（茶学专业论文）儿茶素对内皮细胞生长的影响及与铜离子的络合作用.pdf

中文摘要 肿瘤是当今世界直接危及人类生命的一种最常见、最严重的疾病。1 9 7 1 年， f o l k m a n 首先提出肿瘤的生长和转移有赖于肿瘤的血管生成，来自肿瘤的化学信 号可以激活处于休眠状态的血管内皮细胞，其中v e g f 是目前发现的最重要的 促血管生成细胞因子中的一种。众多的研究发现，茶儿茶素抑制肿瘤血管的生成， 其抗肿瘤血管生成的机制主要是抑制血管内皮细胞生长、抑制细胞黏附分子表达 和抑制基底膜降解。缺氧刺激可以导致内源性v e g f 在内皮细胞中的表达增强， 内皮细胞膜通透性增加，这实质是细胞对缺氧的急性应答反应，但细胞自身所分 泌产生的v e g f 却不足以对抗缺氧所引起的内皮细胞过度凋亡。缺氧能够加速 内皮细胞的凋亡，引起内皮细胞功能异常，并参与一系列的临床病理过程。 本文利用体外细胞培养技术探讨了四种儿茶素对e c v 3 0 4 细胞增殖和迁移 的影响。结果发现，e g c g 对e c v 3 0 4 细胞存活率的影响最显著，在e g c g 浓 度为5 0 t5 0 u m o l l 时，细胞存活率达到极显著差异，半数抑制浓度i c 5 0 为7 5 - - 1 5 0um o l l ：e g c g 对该细胞迁移作用影响明显，且呈剂量依赖性，i c 5 0 为15 0 um o l l ，e g c g 可能通过抑制内皮细胞的迁移抑制新生血管的生成；e c g 与 e c v 3 0 4 作用3 6 h 和4 8 h ，i c 5 0 分别为3 9 0 um o l l 和3 7 0 um o l l ：c 和e c 与 e c v 3 0 4 作用时，细胞存活率在8 0 以上。四种儿茶素在浓度低于7 5u m o l l 时， 对正常e c v 3 0 4 细胞抑制影响不大。 利用n a 2 s 2 0 4 缺氧法、m t t 法探讨了e g c g 对e c v 3 0 4 细胞拟缺氧损伤的 作用，e g c g 对r f 6 a 细胞存活率的影响及e g c g 对缺氧所致r f 6 a 细胞损伤 的保护作用。结果发现，一定条件下的缺氧对e c v 3 0 4 细胞存活率有显著影响， 而e g c g 对缺氧的损伤有明显的保护作用，且有剂量和时间效应；e g c g 对 r f 6 a 细胞存活率的影响2 4 h 作用最为明显，半数抑制浓度i c s 0 为1 2 5p m o l l 。 低浓度的e g c g 对不同浓度的n a z s 2 0 4 引起的细胞存活率的降低有不同程度的 保护作用，且达到显著差异。 铜离子是人体必需的微量元素，过量积累或缺乏会导致多种疾病的发生，包 括肿瘤。茶儿茶素是茶叶中生物学活性最高的物质之一，具有多种药理学功能。 儿茶素类化合物特有的多羟基结构，具有与许多金属离子络合的特性。研究发现， 儿茶素能与金属离子发生配位反应形成稳定的配合物，而使配合物表现出特殊的 药理学活性。铜离子容易接受配体，成为中心离子，茶儿茶素e o c g 是茶多酚 中活性最强的天然活性物质，可作为多基配体与c u ”发生络台反应，可抑制自 由基的过度产生，降低肿瘤的发生率。 本试验在化学体系中研究了e g c g 与c u ”形成络合物的条件，其形成条件 主要受p h 值和c u 2 + e g c g 比率的影响：在p h i 4 0 时，e g c g 与c u 2 + 可以形成络合物； p h 9 ，0 时，酚羟基与碱作用生成酚钠，有铜离子存在时，c u “可充当催化刘， 促进e g c g 自氧化，c u 2 + 被还原为c u + 。在p h = 6 0 的乙酸缓冲液中，c u 2 + 与e g c g 以2 ：l 结合：在p h = 7 4 的硼酸缓冲液中，c u ”与e g c g 以1 ：1 络合，当两者 比例4 ：1 时，两者发生的是氧化还原反应，c u 2 + 会促进e g c g 的氧化。 关键词：荼儿茶素，e g c g ，肿瘤，血管生成，e c v 3 0 4 细胞，r f 6 a 细胞，细胞 存活率，细胞迁移，缺氧，c u 2 + ，络合反应 a b s t r a c t t u m o ri st h em o s tc o m m o na n dt h em o s ts e r i o u sd i s e a s e ，t h ei n c i d e n c ea n d m o r t a l i t yo f l u m o u ra p p e a rt ob ei nt h ep r e c e d i n gi nt h ew o r l d i n1 9 7 1 ，f o l k m a n f i r s t r e p o r t e d t h a tt h eg r o w t ha n dm e t a s t a t i cs p r e a do fs o l i dt u m o r sa r ed e p e n d e n to n a n g i o g e n e s i s ，a n d t h ec h e m i c a ls i g n a lf r o mt u m o