接选择法 C 免疫学方法 D 免疫化学方法 E 酶免检测分析 27 无性繁殖依赖 DNA 载体的最基本性质是 A 自我转录能力 B 自我表达能力 C 自我复制能力 D 青霉素抗性 E 卡那霉素抗性 28 分子遗传学领域里的分子克隆是指 A 细菌克隆 B DNA 克隆 C RNA 克隆 D 动物克隆 E 植物克隆 29 重组 DNA 的连接方式不包括 A 平头末端连接 B 黏性末端连接 C 同聚物加尾连接 D 人工接头连接 E 黏性末端和平头末端连接 30 下列哪种方法不能获得目的基因 A 化学合成法 B 基因组 DNA 文库 C cDNA 文库 D 物理方法 E PCR 法 （二） B 型选择题 A 超螺旋结构 B 启动子序列 C S-D 序列 D 回文序列 E - 螺旋结构 1 限制性核酸内切酶识别的序列通常是 2 在转录过程中 RNA 聚合酶识别并结合的特异序列是 3 16S 核糖体特异结合的特异序列是 4 属蛋白质二级结构的是 A 基因载体的切割 B 目的基因与载体的连接 C DNA 重组子导入受体细胞 D 表达目的基因编码的蛋白质 E 筛选、繁殖含有 DNA 重组分子的受体细胞 5 可以产生重组 DNA 分子的是 6 需要使用限制性内切酶的是 7 需要应用转化或转染等技术手段的是 8 需要选择原核或真核表达体系的是 A 同源重组 B 特异位点重组 C 转座重组 D 人工重组 E 随机重组 9 在体外将不同来源的 DNA 连接起来称 10 在两个同源序列间进行 DNA 片段交换称 11 由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称 A 接合 B 转化 C 转导 D 转座 E 细胞融合 12 质粒 DNA 从一个细菌转移到另一个细菌称 13 由噬菌体感染宿主时伴随的基因转移称 14 自动获取外源 DNA ，使细胞获得新的遗传表型称 A 碱性磷酸酶 B DNA 连接酶 C DNA 聚合酶 D 逆转录酶 E 限制性核酸内切酶 15 能识别特异序列、切割 DNA 的酶是 16 催化合成 cDNA 的是 17 来源不同的 DNA 拼接成重组 DNA 分子需 A 5 及 3 突出末端 B 3 突出末端 C 5 突出末端 D 5 或 3 突出末端 E 平头末端 18 某识别 6 核苷酸序列的限制性核酸内切酶切割 5-AGCTAAGCTT-3 产生 19 某识别 6 核苷酸序列的限制性核酸内切酶切割 5-CTGCAGTCTA-3 产生 20 某识别 6 核苷酸序列的限制性核酸内切酶切割 5-AGGATATCAC-3 产生 （三） X 型选择题 1 DNA 克隆包括下列哪些基本步骤 A 目的基因的获得 B 选择和构建合适的克隆载体 C 筛选转化菌 D 将重组 DNA 导入受体菌 E 外源基因和载体连接 2 关于质粒 DNA 的叙述正确的是 A 是真核生物基因组 DNA 的组成部分 B 具有独立复制功能，能在宿主细胞独立的进行复制 C 不 含有各种抗性筛选标记 D 含有感兴趣的目的 DNA E 具有编码蛋白质的功能 3 下述操作可能用于 DNA 克隆过程的是 A PCR 获得目的 DNA B 限制性核酸内切酶切割目的 DNA 和载体 C 核酸分子杂交 D 细菌的生长和繁殖 E RT-PCR 制备 cDNA 4 下述序列属于完全回文结构的是 A 5-CCTAGG-3 B 5-CCATGG-3 C 5-CCTTGG-3 D 5-CGATCG-3 E 5-CGTTCG-3 5 可用作克隆基因载体的 DNA 有 A 细菌质粒 DNA B 噬菌体 DNA C 病毒 DNA D 大肠杆菌基因组 DNA E 真核细胞基因组 DNA 6 在分子克隆中，目的 DNA 可来自 A 原核细胞染色体 DNA B 基因组 DNA 文库 C 真核细胞 mRNA 反转录获得的 cDNA D 聚合酶链式反应 E 人工化学合成的 DNA 7 下列哪些方法可应用于重组体的筛选 A 抗药性标记筛选 B 营养突变菌株筛选 C - 互补筛选 D 原位杂交筛选 E 免疫化学方法筛选 8 根据重组 DNA 时所采用的载体性质不同，将重组 DNA 分子导入受体细胞的方式有 A 接合 B 转化 C 转染 D 转座 E 感染 9 一个典型的插入序列包括 A 两个分离的反向重复序列 B 一个表达产物能引起转座的转座酶编码基因 C 反向重复序列的侧翼有正向重复序列 D 抗生素抗性等有用基因 E 以上都包括 10 外源基因与载体的连接方式有 A 黏性末端连接 B 平端连接 C 同聚物加尾连接 D 人工接头连接 E 以上都没有 11 分子医学包括的领域有 A 疾病基因的发现与克隆 B 基因诊断 C 基因治疗 D 遗传病的预防 E 生物制药 12 在基因工程的中所需的工具酶有 A 限制性核酸外切酶 B DNA 连接酶 C 逆转录酶 D 限制性核酸内切酶 E 碱性磷酸酶 二、是非题 1 载体和目的基因只有利用一种限制性核酸内切酶切割，才能进行重组。 