（应用化学专业论文）药用植物青刺尖和落新妇生物活性成分的研究.pdf

中文摘要 青刺尖( p r i n s e p i au t i l i sr o y l e ) ，为蔷薇科扁核木属( p r i n s e p i a ) 植物青刺 尖的干燥茎叶，为我国云南的多民族的常用药。其性微寒，味苦。攻一切疮毒痈 疽，有脓出头，无脓自消，散结核。本文对青刺尖叶的乙醇提取物进行有机化学 成分研究。实验采用多种现代分离技术( 包括快速层析法，凝胶色谱法和制各 h p l c ) 对青刺尖乙酸乙酯提取部位进行分离，从青刺尖中分离得到1 3 个化学单 体，通过1 h - n m r ，”c - n m r ，2 d - n m r ，高分辨质谱，单晶衍射等波谱解析方 法鉴定了化合物的结构，其中2 个为新的化合物，9 个化合物为首次分离。 落新妇l 4 s t i l b e c h i n e n s i s ( m a x i m ) f r a n c h e ts a v ，为虎耳草科落新妇属植 物，该植物根茎入药，具有清热解表，祛痰止咳，敛汗的功效。现代药理研究和 临床应用已经证明其具有抗肿瘤、镇痛的药理作用。其化学成分主要为三萜和黄 酮类。为寻找具有活性的化学单体，本文对落新妇根的石油醚、乙酸乙酯和正丁 醇提取部位进行有机化学成分研究，从落新妇中分离得到2 5 个化学单体，通过 各种有机波谱解析方法鉴定了其中1 9 个化合物的结构。其中8 个为新的化合物， 2 个化合物为首次分离。 本文对青刺尖乙酸乙酯提取物及部分单体化合物l - l l 进行了免疫抑制活性 试验，结果表明单体化合物3 8 具有较强的免疫抑制活性，其强度与地塞米松相 当。 落新妇抗肿瘤作用试验结果表明，落新妇石油醚提取物和正丁醇层提取物具 有较强的抗肿瘤活性( h e l a ) 。我们从落新妇分离并且鉴定的部分单体化合物中， 化合物1 4 对h e l a 细胞和l 9 2 9 细胞具有较高的抑制率。而其他化合物1 7 、2 2 、 2 3 、2 5 对h e l a 细胞只显示一定的生长抑制作用；化合物2 5 、2 7 对l 9 2 9 细胞显 示一定的生长抑制作用。 关键词：青刺尖；落新妇；半秸：三萜羧酸；免疫抑制；抗肿瘤 a b s t r a c t p r i 凇e d i nu t i l i sr o y l eh a sb e e nu s e di nf o i km e d i c i n et ot r e a tv a r i o u ss k i n d i s e a s e s ，r h e u m a t i s m , i n f l a m m a t i o n a n dl e p r o s yi nc h i n aa n di n d i a m a n y c o n s t i t u e n t sh a v eb e e nr e p o r t e d s u c ha sh y d r o c y a n i ca c i da n df a t t yo n b yr e p e a t e d c o l u m nc h r o m a t o g r a p h y ，i n c l u d i n gs i l i c ag e l ，s e p h a d e xl h - 2 0 ，t o y o p e a r lh w - 4 0 c a n d p r e p a r a t i v eh p l c ，t w on e we o m p o a n d s ( ( + ) - ( 欲，3 s ) - 2 - e h l o r c - 3 - h y d r o x y - 3 - m e t h y l 一，, - b u t y r o l a e t o n e ( 1 ) ，( 岭犯墨3 s ) - 2 - e b l o r o - 3 - h y d r o x y - 3 - m e t h y i - y - b u t y r o l a c t o n e ( 2 ) a n de l e v e nk n o w nc o m p o u n d s ( 3 - 1 3 ) w e r ei s o l a t e df r o mt h ee t o a c e x t r a c to f p u t i l i s ，t h e i rs l r a c t u r e sw e g e i d e n t i f i e db ym e a u so f1 h - n m r , ”c - n m r ， 2 d - n m re p e e t r aa n dx - r a y k n o w nc o m p o u n d s3 - 1 1w e r ei s o l a t e df r o mt h i sp l a n t f o rt h ef i r s tt i m e a s t i l b e c h i n e n s i s ( m a x i m ) f r a n c h e t s a v h a s b e e n u s e d f o r h e a