植物组织中硝态氮测定.ppt

植物体内硝态氮含量的测定,1教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关2学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。,小白菜：绿叶片、叶柄两个小组合作：一个小组测叶片，另一个小组测叶柄。二者必须是同几株上的材料。,三、实验材料,先做：样品中硝酸盐的提取：,四、操作步骤：,材料剪碎、混匀,精确称取1.0g，3份重复,放入具塞试管，加去离子水至10ml,沸水浴中提取30min(最好2次，本实验提取1次),塞子封口，橡皮筋捆扎在一起,同几株小白菜（一组叶片、另一组叶柄）,注：2个小组合作，结果共用，一起分析,10ml需要很准确？,一、测定意义：,1、作为施肥指标：植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。,2、鉴定蔬菜及其加工品质：蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。,人体摄入的硝态氮81.2来自蔬菜，当人摄取硝酸盐量较大时，体内的NO3还原成NO2进入血液，将血液中的血红素变成高铁蛋白，引起肌体中毒。NO2还可间接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。咸菜的淹制初期咸菜内会大量积累硝酸盐，硝酸盐含量升高数倍或数十倍，当咸菜淹制成熟后硝酸盐含量减少（很低），所以，咸菜没有淹制完成之前，不要食用。青菜放置时间延长一天，体内的硝酸盐含量会不断增加，购买蔬菜后及时食用，不要放置时间过长，减少硝酸盐的积累。,3、植物组织中硝态氮代谢过程？,硝态氮（高度氧化状态）不能直接合成其它有机化合物，还原后才能利用。如何还原的？,NO3-,NO2-,NH4,aa,细胞质，硝酸还原酶NADH提供氢体,叶绿体，亚硝酸还原酶铁氧还蛋白Fd提供电子,二、测定原理：水杨酸法,在浓酸条件下，NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。,硝基水杨酸在碱性条件下（pH12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。,三、材料：小白菜,所用仪器、试剂已备好在实验台上,四、操作步骤程序：,C(g/ml)=110.99D410+6.30(S22P型分光光度计),2样品中硝酸盐的提取3样品液的测定比色4.结果计算,1标准曲线的制作（学生不做）,过滤到25ml容量瓶，去离子水冲洗残渣，定容,材料剪碎、混匀,精确称取1.0g，3份重复,放入具塞试管，加去离子水10ml,沸水浴中提取30min,塞子封口，橡皮筋捆扎在一起,自来水冷却,2个小组合作，结果共用分析；同几株材料；一组叶片、另一组叶柄。,2、样品中硝酸盐的提取,容量瓶、漏斗洗刷一遍。,3、样品液的测定比色,4支试管,空白试管,样品试管3支,加5%水杨酸-硫酸0.5ml(在磁盘中加!移液管立即冲洗),冷却比色(410nm),加9.3ml8%NaOH,加0.2ml蒸馏水,各加0.2ml样品液,试管洗刷一遍,防止不净致重复间误差较大。,使用强酸、强碱注意安全，如意外发生外溅，立即用水冲洗和擦洗。,两组合作测定须用同一台分光光度计。,室温放置20min,溶液加到试管底部，以免影响结果重复性。,分光光度计：比色杯用水冲洗，擦镜纸擦净；比色杯倒液不超2/3；用完后及时洗净!废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器内，切勿倒入水池内!测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含强碱），倒置在试管架上!,注意事项：,式中：C标准方程计算得NO3-N浓度（g/ml）V提取样品液总量(体积，ml)W样品鲜重(g),4、结果计算（课后计算）：,NO3-N含量(g/g)=,C/2V,W,C/2显色时取样0.2ml，标准曲线0.1ml,结果记录：记载表老师签字,用品洗刷干净，检查摆放整