（生物化学与分子生物学专业论文）蜘蛛肽类毒素的结构与功能研究(1).pdf

湖南j | i f j 范人学2 0 0 3 届蜊j ? 毕业论义 中文摘要 摘要1 ：虎纹捕鸟蛛( s e l e n o c o s m i ah u w e n a ) 是在我国西南地 区发现的蜘蛛新种，属于捕鸟蛛科( t h e r a p h o s i d a e ) 。该蛛穴居 i 二下，个体大，毒性强。其粗毒中含有多种成分。我们应用离子交 换和反相高效液相色潜已经从中分离出多种神经毒素如( h w t x i ， h w t x - 工i ，h w t x - i i i ，h w t x i v ，s h l - 1 ) ，并对这些毒素进行鉴定和 研究。 本文报道从虎纹捕鸟蛛( s e l e n o c o i m ah u w e n a ) 粗毒中，结合 阳离子交换和反相高效液相色谱分离纯化出一种昆虫毒素，命名为 虎纹捕鸟蛛毒素一v ( h u w e n t o x i n v ，h w t x - v ) ；其天然突变体( t h e m u t a n to fh u w e n t o x i n ，m h w t x - v ) 也同时纯化出来。经m a l d i t o f 质谱分析，h w t x - v 的相对分子量为4 i 1 1 4 2 0 4 d a ，m h w t x v 的分 子量是3 8 7 7 0 8 0 4 d a 。经d t t 还原，迸一步用碘乙酰胺修饰，它 们的分子量分别增加到4 4 6 0 2 d a 和4 2 2 5 1 d a 。因此我们可以确定 h w t x v 和m h w t x - v 都有三对二硫键。从它们的实测分子量和氨基 酸序列计算分子量都相差6 d a ，进一步证实了它们的6 个半胱氨酸 都形成了3 对二硫键。利用e d m a n 降解气相蛋白质自动测序仪得到 h u w e n t o x i n - v 为一单一多肽链，含3 5 个氨基酸，其中6 个半胱氨 酸残基形成3 对二硫键，其氨基酸全序列为n h 2 一e c r w y l g g c s q d g d c - c k h l q c h s n y e w c v w d g t f s c o o h ；同样m h u w e n t o xin - v 也为单一多肽 链，含有3 3 个的氨基酸，其氨基酸序列为n h 2 一e c r w y l g g c s q d g d c c k h l q c h s n y e w c v w d g t c o o h 。从氨基酸序列上看，m h u w e n t o x i n v 只 在c 末端比h u w e n t o x i n v 少p h e 和s e r 残基，它们的结构有很高的 相似性根据h w t x - v 的c d n a 分析，我们认为这两个毒素来自于同一 个基因，是经过翻译后加工形成的天然突变体。 h w t x - v 通过腹腔注射，能使蝗虫和蜚蠊产生可逆的剂量依赖 性的麻痹作用，麻痹时间长达十多个小时，在高剂量( 1 0 0 扯g g ) 时可使蝗虫和蜚蠊致死，对蝗虫的e d s 。= 1 6 5 r i g g 。而h w t x v 腹 腔注射( 2 0 0 t x g g ) 和脑室注射( 3 0 t t g g ) 对小鼠没有异常反应， 也不能阻断膈神经膈肌标本的神经肌肉传递，可以得l b h w t x v 是 一一种对昆虫有特异性作用的昆虫毒紊，对晴巍动物控有作用。但是 湖巾| | | | j 池人学2 0 0 、“i 疵 m h t w x v 对蝗虫、蜚蠊及小鼠都没有明显反应。它们的结构与功能 的关系可以推断出h w t x - v 的c 末端的p h e “和s e r “为h w t x v 的关 键性残基，决定着h w t x - v 的昆虫活性。 利用t c e p 部分还原测序法、结合酶解方法确定了h w x t v 的二 硫键的位置，它们是c y s 2 一c y s l 6 ，c y s 9 - c y s 2 1 ，c y s l 5 一c y s 2 8 即以 卜4 ，2 - 5 ，3 - 6 的方式连接。经网源性搜索，发现这两种毒素与多 种蜘蛛毒素具有较高的同源性，如t h r i x o p e l m ap r u r i e n s f 1 的 p r o t x i ( 6 5 ) ，s c o d r ag r i s e i p e s 中的s g t x 一1 ( 5 7 ) ，h y s t e r o c r a t e s g i g a s 中的s n x - 4 8 2 ( 5 5 ) ，以及g r a m m o s t o l as p a t u l a t a 中的 h a t x l ( 5 4 ) h a t x 2 ( 5 4 ) 。从这些同源序列的二硫键的结合方式看 来，h w t x - v 和m h w t x - v 很可能属( i n h i b i t o r yc y s t e i l 2 ek n o t ) i c k 结构模体。 关键词：虎纹捕鸟蛛，虎纹捕鸟蛛毒素一v ，虎纹捕鸟蛛毒素一v 天 然突变体，昆虫毒素，二硫键定位，生物学活性，关键性残基。 摘要2 ：从雷氏大疣蛛( m a c r o t h e l er a v e n i ) 粗毒中；，结合阳离子 交换和反相高效液相色谱分离到一种多肽神经毒素，命名为大疣蛛 毒素一v i ( r a y e n t o x i n - v i ) 。