rt i s s u e si sa b l et oa c t i v a t et h er e s t i n g v a s c u l a re n d o t h e l i a lc e l l s o ft h en u m e r o u sp r o m o t e r so fa n g i o g e n e s i st h a th a v eb e e n i d e n t i f i e d ，o n eo ft h em o s ti m p o r t a n c ei sv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ( v e g f ) m a n ys t u d i e s f o u n dt h a tc a t h e c h i n sh a v ei n h i b i t o r ye f f e c t so i l a n g i o g e n e s i s ，t h e m e c h a n i s m so fa n g i o g e n i ca c t i v i t yw e r et h ef o l l o w i n gt h r e ea s p e c t s ：i n h i b i t i o no ft h e v a s c u l a re n d o t h e l i a lc e l lp r o l i f e r a t i o n ，i n h i b i t i o no fc e l la d h e s i o nm o l e c u l ee x p r e s s i o n a n ds u p p r e s s i o no fb a s e m e n tm e m b r a n c ed e g r a d a t i o n h y p o x i aa c t i v a t e sc a ni n c r e a s e t h el e v e l so f e n d o g e n e t i cv e g f ( v a s c u l a r e n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ) i nt h ee n d o t h e l i a l c e l l s ，w h i c hi sar e c e n t l yd i s c o v e r e dm i t o g e n f o re n d o t h e l i a lc e i l si nv i t r oa n da p o t e n t a n g i o g e n e s i s - p r o m o t i n gf a c t o ri n v i v o t h i si st h ea c u t er e s p o n s i o nu n d e rh y p o x i c e n v i r o n m e n tf o rc e l l s ，h o w e v e r , e n d o g e n e t i cv e g fc o u l d n tc h a n g et h ee x c e s s i v e a p o p t o s i so ft h ee n d o t h e l i a lc e l l s ，h y p o x i aa c t i v a t e sc a l la c c e l e r a t et h ea p o p t o s i so f t h ee n d o t h e l i a lc e l l s ，w h i c hb r i n gt ot h ef u n c t i o no fe n d o t h e l i a lc e l l su n c o n v e n t i o n a l i t y a n d p a r t i c i p a t ei nt h ep r o c e s so f s e r i e s o f c l i n i c a lp a t h o l o g y b ye m p l o y i n gt e c h n i q u e so f c e l lc u l t u r e ，t h ee f f e c t so ff o u rt e ac a t e c h i n s ，e g c g e cg ，e ca n dcw e r es t u d i e do nt h ep r o l i f e r a t i o na n dm i g r a t i o no fe c v 3 0 4i nt h i s p a p e r t h er e s u l t d e m o n s t r a t e dt h a te g c gw a st h em o s te f f e c t i v ei nc e l lv i a b i l i t y a m o n g t h ef o u rc a t e c h i n st e s t e d v i a