d a c h e ，a r t h r a l g i a c h r o n i cb r o n c h i t i sa n ds t o m a c h a i g i ai nt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n e s i xf l a v o n o i d s a n df o u rt r i t e r p e n e sh a v eb e e ni s o l a t e df r o mt h i sp l a n t p h a r m a c o l o g i c a ls t u d i e s i n d i c a t e dt h a tt h ee x t r a c t so f a c h i n e n s i sh a da n t i n e o p l a s t i ca n di m m u n o p o t e n t i a t i n g a c t i v i t i e s b yr e p e a t e dc o l u m nc h r o m a t o g r a p h y ，i n c l u d i n gs i l i c ag e l ，t o y o p e a r l h w - 4 0 ca n dp r e p a r a t i v eh p l c ，t w e n t y - f i v ec o m p o u n d sw c l ei s o l a t e df r o mt h e e t o he x t r a c to fa c h i n e n s i s ，a n de i g h tn e wc o m p o u n d s1 5 - 1 9 ，2 2 - 2 5a n dt w of i r s t i s o l a t e dc o m p o u n d s2 6 ，2 7w c l ei d e n t i f i e db ym e a n bo f1 h - n m r , ”c - n m r ， 2 d - n m rs p e c t r aa n dx - r a y c o m p o u n d s3 - 6a n d7s h o w e ds i g n i f i c a n ti n h i b i t o r ye f f e c t so i ll y m p h o c y t e t r a n s f o r m a t i o n ，c o m p a r e dw i t ht h er e f e r e n c ec o m p o u n d ( d e x a m e t h a s o n e ) t h epe a n db u o he x t r a c t so fa c h i n e n s i sw a sr e v e a l e da n t i t u m o ra c t i v i t i e s ( h e i a ) c o m p o u n d1 4e x h i b i t e ds i g n i f i c a n tc y t o t o x i ca c t i v i t yt oh e l aa n dl 9 2 9c e l l l i n ei nv i t r o c o m p o u n d s1 7 ，2 2 ，2 3a n d2 5s h o w e dp o s i t i v e l ya c t i v i t yt oi n h i b i to n h e l ac e l lg r o w t h c o m p o u n d s2 5a n d2 7s h o w e dp o s i t i v e l ya c t i v i t yt oi n h i b i to nl 9 2 9 c e l lg r o w t h k e yw o r d s ：p r i n s e p i au t i l i s ，a s t i l b ec h i n e n s i s ，h e m i t e r p e n c ，t r i t e r i o e n e ， i m m u n o s u p p r e s s i v ea c t i v i t i e s ，c y t o t o x i ca c t i v i t i e s 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得鑫生态堂或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名：，嗣名， 签字日期：伽一6 年月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解鑫洼蠢堂有关保留、使用学位论文的规定。 