2 来源于真核的外源 DNA 片段只能在真核细胞中表达。 3 重组 DNA 技术中常用的限制性核酸内切酶为类酶。 4 通过自动获取或人为地供给外源 DNA ，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是转导作用。 5 所有的限制性核酸内切酶切割 DNA 后均产生 5 磷酸基和 3 羟基的末端。 6 可充当克隆载体的 DNA 分子有质粒 DNA 、噬菌体 DNA 、病毒 DNA 和细菌 DNA 。 7 任何质粒均可通过接合作用从一个细胞（细菌）转移至另一个细胞（细菌）。 8 免疫球蛋白基因的重排属于同源重组类型。 9 重组 DNA 技术所采用的宿主菌应为限制酶和重组酶缺陷型。 10 噬菌体感染宿主时伴随发生的基因转移属转导作用。 11 质粒是存在于酵母染色体外的小型环状双链 DNA 分子。 12 有些限制性核酸内切酶识别序列不完全相同，但切割 DNA 后可产生相同类型的黏性末端，且可进行相互连接。 三、填空题 1 细菌的基因转移与重组有 _ 、 _ 、 _ 和 _ 四种方式。 2 当噬菌体感染宿主时会有两种结局：一种是 _ ，另一种是 _ 。 3 转座是由 _ 和 _ 介导的基因移位和重排。 4 限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生的末端有 _ 和 _ 。 5 目的 DNA 有两种类型，即 _ 和 _ 。 6 可充当克隆载体的 DNA 分子有 _ 、 _ 和 _ 。 7 蓝白筛选时，若外源基因被插入到载体 lac Z 基因内，那么在含有 X-gal 的培养基上生长时会出现 _ 色菌落，若在 lac Z 基因内无外源基因的插入，在相同的培养条件下呈现 _ 色菌落。 8 基因操作中的目的基因获取的途径和来源有 _ 、 _ 、 _ 和 _ 。 9 根据重组 DNA 时所采用的载体性质不同，将重组体 DNA 导入受体细胞的方式有 _ 、 _ 及 _ 。 10 重组体的筛选可采取 _ 法和 _ 法。 11 重组体筛选的 直接选择法包括 _ 、 _ 及 _ 。 12 基因工程的表达系统包括 _ 和 _ 。 13 基因工程的真核表达系统包括 _ 、 _ 和 _ 三类。 14 分子医学包含的领域及内容有 _ 、 _ 、 _ 和 _ 。 15 DNA 重组包括 _ 、 _ 和 _ 等类型。 四、名词解释 1 homologous recombination 2 conjugation 3 transformation 4 transduction 5 site specific recombination 6 transposition 7 DNA clone 8 genetic engineering 9 restriction endonuclease 10 compatible end 11 target gene 12 gene vector 13 plasmid 14 competent cell 五、问答题 1 获取目的基因的方式有哪些？ 2 试述基因重组的基本过程。 3 适用于 E . coli 表达体系 的表达载体必须具备哪些条件？ 4 基因工程的原核表达体系有何优缺点？ 5 简述基因工程生产胰岛素的基本过程。 参考答案 一、选择题 （一） A 型选择题 1 A 2 D 3 E 4 D 5 B 6 A 7 B 8 C 9 B 10 E 11 D 12 B 13 A 14 A 15 B 16 C 17 E 18 E 19 A 20 C 21 D 22 C 23 C 24 A 25 B 26 B 27 C 28 B 29 E 30 D （二） B 型选择题 1 D 2 B 3 C 4 E 5 B 6 A 7 C 8 D 9 D 10 A 11 C 12 A 13 C 14 B 15 E 16 D 17 B 18 C 19 B 20 E （三） X 型选择题 1 ABCDE 2 BE 3 ABCDE 4 ABD 5 ABC 6 ABCDE 7 ABCDE 8 BCE 9 ABC 10 ABCD 11 ABCDE 12 BCDE 二、是非题 1 B 2 B 3 A 4 B 5 A 6 B 7 B 8 B 9 A 10 A 11 B 12 A 三、填空题 1 接合 转化 转导 细胞融合 2 溶菌生长途径 溶源菌生长途径 3 插入序列 转座子 4 黏性末端 平头末端 5 cDNA 基因组 DNA 6 质粒 DNA 噬菌体 DNA 病毒 DNA 7 白 蓝 8 化学合成法 基因组 DNA 文库 cDNA 文库 PCR 9 转化 转染 感染 10 直接选择 非直接选择 11 抗药性标志选择 标志补救 分子杂交法 12 原核表达体系 真核表达体系 13 酵母 昆虫 哺乳类动物细胞 14 疾病基因的发现与克隆 生物制药 基因诊断与治疗 遗传病的预防 15 同源 重组 特异位点 重组 转座 重组 四、名词解释 1 同源重组，指发生在同源序列间的重组，它通过链的断裂和再连接，在两个 DNA 分子同源序列间进行单链或双链片段的交换，是最基本的 DNA 重组方式，又称基本重组。 