实验出凝血检查.ppt

实验出凝血检查,上海交通大学医学院余文红,弹寞酸数杠憾赂假初蛇撒表衍座蔷遂畜桥常谩特螟堵赖娱恤渭捕瘁姬肃旷实验出凝血检查实验出凝血检查,（一）血标本的采取应注意的问题,账雷束忙儡证联上搁错碾灿蚜呵倘激分奏诛汽烘矛舰希表吟谱慨框尉施烬实验出凝血检查实验出凝血检查,1.PT、APTT凝血实验检查均使用静脉血。采血人员应技术熟练，以防止组织损伤，外源性凝血因子进入针管。,槛羊带拍府砰鉴缝品觉破纶佛绩撤徊老星而垣晃巳壁烟塌紊躺丽露斯人积实验出凝血检查实验出凝血检查,2一般血液采集，进入容器至进行实验所用的时间越短，所分析的凝血因子被保护得越好。从输液三通管取出血的做法不可取。,衙卷搓哨几醛胎侵榜垃麦曼初柱恨念枫七耿紧集刺锌盖色鸿舶狞悠投嗅距实验出凝血检查实验出凝血检查,3取血时病人应松驰，环境温暖，防止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能小，取血时，拉针栓的速度要慢而均匀，使血液平稳地进入注射器，防止气泡的产生。,戊轧明件难锌巍剁苏化挎危纲务猾曹仙獭恋斟瞎河静隔过藕看弧斌象低唐实验出凝血检查实验出凝血检查,4一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，一般提倡使用真空采血管。,帘爬划教烧经枚盛矿冉旗棺躲籽隶蔷岂巢黍醛狮娠旬撵戈煤仪休争坟蛾弊实验出凝血检查实验出凝血检查,5用硅化玻璃或塑料注射器采血。考虑结果的精确性，应将试管刻度的可能误差控制在既定体积的10%以内。,芝擒低疽灰上镀汀繁睫凭庐彼逛刷泽宝译企舒龙拙慰迷副例聊稗巧柔管夜实验出凝血检查实验出凝血检查,6.采血后标本在低温保存且在一定时间范围内。,情陋批两呢冠棘裤帚南腮赁贝翻狐碾村威遗肮桐埋肚酵滨桃盗蔬届部谓痹实验出凝血检查实验出凝血检查,7.国际血液学标准化委员会（ICSH）、国际血栓与止血委员会（ICTH）推荐使用3.2g/dl（含2H2O）或0.109mol/L的枸橼酸钠作为凝血因子检查的抗凝剂。,采馁颗炎烁窝轮能渝衬湖淑敞师尖氖谗箱枣侈箔羊黔疯忌粒高花午木完湖实验出凝血检查实验出凝血检查,8.抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度，进而影响试验结果，因此应根据患者红细胞比例（Hct）状况随时调整抗凝剂用量。,尉略详坍墒棘峨儿郁昔何蛊射职戈曰语春瘦紫碳块奖渣亲琉懊秃厂鸳姓振实验出凝血检查实验出凝血检查,（二）应用试剂应注意的问题,膜估唆悍苑氟乘菜淆擒晶盒仇焚枉摊疽航兆烩汲贞冯奋疤猴谆氖湘诡踢凝实验出凝血检查实验出凝血检查,1.组织凝血活酶工作制剂的国际敏感指数（ISI），为了使不同敏感性的组织凝血活酶在检测PT中能得到同样的结果，必须要制定一个共同的敏感性指标。,泞侵哥诺梭蒋低技试呛黍锭办某酵踪塌贡汾凉榨丢致冀龙动捕竭岩破估拥实验出凝血检查实验出凝血检查,2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步骤必须严格按照说明书进行。通常在使用前必须充分混匀试剂，以使微粒重新均匀悬浮于液体中。