特授权墨鲞盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权说明) 学位论文作者签名：蠢司只一 导师签名： 签字r 期：伽年占月，日签字日期：勿6 年占月同 第一章青刺尖化学成分及药理临床研究进展 1 1 概述 第一章青刺尖化学成分及药理临床研究进展 青刺尖( p r i n s e p i au t i l i sr o y l e ) ，为蔷薇科扁核木属( p r i n s e p i a ) 植 物青刺尖的干燥茎叶，始载于滇南本草，其日：“性微寒，味苦。攻一 切疮毒痈疽，有脓出头，无脓自消；散结核，嚼细用酒服”【l 】。青刺尖为 我国云南的多民族的常用药。本品“根、茎、叶、果：味苦，性微寒，无 毒。茎叶主治痈疽毒疮，风火牙痛，枪伤，骨折，蛇咬伤。根主治虚咳， 久咳，积食。风湿关节炎。过主治日淤多泪，消化不良”【2 3 】。本文对其 化学成分和药理作用临床应用研究加以综述。 1 2 植物来源 蔷薇科扁核木属( p r i n s e p i a ) 植物为常绿或落叶小灌木。本属植物在 我国共有三种，青刺尖( p r i n s e p i au t i l i sr o y l e ) 又名枪刺果、打油果( 曲 靖) 、鸡蛋果( 云南) 、阿那斯( 那西语) 等，产于云南、贵州、四川、西 藏等省，生于山坡、荒地、山谷或路旁等处，海拔1 0 0 0 2 5 6 0 米，巴基斯 坦、尼泊尔、不丹和印度北部也有分布；台湾扁核木( p r i n s e p i as c a n d e n s h a y a t a ) 形态与青刺尖基本相似，产于台湾；东北扁核木( p r i n s e p i as i n e n s i s o l i v ) ，又名扁胡子、东北槠核，主产于东北和朝鲜【4 】。 1 3 化学成分研究 虽然对药用植物青刺尖的民间应用已经有较长的历史，但至今仅有少 量的研究成果报道。现已从该植物分离鉴定了4 类化合物，为黄酮、木脂 素、甾族类、脂肪油类化合物。 第一章青刺尖化学成分及药理临床研究进展 1 3 1 黄酮类 黄酮类化学成分较少，至今仅从青刺尖的茎的有机溶剂提取物中分离 得到的黄酮类化合物5 1 。( f i g 1 - 2 ) 见图1 1 3 2 木脂素类 图卜1 左旋一表儿茶精 f i g 1 - 1l - e p i c a t e c h i nf r o mp u t h sr o y l e k i l i d h a r 青刺尖的茎的乙醇提取物中分离得到的木脂素类化合物拽司 ( f i g 1 - 2 ) 图1 - 2 青刺尖醇 f i g 1 - 2l i g n a n sf r o mp u t i l i sr o y l e 1 3 3 甾体及其苷类 1 9 8 2 年k i l i d h a r 从青刺尖的茎的乙醇提取物中分离鉴定了b - 谷甾醇及 b 谷甾醇p 一葡萄糖苷“( f i g 1 - 3 ) 。 第一章青刺尖化学成分及药理临床研究进展 凡- h - 图1 - 3 p 谷甾醇及p - 谷甾醇一p - 葡萄糖苷 f i g 1 - 3 s t e r o i d e sa n ds t e r o i d i a cg l y c o s i d e sf r o mpu t i l i sr o y l e 1 3 4 脂肪酸化合物 p u n t a m b e k a r 等运用g c m s 方法，从印度产青刺尖中鉴定了棕橱酸、硬 脂酸( s t e a r i ca c i d ) 、花生酸、油酸( o l e i ca c i d ) 、亚油酸( 1 i n o l i ca c i d ) 、 亚麻酸( 1 i n o l e n i ca c i d ) 等多种脂肪酸类化合物【7 , 8 , 9 , 1 0 各种脂肪酸的含 量见表l l 。 表1 1 青刺尖中脂肪酸的组成( ) t a b l e1 - 1f a t t ya c i d s c o m p o s i t i o mo f pu t i l i sr o y l e 1 3 5 其它化合物 p l o u v i e r 从青刺尖中分离得到氰化物【l l ，12 1 ，l u t h r a 等从青刺尖中分离得 到多肽和氨基酸类化合物。 1 4 药理研究 青刺尖( p r i n s e p i au t i l i sr o y l e ) 改善细胞新陈代谢、增强机体免疫、 等成分是优质的保健食品。 具有调节人体血脂、促进血管软化、 延缓衰老的功能。青刺尖中脂肪酸类 第一章青刺尖化学成分及药理临床研究进展 1 4 1 抗缺氧作用 1 4 1 1 青刺尖种籽油对小鼠常压抗缺氧时间的影响 张晓鹏等对青刺尖进行了抗氧化作用研究。昆明鼠连续灌胃青刺尖种 籽油3 0 d 后，分别测定各小鼠的常压抗缺氧时间。结果表明0 3 3 g ( k g b w ) j 组小鼠的常压抗缺氧时间( 2 6 8m i n ) 与对照组( 2 2 8m i n ) 比较有显著差异( p o 0 5 ) “1 。 1 4 1 2 青刺尖种籽油对小鼠n a n 0 2 中毒存活时间的影响 连续灌胃青刺尖种籽油3 0 d 后，各组小鼠的n a n 0 2 中毒存活时间与 对照组比较均有不同程度的延长，其中o 6 7 和1 0 g ( k g b w ) 4 9 l d , 鼠的 n a n 0 2 中毒存活时间( 1 5 5 和1 5 7m i n ) 与对照组( 1 3 3r a i n ) 比较有显著 差异( p o 0 5 ) 。 