病原性球菌及检验 PPT专业课件.ppt

病原性球菌及检验,1,1.简述病原性球菌的概念及种类。2.熟悉常见病原性球菌的主要生物学特性、临床意义。3.说出葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的检验程序和检验方法。,学习目的与要求,2,对人有致病性的球菌主要引起化脓性炎症,又称化脓性球菌。主要包括有1、G+球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌。2、G-球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌等。,3,第一节葡萄球菌属(Staphylococcus),4,（一）形态与染色G+，球形，无鞭毛、无芽孢，呈葡萄串状排列。,一、生物学特性,5,（二）培养特性营养：要求不高，耐盐。液体：均匀浑浊生长普通琼脂平板：血液琼脂平板：,高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡橙黄色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落。,6,（三）生化反应活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。(如：葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，甘露醇）触酶（）（区别于链球菌属）,7,（四）抗原构造、蛋白抗原（）、多糖抗原金黄色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（检测磷壁酸有助于金葡菌感染诊断）凝固酶（）：甘油磷壁酸,8,（五）分类:个种及亚种、按色素分类：金、白、柠、按凝固酶分类：凝固酶阴性、凝固酶阳性葡萄球菌、按噬菌体分类：金葡菌分为5群26型4.据色素、生化反应分：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌,9,三种葡萄球菌的主要性状,10,（六）抵抗力无芽胞菌中最强，耐干燥，对石炭酸、升汞、龙胆紫敏感。易产生耐药性变异，如：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。MRSA常呈多重耐药，对青霉素、氧氟沙星及红霉素的敏感率分别为1.3%、3%及14%。,11,长期住院、反复使用各种广谱抗菌药物、烧伤或有伤口的病人及与MRSA定植或感染的病人接触都是造成院内MRSA流行的危险因素。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。MRSA定植或感染的人员及院内环境污染是引起院内流行的主要来源。,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,12,二、致病性和免疫性,(一)致病物质金黄色葡萄球菌产生多种侵袭性酶与外毒素。1血浆凝固酶（coagulase)：分：结合型凝固酶、游离型凝固酶。鉴别金黄色葡萄球菌的重要指标。,2葡萄球菌溶血素（staphylolysin）,13,3杀白细胞素（leukocidin）4肠毒素（enterotoxin）：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9个血清型）5表皮剥脱毒素（exfoliativetoxin）6.毒性休克综合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）,14,（二）所致疾病1侵袭性疾病：（1）皮肤软组织感染特点：病灶局限且脓汁粘稠,（2）内脏器官感染,（3）全身感染,（4）尿路感染,15,2毒素性疾病（1）食物中毒,（2）烫伤样皮肤综合征由表皮剥脱毒素引起。,（3）毒性休克综合征由TSST1引起,（4）假膜性肠炎,16,人类凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最为常见。CNS主要引起以下几种感染：泌尿系感染，细菌性心内膜炎，败血症等，其中大多为医院内感染。此外，心脏起搏器安装、置换人工心脏瓣膜、长期腹膜透析、静脉滴注等亦可造成凝固酶阴性葡萄球菌的感染。