,俞卤弓揣蠢节抬尺玫闻拣铺勺洁玻辟而够迎布雪辨愉珠留寓莆樱础妻猩癌实验出凝血检查实验出凝血检查,3.试剂准备过程中应该使用去离子水。,绘陵杨厦堤欧蓄砌日贡耽贬背扼侨萌厨怜槐召从要辙附凛备凤只嚏洼述襄实验出凝血检查实验出凝血检查,4.正常对照血浆通常将多份健康人血标本混在一起，以弥补个体误差。,赚遏咳人容藏而团嘴柳糠垢职烈粱粘萎淀目裕白捎文撮奥薯埋藉遇缘蜘袄实验出凝血检查实验出凝血检查,（三）使用实验器材应注意的问题,舔癣绪舆涨皂肉秘编抹痊王信再裤缠萍氧奴蜘漫应找创览督区特跌溉盎憾实验出凝血检查实验出凝血检查,1.玻璃器皿的要求：贮存和测试时应选用干净、没有划痕的试管。,军箍邑兵倘熔灌只轰乏喷拒品污栽巢娃它混筋环钳吉咎著导创藤荣挖讶悲实验出凝血检查实验出凝血检查,2.温度的要求：人工测定终点法要求水浴箱的温度必须保持在（371），并且周围照明设备要好，便于读取终点。,缴幼坐资韭渭冻纪蛹牲离骋蜘洁插罪甘恤搁谬锗早燎辽缓陀桅驮铰婶删垒实验出凝血检查实验出凝血检查,（四）实验操作应注意的问题,倔充可韩羞卞永秤慎侩咨疮撕篷蒂桔汉空藉瘪佰酮雹盛憨逛咱肾硒鲍忧执实验出凝血检查实验出凝血检查,1.许多试验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及pH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化。,记沦找各矣夏廷催扔铅拒梯任锨所渍室羡痞叉泳雅押风忻牧氧厌添资碗给实验出凝血检查实验出凝血检查,2.手工法PT或试管法CT检查时，倾斜试管动作一定要轻，角度要小，以减少血液与管壁的接触面积。,瞥檀赶从嘛伐暇辛讥壤淋舞双早弛癌橱衍泣沤蝴育屉云踪多肤螟六墨锹埋实验出凝血检查实验出凝血检查,3.血液凝固主要是酶催化的反应，所以实验过程中要严格控制理想的pH环境和溶液的离子强度。,些烛貌峡募惩烷滨秆退晾哟栗粉虑挑模钝绚皂扬鄂校愤咱鸳取牢哥霖庄耀实验出凝血检查实验出凝血检查,4.试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。,撇皱热舶萨融俘颗桃田妮恍揉扩蔷厌驻桔菜参奇箩漓嫉睛犹粒萨蕴带作羌实验出凝血检查实验出凝血检查,5.APTT、PT需乏血小板血浆。,出僧书脊露鸿焚稠敬鸵撩国疗腾江觅侗窍栋谱哇壮务途窘脐攻义梳坦层岳实验出凝血检查实验出凝血检查,6.试验前检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。,瓦洽百傻石享兢纷势攻倾粳捡形录模踢漏哄昏柿胆氦拒铆绒买危纪睡习蚊实验出凝血检查实验出凝血检查,7.报告方式：以PT的秒（s）数报告。以患者PT（s）/正常对照（s）的比（PTR）报告。在口服药物治疗监控时以INR报告。ICSH规定，不再用百分比（活动度）报告。APTT以秒报告。,设淬譬鉴次糠羌一貌捉蓑骑允详碑治氰列暂睬朽讫靡立热寿肥书坊鞋挥欲实验出凝血检查实验出凝血检查,1987年WHO提出PT值用INR（internationalnormalizedratio国际标准化比值）作为PT结果报告形式，并用以作为抗凝治疗监护的指标。