b i l i t yo fe c v 3 0 4w e r es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n ti n t h ec a s eo ft h ec o n c e n t r a t i o n so fe g c g ，w h i c hw a sr a n g e df r o m5 0t o15 0um o l l t h e1 c s oo fe g c gw a s7 5 15 0um o l l ：e g c gw a sa l s oe f f e c t i v ei nc e l lm i g r a t i o n i nad o s e d e p e n d e n tm a n n e r ，t h ei c s 0 w a s15 0um o l l e g c gc a r ti n h i b i t a n g i o g e n s i s ，w h i c hm a y b er e l a t e dt ot h ed e c r e a s e dm i g r a t i o no fe n d o t h e l i a lc e l l t h e 1 c 5 0w a sa t3 9 0 m o l la n d3 7 0um o l li n3 6 一h o u r - d i s p o s a la n d4 8 一h o u r - d i s p o s a l o f e c g r e s p e c t i v e l y t h ev i a b i l i t yo f e c v 3 0 4d i s p o s e db yc a n de cw e r ea b o v e8 0 i tw a si n d i c a t e dt h a tc a t e c h i n ss h o w e dl i t t l ei n h i b i t o r ye f f e c to nn o r m a lc e l lg r o w t h a n d m i g r a t i o n a tt h ec o n c e n t r a t i o no fl o w e rt h a n7 5um o l l b ye m p l o y i n g a n o x i ai n j u r ym o d e lu s i n gn a 2 s 2 0 4a n dm t ta s s a y ，t h ee f f e c t so f e g c gf o rt h ea n o x i ai n j u r yt oe c v 3 0 4c e i l s ，t h ev i a b i l i t yo fr f 6 aa n dt h ea n o x i a i n j u r yt or f 6 aw e r e s t u d i e di nt h i sp a p e r t h er e s u l td e m o n s t r a t e dt h a ta n o x i ai n j u r y i nt h ec a s eo ft h ec o n c e n t r a t i o n sa n da p p r o p r i a t et i m eo fn a z s 2 0 4c a ns i g n i f i c a n t l y e f f e c tt h ec e l l v i a b i l i t y o fe c v 3 0 4c e l l s ，b u te g c gw a ss i g n i f i c a n t l yp r o t e c t i v e e f f e c t i v ef o rt h ea n o x i ai n j u r yi nad o s ea n dt i m ed e p e n d e n tm a n l i e r m e a n t i m e ，t h e r e s u l ts h o w e dt h a t2 4 h o u r - - d i s p o s a lo fe g c gw a st h em o s te f f e c t i v et ot h ev i a b i l i t y o fr f 6 aa n dt h ei c s 0o fe g c gw a s1 2 5 灶t o o l l ：a n o x i ai n j u r yi nt h ec a s eo ft h e c o n c e n t r a t i o n sa n da p p r o p r i a t et i m eo fn a 2 s 2 0 4c a n s i g n i f i c a n t l y e f f e c tt h ec e l l v i a b i l i t yo fr f 6 a ，a n de g c g w a ss i g n i f i c a n t l yp r o t e c t i v ee f f e c t i v ef o rt h