,3、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性,17,三、微生物学检验,（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法,18,三、微生物学检验,（一）标本采集根据病情采集标本种类：脓液、伤口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。注意：无菌操作，避免污染。,19,（二）葡萄球菌检验程序,脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液,脑脊液血液,粪便、呕吐物,直接涂片染色,增菌培养,分离培养（血平板）,分离培养（高盐甘露醇平板）,取可疑菌落,鉴定试验药敏试验,涂片染色血浆凝固酶耐热核酸酶其他鉴定试验,报告,初报,20,（三）检验方法,1、直接涂片适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等,初步报告：“查见革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌”或：“查见类似葡萄球菌的革兰阳性球菌”,21,2、分离培养50ml葡萄糖肉汤（增菌）,浑浊,无菌（7天）,报告：无菌生长,脑脊液、脓液、穿刺液、咽拭、尿液,血平板,血液标本5ml,粪便、呕吐物,高盐甘露醇平板,22,（三）检验方法,3、鉴定试验（1）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（2）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌（+）（3）耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌（+）（）肠毒素测定：金黄色葡萄球菌产生（5）SPA检测：金黄色葡萄球菌（6）凝固酶阳性和凝固酶阴性的葡萄球菌鉴定（7）API葡萄球菌鉴定试剂盒,23,（四）结果评价和报告,1、金黄色葡萄球菌：无论任何标本中分离到均应鉴定并报告临床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：从输液导管、人工植入组织中分离到，应视为致病菌。3、尿培养计数：103-104为阳性菌尿标准。4、其他凝固酶阴性葡萄球菌：引起感染流行或治疗失败时，应鉴定到种。5、金黄色葡萄球菌（MRSA)：头孢菌素类抗生素体外药敏试验为敏感时，不应报告，因体内试验已证实MRSA对该类抗生素耐药。,24,第二节链球菌属(Streptococcus),25,一、链球菌,26,一、生物学特性,（一）形态与染色G+，球形或椭圆形，呈链状排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,27,一、生物学特性,（二）培养特性条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧菌，少数专性厌氧。液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。普通琼脂平板：不生长。血液琼脂平板：,28,（三）生化反应活泼分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。菊糖（-）胆汁溶菌试验（-）optochin敏感试验（-）触酶（-）（区别于葡萄球菌属）,（区别甲链与肺链）,29,（四）抗原构造、多糖抗原（C抗原）：群特异性。、蛋白抗原（M、T、R、S）型特异性，与致病有关的是M蛋白抗原。3、核蛋白抗原：无特异性。,30,多糖抗原,蛋白质抗原,核蛋白抗原,链球菌抗原构造模式图,荚膜,31,（五）分类40个种及亚种、按溶血情况分类：（1）甲型溶血性链球菌：菌落周围有12mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或溶血。为条件致病菌。（2）乙型溶血性链球菌：菌落周围形成一个24mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或溶血。又称溶血性链球菌。致病力强，引起多种疾病。（3）丙型链球菌：无溶血环，不致病,32,、按抗原结构分类：按C抗原分群：ABCD20群，对人致病的以A群为主。按M蛋白分型：如A群：100个型，B群：4型，C群：13个型。