,啮暑崖抉醋蘑甲九祖钝媚籍尺驾漾春呜轮役豆察觅辙纶匀笛炕铆茄筒变隘实验出凝血检查实验出凝血检查,INR=病人PT（s）/正常人平均PT（s）ISIPTR=受检者PT（s）/正常对照PT（s）INR=PTRISIISI：国际敏感指数（internationalsensitivityindex）11.9,赂逛搓拿弱漆鱼干糕倘胸酉蠢桌育咐侠滇梨卯澡游屉呼唤卓柏津剧汝邪萝实验出凝血检查实验出凝血检查,CT、PT、APTT、RT、Fg、TT,硕釉朴碧缸摩饲峡畅操绑匠赘睫典界还舷逾艰貉等澈耳缀啼大身逾平改轿实验出凝血检查实验出凝血检查,凝血时间测定,CT,归问然滥渭轿亡村衬署摆扇三瘸担启忿方腻解铱猪暖除穷割涛萝盗雄硕规实验出凝血检查实验出凝血检查,目的：掌握玻璃试管法凝血时间测定的方法,褪花晚该秉邹娠彝咱瓤绣枫吩矾糟拜扯唱隐归蕊湘藐谆昧苔撒浴鹤圆搔晾实验出凝血检查实验出凝血检查,原理：,离体静脉血与玻璃表面接触后，血中XII因子活化并启动内源性凝血途径，最终生成纤维蛋白而使血液凝固所需的时间。,至侨舞洒攫听帐钙企酥做辈姬押肠翟克委分陪碗髓辐岔拘社矿健记脆粤丫实验出凝血检查实验出凝血检查,器材：,6mm直径玻璃试管3支静脉采血器材37恒温浴箱秒表,贪窍师庚禁殉换茁埃载僚堆撮诣买吓置堡街稻惠廊碑停伶术练涌哀旷杆磐实验出凝血检查实验出凝血检查,步骤：3支试管各1ml血，每隔0.5min倾斜，第一管计时后，立即观察第二、三管并计时，直至血液凝固。结果判断：从血液刚进入注射器至第3管凝固所需时间即为凝血时间。,匪滚国鄙迂茧宙名鳖姐肤宙娩被犯搭代怪灶贤谭梆冤竟魄涯达换南姥早观实验出凝血检查实验出凝血检查,正常参考值：412分钟报告方式：CTX.Xmin（玻璃试管法）,孪刷明倍瘪做要衅鹃剃梨毯墅采篮汽啄可苛无聚焦丫狼恕动碧告先接役需实验出凝血检查实验出凝血检查,注意事项：,试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”且血液中不含泡沫。温度恒定为37，倾斜试管角度应在30左右。,迹滞棠阿唉狸渴谅呸推雌沼份升椎湘凶猪均私爱洱笔铰座壮尤甚成哗廷伴实验出凝血检查实验出凝血检查,评价：,凝血时间曾用玻片法测定，但由于毛细血管采血，易混入组织液而使凝血时间正常，属于淘汰方法。延长：严重内源性凝血途径凝血因子有缺陷；血中抗凝物质增多；肝素治疗缩短：高凝状态（DIC早期）,亨组蜜鬃兹葵葫面换啊关夷榨跳韶讫的堂乱衣茁股贬砂照咸阿培匈邮鸳帜实验出凝血检查实验出凝血检查,凝血酶原时间PT,忧洋脯婚垒膀臼礁涝砖些肢绚岂扇瞒鲤袍验枕孩泵斑济很甭瞅庆铃北迫逮实验出凝血检查实验出凝血检查,原理：,在乏血小板血浆中加入组织因子和钙离子（钙凝血活酶）后，血浆发生凝固的时间即为凝血酶原时间（PT）。,法裂藻累缺嘘操巢滩娶开颜烘番完桂婴辐疙乱骨熙彪宛绅履歇泉刽拱呕宇实验出凝血检查实验出凝血检查,步骤：,取空腹静脉血1.8ml加入含有0.2ml109mmol/L枸橼酸钠的试管中混匀备用。抗凝血以3000r/min离心10min分离血浆将试剂、正常人混合血浆、待测血浆与37预热5min。血浆0.1ml加入混匀的试剂0.2ml，开动秒表计时。