DNA分析技术在法医物证学上的应用.ppt

DNA分析技术在法医物证学上的应用,法医物证学内容,亲子关系鉴定个体识别,亲子关系鉴定,亲权纠纷（离婚案）移民案强奸致孕案拐卖丢失儿童案（医院中）婴儿错抱案（计划生育中）超生与否的鉴定,个体识别,凶杀案强奸案碎尸案石蜡包埋组织块调错案,法医物证学鉴定方法,血清学方法检验红细胞血型、白细胞血型、红细胞酶型、血清型DNA检验技术DNA指纹技术、PCR扩增技术,血清学方法的局限性,检材需要量大，且对时限要求较高（HLA分型要求采血后16-24小时内必须检验）不适用于陈旧、微量检材鉴别能力有限，不宜用于同一认定,只能否定,DNA检验,DNA,核DNA线粒体DNA,核DNA与线粒体DNA,mtDNA结构,D-环区（displacementloop),HV1,HV2,在线粒体DNA基因组中占5-7%,长约1100bp,HV1:29-408bpHV2:15996-16401bp,mtDNA,细胞,细胞核,核DNA,DNA多态性,序列多态性(mtDNA、DQ、PM）片段长度多态性（VNTR、STR）,片段长度多态性,VNTR位点（小卫星）重复单位17-170bpSTR位点（微卫星）重复单位2-7bp长度相差1个重复单位就构成一个等位基因,重复序列(在人类基因组所占比例为20-30%),散在重复序列:单拷贝DNA序列散布于基因组中在人类基因组中占10%,串联重复序列:多个特定序列首尾相连而成(卫星DNA)在人类基因组中占15-20%,倒位重复序列,5,6,可变串联重复数目,4,1,2,3,DNA多态性检测方法,DNA多态性检测方法RFLP（DNA指纹技术）（VNTR位点）PCRPCR产物序列多态性检测（DQ、PM）PCR产物长度多态性检测（VNTR、STR）,DNA检测方法比较,RFLP信息量大费时（12周）费力50ngDNADNA不能降解,PCR快速省力30,000个每10kb存在一个STR位点扩增片段为100-400bp,重复单元的长度,Dinucleotides:,Trinucleotides:,Tetranucleotides:,Pentanucleotides:,法医学上使用四核苷酸重复序列,二、三核苷酸重复序列会出现非特异性PCR产物三核苷酸重复序列与疾病有关四核苷酸重复序列位点比二、三核苷酸重复序列的等位基因更容易彼此区分,TH01位点,(AATG)5-11,等位基因:,*AmpFlSTR,13核心STR位点,FGAVWATH01TPOXCSFD3S1358D5S818D7S820D8S1179D13S317D16S539D18S51D21S11,STR位点检测步骤,检材DNA的提取,STR位点复合扩增,对扩增产物进行电泳分析，用GeneScan软件扫描,通过Genotyper软件分析扩增产物的基因型,D18S51D21S11D8S1179Amelogenin,13个STR位点复合扩增体系,AmpFlSTRProfilerPlus,FGAvWAD3S1358,D7S820D13S317D5S818,AmpFlSTRCOfiler,STR位点检测结果的存档,STR位点识别概率(PI),n=200,U.S.Caucasian,AfricanAmerican,n=195,ProfilerPlus,1/96billion,1/68billion,COfiler,1/840,000,1/3.2million,ProbabilityofIdentity1/1014,PCR技术在法医学上的应用（检材类型）,血液、血痕、肌肉、毛发、羊水、精液、精斑、混合斑、骨骼、唾液斑、牙齿、石蜡包埋组织块、尿液,PCR技术在法医学上的应用（案件类型）,刑事案件的鉴定（凶杀案、强奸案、拐卖儿童案、碎尸案、抢劫案、盗窃案）民事案件的鉴定（亲权纠纷、移民案、婴儿错抱案、石蜡包埋组织块调错案、超生与否的鉴定）其它：骨髓移植成功与否的鉴定,强奸致孕案（血痕检材),强奸致孕案（血液、羊水检材),受害人(孕妇)胎儿羊水嫌疑人(父?)D3S135816，1616，1616，17VWA17，1816，1716，16FGA20，2423，2419，23D8S117914，1413，1413，16D21S1128，3029.2,3029.2，29.2D18S5117，2113，1712，13D5S81810，1010，119，11D13S3178，118，99，10D7S82012，128，128，10D16S5399，1210，1210，11THO19，96，96，8