槐花米中芸香甙的提取.doc

超声强化碱溶酸沉法从槐米中提取芦丁摘要：本文目的是采用超声波强化碱溶酸沉法，以得出超声波提取槐米中芦丁的最佳条件。方法是针对提取煮沸时间 、提取PH值、超声波处理时间等三个因素进行研究。并在单因素的基础上进行正交实验，用30%乙醇进行浸取方法处理样品提取芦丁，用紫外分光光度法确定芦丁在波长400-600nm 之间的最大吸收波长，并用分光光度法测定芦丁的含量。结论是超声时间5min 、加热煮沸1h、碱pH9酸PH3的条件提取率最高,可达14%。关键词：碱溶酸沉、 超声波 、槐花米、 芦丁 、提取精制一、 芦丁介绍芦丁又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素3位上的羟基与芸香糖、葡萄糖与鼠李糖组成的双糖脱水形成的苷。芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174178，无水物188190。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 二、 提取原理芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。超声波细胞粉碎机是一种利用强超声在液体中产生空化效应，对物质进行超声处理的多功能、多用途的仪器，能用于动植物组织、细胞、细菌、芽胞菌种的破碎，同时可用来乳化、分离、分散、匀化、提取、脱气、清洗及加速化学反应等等。两种方法结合，先是超声波破坏细胞，然后进行碱溶酸沉法进一步提取。三、材料与方法3.1仪器 WFZ UV-4802H紫外可见分光光度计、7200分光光度计、电热恒温水浴锅、恒温箱、电子天平、容量瓶、试管、刻度试管、量筒、锥形瓶、玻璃棒、滤纸、烧杯布氏漏斗，玻璃棒，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml），洗耳球，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。3.2实验试剂 槐米花10 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，NaOH：分析纯，无水乙醇：分析纯，NaNO2：分析纯Al(NO3)3:分析纯。3.3实验步骤以pH为8 ，9，10，时间0.5，1，1.5h，超声时间5，10，15，20min作为变量研究。定量各为PH=9,加热煮沸1h，超声时间5min。1芸香甙的提取（以某一条件为列）称取10g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入0.4%硼砂溶液200ml，以饱和石灰水调pH至9，加热至沸，并不断搅拌，随时补充水分并保持PH9，煮沸约1h后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为3。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤23次，得到芸香甙的粗产物。3.4.精制用水重结晶：将粗芦丁置500mL烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，趁热抽滤。滤液静置，充分冷却，析出芦丁晶体，抽滤，产品用蒸馏水洗涤，7080C烘干，称重，得芦丁产品。3.5检识取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解， 取上述溶液1-2ml，加2滴浓盐酸，再加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。（紫红色）3.7芦丁的含量测定【1】标准储备液的制备 精确称取干燥至恒重的芦丁标准品5.0mg置于50ml容量瓶中，加入乙醇溶解并定溶成浓度为0.1mgml的芦丁标准品。【2】标准曲线的制作 精确量取芦丁标准溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml分别置于10ml容量瓶中，加入30%的乙醇溶液使各体积至5.0ml，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml。摇匀后放置5分钟。再分别加入10%硝酸铝溶液0.5ml，摇匀后放置5min。最后分别加入1.0molL的氢氧化钠溶液3ml，用30%的乙醇溶液定容至刻度，摇匀放置5min。在510nm波长测定其吸光度。以吸光度-浓度作图并进行回归，的回归方程。【3】样品分析 准确称取样品适量或取适量样品溶于10ml的容量瓶中，加入30%的乙醇溶液溶解并使体积至5.0ml，（同时做样品空白对照），分别加入5%亚硝酸钠溶液至0.5ml,摇匀后放置5min。再分别加入10%硝酸铝溶液0.5ml，摇匀后放置5min，再分别加入1.0molL的氢氧化钠溶液3ml，用30%的乙醇溶液定容至刻度，摇匀放置15min，在510nm波长测定其吸光度。3.6实验说明与注意事项1. 需要等滤液充分冷却后再用盐酸调节PH值，否则会导致部分芸香甙水解。2. 水洗时至少要保证洗至PH值为6，否则再下一步精制过程中加热时会导致部分芸香甙水解，影响产率。3. 实验过程中多次用到电加热炉进行加热的操作，注意安全，避免烫伤自己。4. 水解时随时加水，避免蒸干。三、 结果与讨论结果见下表PH为变量研究结果煮沸时间为变量研究结果超声时间为变量的研究结果参考文献槐花米中芦丁的