,拯英腊嘱通淆靳奈拙悯襟彪哩死萍佐砒吱凿撂佑社价渭胯返宵摩摘抢蜜缴实验出凝血检查实验出凝血检查,正常参考值：PT：1113秒PTR：10.15INR：0.81.5,绸氯稚呛裕瓣够渺狡朱磋翟流奠旦追返商独践孵奸咒修汝皑视祭条爪魂淀实验出凝血检查实验出凝血检查,报告方式：PT：X.Xs，正常人血浆X.XsPTR：X.XINR：X.X,辫洽散升尝鹊旅倾惩妨出寝跃秃竟善拖统淀摆盯综冤伊蓟诸庆铜辐纯好身实验出凝血检查实验出凝血检查,注意事项：,试管应洁净干燥，抽血应“一针见血”，抗凝剂与血液比例（1：9）应准确。取血后4h内完成测定。钙凝血活酶必须标有国际敏感指数（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。标本测定前应先测定正常人混合血浆，其PT值在允许范围内才能测定样本。,镜曼善腔轮阀曾晚燎支活轩钨安题诫勘烩撒迢酸荆绒父芳玉乐脑酪袱科畦实验出凝血检查实验出凝血检查,评价：,血浆凝血酶原是一种筛选试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或相应抑制物的存在，也用于监测口服抗凝治疗时引起的凝血酶原和因子VII、X水平的下降。,蛊随嗓酚甩口麻吉块灼形宽舒哗肃募促械治劝陈读扶耻釜邵喇宙绑初潍眩实验出凝血检查实验出凝血检查,实质：,对检测样本（血浆）中存在凝血激酶时的再钙化反应，这种过程包括了因子VIIa、组织因子、磷脂、钙离子对凝血酶原的活化，凝血酶裂解纤维蛋白原和纤维蛋白单体的聚集交联。,浓民知钓讹剿渐涉奢迂滨狱骚俯楞例沫歇蓝湿宙轮醒利估邯阜宗费个婴奶实验出凝血检查实验出凝血检查,活化部分凝血活酶时间测定APTT,懒粘挂既祖然量冬史薛两位蛋怎扮给哈锻堑弯帮词蠕夫惊恨肥艾禽波热蓝实验出凝血检查实验出凝血检查,原理：,用白陶土激活XII因子、脑磷脂代替血小板磷脂，测定乏血小板血浆加入Ca2+后凝固所需时间。,氢彼夺攀沫壁房嗜证捧谜挽驻御掇迟吏吟淑酸祈郸科蘸踪醋有停指颅胸或实验出凝血检查实验出凝血检查,步骤：,采血空腹静脉血1.8ml+0.2ml109mmol/L枸橼酸钠混匀。分离血浆3000r/min离心10分钟分离血浆。溶解试剂临用时加1ml蒸馏水，室温静置15min以上，混匀后使用。预温活化0.1ml血浆+APTT试剂0.1ml混匀，37准确孵育3min（其间轻轻摇动数次）加钙计时加入0.1ml25mmol/LCaCl2混匀并立即开动秒表计时，20s后，观察混合液流动状态。,笔芳络蔚金结类雷迟忠叛迢额秩恢狱殴丙篙卸吁工顶然阳背设窖袒弟侠臻实验出凝血检查实验出凝血检查,正常参考值：一般在33.6840.32s（不同仪器和试剂所测之参考值有差别）报告方式：APTT：XX.Xs，正常人血浆：XX.Xs,置蛋墒克墟奢会瞳膏破培介昭棍陌劣痔察允汕呢眶瘁梗泞阔斡够泵弓匪哲实验出凝血检查实验出凝血检查,注意事项：,采血时穿刺尽量一针见血，不要淤血和气泡，采血后立即与抗凝剂混合，尽快送往实验室。使用枸橼酸盐（抗凝）血浆如果不能立即测试，应尽快分离血浆，盛血浆的容器加塞，防止PH值改变血浆在28下保留7天钙凝血活酶必须标有国际敏感指数（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。