1 4 1 3 青刺尖种籽油对小鼠急性脑缺血性抗缺氧时间的影响 连续灌胃青刺尖种籽油3 0 d 后，各组小鼠的急性脑缺血性抗缺氧时 间与对照组比较均有不同程度的延长，其中o 6 7 7 r 1 1 0 g ( k g b w ) 。组小鼠 的急性脑缺血性抗缺氧时间( 3 2 5 和3 2 1m i n ) 与对照组( 2 8 4 m i n ) 比较 有显著差异( p 0 0 5 ) 。 1 4 2 抗氧化作用 张晓鹏等对青刺尖进行了抗氧化作用的研究。研究结果表明青刺尖复 合对照组( 8 1 6 1 9 9 ) 大鼠血清m d a 水平略高于阴性对照组( 7 9 1 3 5 2 ) 外，其余各组均略低于阴性对照组，但统计学检验各组之间无显著性差异。 低( 2 2 9 1 8 1 6 9 0 ) 、中( 2 6 7 3 7 2 0 7 4 ) 、高( 2 6 9 4 6 2 0 3 9 ) 剂量组 及复合剂量组( 2 7 8 0 6 2 7 5 1 ) 和复合对照组( 2 5 7 7 7 4 9 2 3 ) 的血清s o d 含量显著高于阳性对照组( 1 8 8 6 8 - 4 - 3 2 2 9 ) 。青刺果油中、高剂量组及复 合剂量组显著高于阴性对照组“5 ”1 。青刺尖具有较好的抗氧化活性。 1 4 3 抑菌作用 朱正良等对青刺尖的水提取液做了抑菌实验”，青刺尖水提取原液 第一章青刺尖化学成分及药理临床研究进展 对七种试验菌大多具有抑制作用。其中对细菌( 尤其是大肠杆菌和金黄色 葡萄球菌) 的抑菌效力比对酵母、霉菌的更为显著；对青霉及根霉的抑制 作用相对较弱( 其中，金钱草提取原液对青霉无明显抑制作用，而金银花 提取原液则对青霉及根霉都无明显的抑制作用) 。青刺果提取液对大肠杆 菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度( m i c ) 为3 1 2 5 m g ，m l ，对枯草芽孢杆 菌的最低抑菌浓度( m i c ) 为6 2 5 m g m l ，对变形杆菌、酿酒酵母、青霉和 根霉菌的最低抑菌浓度( m i c ) 为1 2 5 m g m l ；青刺尖提取原液经8 0 ( 2 、1 0 0 水浴处理后仍能保持原有的抗菌效力，仅在1 2 1 高温湿热处理1 5 分钟 后，其抗菌效力才有所减弱。 1 5 临床应用 青刺尖的临床应用起步较晚，民间应用较多。青刺尖油被当地人视为 “神油”，除食用外，自古以来是用来搽脸防晒防冻外用药品，还可以治 疗关节疼痛、烧伤、烫伤，因其量少，历来被视为馈赠亲友的珍品。近年 对青刺尖的开发利用较多，成都瑞祥生物技术有限公司在2 0 0 2 年开发了青 娜油软胶囊，具有调节人体血脂、促进血管软化、改善细胞新陈代谢、增 强机体免疫，延缓衰老的功能，对冠心病、高血压、高血脂症、更年期综 合症、老年性痴呆等病症有着明显的帮助。 1 6 展望 以往的研究表明，青刺尖的生物活性化学成分次生代谢产物主要是脂肪 酸、木脂素、黄酮类、甾体及其皂苷类化合物。该植物的药理作用表现在 抗缺氧、抗氧化、抑菌等方面，并且临床应用取得了一定的治疗效果。由 于青刺尖仅分布在印度北部和中用滇西北少数地域，虽然在当地民间应用 历史悠久，但尚未有研究小组对其进行系统的化学成分和现代药理作用研 究，更没有有效成分的分子细胞药理学的现代研究报道，说明了该药用植 物还有很大的研究开发潜力，有必要进一步研究其化学成分和药理作用， 应加强其化学成分的分离鉴定和单体成分的深入药理研究，为研制出疗效 确切，副作用小和能广泛应用于临床的中药新药奠定基础。 第二章青刺尖有效成分的提取分离 第二章青刺尖化学成分的提取分离 2 1 实验材料 青刺尖( p r i n s e p i au t i l i s r o y l e ) 的叶子原料药材采自云南昆明，经昆 明植物所刘锡葵研究员鉴定。标本( d 2 0 0 2 0 8 0 4 ) 被保存在天津医科大学 药学院。 2 2 不同极性部位的制备 将1 3k g 干燥的药材青刺尖的叶子粉碎，用9 5 的乙醇( 1 5 l ) 加热 回流提取3 次，每次6 小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，得提取 物2 1 0 9 。 在i o l 的分液漏斗中将青刺尖提取物( 2 1 0 9 ) 加水混悬后，分别用石 油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得石油醚提取物3 7 9 ，乙酸乙酯提取 物2 8 9 ，正丁醇提取物5 7 9 。青刺尖的提取过程见图2 - 1 。 