ea n o x i a i n j u r yi nt h el o w c o n c e n t r a t i o n c o p p e ri o ni sn e c e s s a r yf o rt h en o r m a lg r o w t ho fm a n k i n da f t e re x c e e d i n go r l a c k i n go fc o p p e ri o ni nt h eb o d y , i tc o u l dr e s u l ti n ，m a n yk i n d so f d i s e a s e si n c l u d i n g t u m o rt e ac a t h e c h i n s ，o n eo ft h em o s te f f e c t i v eb i o a c t i v ec o n s t i t u e n to f t e a ，h a v el o t s o f p h a r m a c o l o g i c a lf u n c t i o n s m o l e c u l a ro f t e ap o l y p h e n o l s ( i n c l u d i n gc a t e c h i n s ) h a s m a n yh y d r o x y lg r o u p s ，a n dc a nc o m p l e x w i t hm a n yk i n do fm e t a li o n m a n ys t u d i e s f o u n dt h a tc a t h e c h i n sc o u l d c o m p l e xw i t hm e t a l i o n sa n df o r m e ds t a b l em e t a l c o m p l e x e s ，w h i c hh a ds p e c i a lp h a r m a c o l o g i c a la c t i v i t i e s c o p p e ri o n se a s i l yc o m p l e x w i t hl i g a n da n d a c t i n ga st h ec e n t r a li o n e g c o ( ( - ) e p i g a l l o c a t e c h i ng a l l a t e ) ，o n eo f t h ec a t e c h i n si nt e a ，i st h em o s ta c t i v en a t u r a lp o l y p h e n o li nt h ep r o d u c t sa n d b e i n ga p o l y l i g a n d ，c a nc o m p l e x w i t hc u 2 + t h ec o m p l e xc a ni n h i b i tt h ee x c e s s i v ee x p r e s s i o n o ff l e er a d i c l e s ，a n di n h i b i tt h eo c c u r r e n c eo f t u m o r s i nt h ep r e s e n tp a p e r , t h er e a c t i o nc o n d i t i o nf o re g c gt oc o m p l e xw i t hc 小w a s i n v e s t i g a t e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tp h v a l u ea n dt h er a t i oo fe g c gt oc u 2 + w e r e t h em a i na f f e c t i n gf a c t o r s u n d e rt h ec o n d i t i o no f s t r o n ga c i d i t y ( p h p h 4 0 ，e g c gc o u l dc o m p l e xw i t h c u ”；a tp h 9 0 ，c a t e c h o l h y d r o x y lg r o u p si n t e r a c t e dw i t hn a + t of o r mc a t e c h o l n a * p r e s e n c eo fc u 2 + s t r o n g l yp r o m o t e dt h ea u t o x i d a t i v ea c t i v i t yo fe g c g , s ot h a tc u 2 * w a so x i d i z e dt oc u 十i nt h em e a n t i m ew ef o u n dt h a ti na c e t i ea c i db u f f e rs o l u t i o no f p h 6 0t