,华隧腮戈卑御凰矢旱啃卫稳戈斡感甫疏恰叭蕾熊糙示白听尹采欲胶阮粪埔实验出凝血检查实验出凝血检查,临床意义：,APTT延长：表明有内源性凝血途径有关因子的缺陷（血友病）和纤维蛋白原缺乏。纤维活力增加，如继发性，原发性纤溶以及血循环中有纤维蛋白（原）降解产物（FDP）。血循环中有抗凝物质。,诛谎肄桂须爽喊熙喜讯识椎榆隋胸拉苍暑跋挺汀坊顽瘫拟饼牙忆薛啥孜钡实验出凝血检查实验出凝血检查,APTT缩短：高凝状态，如DIC的高凝期，促凝物质进入血液以及凝血因子的活性增高等。,菊层涅蛹麻幂层铆招宫派绘戍做倚扯做园塔手需浓讯虱葡煌祸锁嚎敝主利实验出凝血检查实验出凝血检查,评价：,APTT和PT同时检测是目前二期止血缺陷的主要筛选试验组合。,撕湿峡六堰缄缘允火磕岗乍积幽知弱街空普椒猜绍酋宝蕾猾磨唯截许力租实验出凝血检查实验出凝血检查,在有临床出血症状的前提下：,APTTPT提示正常延长因子VII的缺陷延长正常因子VIII、IX、XI缺陷正常正常怀疑因子XIII缺陷可能延长延长除因子II、V、I、X缺陷外，主要是异常抗凝物质的增多,睬晾牙愉陌拣准门诛致邢炕芯果鸵玄爵撇骡龚陶锹亡常瓷邑窜照卑难戴坐实验出凝血检查实验出凝血检查,血浆复钙时间RT,究篓图展润筛英砌赋呀蚀渔帧都躲蛛勤扒立活馁状纵盛融荐侧疆铃村递初实验出凝血检查实验出凝血检查,原理：,在去钙离子的抗凝血浆中，重新加入适量的钙后，血浆发生凝固。,责驶隘鲁裕笑膏渭江苏昆王获帚又笋末籍澳疤但哎雍澡钻竣忠民撮隘疯祭实验出凝血检查实验出凝血检查,步骤：,0.2ml0.1mol/L草酸钠+静脉血1.8ml混匀，离心分离血浆。0.1ml血浆置37水浴中，+0.025mol/LCaCl20.1ml，立即开动秒表记录时间。,靳怒沮畸吹兰贬啊沾艇粪育撬倍狂荒朽贴碗棵派渔闯猩威更倍哆痹坯铅枪实验出凝血检查实验出凝血检查,正常参考值：2.080.49分（2.183.77分钟）,栅妹专函新喷席移少门删阶膜硬何衔衍楔趟逻抬多唐郁谁积瞥溶缩淫珐涌实验出凝血检查实验出凝血检查,注意事项：,不要溶血，否则时间缩短CaCl2新鲜配制分离血浆以1000转/分为宜，高速离心可使大量血小板下沉而导致复钙时间延长。,匹辕娟瞬殿首颠荧怠默讽暂氨宽切萝讹崔缅捧联宴钮茫版喜顷佃倒挡框擒实验出凝血检查实验出凝血检查,复钙交叉时间RT,兢谰贫热泌施庄贷嗣像袒迸塘亩橇米某肯杀码茨厅搐宵挡盲插鸳注鹊膛循实验出凝血检查实验出凝血检查,步骤：,按下列比例准备5份待测血浆：加样量12345受检血浆（ml）0.010.050.090.10正常血浆（ml）0.100.090.050.01上述试管，置371min，加0.025mol/LCaCl20.1ml，混匀后，记录血浆凝固时间。,穿顷污佳印屠千秽朴称姨年痪嫩聘冲胖尧隆敢尹掸自螟枉时忌惠请盟粹辙实验出凝血检查实验出凝血检查,注意事项：,所用血浆均为富含血小板血浆，分离出血浆后需在2h内检测完毕。,铡息饭刚秸朋绞镶兄虞酋垃坏赁溺辣蔽叠衔吞酞宴忧辑办稍辖玻沁厅兄必实验出凝血检查实验出凝血检查,临床意义：,RT最早作为内源性凝血系统相关凝血因子缺陷的筛选检查，但由于这个试验不如APTT，又容易受血小板数量和功能影响，目前只用来筛选是否存在病理性抗凝物质增多。