青辩尖9 5 乙醇提取物( 2 1 0 0 i 村石油醚 厂一1 石油醚层水层 i 减压浓缩i 乙酸乙醑萃取 石油2 8 醚e x t rg il i l 减压浓缩 l 乙酸乙酯e x t 2 8 9 i 正丁醇萃取 厂 正1 醇层水层 i l 减压浓缩 正- j 醇e x t 5 7 9 图2 - 1 青刺尖的提取过程 f i g 2 - 1 e x t r a c t i o no f pu t i l i s 6 第二章青刺尖有效成分的提取分离 2 3 乙酸乙酯提取物的分离 青刺尖乙酸乙酯提取物( 1 6 9 ) ，以硅胶柱层析( 1 0 0 0 9 ，1 0 0 - 2 0 0 目) 分离， 用p e ：e t o a c f 6 ：i ，4 ：i ，2 ：1 ，1 ：1 ，1 ：2 ，1 ：3 ，1 0 0 e t o a c ，e t o a c ( 5 m e o h ) ， e t o a cf 1 0 m e o h ) ，e t o a c ( 2 0 m e o h ) 和m e o h 梯度洗脱，通过t l c 合并类似 组分，得到p u q 2 7 0 1 - 2 7 1 6 。 p u q 2 7 0 5 - 0 7 ( 4 3 9 ) ，p u q 2 7 l o ( 1 9 9 ) ，p u q 2 7 1 1 - 1 2 ( 2 3 9 ) 再经过硅 胶常压柱，快速层析，凝胶渗透柱层析以及制备高效液相h p l c 分离纯化，得 到化合物p u q 3 0 2 0 ( i ，5 0 2 m g ) ：p u q 3 0 2 1 ( 2 ，1 8 6 r a g ) ：p u q 4 9 0 5 ( 3 ，5 0 2 m g ) ； p u q 4 9 0 4 ( 4 ，6 g m g ) ；p u q 6 3 0 4 ( 5 ，3 8 m g ) ；p u q 6 3 0 3 ( 6 ，4 0 1 m g ) ；p u q 4 9 0 7 ( 7 ， 1 3 4 m g ) ；p u q 6 2 0 2 ( 8 ，1 0 1 m g ) ：p u q 5 7 0 9 ( 9 ，8 1 i n g ) ；p u q 5 4 0 8 ( 1 0 ，2 8 2 m g ) ； p u q 6 4 0 2 ( 1 1 ，4 2 r a g ) ；p u q 5 1 0 2 ( 1 2 ，8 0 1 i n g ) 。分离纯化过程详见图2 2 。 p u qe i o a cl a y e r p u q 5 5 0 3 e u q 5 p u q 3 0 0 i - 0 8 p u q 3 0 0 9 - 1 0p u q 3 0 1 p u q 3 1 0 1p u q 31 0 2 厂 p u q 4 9 0 4p u q 4 9 0 5 6 9 m g ( 4 ) 5 02 r a g ( 3 ) d 5 0 4 l g 3 1 6 p u q 5 1 0 7p u q 5 1 0 8 l ， p u q 6 2 0 2 1 0 i r a g ( s ) p u q 6 4 0 2 4 2 m g ( 1 1 ) 。1 寥 p u q 3 0 2 0p u q 3 0 2 1p u q 6 3 0 3p u q 6 3 0 4 p u q 5 4 0 8 5 0 2 r a g ( | )1 8 6 r a g ( 2 ) 柏i m g ( 6 ) 3 s m g ( 5 )2 8 2 m g ( 1 0 ) 图2 - 2 化合物1 1 2 的分离 f i g 2 - 2 i s o l a t i o no fc o m p o u n d s1 - 1 2 引 l o 螂liqi p 一 书几 第二章青刺尖有效成分的提取分离 ：硅胶( 1 0 0 2 0 0 目) 柱色谱：石油醚乙酸乙酯3 ：l ，1 ：1 ，1 ：2 ， 1 ：4 ，1 0 0 乙酸乙酯，乙酸乙酯甲醇9 5 ：5 ，9 ：l ，8 ：2 ，1 0 0 甲醇 b ：中压硅胶( 3 0 0 4 0 0 目) 柱色谱：氯仿甲醇9 7 ：3 ，9 5 ：5 ，9 ：l c ：t o y o p e a r lh w 4 0 柱色谱：氯仿甲醇2 ：1 d ：制各h p l c ，g p c 柱( s h o k o ) ：甲醇 e ：制备h p l c ，o d s - a 柱( y m c ) ：甲醇 f ：制备h p l c ，o d s a 柱( y m c ) ：甲醇- 水6 ：4 g ：制备h p l c ，o d s a 柱( y m c ) ：甲醇水8 ：2 h ：中压硅胶( 3 0 0 4 0 0 目) 柱色谱：氯仿甲醇9 7 ：3 ，9 3 ：7 ，8 5 ：1 5 i ：制备h p l c ，o d s a 柱( y m c ) ：甲醇- 水9 ：l j ：制备p t l c ，硅胶g f z “：氯仿，甲醇9 ：l s 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 从青刺尖的乙酸乙酯提取物中共分得1 3 个化合物，其中2 个为新化 合物( 文献未见报道) ，9 个为首次从该属植物中分离得到。 