经m a l d i - t o f 和e s i 质谱分析，它的 分子量为5 3 7 1 6 0 4 d a ，利用e d m a n 降解气相蛋白质测序仪测得 其氨基酸列是n h 2 - n ii k g r v v k l c g g c a q k c c d r e p r c d p c r t c v e n v g t g g g y l s s n k k c n g s - c o o h ，其中八个c y s 形成四对二硫键。r a v e n t o x i n v 能阻断小鼠膈神经膈肌标本神经肌肉接头传递，脑室注射能使小鼠 瘫软。但是对昆虫没有明显作用。从一级结构上没有发现与该毒素 有相似的其他蜘蛛毒素。 关键词：雷氏大疣捕鸟蛛，r a v e n t o x i n v i ，神经毒素，生物学活 性 v a b s tr a c t a b s t r a e t1 ：t h ec h i n e s eb i r ds p i d e rs e l e n o c o m i af i u w e n al so n e o ft h em o s tv e n o m o u s s p i d e r s i n c h i n a ，w h i c h d i s t r i b u t e s i n s o u t h w e s t e r n h i l l y a r e ao fc h i n aa n d h a b i t u a l l y l i v e s 。i n t h eh o l e s u n d e r g r o u n d t h e y e n o mo ft h i s s p i d e r o n t a i n sam i x t u r eo f c o m p o u n d sw i t hd i f f e r e n tt y p e so fb i o l o g i c a la c t i v i t y m a n yk i n d so f n e u r o t o x i ct o x i n ss u c ha sh w t x i ，h w t x i i ，h w t x i i i ，a n d h w t x i ve t ch a v eb e e ni s o l a t e d b y c o m b i n a t i o no f r i o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y a n dr e v e r s e p h a s eh i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y an e u r o t o x i c p e p t i d e ( n a m e dh u w e n t o x i n - v ) w a s ：p u r i f i e d f r o m t h ev e n o mo ft h e s p i d e rb y ac o m b i n a t i o no fi o n e x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h ya n d r e v e r s e p h a s eh p l c h w t x - v h a s 。3 5a m i n oa c i d r e s i d u e s ，w i t ht h em o l e c u l a rm a s s4 1l1 4 d a t h ea m i n oa c i ds e q u e n c e h a sb e e nd e t e r m i n e da s n h 2 一e c r w y l g g c s q d g d c c k h l q c h s n - y e w c v w d g t f s c o o h ，w h i c hc o n s i s t so f 6c y s ，f o r m e dt h r e ep a i r s o fd i s u l f i d e b r i d g e s an a t u r a lm u t a n to ft h e t o x i n ( c a l l e d m h u w e n t o x i n v ) w a sa l s o i s o l a t e d f r o mt h e v e n o m , ，t h ec o m p l e t e a m i n oa c i ds e q u e n c ei sn h 2 e c r w y l g g c s q d g d c c k h l q c h s n y e - w c v w d g t c o o hd e t e r m i n e d b y a u t o m a t e de d m a nd e g r a d a t i o n m h w t x vw a s o n l y t r u n c a t e dt w oa m i n oa c i dr e s i d u e s f r o mt h e c t e r m i n u so f h w t x - v ，a n d i t sm o l e c u l a r w e i g h t i s3 8 7 7 i d a d e t e r m i n e db ym a s ss p e c t r o m e t r y t h e r ea r et h r e ed is u l f i d eb r i d g e si n e a c ho ft w o p e p t i d e sd e m o n s t r a t e db y m a s ss p e c t r o m e t r y a c c o r d i n gt o t h ee d n ao fh w t x - 够h w t x - va n dm h w t x - v m i g h t j b ec o m ef r o m t h es a m e g e n e t h e d i f f e r e n c eo ft w ot o x i n s m a yb e r e s u l tf r o m p o s t - t r a n s l a t i o nm o d i f i c a t i o n h w t x vc a nr e v e r s i b l y p a r a l y z e l o c u s t sa n dc o c k r o a c h e sf o r s e v e r a lh o u r sw i t ha ne d 5 0v a l u ea s16 + 5 p g ，g t ol o c u s t s ，a n dl a r g e r d o s eo ft h et o x i nc a nc a u s ed e a t h 。t h e ，n e u r o t o x i cs y m p t o m si n d u c e d v l 湖南师范人学2 0 0 3 厢坝i j 牛札沦譬 b y i n t r a a b d o m i n a l i n j e c t i o no fh u w e n t o x i n vw e r e p a r a l y s i s ， i m m o b i l i z a t i o na n d1 a s t g r a d u a l l yr e c o v e r y h w t x vw a sn o ts h o w n t ob l o c kn e u r o m u s c u l a rt r a n s m i s s i o ni ni s o l a t e dm o u s ep h r e n i cn e r v e d i a p h r a g mp r e p a r a t i o n h w t x v a l s oh a dn o t e v i d e n t l y e f f e c to n m i c eb yi n t r a - a b d o m i n a li n 3 e c t i o nw i t hh i g hd o s eo f4 0 0 l i g g w ec a n c o n c l u d et h a th u w e n t o x i n vi sap o t e n ti n s e c t i e i d a lt o x i n w i t h o u tn o v e r b r a t et o x i c i t y h o w e v e r m h w t x vs h o w sn os i g n i f i c a n te f f e c to n 1 0 c u s t sa n dc o c k r o a c h e s t h es t r u c t u r e 。a c t i v i t yr e l a t i o n s h i pi n d i c a t e s t h a tt h er e s i d u e sp h e 3 4a n ds e r ”i nt h ec t e r m i n u so fh w t x va r et h e k e yr e s i d u e so ft h eb i o l o g i c a la c t i v i t y t oa s s i g nt h ed i s u l f i d eb o n d so fh w t x v w ee m p l o yt h em e t h o d o f p a r z i a lr e d u c t i o nu s i n gt c e p t h el a b e l e dt h i o l sw e r ei d e n t i f i e db y e d m a nd e g r a d a t i o n t h er e s u l t si n d i c a t e ds p e c i f i cl o c a t i o no ft h r e e d i s u l f i d eb o n d s t h et h r e e d i s u l f i d e l i n k a g e o fh w t x vh a sb e e n a s s i g n e da sc y s 2 一c y s l 6 ，c y s 9 c y s 2 1 ，a n dc y s l 5 - c y s 2 8 t h ep r i m a r y s t r u c t u r eo ft w ot o x i n se x h i b i t e ds e q u e n c ei d e n t i t yw i t ho t h e rs p i d e r t o x i n ss u c ha sp r o t x i ( 6 5 ) ，at o x i nf r o mt h ev e n o mt h et a r a n t u l a s p i d e rt h r i x o p e l m ap r u r i e n s ，s g t x ( 5 7 ) ，at o x i n f r o mt h es p s c o d r ag r i s e p e s ，s n x - 4 8 2 ( 5 5 ) ，at o x i nf r o mt h et a r a n t u l as p t - f y s t e r o c l c l t d sg i g a sa n dh a