h er a t i oo f c u 2 + t oe g c gi nt h ec o m p l e xw a s2 ：1a n di nb o r i ca c i db u f f e r s o l u t i o no fp h 7 4 ，t h er a t i ow a s1 ：1 w h e nc u 2 + t oe g c gr a t i ow a sa b o v e4 ：1 ， r e d o xr e a c t i o no c c u r r e dr e s u l t i n gi np r o m o t i n gt h ea u t o x i d a t i v ea c t i v i t yo fe g c gb y c u ” k e yw o r d s ：t e ac a t e c h i n s ，e g c gt u m o r , a n g i o g e n e s i s ，e c v 3 0 4c e l l ，r f 6 ac e l l c e l lv i a b i l i t y , c e l lm i g r a t i o n ，a n o x i ai n j u r y , c o p p e r ( i i ) i o n ，c o m p l e x 一之 7 3 2 8 8 1 单 v 代码： 科m ，： 了、j ： 儿茶素对内皮细胞生长的影响及与铜离子的络合作用 论文答辩日期： 2 0 0 5 年6 月1 4 日上午9 ：0 0 答辩委员会主席： 鋈旦苤熬攫：熊昱( 逝堑太堂2 答辩委员会成员：7 塞塑垩熬援! 蝗昱( 逝堑太堂2 友里匮副教援( 堑、江太堂2 陵绍嫒副塾攫( 堑江盍堂2 选生苤数援! 盟昱! 逝选太堂2 论文评阅人： 越耀鏖熬援! 监昱( 逝堑生医堂院2 塑国麽麴援! 熊昱( 逝堑态堂2 盟丞逝麴握! 熊昱( 逝堑态堂2 a b b r e v i a t i o n s t p ( t e a p o l y p h e n o l s ) ：茶多酚 e g c g ( e p i g a l l o c a t e c h i ng a l l a t e ) ：表没食子儿茶素没食子酸酯 e g c ( e p i g a l l o c a t e c h i n ) ：表没食子儿茶素 e c g ( e p i c a t e c h i ng a l l a t e ) ：表儿茶素没食子酸酯： e c ( e p i c a t e c h i n ) ：表儿茶素 h p l c ( h i g hp e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ) ：高效液相色谱 i c p a e s ( i n d u c t i v e l yc o u p l e dp l a s m a a t o m i ce m i s s i o ns p e c t r o s c o p y ) ：电感耦合等离子体原 r 发射光谱 g f a a s ( g r a p h i t e f u r n a c ea ta b s o r p t i o ns p e c t r o m e t r y ) ：塞曼效应石墨炉原子吸收光谱法 m t t ( 3 一【4 ，5 一d j m e t h y l t h i a z o l y l 】- 2 ，5 一d i p h e n y l t e t r a z o l i u mb r o m i d e ) ：四甲基偶氮噻唑盐 d m s o ( d i m e t h y l s u l f o x i d e ) ：二甲基亚砜 h i s 5 7 ( h i s t i d i n e 5 7 ) ：组氨酸5 7 s e r l 9 5 ( s e r i n e l 9 5 ) ：丝氨酸1 9 5 a r 9 3 5 ( a r g i n i n e 3 5 ) ：精氨酸3 5 v e g f ( v a s c u l a r e n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ) ：血管内皮生长因子 v p f ( v a s c u l a r p e r m e a b i l i t yf a c t o r ) ：血管通透性因子 n t 一1 ( f l m s 1 i k et y r o s i n ek i n a s e ) ：f m s 样酪氨酸激酶 v e g f r l ( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r - 1 ) ：血管内皮生长因子受体1 k d r ( k i n a s ei n s e r td o m a i nc o n t a i n i n gr e c e p t o r ) ：胚肝激酶一1 v e g f r 一2 ( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r - 2 ) ：血管内皮生长因子受体一2 e g