无菌检查法.ppt

2010版药典无菌检查法的主要增修订情况及其展望2010.10,增、修订涉及范围前言部分培养基部分灵敏度检查稀释液、冲洗液方法验证薄膜过滤法培养及观察结果判断表1、表2和表3,前言部分1、新增规定：“防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。”2、新增规定：“日常检验还需要对环境进行监控。”3、新增规定：“无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。,培养基部分1、删除：1.硫乙醇酸盐流体培养基后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明2、删除：2.改良马丁培养基后括号（用于培养真菌）的说明,培养基部分3、删除：3.选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂后面的“如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或-内酰胺酶（用于-内酰胺类供试品）”等说明。修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。(中和剂、灭活剂见微生物限度检查法中表1）,表1常见干扰物的中和剂或灭活方法,培养基部分4、将原第6.0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）修订排列为第4.按顺序排列归类培养基1.4.均为直接用于无菌检查的液体培养基。,培养基灵敏度检查部分1、修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法：规定应使用含0.05（v/v）聚山梨酯80的0.9无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100cfu的孢子悬液。删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）吸出孢子悬液的操作方法,培养基灵敏度检查部分2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在28，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。”,稀释液、冲洗液及其制备方法部分在原有1.0.1%蛋白胨水溶液2.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的基础上新增加：“可根据供试品的特性，选用其他经验证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。”,方法验证试验部分1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌。是因在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好。,2、验证试验中样品用量的规定：删除了原：“将规定量供试品按”修订为：薄膜过滤法验证试验样品量：“取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤。”直接接种法验证试验样品量：“其中1管接入每支培养基规定量的供试品量，“明确了验证试验所需样品量是供试品的检验量而不是供试品的检验数量。,供试品的无菌检查部分1、阳性对照用量：原：“若采用直接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。”修订为：若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应按验证的方法确定。,供试品的的无菌检查部分薄膜过滤法：1、新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜2、新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml3、新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验,供试品的无菌检查部分薄膜过滤法4、增、修订无菌气（喷）雾剂供试品的检验方法：规定冰室的温度应至少为-20，新增了开启容器后“将供试品转移至无菌容器中”的操作步骤。,供试品的无菌检查部分薄膜过滤法5、增、修订：装有药物的注射器供试品的检验方法删除“装上无菌针头（非包装中所配带的）”修订为“取规定量，排出注射器中的内容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，直接过滤，,供试品的无菌检查部分直接接种法删除原直接接种法中-内酰胺类或黄胺类供试品项。因该两类供试品的无菌检查以采用薄膜过滤法加中和剂更好。,供试品的无菌检查部分培养及观察对于培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长时，删除了：“或划线接种于斜面培养基上”的规定。同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判断的规定。,结果判断部分新增订阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作用：“阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。”,表1、表2和表3部分表1将表1第3列的表题原“每种培养基最少检验数量”修订为：“接种每种培养基所需的最少检验数量”更明确指出接种到培养基中去的检验量。修订了表1下的注:对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。,表2将表2原名称：“上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量”修订为：“液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量”。明确液体制剂最少检验量见表2的第2列，供试品最少检验数量见表2的第3列。修订了表2下的注:对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。,表3将表3原名称：“上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量”修订为：“固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量”明确固体制剂最少检验量见表3第2列；供试品最少检验数量见表3的第3列。修订了表3下的注:对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。,对药典无菌检查法的展望,一、无菌检查用培养基的不断改进1、与国际先进药典无菌检查法所用培养基一致2、深入开展无菌检查用培养基的研究与开发二、增加对检出菌的检定要求三、每种接种后的培养基分别置两种温度（适合细菌生长和适合真菌生长）下培养,一、无菌检查用培养基的不断改进,1、与国际先进药典无菌检查法所用培养基一致理由（1）随着对药品安全的保证和药品无菌检查要求的不断提高，无菌检查用培养基应不断改进。,理由（2）USP中大豆酪蛋白胨培养基灵敏度测定要求用3种菌：枯草杆菌、白念、黑曲检查。我国药典改良马丁培养基灵敏度测定只要求2种菌：白念、黑曲。实验也证明大豆酪蛋白胨培养基同时适合真菌、细菌的生长，有利于提高污染菌的检出率。理由（3）与USP/BP/EP/JP保持一致便于国际交流。,2、深入开展无菌检查用培养基的研究与开发理由（1）任何一种培养基不可能把药品中可能存在的菌都培养出来。理由（2）与培养基灵敏度试验用菌相比较，药品中的污染微生物更广泛、活性更低。可能存在某些苛养菌是否需要添加更丰富的营养成分，如动物的血液、动物组织提取液等。,理由（3）据报道：巯乙醇酸盐流体培养基中指示剂刃天青对微生物有一定抑制作用；加0.1%刃天青1ml0.5ml对灵敏度无显著差异。美国药典中同时收载两种巯乙醇酸盐流体培养基供选择，其中之一无刃天青和琼脂。引入思考：什么情况下应选择用？为甚我国只收载一种？,理由（4）可能存在严格厌氧菌巯乙醇酸盐流体培养基中所营造的厌氧环境是否足以满足严格厌氧菌的培养需要。引入思考：现无菌检查的实验操作、培养条件是否满足严格厌氧菌的检出。,2、增加对检出菌的检定要求,理由（1）无菌检查法前言中：“若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。”那么，若供试品不符合无菌检查法的规定，是否就能表明绝对是供试品污染所致？怎么证明、确定是供试品污染所致？,理由（2）无菌检查是高风险产品关乎用药安全的必检项目，为对所检供试品的质量负责，对检验质