t x1 ( 5 4 ) h a t x 2 ( 5 4 ) f r o mt h es p d e r d e r d e r g r a m m o s t o l as p a t u l a t a a c c o r d i n gt o t h e s e q u e n c e ss i m i l a r i t y a n d t h es a m ed i s u l f i d el i n k a g eo fh w t x vf a m i l yw i t ho t h e rt o x i n sw i t h k n o w n3 ds t r u c t u r e s ，w ec a np o s t u l a t et h a th w t x vm a yb e l o n gt o i c k ( i n h i b i t o r yc y s t e i n ek n o t ) m o t i f 1 k e y w o r d s ： s p i d e r v e n o m ，h u w e n t o x i n v m h u w e n t o x i n _ v ， i n s e c t i c i d a l ，k e ya m i n oa c i d ，o r n i t h o c t o n u sh u w e n a a b s t r a c t2 ：an e wn e u r o t o x i nn a m e dr a v e n t o x i n v ia r e p u r i f i e df r o m t h ev e n o mo ft h e s p i d e r m a c r o t h e l er a v e n i b y i o n e x c h a n g e 窜耋i 一塑塑些! 叁堂! ! 塑旦型! ! ：望些堕茎 c h r o m a t o g r a p h y a n dr e v e r s e p h a s eh i g hp e r f o r m a n t e 1i a u i d c h r o m a t o g r a p h y t h e m o l e c u l a r w e i g h o fr a v e n t o x i n v ii s 5 3 7 1 6 + 0 5 d a ，i d e n t i f i e db ym a l d i ，t o fm a s ss p e c t r o m e t r y w h i c hi s i n g o o da g r e e m e n tw i t ht h e c o m p l e t e a m i n oa e i d s e q u e n c e o f n h 2 一n i i k g r v v k l c g g c a q k c c d r e p r c d p c r t c v e n v g t g g g y l s s n k k n c g s c o o hd e t e r m i n e d b ya u t o m a t i ce d m a nd e g r a d a t i o n r a v e n t o x i n - v ic a np a r a l y z er a ta f t e ri n t r a c e r e b r o v e n t r i c u l a ri n je c t i o n a n db l o c kt h en e u r o m u s c u l a rt r a n s m i s s i o no f i s o l a t e dr a tp h r e n i cn e r v e d i a p h r a g mp r e p a r a t i o n t h e 51 一r e s i d u e s p e p t i d e ，w h i c hc o n t a i n e d 8 c y sa n df o r m e df o u rd i s u l f i d eb o n d s ，s h o w e dn oh o m o l o g yw i t ho t h e r s p i d e rt o x i n s k e y w o r d s ：m a c r o t h e l e r a v e n i ，n e u r o t o x i n ，r a v e n t o x i n v i ， b i o l o g i c a la c t i v i t y v i i l 缩写表( 中英文对照) a c n 乙腈( a c e t o n i t r i l e ) c c a a 一氰基一4 一羟基肉桂酸( q - c y a n o - 4 一h y d r o x y c i n n a m i ca c i d ) c n s 中枢神经系统( c e n t r a ln e r v es y s t e m ) d t t 二硫苏糖醇( d i t h i o t h r i t 0 1 ) e d , = ；0 半有效剂量( e f f e c t i v ed o s ef o r5 0 o ft h et e s t e ds a m p l e ) h w t x i 虎纹捕鸟蛛毒素一i ( h u w e n t o x i n i ) e w t x i i 虎纹捕鸟蛛毒素一i i ( h u w e n t o x i n i i ) h w t x i v 虎纹捕鸟蛛毒素- i v ( h u w e n t o x i n i v ) s e l i 虎纹捕鸟蛛凝激素- i ( s e l e n