TPOX9，118，98，8CSF1PO11，1212，1310，13,强奸案（混合斑检材),凶杀案,水果刀上的血迹嫌疑人血液D3S135814，1714，17VWA14，1814，18FGA20，2220，22D8S117913，1613，16D21S1128,3228,32D18S5116，1916，19D5S81811，1211，12D13S3178，118，11D7S82012，1212，12D16S53911，1311，13THO16，86，8TPOX8，118，11CSF1PO9，109，10（偶合率小于10-9）,碎尸案,位点头颅失踪者之父失踪者之子失踪者之兄失踪者之姐D3S135816，1715，1615，1715，1715，15VWA15，1814，1815，1814，1616，18FGA21，2625，2623，2624，2624，25D8S117914，1511，1414，1411，1513，14D21S1129，32.229，2930，32.229，3029，30D18S5115，2213，1515，2213，1713，17D13S3179，108，910，129，109，10D7S8208，118，1211，118，118，12D16S5399，119，1011，1110，1110，11THO19，99，9.39，108，9.38，9TPOX8，98，88，98，98，8CSF1PO10，1210，1010，1010，1210，12,盗窃、拐卖婴儿案,儿子？父亲D3S135814，1715，16VWA14，1814，17FGA20，2423，23D8S117912，1413，15D21S1130,3130,32.2D18S5114，1416，19D5S81812，1311，11D13S3178，89，11D7S82010，1211，11D16S5399，1112，13THO16，99，9TPOX8，98，8CSF1PO12，129，10,婴儿错抱案,母亲孩子？父亲D3S135816，1716，1615，15VWA16，1818，1916，17FGA22，2419，2320，25D8S117912，1412，1411，13D21S1129,31.229,31.228，30D19S43314，1513，1314，15.2D18S5113，2219，2016，19D2S133820，2417，2019，19D7S8208，1110，128，10D16S5399，1110，129，13THO19，98，88，9TPOX8，118，811，11CSF1PO12，1211，1210，13,被烧尸体肌肉块鉴定,母亲肌肉块(儿子?)父亲D3S135815，1817，1816，17VWA16，1818，1817，18FGA22，2522，2323，26D8S117912，1210，1210，10D21S1130,31.230,33.230,33.2D18S5114，1916，1913，16D5S81810，1210，1212，12D13S31710，128，108，8D7S8208，1211，1210，11D16S5399，109，1210，12THO17，97,9.36，9.3TPOX8，99,118，11CSF1PO12，1310，1210，10,离体牙的检验(个体识别案),牙1、牙2、牙3受害人D3S135816，1616，16VWA18，1918，19FGA22，2422，24D8S117912，1412，14D21S1129,31.229,31.2D18S5113，1313，13D5S81811，1211，12D13S3178，98，9D7S8208，88，8D16S53910，1010，10THO17，87，8TPOX8，118，11CSF1PO11，1211，12,双亲家庭的亲子鉴定,母亲儿子父亲D3S135815，1817，1817，20VWA14，1717，1814，17FGA22，2523，2523，25D8S117913，1614，1615，15D21S1130.2,31.228,31.230,31D18S5119，1919，2413，14D5S81810，1110，1012，12D13S31712，1212，128，12D7S82011，1212，1210，11D16S5399，1111，1210，13THO17，88，99，9.3TPOX9，1111，118，11CSF1PO12，1212，1210，12,单亲家庭的亲子鉴定