r - 1 ( e a r l yg r o w t hr e s p o n s ef a c t o r _ i ) ：早期生长反应因子1 e r k i ，2 ( e x t r a c e l l u l a r s i g n a l r e g u l a t e dk i n a s a s 一1a n d 2 ) ：细胞外信号调节激酶1 和2 b f g f ( b a s i cf i b m b l a s tg r o w t hf a c t o r ) ：碱性成纤维细胞生长因子 l l 一8 ( n t e r l e u k i n 8 ) ：白细胞介索8 p m n s ( p 0 1 y m o r p h o n u c l e a rn e u t r o p h i l s ) ：多形核白细胞 c a m ( c e l la d h e s i o nm o l e c u l e ) ：细胞黏附分子 e s e l e c t i n ( e s e l e c t i n ) ：选择素e v c a m 1 ( v a s c u l a rc e l la d h e s i o nm o l e c u l e 1 ) ：血管细胞间粘附分子1 v e c a d ( v a s c u l a re n d o t h e l i a l c a d h e r i n ) ：血管内皮钙黏连素 b m ( b a s e m e n tm e m b r a n c e ) ：基底膜 m m p ( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s ) ：基质金属蛋向酶 m m p 一2 ( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 2 ) ：明胶酶a m m p 9 ( m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e - 9 ) ：明胶酶b u p a ( u r o k i n a s e p l a s m i n o g e na c t i v a t o r ) ：尿激酶纤溶酶原激活剂 p a l 一1 ( p l a s m i n o g e na c t i v a t o ri n h i b i t o r - 1 ) ：纤溶酶原激活剂抑制囡子1 型 p a l 2 ( p l a s m i n o g e na c t i v a t o ri n h i b i t o r - 2 ) ：纤溶酶原激活剂抑制因子2 犁 p g ，p g i ) ( p r o s t a c y c l i n ) ：前列还素 p a f ( p l a t e l e t a c t i v a t i n gf a c t o r ) ：血小板激活( 活化) 因子 d n a s e ( d e o x y r i b o n u c i e j ca c i de n z y m e ) ：脱氧核糖核酸酶 a m d ( a g i n g m a c u l a r d e g e n e r a t i o n ) ：年龄相关性黄斑变性 n m d a ( n m e t h y l d a s p a r t a t e ) ：n 一甲基d 一天冬氮酸 t n f a ( t u m o rn e c r o s i sf a c t o r - q ) ：肿瘤坏死因子一a e g f ( e p i d e r m a lg r o w t hf a c t o r ) ：表皮生长因子 p d g f ( p l a t e l e t d e r i v e dg r o w t hf a c t o r ) ：血小板源性生长因子 i g f i ( i n s u l i n 1 i k eg r o w t hf a c t o r - i ) ：胰岛素样生长因子一i t g f ，b ( t h a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - 1 3 ) ：转化生眭因子b h i f 1 ( h y p o x i a _ i n d u c i b l ef a c t o r - 1 ) ：缺氧诱导因子1 r p e ( r e t i n a lp i g m e n t a r ye p i t h e l i u m ) ：视网膜色素上皮细胞 r g c ( r e t i n a lg a n g l i o n i cc e l l ) ：视网膜神经节细胞 h m v e c ( h u m a nm i c r o v a s c u l a re n d o t h e l i a lc e l l s ) ：人微血管内皮细胞 h u v e c ( h u m a nu m b i l i c a lv e i ne n d o t h e l i a lc e l l s ) ：人脐静脉内皮细胞 h u a e c ( h u m a nu m