o c o s m i ah u w e n a1e c ti n i ) f n t x v 虎纹捕鸟蛛毒素- v ( h u w e n t o x i n v ) i 廿i w t x v 虎纹捕鸟蛛毒素一v 的天然突变体( t h em u t a n to fh u w e n t o x i n v ) h p l c 高效液相色谱层析( h i g hp e r f o r m a n c eli q u i dc h r o m a t o g r a p h y ) i c k 抑制剂胱氨酸结( i n h i b i t o rc y s t i n ek n b t ) l d 半致死剂量( 1 e t h a ld o s ef o r5 0 o ft h et e s t e da n i m a l ) m a l d i t o f 基质辅助激光解析离子飞行时间质谱( m a t r i x a s s i s t e dl a s e r d e s o r p t i o n i o n z a t i o nt i m eo ff l i g h t ) n i 具有根强 1 9 第一章前言蜘蛛多肽毒索的研究新进展 的杀虫活性，发现其可逆地抑制n m d a 受体，而对大鼠的海马神经 元【? 的a m p a 、k a i n a t e 和g a b a 诱导的电流没有影响 ( f i g u e i r e d o ，2 0 01 ) 。 1 8a sic 通道毒素 h + 门阳离子通道是属于a s i c ( 酸敏感离子通道) 家族，能调 节喙觉传导、在大脑中由p h 波动引起的感觉以及与疼痛相关的细 胞外酸度。一种从p s a l m o p o e n sc a m b r i d g i e 狼蛛中发现毒素p c t x l ， 含4 0 个氨基酸，可以强烈抑制a s i c la 亚型阳离子通道。该中 a s i c la 亚型阳离子通道在中枢神经元和背根神经元中有很高的表 达。p c t x l 是第一个对a s i c l a 亚型阳离子通道有高亲和力和高选 择性的药理试剂。它能选择性地抑制a s i c l a 亚型阳离子通道同一 多聚体的装配，而对a s i c 家族中别的亚型离子通道不敏感。p c t x l 可以作为一种重要的工具试剂对中枢神经元天然a s i c 流的鉴定和 解释a s i c 离子通道的生理作用。虽然p c t x l 与以前报道的蜘蛛毒 素在药理作用上有显著的不同，但是在一级结构上和其他狼蛛多肽 毒素有相似性，包括保守的半胱氨酸位置。 1 9 其他神经毒素 由于神经毒素在研究神经生物学和神经药理学上重要作用，如 它作为生态杀虫剂的开发价值，越来越多的蜘蛛毒素被开发出来。 因为它的杀虫活性，所以对毒素活性的侧重点已由过去的注重对脊 椎实验动物的毒性转移到对昆虫的毒性上了( b e t t i n ia n db r i g n o l i ， 1 9 7 8 ；q u i s t a d ，1 9 9 2 ；a t k i n s o n ，1 9 9 6 ；m a n z o l i ，1 9 7 8 ；m a n z o l i - p a l m a ， 2 0 0 0 ) 。但是对大鼠的毒性分析仍是检验毒索对脊椎动物的c n s 的 活性最常用的方法( e s c o u b a s ，1 9 9 8 ) 。除了上面讲到的神经毒素以及 它们的作用机理已经发现外，还有许多已经被分离的神经毒索的作 用模式目前不清楚。 从东非狼蛛p t e r i n o c h i l u ss p 的粗毒中得到至少1 2 种对鼠有 毒性的多肽( 1 9 8 2 ) 。a 4 4 是一个7 7 个氨基酸残基的多肽，4 对二 硫键使其高度折叠，它可以使小鼠的呼吸麻痹致死。作用机理不清 楚。但其在非致死剂量的快速恢复表明它不可能是作用于突触前 的。 第一章前言蜘蛛多肽毒素的研究新进展 e s t x 是从狼蛛毒素分离出的，3 8 氨基酸残基，能致死蟑螂。有 一种象e s t x 异型的3 9 个氨基酸残基的多肽，是从墨西哥红肢狼蛛 b r a c h y p e l m as m i t h i i 中提取的，还有另外一种不相关的毒素，它们 与t x 2 9 ( f r o mp n i g r i v e n t e r ) 有相同的活性( k a i s e r ，1 9 9 4 ；e s c o u b a s ， 19 9 7 ) 从狼蛛l a s i o d o r ap a r a h y b a n a 中分离了两种新的神经毒素多 肽，能使致死小鼠。它与另两种狼蛛e c a l i f o r n i c u m 和b s m i t h i i 的 毒，蔓成分有7 4 的同源性。他们注意到在狼蛛中的粗毒中最初成分 中，对脊椎动物有毒性的成分和对非脊椎动物有活性的成分之间没 什么重叠。杀虫的成分为低分子量，而对脊椎动物有毒性成分分子 基为3 。7 - 7 。3 k d a 。从t r a p d o o r 蜘蛛a p t o s t i c h u ss c h l i n g e r i 中分离出 9 种有杀虫活性的成分，其中的6 种已测序( s k i n n e r ，19 9 2 ) ，7 种能 致烟草h o r n w o r m ( m a n d u c as e x t a ) 和甜菜粘虫( s p o d o t e r ae x i g u a ) 的 幼虫麻痹，已经测序的多肽发现都含有3 - 4 个二硫键。另外有两种 杀虫多肽，t x 4 ( 7 ) 和t x 4 ( 6 - 1 ) 是从p n i g r i v e n t e r 的粗毒的第4 组 成分中分离，对大鼠无毒性( f i g u e i r e d o ，1 9 9 7 ) 。