新化合物包括：( + ) ( 2 r ，3 s ) 2 氯3 羟基3 - 甲基r - 丁酸内酯 【 ( + ) - ( 2 r ，3 s ) 2 - c h l o r o - 3 - h y d r o x y - 3 - m c t h y l - r - b u t y r o l a c t o n e ， 1 】， ( + ) - ( 2 墨3 回2 氯3 一羟基- 3 一甲基r o 丁酸内酯【( + ) 一( 2 s ，a s ) - 2 一c h l o r o - 3 - h y d r o x y - 3 - m e t h y l r - b u t y r o l a c t o n e ，2 】。 已知化合物包括：乌苏酸( u r s o l i ca c i d ，3 ) ，齐墩果酸( o l e a n o l i ca c i d ， 4 ) ，2 c t 羟基乌苏酸( c o r o s o l i ca c i d ，s ) ，2 0 t - 羟基齐墩果酸( m a s l i n i ca c i d ， 6 ) ，坡模酸( p o m o l i ca c i d ，7 ) ，委陵菜酸( t o r m e n t i ca c i d ，8 ) ，2 ，3 断1 9 c t 羟基1 2 烯一乌苏2 ，3 ，2 8 三羧酸( c e c r o p i a c i ca c i d ，9 ) ，3 - 0 t r a n s 一对羟基 桂皮酰基委陵菜酸( 3 - o o t r a n s - p c o u m a r o y l t o r m e n t i ca c i d ，1 0 ) ，3 - d c 括 对羟基桂皮酰基委陵菜酸( 3 - 0 c i s - p c o u m a r o y l t o r m e n t i ca c i d ，1 1 ) ，b 葡 谷甾醇( b s i t o s t e r o l ，1 2 ) ，3 b d 葡萄糖谷甾醇甙( d a u c o s t e r o l ，1 3 ) 。化 合物3 1 l 为首次从青刺尖中得到分离鉴定。 化合物1 1 3 结构如下： + l u q 加如l ，p u o3 啦l 国 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 p u q5 7 眇( 9 ) p - c o u m a r o y l ： 一c o m 0 4 - c # c h ： p u q5 4 0 8 ( 1 0 ) r = t r a n s - p - c o u m a r o y l 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 p u q6 4 0 2 1 2 ) 为新化合物 3 1 化合物1 的结构解析 ，u q 5 1 们( 1 封 化合物1 命名为( + ) ( 2 r ，a s ) 2 氯3 羟基一3 - 甲基r - 丁酸内酯 【( + ) ( 2 r ，3 s ) 一2 c h l o r o 3 一h y d r o x y 3 - m e t h y l 一，一b u t y r o l a c t o n e 】，为无色柱状晶 体，m p8 9 9 1 ，【a 】芋+ 2 6 9 ( c1 7 ，m e o h ) 。根据h r e i m s 数据m z ：1 5 0 0 0 6 5 ( c a l c d 1 5 0 0 0 8 4 ) 【m 】+ 确定分子式为c 5 h 7 c 1 0 3 。在底分辨质谱e l m s 中有【m + 2 】+ 的信号并且其强度为 m 】+ 的l 3 ，结合高分辨确定含有氯原子。另外 在底分辨质谱e i m s 中有 m h 2 0 】十的信号，即出现了脱水峰。从红外光谱 可以看到3 4 9 8c m 。处出现羟基的吸收峰( o h ) ，1 7 9 1c m 。处出现酯基中的 羰基吸收峰( r - l a c t o n er i n g ) 。在紫外光谱中没有显示明显的吸收峰。 化合物1 的核磁共振氢谱数据( 图3 - i ) 表明分子中存在一个甲基 c h 3 【6 h1 4 7 ( s ) 】，一个氧化的亚甲基o - c h 2 【6 h4 1 7 ( d ，l h ，j = 9 5 h z ) ， 4 2 3 ( d ，l h ，= 9 5h z ) 和一个吸电子基团取代的次甲基 6 h4 2 1 ( s ) 】。 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 i 女；l ? 缈 一j i ，j 图3 - 1 化合物1 的1 h n m r 波谱图 f i g 3 - l 1 h - n m r s p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n d1 化合物1 的核磁共振碳全去耦谱数据( 图3 2 ) 和d e p t1 3 5 。( 图3 3 ) 谱表明结构中存在一个甲基( 5 c2 0 4 ) ，一个氧化的亚甲基( 6 c7 7 8 ) ， 个吸电子基团取代次甲基碳( 5 c6 0 5 ) ，一个氧化的季碳( 8 c7 7 2 ) 和一个 酯羰基碳( 6 c1 7 3 8 ) 。从以上这些波谱数据可以确定化合物l 的结构是半 萜的羟基内酯为骨架的化合物，这类骨架结构与文献报道的半萜( 3 ，甲基 产丁酸内酯) 的骨架一致“”。