b i l i c a la r t e r i a le n d o t h e l i a lc e l l ) ：人脐动脉内皮细胞 e c v 3 0 4 ( h u m a nu m b i l i c a lv e i ne n d o t h e l i a lc e l l sl i n e ) ：人脐静脉内皮细胞株3 0 4 r f 6 a ( r h e s u sm a c a q u ec h o r o i d - r e t i n a le n d o t h e l i a lc e l l s ) ：恒河猴猿脉络膜视网膜内皮细胞 第一部分 儿茶素对内皮细胞生长的影响 1 前言 第一章综述 茶儿茶素抑制肿瘤血管生成的作用 肿瘤是当今世界直接危及人类生命的一种最常见、最严重的疾病。1 9 7 1 年， f o l k m a n i l 在大量临床实践和试验积累的基础上提出了肿瘤生长依赖于血管生成 的假说。经过3 0 多年的发展，尤其是最近l o 年分子生物学的迅猛发展，实验技术的 飞速进步，关于血管生成的大量基础研究成果不仅充分证实t f o l k m a n 的假说，并 且发现血管生成也是肿瘤转移所必需的。 血管生成是一个由多种细胞因子和多种细胞成分参与的、动态的、协调的复 杂过程。涉及一系列形态学及生化学改变。形态学改变包括内皮细胞激活，降解 基底膜、内皮细胞的定向运动和增殖、新生微血管、内皮细胞新的基底膜合成、 血管腔产生、芽式生长并形成血管襻等一系列步骤【2 】。其生化学改变涉及许多血 管生成因子、细胞因子及相关抑制因子之间的调节失衡。肿瘤的生长与转移依赖 血管生成，建立丰富的血液循环，以供应肿瘤组织异常旺盛的生化代谢以及瘤细 胞的繁殖与转移。因此通过抑制血管生成，阻断肿瘤的生长和转移，已成为一个 崭新的、有希望的抗肿瘤靶点。 茶叶中的儿茶素( c a t e c h i n s ) 属于黄烷醇类化合物，是茶叶中多酚类物质的 主体成分，具有广谱的药理学作用，在抗癌抗肿瘤、抗炎镇痛、抗氧化抗衰老、 抗辐射、抑菌抗病毒、免疫调节、雌激素样作用和抗心脑血管疾病等方面都有疗 效。1 9 9 9 年，y i h a ic a o 等1 3 】在n a t u r e 中指出，饮茶可以抑制血管生成，作者发现 绿茶及e g c g f i 明显抑制动物体内一些肿瘤生长，如肺癌和食道癌等新生血管的 生长，这一证据表明饮茶有益于预防和治疗血管生成依赖性疾病，并提出绿茶能 够抑制肿瘤生长可能是通过抑制血管生长而介导的。从而解释了饮茶能够抑制不 同类型肿瘤的生长的原因。 2 2 茶儿茶素抑制肿瘤新生血管生成的作用机理 2 1 对血管内皮细胞生成的抑制作用 血管生成起始的中心环节是血管内皮细胞或基质干细胞的迁移、分裂、分化， 以及随后的管腔化。内皮细胞最直接与血液循环中的药物接触，其增殖、迁移、 管腔形成在血管生成过程中起关键作用。因此，抗血管生成的较好靶点是内皮细 胞通过抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成三个环节能有效地抑制血管 生成。 t a k a k ok 0 n d o 【4 1 等研究发现，四种儿茶素( e c 、e c g 、e g c 和e g c g ) 在一 定浓度范围内能抑制人脐静脉内皮细胞( h u v e c ) 生长、迁移及小管形成，在1 0 0 um 时，e g c g 和e c g 对细胞生长的抑制率分别为5 5 和5 0 ，e c f f e g c 抑制率 为2 0 ，2 5 ；对细胞迁移的抑制效果比抑制细胞增生的效果明显，在1 0 0 um 时， e g c g 、e c g 、e g c 和e c 抑制率分别为8 0 、7 0 、6 0 和5 0 ；儿茶素能抑制 内皮管腔的长度和宽度，在1 5 6 6 2 5l am 低浓度时，四种儿茶素对其作用差异不 很小，当e g c g 和e c g 浓度为2 5um 时抑制率为7 0 和5 0 ，而e c 和e g c 在1 0 0 um 时抑制率仅为4 0 。 总之，研究发现，在浓度为1 5 6 1 0 0 um 时，四种儿茶素都能抑制血管生 成，e g c g 抑制血管生成最有效，e c g 位居第二，这可能与分子结构中没食子 酰基的存在与作用有关。 2 1 1 对血管内皮生长因子( v a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o r ， v e g f ) 及其受体的抑制作用 肿瘤的生长和转移有赖于肿瘤的血管生成，来自肿瘤的化学信号可以激活处 于体眠状态的血管内皮细胞。其中v e g f 是目前发现的最重要的促血管生成细胞 因子中的一种。v e g f 又称血管通透性因子( v a s c u i a r p e r m e a b i l i t yf a c t o r , v p f ) ，是 较强的血管通透性调节剂和特异的促内皮细胞分裂素。其特异地作用于血管内皮 细胞 且有促进内皮细胞分裂、诱发新血管形成和增加血管通透性的功箍i ”，它在 肿瘤血管卜成过程中起关键调节作用【6 j 。 众多的研究发现，儿茶素在体内能够抑制血管的生长、分化和血管生成 6 - i o 。 