r x 4 ( 6 一1 ) 和组分4 能刺激蟑螂肌肉切片上的谷氨酸释放。p h t x l 也是从p n i g r i v e n t e r 分离的，能致死小鼠，静脉注射引起神经毒性反应( 尾巴上翘，兴 奋和痉挛性瘫痪) ( r e z e n d e ，1 9 9 1 ) ，在小鼠的膈神经隔肌上，p h t x l 对间接引起的抽搐、静息膜电位和微终板电位没有作用，但它能导 致神经( 液泡化) 和2 0 - 3 0 肌肉纤维( 液泡化，破坏线粒体和肌浆 的网状组织) 形态改变，显示它有神经毒性和组织坏死活性，具体 的作用机理目前还不清楚( m a t t i e l l o s v e r z u t ，1 9 9 8 ) 。 二：蜘蛛多肽神经毒素的三维结构研究 截止2 0 0 3 年3 月，我们在蛋白质结构数据库p d b ( p r o t e i nd a t a b a n k ) h t t p ：w w w n c b i h i m n i h 总共发现1 3 种蜘蛛的2 2 种蜘蛛毒 索的三维结构，在这1 8 个三维结构中除了2 个是通过同源模型方 法得到，其余2 1 个分别属于1 3 种不同的蜘蛛。毒素的三维结构都 是通过核磁共振的方法解析出的( 见表l ，2 ) 。 上述不同种类的蜘蛛毒素在一级结构和生物学功能上虽然不尽 相同，但在空间结构上除了h w t x i i ( t h ed i s u l f i d e d i r e c t e d b - h a i r m o t i f ) 外，其他2 1 种毒素具有相同的结构模式一即抑制胱氨酸结构 2 l 第一章前言蜘蛛多肽毒素的研究新进展 模体( i n h i b i t o rc y s t i n ek n o tm o t i f , i c k ) 。i c k 模体最早由澳火利 亚科学家n o r t o n ，r s 等人于1 9 9 4 年通过对芋螺( c o n u s g e o g r a p h u s 的n 一型钙离子通道阻断剂( ) c o n o t o x i n g v i a 的溶液三维 结构分析提出的。它们主要由半胱氨酸等保守残基维持相同的结构 框架，框架上非保守区域残基的不同决定了它们的生物学活性。 图1 一l 六种有代表性的蜘蛛毒素三维结构示意图和耽氮酸结模型 2 ： 一丝：二童堕宣二：塑些童墼堡墨笪塑窒堑堂壁 多敝毒错名称 来源蜘蛛名称残 生物学活性 基 数 - a g a t o x i nl v aa g e n e d p s i $ a p e r t a 4 8 p - t y p ev c c cb l o c k e r l 0 一a g a t o x i i l1v a a g e n e l o p s i sa p e r t a 4 8 p t y p ev c c cb l o c k e r u - a g a t o x i t li a g e n e l o p s i sa p e r t a 3 6i n s e c ts o d i u m c h a n r e l g t - a g a t o x ；n1 va g e n e l o p s i sa p e r t a3 7 l n s e e ts o d i u mc h a n n e l ( ) a t r a c o t o x i n h a d r o n y c h ev e r s u l a 3 7i n s e c tc a l c i u mc h a n n c l h v l j - a t r a c o t o x i nh v l c h 8 d 。o n y c h ev e r s u t a 3 7l n s e c t i c i d a lt o x i n 6 a tr a c o t o x i nh v1 h a d r o n y c h ev e r s u t a 4 2s o d i u mc h a n n e lt o x i n 6 a t r a c o t o x i nar i爿，。日rr o b l d s t u s4 2s o d i u mc h ：a n n e l r o o d g i a t o r h u w e n t o x i i l i or n i t h o c t o n u sh u w e n a3 3 n t y p ee a l c i n mc h a n n e l h u w e n t o x i n ，i l 0 r n i t h o c l o n i t sh u w e n a3 7i s e c t i c i d a lt o g i n s h l 10 r 月i l h o c t o n “sh u w e n 口3 2 l e c t i n p e p t i d e h t l w e n t o x i n 。