我们测定了二维核磁共振波谱来确定化合物 l 的结构。 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 图3 - 2 化合物1 的”c n m r 波谱图 f i g 3 - 21 3 c - n m rs p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n dl 为了进一步鉴定化合物i 的结构，我们测定了2 d n m r 波谱。在1 3 c j h c o s y 谱图中，可以得到以下碳氢相关： 芏 丫i l ii 一乎 c i - - c | 6 0 5 - -一侮 i 7 7 鼻 i 6 0 5 i 7 7 2 h il c h 3 ( 2 0 4 ) 一o 1 7 3 8 图3 - 3 化合物1 的1 3 c _ l hc o s y 波谱数据 f i g 3 - 3 1 3 c _ lhc o s ys p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n d1 1 二一j 。 1 图3 - 4 化合物1 的”c 1 hc o s y 波谱图 f i g 3 4 ”c 。hc o s ys p e c t r a ld a t ao f c o m p o u n d1 在化合物1 的h m b c 谱中( 图2 - 4 ) ，氢信号( 6 h1 4 7 ，5 - h ) 与碳【5 c 7 7 8 ( c 4 ) ，7 7 2 ( c 3 ) ，6 0 5 ( c 一2 ) 】相关；氢信号( 8 h4 2 1 ，2 - h ) 与【5 c1 7 3 8 ( c 1 ) ，7 7 2 ( c - 3 ) 】相关；氢信号( 6 h4 1 7 ，4 2 3 ，4 - h ) 与 碳【6 c1 7 3 8 ( c 一1 ) ，7 7 2 ( c 一3 ) ，6 0 5 ( c 一2 ) 】相关。 1 3 o-一 ：，：=：_|l一=ii：-iir_；-一，；一_一：l-；- 嚷誊藿委豢专嚣荤熹挚了葶秀臻麓一 ，：f：#i：r蕃一l=一著一llll#乎，1iif，：，；。毛孝菩 j 月：一w：h e 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 一、 h c h m b c 图3 - 5 化合物1 的h m b c 波谱数据 f i g 3 - 5 h m b c s p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n d1 - ： 一一h 一 图3 - 6 化合物1 的h m b c 波谱图 f i g 3 - 6 h m b cs p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n dl 由上述的信息可以推测化合物1 为2 氯3 羟基3 甲基p 丁酸内酯。 为了确定化合物l 绝对构象，对化合物1 进行了x 射线单晶衍射实验， 由此可以阐明氯原子和羟基的绝对立体构型为2 月和3 j 构型。 一i。 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 图3 7 化合物1 的x 射线单晶衍射结构 f i g 3 - 7 t h eo r t e pd r a w i n go fc o m p o u n d1 综合以上核磁谱数据和x 射线单晶衍射实验，化合物1 可以鉴定为下 图( f i g 3 - 8 ) 所示的化学结构，命名为( + ) ( 2 r ，3 s ) 一2 氧一3 - 羟基一3 - 甲基- ， 丁酸内酯【( + ) - ( 2 r ，3 s ) 一2 一e h l o r o - 3 - h y d r o x y 3 m e t h y l - r b u t y r o l a c t o n e 。 图3 - 8 化合物1 结构图 f i g 3 - 8 s t r u c 仃u eo f c o m p o u n d1 3 2 化合物2 的结构解析 化合物2 命名为( + ) ( 2 s , 3 回2 氯3 羟基一3 甲基，- 丁酸内酯 ( + ) ( 2 s , 3 研2 c h l o r o 3 h y d r o x y 3 m e t h y l 一，一b u t y r o l a c t o n e 】，为无色粘稠液 体，【c 】分+ 3 9 1 ( c1 7 ，m e o h ) 。根据h r e i m s 数据m z ：1 5 0 0 0 6 5 ( c a l e d 1 5 0 0 0 8 4 ) 【m 】十确定分子式为c5 h 7 c 1 0 3 。在底分辨质谱e l m s 中有【m + 2 】+ 的信号并且其强度为【m 】+ 的3 3 ，结合高分辨确定含有氯原子。另外在底 分辨质谱e l m s 中有【m h 2 0 】+ 的信号，即出现了脱水峰。从红外光谱可以 看到3 4 9 8c m 4 处出现羟基的吸收峰( o h ) ，1 7 9 1c m 。处出现酯基中的羰基 吸收峰( r - l a e t o n er i n g ) 。