但只有e g c g 抑制v e g f 受体的分泌。在2 5u m 时，其抑制率为4 0 ，较维生 素e 更有效【4 1 。y i h a ic a o 等3 谰绿茶作为小鼠的唯一饮用水来源，观察饮茶对 v e g f 诱导的角膜新生血管形成的影响。血浆e g c g 浓度约为o 1 o 3um ，此 浓度与人喝2 3 杯绿茶后血中e g c g 浓度相当。研究表明，绿茶水能够明显抑 制动物模型肺肿瘤的生长和发展。与饮白水的对照组比较，饮茶能显著阻止 v e g f 诱导的角膜新生血管形成。t h o m a sn e u h a u s 等1 研究发现e g c g 能剂量 依赖的抑制v e g f 诱导的h u a e c 细胞d n a 的合成，在浓度为5 0 um 时，能 彻底的抑制d n a 的合成，对细胞的增殖也有抑制作用，但e c 却无此作用。 v e g f 的血管生成效应是通过两种内皮细胞特有的v e g f 特异受体：f i n s 样 酪氨酸激酶( f i t - 1 ，也称v e g f r - 1 ) 和胚肝激酶一l ( k d r ，也称v e g f r 2 ) 介导的。 目前，认为f l t 1 主要介导细胞骨架重排引起细胞迁移，并引起单核细胞趋化，而 k d r 则主要介导e c 的增殖、引起血管通透性升高，并有抗e c 凋亡维持e c 存活 的作用【陀1 。v e g f r 一2 ( k d r f i k - - 1 ) 被认为是血管内皮的最重要的靶标。对e c s 上调的v e g f r s ，抗f l k 1 k d r 抗体能特异地与之结合并发挥抑制作用，而且比抗 v e g f 抗体更有优势。众多研究证实，利用v e g f 与其受体特异性结合的特点， 将v e g f 与茶儿茶素结合进行受体导向治疗，可望显著提高抑瘤疗效。 k o j i m a - y u a s a a 1 4 1 等研究发现，绿茶提取物( g t c ) 在培养基中能显著的抑 制细胞的增殖，在g 1 期细胞积累呈剂量依赖性，且能降低f l t 一1 和k d r f l k 一1 的表达，g t c 浓度在2 5 1 1g m l 时作用最显著。t h o m a s n e u h a u s 等1 1 l 】以h u a e c ( h u m a nu m b i l i c a la r t e r i a le n d o t h e l i a lc e l l ) 为研究对象，用e g c g 预处理细胞， 发现e g c g 能剂量依赖性的抑制v e g f 诱导的细胞外信号调节激酶一1 和2 ( e r k i l 2 ，e x t r a c e l l u l a r s i g n a l r e g u l a t e dk i n a s e s 1a n d 一2 ) 的磷酸化，从而抑制细 胞的有丝分裂；而且还发现对v e g f 诱导的早期生长反应因子1 ( e g r - 1 。e a r l y g r o w t hr e s p o n s ef a c t o r - 1 ) m r n a 的表达有抑制作用。5 0 um 的e g c g 几乎能彻 底的抑制v e g f 诱导的v e g f r 一1 和一2 酪氨酸的磷酸化。而同样浓度的e c 无此 作用。 许多与血管关系密切的肿瘤( 如卵巢癌、肾癌、黑色素瘤、胶质瘤等1 可以自 分泌v e g f 并直接作用于血管内皮细胞上的v e g f 受体，最终导致肿瘤血管牛 长。许多实验证明，荷瘤宿主体内，v e g f 的水平较正常显著升高，肿瘤组织中 v e g fm r n a 的表达与肿瘤血管密度呈正比。因此许多学者拟以v e g f 为靶点， 通过抑制v e g f 而抑制肿瘤的血管生成，从而达到抗肿瘤生长的目的，并已在 动物实验中得到了证实。e g c g 通过抑制v e g f 因子分泌或下调其受体的表达， 可以有效地抑制肿瘤内皮细胞生长和血管生成，从而阻止肿瘤的生成和转移。 2 1 2 对碱性成纤维细胞生长因子( b a s i cf i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r ， b f g f ) 及其受体的抑制作用 b f g f 是成纤维生长因子家族中的一员，其功能主要是刺激内皮细胞的增生 和迁移、促进小管腔的形成和使内皮细胞向细胞间质侵入，以及刺激内皮细胞胶 原酶和纤维蛋白酶，能降低基底膜【】5 l 。 b f g f 并i v e g f 在诱导内皮细胞血管生成上有协同效应，两者联合应用比单 独应用其中的一种生长因子明显提高了血管再生的速度及生成血管的直径，同时 大大提高了缺血肢体的血液供应。b f g f 的血管生成作用是通过与v e g f 基因的 启动子s p le ( c f o e ) 结合并使之激活，导致v e g f 的表达，达到其血管生成的【1 6 】 目的。 b f g f 也与肿瘤的血管生成密切相关1 7 】，提示b f g f 介导了脑部肿瘤的血管 生成，并可作为判断肿瘤预后的一个指标。 y i h a ic a o 等【3 l 研究