i v d r f ， o c t o n t l sh u w e n a3 5t t x ss o d i u mc h a n n e i h a i n a n t o x i n i v0 r n i t h o c t o n l l sh a i n a n a3 5t t x ss o d i u mc h a n n e l h a i n a n t o x i n j 0 ，n i t h o c t o n u sh a i n a n a3 3l n s e c tp o s s i u mc h a n n e l gs m t x 2 g r a m m o s t o l as p a t u l a t a3 lm e c h a n o s e n s i t v ei o n t h a n n e l g s m t x 4g r a m m o s t o l as p a t u l a t a3 5m e c h a n o s e n s i t i v ei o i l c h a r m e i a c t x h i h a d r o n y c h ei n f e n s a 3 8 l o c t i n p e p t i d e d h a d r o n y c h ev e l $ 目l a 4 5i n s e c tc a l c i u mc h a n n e l a t r a c o t o x i n h v 2 a h a t x lg i t z l ? ? l o s l o l as p a t u l a t a3 5p o s s i u n lc h a n n e j ha t x 2 g r a m m o s t o l as p a t u l a t a 3 5p o s s i u mc h a n n e i l - r , d 下x 2 h e t e r o p o d av e n t o r i a 3 0k v 4 2p o s s i u mc h a n n e l 第一章 前言一蜘蛛多肽毒素的研究新进展 参考文献 1 s c o t t ，r h ，s u t t o n ，k g ，a n n e t t e ，c d t r e n d s i n n e u r o s e i e ，t e e e s 。1 9 9 3 ；1 6 ( 4 ) ：15 3 - 15 9 2 ，g r i n s h i n e e “，：，b i o c h e m 19 9 9 ；2 6 4 ：2 7 6 2 8 0 ：，。l o n g e n e c k e r ，h ，e ，h u r b u t ，w p ，m a u r o ，a ， e ta 1 n a t u r e ， 1 9 7 0 ；2 2 5 ：7 0 1 4 f r o n t a i l ，n ，c e c c a r e l l i ，b ，g o r i o ，a ，e ta 1 ，c e l ，b i o 1 9 7 6 ； 6 8 ：4 6 2 5 h u l b u t ，w p ，l e z z i ，n ，f e s c e ，r ，c e c c a r e l l i ，b ，p h y s i 0 1 1 9 9 0 ：4 2 5 ：5 0 1 - 5 2 6 6 p e t r e n k o ，a g ，k o v a l e n k o ，v ，a s h a m o t i e n k o ，z n 。e ta 1 e m b oj o u r a l 1 9 9 0 ；9 ：2 0 2 3 7 k i y a t k i n ，n i ，d u l u b o v a ，e ，c h e k n o v s k a y a ，i i ，e t a 1 f e b sl e t t e r s 19 9 0 ；2 7 0 ：1 2 7 8 l u r n e v ，a v ，q e m i n ，v v ，e ta 1 b i o o n g k h i m 1 9 9 l ；1 7 1 0 2 1 2 6 9 e r i s h i n ，e v t o x i c o n ；t 9 9 8 ；3 6 ( 1t ) ：1 6 9 3 - 1 7 0 1 。 10 m i c h a e l y ，p ，b e n n e t t ，v t r e n d sc e l lb i o ，1 9 9 2 ；2 ：1 2 7 _ 1 2 9 1i d a n i l e v i c h ，v n ，l u k i a n o v ，s ，a ，g r i s h i n ，e v b i o o r gk h i m 19 9 9 ；2 5 ( 7 ) ：5 3 7 - 5 4 7 ： 1 2 s h e u m a c k ，d d ，c l a s s e n s ，r w h i t e l e g ，n m ，e ta 1 f e b s l e t t e r s 19 8 5 ；1 8 1 ：15 4 13 b r o w n ，m r ，s h e u m a c k ，d d ，t y l e r ，m i ，e ta 1 b i o c h e m 1 9 8 8 ；2 5 0 ：4 0 1 1 4 n i c h o l s o n ，g 。m ，l i t t l e ，m j ，t y l e r ，m ，n a r a h a s h i ，t t o x i c o n 1 9 9 6 ； 3 4 ( 1 l 一1 2 ) ：1 4 4 3 5 3 1 5 s k i n n e r ，w s ，a d a m s ，m e ，q u i s t a d ，x e ta 1 ，b i 0 1 c h e m 19 8 9 ；2 6 4 ：2 1 5 0 16 a d m a s ，m e ，b i n o k a s ，v p ，h a s e w a g e ，l ，v e n e v a ，v j ， ，4 第一章 前言一蜘蛛多肽毒素的研究新进展 b i 0 1 c h e m 1 9 9 0 ；2 6 5 ：8 6 1 8 6 7 17 e r t e l ，e a ，w n r e n ，v j ，a d a l l l s ，m e ，e ta 1 ，b i o e h e m s t r y 1 9 9 4 ；3 3 ：5 0 9 8 5 1 0 8 18 m i n t z ，i m ，v e n e m a ，v ，j ，s w