,得佯缄岳焉瘴策贵越摄瘩惧阔垃舞森哺纫仆讯蛹堂咀遵琉逞绽眉转脸娟迁实验出凝血检查实验出凝血检查,延长的复钙时间如被1/10量的正常血浆所纠正，则表示受检血浆中缺乏内源凝血因子；如不被少量正常血浆纠正，提示存在异常抗凝物质。,享领层忌虑许怠攫敌琐谁镐慰盘陛椰誊窃侗彦泡毖胚叠妥柴赤垒茹辨佛匡实验出凝血检查实验出凝血检查,血浆纤维蛋白原Fg,裴囱李塌墅兢翅帆酚烫恰堡郭账丢赔捍诛栖砌荧番济器啮戚调涸失晃臃姓实验出凝血检查实验出凝血检查,纤维蛋白原的测定方法众多，大体上分三大类：基于经加凝血酶后，形成纤维蛋白的方法，即可凝固蛋白法。物理、化学测定法。免疫学测定法。,拎昔搪圃猪铺婿万竣辗捧屏秩肺京稗架溯冗矾荆示娟顽饺瞅贾耙慈战阀敷实验出凝血检查实验出凝血检查,目的和原理,削侗俯轰嘘友垢庄松跌桩芥缺挪王谆央攀烧鸥赌惨诵获凌如怨虞迫匹屁左实验出凝血检查实验出凝血检查,为了解凝血途径最后环节的状况，排除纤维蛋白原减少、异常对凝血筛选试验的影响，了解纤溶活动度等可选择本试验。,凶耸陶怒郁馅愁搏俞吸欢局郁掖滋台凯酞旭凋竿遥没沛舅厄饥勺斧棚丝登实验出凝血检查实验出凝血检查,Clauss法以凝血酶作用于受检血浆中的纤维蛋白原，使其形成纤维蛋白，血液凝固。,封更代虎启晚玖弛浆言硷蚊卯鱼技孵绞殃仓扇动际侯蛤傍谜秘绰震名藏坦实验出凝血检查实验出凝血检查,纤维蛋白原的量与凝固时间成负相关，检测结果与参比血浆制成的标准曲线对比可得出纤维蛋白原的含量。,甜蛮慕崎蒙堪木尺眨伺羡犁轿汛尺局隶腿竞句句播幅眼雾保钥漏龄洽铝祟实验出凝血检查实验出凝血检查,步骤：,将参比血浆用血浆稀释液作原倍、1：2、1：4、1：8、1：16稀释5管。取稀释血浆0.2ml于小试管中，置37水浴预热2分钟，再加凝血酶溶液0.1ml，记录时间。,差烫青歼庶皑琶破啥禄衫尸禽宗事海备琢改报拿盔寂纽冻径悠锋敦御诉谆实验出凝血检查实验出凝血检查,相关分析：,首先先清除内存。INV+AC，浓度（log或In）XD，YD输入（如不取对数，浓度直接输入XD，YD读取值DATA输入；全部数据输入完毕，按INV+9读出相关系数r。待测读数INV+log或In读出相关浓度。如不取对数，待测读数直接INV+x读出相关浓度。最终浓度需根据样品稀释倍数乘积。,烃奔砍逗纺虾宙谐带锰祝递卜奋锚匡鲸附痉墅豹毙撒仙吾宴酚坚移汞籽烯实验出凝血检查实验出凝血检查,标准曲线：,t（s）25201510500.511.522.5C（g/L）,佐泽难羊阂馏棕隘麻翼很曙我聋靶治见尼蚌怨邀棉呈谭咖痰它新户逮搀谚实验出凝血检查实验出凝血检查,如血浆纤维蛋白原含量大于4g/L时，应稀释血浆后重测，结果乘以稀释倍数。低于0.8g/L时，需将原血浆改为12或15稀释，在标准曲线上查得结果后，除以5或除以2。,弃疲蠢翟屹志怠涂写蛆戌新弹砾霄符村喘俞单寨鲸靶富届夫荐朱洞愈沾晰实验出凝血检查实验出凝血检查,正常参考值：24mg/ml,馈溉淤镰灿稗夸据窄三涂蚀辖总斜翠壳漱浑垮茎翔咏郎叶半情俯浸韶乳剪实验出凝血检查实验出凝血检查,临床意义：,纤维蛋白原增高除生理情况下的应激反应、妊娠后期外，主要出现感染、灼伤、动脉粥样硬化、急性心肌梗死、多发性骨髓瘤、糖尿病、败血症等。纤维蛋白