(检测系统的非父排除率宜达到99.95%以上),女儿父亲D3S135814，1616，16VWA14，1717，17FGA22，2323，24D8S117915，1614，14D21S1128,3030,32D18S5114，1512，13D5S81811，119，10D13S3179，1110，11D7S8208，1110，12D16S53911，1310，11THO16，77，8TPOX9，118，11CSF1PO12，1211，13,DNA检验用于骨髓移植(若亲子鉴定的当事人曾接受过骨髓移植，取样时宜采用口腔拭子作为检材）,父亲儿子（移植前）儿子（移植后）D3S135815，1814，1815，18VWA17，1816，1817，18FGA23，2622，2323，26D8S117912，1212，1412，12D21S1129，3229,3029，32D18S5113，1614，1613，16D5S81811，1211，1111，12D13S3178，88，108，8D7S82011，128，1111，12D16S53911，1311，1211，13THO16，96，86，9TPOX8，88，118，8CSF1PO12，1311，1212，13,性别染色体上STR位点的检测（X-STR）,以下18个X-STR位点在法医学上有重要应用价值（认亲）DXS6807（GATA52B03）DXS9895（GATA124B04）DXS8378（GATA119E07）DXS9902（GATA175D03）DXS7132（GATA72E05）ARADXS6800（GATA31D10）DXS9898（GATA126G01）DXS6789（GATA31F01）DXS101DXS7424（btk5）DXS7133（GATA81B07）GATA172D05HPRTBDXS7423DXS8377DXS11001DXS981,性别染色体上STR位点的检测（Y-STR）,应用价值广泛：强奸案中混合斑的鉴定认亲（祖孙、叔侄、兄弟等）Europeanloci:19,385I/II,389I,389II,390,391,392,393,YCAIIa/bAdditionalloci:426,A7.1,H4,388,437,438,439,447,448,Yfiler在同胞兄弟关系和强奸案鉴定中的应用,Y-STR检测的意义,Y-STR：呈父系遗传特征适合于：同胞关系鉴定父-子单亲鉴定祖孙关系鉴定叔侄关系鉴定混合斑中男性组份的鉴定,Y-STR复合扩增体系,Yfiler各基因座特征,五核苷酸重复序列,六核苷酸重复序列,四核苷酸重复序列,三核苷酸重复序列,家系调查结果（文献资料）*突变率：2.810-3,DYS458-16,单倍型（父）,DYS458-17,单倍型（子）,若仅发现一个基因座不吻合，不可作出排除结论。,Y-STR基因座遗传差异度(GD),GD=1-p2,（中国汉族）Y-PLEX5+Y-PLEX6：TGD=0.999996Yfiler：TGD=0.999999996,Y-STR基因座的法医学价值,混合斑检验父-子单亲鉴定同胞关系鉴定祖孙关系鉴定叔侄关系鉴定,案例,委托事由:同胞关系鉴定案情:当事人为两名男性(不同母亲所生)，一名为韩国国籍,一名为中国国籍,彼此以兄弟相称,无其他兄弟姐妹。现因移民需要，两人委托进行DNA检验,以证明两人为同父兄弟。,常染色体STR检测鉴定同胞关系的局限性相关文献报道,用Identifiler试剂盒对50对同胞和50对非同胞进行检测，计算累积的同胞关系指数（combinedsibshipindices,CSIs)。结果发现:两个同胞之间的CSIs值有的小至10以下，有的大至10亿以上。非同胞之间的CSIs值则为4.510-80.12。存在同胞关系的两个个体约在40%的基因座具有相同的基因型，约在10%的基因座具有完全不同的等位基因。两个无关个体约在6%的基因座具有相同的基因型，约在45%的基因座具有完全不同的等位基因。两名个体无论是否具有同胞关系，约在50%的基因座具有一个相同的等位基因。,本案例STR检测分析结果,本案例Y-STR检测结果,检测结果（FAM标记）,DYS456,DYS389,DYS390,DYS389,检测结果（VIC标记）,DYS458,DYS19,DYS385a/b,检测结果(NED标记),DYS393,DYS391,DYS439,DYS635,DYS392,检测结果（PET标记）,YGATAH4,DYS437,DYS438,DYS4