在紫外光谱中没有显示明显的吸收峰。 化合物2 的核磁共振氢谱数据( 图2 1 ) 表明分子中存在一个甲基 c h 3 6 h1 4 9 ( s ) 】，一个氧化的亚甲基o c h 2 【6 h4 1 8 ( d ，1 h ，j = 9 9 h z ) ， 4 4 2 ( d ，1 h ，= 9 9 h z ) 】和一个吸电子基团取代的次甲基【6 h4 4 2 ( s ) 】。 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 。，薯；弧 ：r ； i+ 。一一 l 一 强 图3 - 9 化合物2 的1 h n m r 波谱图 f i g 3 - 9 1 h - n m rs p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n d2 化合物2 的核磁共振碳谱数据( 图2 2 ) 表明结构中存在一个甲基( 5 c 2 2 2 ) ，一个氧化的亚甲基( 6 c7 5 8 ) ，个吸电子基团取代次甲基碳( f i e 6 2 o ) ，一个氧化的季碳( 6 c7 5 0 ) 和一个酯羰基碳( 6 c1 7 0 5 ) 。从以上信 息可以确定化合物2 的结构是半萜的羟基酯为骨架的化合物，并且是化合 物1 的同分异构体，波谱数据比较见( 表3 - 1 ) 。 表3 - 11 h n m ra n d1 3 c - n m rs p e c t r a ld a t ao f1a n d2 t a b l e3 1 化合物1 与化合物2 的波谱数据比较 m 。吒- 卫鼍- 弋- 塑广一 。oiq 4 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 ! l z j 二! ! 叫z i 。 图3 1 0 化合物2 的”c n m r 波谱图 f i g 3 - 10 1 3 c - n m rs p e c i a ld a t ao fc o m p o u n d2 为了进一步鉴定化合物2 的结构，我们测定了2 d n m r 波谱。在化 合物2 的h m b c 谱中( 图2 4 ) ，氢信号( 8 u1 4 9 ，5 - h ) 与碳 8 c7 5 8 ( c 4 ) ，7 5 0 ( c 3 ) ，6 2 0 ( c 一2 ) 】相关；氢信号( 8 h4 4 2 ，2 - h ) 与 5 c 1 7 0 5 ( c 1 ) ，7 5 0 ( c 3 ) 】相关；氢信号( 8 h4 1 8 ，4 4 2 ，4 h ) 与碳【5 c 1 7 0 5 ( c 1 ) 。7 5 0 ( c 3 ) ，6 2 0 ( c - 2 ) 1 相关。 ，、 h c h m b c 图3 1 1 化合物1 的h m b c 波谱数据 f i g 3 - l1 h m b c s p e c t r a ld a t ao fc o m p o u n d1 上述的信息可确定2 和1 为c 2 ，c 3 位的非对应异构体。3 位甲基氢 的化学位移变化不大【6 h1 4 7 ( s ) ，1 ；6 h1 4 9 ( s ) ，2 】，2 位氢的化学位移变 化较大( 6 h4 2 1 ，1 ；6 h4 4 2 ，2 ) ，既化合物2 在2 位的官能团构型发生 了转换，由2 r 转为2 s 。综合以上核磁谱数据因此推测化合物2 可以鉴定 为下图( f i g 3 1 2 ) 所示的化学结构，命名为( + ) ( 2 8 , 3 研一2 氯3 弪基3 甲 基- ，- 丁酸内酯【( + ) - ( 2 s ，3 s ) - 2 - c h l o r o - 3 - h y d r o x y - 3 一m e t h y l p b u t y r o l a c t o n e 】 第三章青刺尖中化学成分的结构解析与鉴定 图3 1 2 化合物2 结构图 f i g 3 - 1 2 s t r u c t r u eo f c o m p o u n d2 3 3 化合物3 的结构解析 化合物3 ( u r s o l i ea c i d ) 为白色无定型粉末，根据e s i m s 数据r e ，z ：4 5 5 【m h 】。确定分子式为c 3 0 h 4 s 0 3 。 化合物3 的核磁共振氢谱数据表明分子在低磁场区域存在7 个甲基，5 个甲基单峰 s ho 9 0 ( 3 h ，s ) ，1 0 3 ( 3 h ，s ) ，1 0 6 ( 3 h ，s ) ，1 2 4 ( 3 h ，s ) 1 2 5 ( 3 h ，s ) 】 和2 个裂分的甲基【5 ho 9 6 ( 3 h ，d ，j = 6 3h z ) ，1 0 1 ( 3 h ，d ，j = 6 3h z ) b 在 中低磁场区域存在1 个羟基取代的次甲基质子峰 6 h3 4 6 ( 1 h ，d d ，j = 5 9 ， l o 2h z ，3 a h ) 】：在高磁场区域存在1 个乌苏酸- 1 2 氢质子峰【6 h5 5 0 ( 1 h ，b r s 1 2 - h ) 。 化合物3 的核磁共振碳谱数据显示7 个甲基的碳( 6 c2 7 8 ，1 6