,（五）分类,33,（六）抵抗力不强，6030min杀死，对多种消毒剂敏感。乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。,34,二、致病性和免疫性,（一）致病物质1、链球菌溶血素（1）链球菌溶血素O(SLO)SLO抗体抗链球菌溶血素O试验：协助诊断风湿热（1:400)（2）链球菌溶血素S(SLS)：无抗原性。,2、致热外毒素（猩红热毒素/红疹毒素）3、M蛋白,35,4、透明质酸酶5、链激酶6、链道酶,36,（二）所致疾病主要由A群链球菌引起。1、化脓性感染：由皮肤伤口侵入，经呼吸道侵入，其他途径（如产褥热、蜂窝组织炎）特点：病灶界限不清,脓汁稀薄,2中毒性疾病：猩红热由产生致热外毒素的A族链球菌所致的急性呼吸道传染病。,37,3变态反应性疾病：风湿热急性肾小球肾炎,二、致病性和免疫性,4其他疾病：甲型（草绿色）链球菌：引起亚急性细菌性心内膜炎。,38,三、微生物学检验,（一）标本采集（二）检验程序（三）检验方法,39,（一）标本采集根据病情采集标本种类：脓液、鼻咽拭子、血液等风湿热查血清抗体,40,（二）链球菌的检验程序,痰、脓、穿刺液咽拭子等,脑脊液,血液,直接涂片染色,测抗原,分离培养,增菌培养(5%CO2葡萄糖肉汤),血平板（5%CO2）,可疑菌落,鉴定试验,初步报告,血清学鉴定（分群）,杆菌肽试验optochin胆汁溶菌试验其他鉴定敏感试验试验,41,（三）链球菌的检验方法,（1）直接镜检：（痰、脓、穿刺液、咽拭子等）初报：发现G+球菌，呈链状排列,42,（2）分离培养：血液、脑脊液肉汤增菌脓液、咽拭子等血平板分离,43,（3）鉴定链球菌的主要试验：根据形态、菌落、溶血情况进行：杆菌肽敏感试验：A群敏感(d10mm)Optochin敏感试验：肺炎链球菌d18mm，d400为+,45,二、肺炎链球菌(S.pneumoniae),属链球菌科，链球菌属。广泛分布于自然界，主要寄生于人类上呼吸道，多数不致病。,46,一、生物学特性,（一）形态与染色G+，矛头状，成双（或短链）排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。,47,（二）培养特性条件：营养要求较高，兼性厌氧菌，5-10%C02生长最好。产生自溶酶。液体：培养24h呈均匀混浊，后期因产生自溶而变得澄清。普通琼脂平板：不生长。血液琼脂平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,48,（三）生化反应活泼分解多种糖类。菊糖（多数+）胆汁溶菌试验（+）Optochin试验(+),区别甲链与肺链,49,（四）抗原构造、荚膜多糖抗原：据此将肺炎链球菌分85型，对人致病的有20多型。-型引起大叶性肺炎。、菌体多糖抗原：可与CRP反应，产生沉淀。3、M蛋白抗原：型特异性。,50,（五）抵抗力较弱，加热56，20min即死亡。对一般消毒剂敏感，对干燥抵抗力较强。,荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消失。,（六）变异性,51,二、致病性和免疫性,（一）致病物质1、荚膜：肺炎球菌的致病力，主要是荚膜的抗吞噬作用。2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎链球菌溶素O等溶血毒素“O”：自溶后释放，能溶解人和动物的红细胞，高浓度对动物有坏死及致死作用。,52,（二）所致疾病存在于正常人上呼吸道，为条件致病菌，仅在人体抵抗力下降时才引起疾病。可引起：大叶性肺炎，胸膜炎，脓胸，慢性支气管炎，中耳炎，脑膜炎，败血症等。,53,三、微生物学检验,（一）标本采集痰液，脓液，血液，脑脊液等。（二）检验程序（三）检验方法,54,检验程序,痰、脓,脑脊液,血液,直接涂片分离培养,革兰染色、美兰染色荚膜肿胀试验,增菌培养（葡萄糖肉汤、硫酸镁肉汤）,（血平板）,挑选可疑菌落,纯培养,初报,兔血清肉汤,小白鼠毒力试验,涂片荚膜肿胀试验,胆汁溶菌试验菊糖发酵Optochin试验,药敏试验,报告,55,检验方法,1、直接镜检适用于：痰、脓、脑脊液标本。报告：“找到肺炎链球菌”2、分离培养硫酸镁肉汤：均匀混浊生长，有绿色荧光。血平板：灰白色，圆形，扁平，较小，周围有草绿色溶血环（溶血）,56,3、鉴定试验（1）荚膜肿胀试验（2）胆汁溶菌试验：+（3）Optochin试验：+（4）菊糖发酵试验：+（5）小鼠毒力试验：有毒力的菌株，接种后12-36h，死亡。