2 接合作用，指当细胞与细胞、或细菌与细菌通过菌毛相互接触时，质粒 DNA 从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）的 DNA 转移。 3 转化作用，指通过自动获取或人为地供给外源 DNA ，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。 4 转导作用，指当病毒从被感染的细胞（供体）释放出来、再次感染另一细胞（受体）时，发生在供体细胞与受体细胞之间的 DNA 转移及基因重组。 5 位点 特异重组，是由整合酶催化，在两个 DNA 序列的特异位点间发生的整合。 6 转座，是由插入序列和转座子介导的基因移位或重排。 7 DNA 克隆，指应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA ）与载体 DNA 结合成一具有自我复制能力的 DNA 分子（复制子），继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一 DNA 分子，也称基因克隆或重组 DNA 。 8 基因工程，指实现基因克隆所采用的方法及相关的工作，又称重组 DNA 技术或重组 DNA 工艺学。 9 限制性核酸内切酶，是识别 DNA 的特异序列、 并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类内切酶。 10 配伍未端，指有些限制性核酸内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割 DNA 后，产生相同类型的粘性末端，可进行相互连接。 11 目的基因，指应用重组 DNA 技术的目的有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或 DNA 序列，或是为获得感兴趣基因的表达产物 蛋白质。这些感兴趣的基因或 DNA 序列就是目的基因，又称目的 DNA 。 12 基因载体，又称克隆载体，是为 “ 携带 ” 感兴趣的外源 DNA ，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些 DNA 分子。 13 质粒，是存在于细菌染色体外的小型环状双链 DNA 分子，小的 23kb ，大的可达数百 kb 。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞独立自主地进行复制，并在细胞分裂时保持恒地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。因此，质粒 DNA 的自我复制功能及所携带的遗传信息在基因重组 DNA 操作中都是极为有用的。 14 感受态细胞，指细菌经适当的理化方法处理后，处于最适摄取和容忍重组体的状态。 五、问答题 1 获取目的基因的方式有哪些？ 答：获取目的基因大致有如下几种途径或来源：（ 1 ）化学合成法：如果已知某种基因的核苷酸序列，或根据某种基因产物的氨基酸序列推导出为其编码的核苷酸序列，可以利用 DNA 合成仪通过化学合成法合成目的基因。一般用于小分子活性多肽基因的合成。 （ 2 ）基因组 DNA 文库： 利用 限制性核酸内切酶将组织或细胞染色体 DNA 切割后，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了这个组织或细胞的几乎所有基因组 DNA 信息，也包括我们感兴趣的基因。再采用适当方法从基因组 DNA 文库中筛选出目的基因。（ 3 ） cDNA 文库：以 mRNA 为模板，利用反转录酶合成与 mRNA 互补的 DNA ，即单链 cDNA ，再复制成双链 cDNA 片段，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了这个组织或细胞所表达的各种 mRNA 信息，称 cDNA 文库。然后，采用适当方法从 cDNA 文库中筛选出目的 cDNA 。 （ 4 ）聚合酶链反应（ PCR ）： PCR 是一种在体外利用酶促反应获得特异序列的 基因组 DNA 或 cDNA 的专门技术。要获得目的基因，除 PCR 技术的通用条件外，还必须知道目的基因 5 、 3 端的各一段核苷酸序列及其它相关条件，以设计出合适的引物。 2 试述基因重组的基本过程。 答：基因重组的基本过程为：（ 1 ）分： 分离出目的基因和基因载体的选择、构建。 （ 2 ）切：用 限制性核酸内切酶将载体和目的基因切成使二者易连接的状态。 （ 3 ）接：用 DNA 连接酶把目的基因和载体连接成重组体。 （ 4 ）转：把 重组 DNA 分子转入受体细胞内进行表达。 （ 5 ）筛：筛选出含有 重组 DNA 的受体细