,57,胆汁溶菌试验阳性：,加入胆汁或10%去氧胆酸钠，37，5-10min，激活本菌的自溶酶，出现溶菌现象。,58,Optochin敏感试验阳性：取肉汤培养液均匀涂于血平板上用optochin纸片贴于接种区中央（或分区划线法，纸片贴于1-2区），35需氧培养过夜，抑菌圈18mm。,59,Optochintest,60,肺炎链球菌的主要鉴定依据,1、镜下形态：革兰阳性球菌，矛头状成双排列，平端相对，尖端向外；2、血平板菌落特点：直径0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些菌株为粘液状），扁平，周围有草绿色溶血环。培养或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈脐窝状。3、生化鉴定：Optochin试验+，胆汁溶菌试验+。,61,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的鉴别,形态菌落血清胆汁菊糖Opto-小鼠肉汤溶菌chin毒力试验,肺链甲链,矛头状，稍大，湿润浑浊+成双，扁平，有荚膜脐窝状,圆形，较小，稍干，沉淀无荚膜圆，凸起,62,（四）结果评价和报告,乙型溶血性链球菌和肺炎链球菌为毒力强的致病菌，无论从任何临床标本中分离出均应报告临床。及时鉴定和报告咽部标本中分离出的化脓性链球菌，有利于早期治疗，以减少并发症（如风湿热，肾小球肾炎）的产生。草绿色链球菌在重症感染时，应鉴定到种。,63,第三节肠球菌属,是肠道中的正常菌群导致医院内感染：如尿路感染、腹部和盆腔感染、败血症、脑膜炎。,64,一、生物学特性,（一）形态染色G+球菌，单个、成双或短链状排列。无荚膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。,65,营养要求较高。能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（PH9.6）、高胆汁（40%）、1045生长。菌落：圆形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有或溶血。,（二）培养特性,66,能分解多种糖类触酶（-）PYR（吡咯烷酮-萘基酰胺）试验（+）,（三）生化反应,67,目前分18种。引起医院内感染常见的是粪肠球菌和屎肠球菌。常用的分型方法：rRNA基因探针分型法。,（四）分型,（五）抵抗力对理化因素抵抗力弱。但对大多数抗生素天然耐药。,68,二、微生物学检验,（一）标本采集尿液、血液、脑脊液、脓汁分泌物等。,69,（二）检验程序,尿液、脓汁、穿刺液,血液,涂片染色分离培养（血平板、5%CO2）,初报,挑选可疑菌落,增菌培养（葡萄糖肉汤、5%CO2）,PYR试验,胆汁七叶苷试验,6.5%NaCl生长试验,血清学试验,其他鉴定试验,报告,70,（三）检验方法,1、直接镜检适用于：痰、脓、脑脊液、穿刺液标本。2、分离培养血平板：灰白色，圆形，中等大小，不透明，S型菌落，周围有溶血或溶血。选择培养基：叠氮胆汁七叶苷琼脂平板。,71,3、鉴定试验（1）菌属鉴定试验：PYR试验：肠球菌、A群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（+）胆汁七叶苷试验：+盐耐受试验：+（4）种间鉴定试验：P175表17-3,72,第四节奈瑟菌属(Neisseria),特点：为一群G-双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及触酶+。种类：共九种，主要致病菌是脑膜炎奈瑟菌(merningococcus)淋病奈瑟菌(gonorrhoeae),73,一、脑膜炎奈瑟菌(N.meningitidis),即脑膜炎球菌，是流行性脑脊髓膜炎的病原体,74,（一）生物学性状,1形态结构2培养特性3生化反应4.抗原结构5.抵抗力特点,75,（一）形态结构,G-，肾形成双排列在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。,76,2培养特性,营养要求高，必须在含有血清或多种氨基酸、无机盐的培养基上生长良好。血平板：半透明，灰褐色，圆形，湿润光滑露滴样菌落。易自溶。,77,巧克力平板：圆形，扁平，蓝灰色，半透明，光滑湿润的菌落。卵黄双抗（EPV）平板：较大，无色，光滑湿润，扁平，边缘整齐的菌落。血清肉汤：呈微混浊。,78,3.生化反应,分解葡萄糖、麦芽糖：+硝酸盐还原试验阴性，不分解尿素氧化酶试验阳性,79,4.抗原结构,可分9个血清群，对人致病的主要是A群,5抵抗力特点,对寒冷、光、热力，干燥等十分敏感。室温3h，605min死亡。采集标本：注意保温迅速送检。对磺胺类、青霉素、链霉素均敏感。,80,（二）致病性与免疫性,1致病物质：菌毛、荚膜、内毒素2所致疾病：传染源、传播途径寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群，与患者补体介导的杀菌活性缺陷有关。约2%-3%的人表现为流脑症状。,3.免疫性病原可产生群特异性抗体，但不持久。,81,(三)微生物学检验,1标本采集菌血症期病人采集血液有出血点或瘀斑者，可取瘀斑渗出液有脑膜刺激症状，抽取脑脊液带菌者：咽拭子,82,注意事项：立即送检注意保温（勿放冰箱）防干燥防紫外线,83,、脑膜炎球菌的检验程序,血液,增菌培养（葡糖肉汤）,分离培养（巧克力、血平板）,鉴定试验,涂染检氧化酶葡、麦糖多价血清药敏试验,结果报告,鼻咽拭子,卵黄双抗平板,510%co2,371824h,371824h,371824h,脑脊液瘀血点,离心,上沉清淀液物,510%2,涂片染色,初步报告,直接凝集,84,脑膜炎球菌的鉴定依据,菌落特征符合形态染色符合分解葡、麦糖产酸氧化酶、触酶阳性血清凝集试验阳性,85,二、淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）,即淋球菌为淋病的病原体，人是唯一天然宿主和传染源,86,（一）生物学性状,1形态结构2培养特性3.生化反应4抵抗力特点,87,1形态结构,G-，球形或肾形，成对排列有荚膜，无芽胞和鞭毛,88,2培养特性,营养要求高，30-37生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用血液、巧克力等培养基初次分离，须5-10%CO2才能生长发育菌落：凸起，光滑、圆形，灰褐色，半透明,89,3.生化反应,氧化酶试验：（+）触酶：（+）葡萄糖（+），麦芽糖（-）易自溶,90,4抵抗力特点,抵抗力弱，在干燥环境中仅能存活1-2h，湿热555min,100立即死亡。室温下存活1-2d。对消毒剂极敏感,91,、致病物质：菌毛、外膜蛋白、等、所致疾病：侵犯人类泌尿生殖系统引起淋病(首位性病)新生儿眼炎,（二）致病性与免疫性,92,1标本采集,标本：男性：尿道分泌物女性：阴道分泌物全身性淋病：血液、泌尿、生殖道的各种分泌物、尿液立即送检,检验程序,(三)微生物学检验,93,脓汁、分泌物,直接涂片染色,分离培养血、巧克力、TM平板,510%co2,351824h,鉴定试验,涂染检氧化酶糖发酵药敏试验,报告,初步报告,351824h,94,（）直接涂片镜检,急性淋病：嗜中性粒细胞内大量G-，肾形双球菌具有诊断意义慢性淋病：镜检较困难,检验方法,95,（）分离培养,即采集即培养，常用含有两种以上抗生素（万古霉素、粘菌素、磺胺类等）的选择培养基上培养（如ML、TM）5-10%CO2培养基先预温。,96,氧化酶试验：（+）触酶：（+）（多数奈瑟菌为阴性）葡萄糖（+），麦芽糖（-）PCR：灵敏，特异，标本不受限制(不需活菌),（）鉴定,97,1.名词解释：血浆凝固酶、SPA、抗链“o”试验、Optochin试验。2.根据色素和生化反应将葡萄球菌分成哪几种？3.金黄色葡萄球菌的鉴定依据有哪些？4.根据链球菌在血平板上的溶血现象，将其分成哪些类型？甲链和乙链有何区别？5.简述链球菌的检验程序和检验方法。6.脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些异同点？7.采集脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的标本进行细菌检验应该注意哪些问题？为什么？,复习思考题,98,中等大，突起，有色素，S型菌落。,葡萄球菌菌落形态（普通琼脂平板）,99,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,100,金黄色葡萄球菌有透明溶血环。,表皮葡萄球菌无溶血环。,101,葡萄球菌A蛋白（SPA）的意义：（1）降低抗体的调理作用，抗吞噬（2）协同凝集试验:辅助诊断疾病。