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文档简介

第四章：酶学分析技术,第三节酶活性的测定,1,.,酶具有高效性,酶的催化效率一般是无机催化剂的1071013倍。,2,酶具有专一性,酶的专一性建立在酶结构的专一性上,3,影响酶活性测定的因素,一、标本1、溶血红细胞中某些酶的活性比血清高。2、抗凝剂某些抗凝剂可抑制酶的活性。因此一般都采用血清做标本，确实需要使用血浆的，则使用肝素抗凝。3、样品存放时间各种血清酶的稳定性不同，故而存放时间及存放方法不同都会影响到酶的活性。,4,第三节、影响酶活性测定的因素,二、测定条件酶活性易受到条件如温度、PH、底物浓度等影响。因此，在酶活性测定时，要控制在最佳条件下进行。这样，不仅酶的活性最高，相对误差最小，而且酶活性受测定条件变化的影响也小。在此主要介绍底物浓度对酶活性影响及反映相互关系的米氏方程。,5,6,VmaxSv=S+Km,上式中v代表反应速度，Vmax代表最大反应速度，S代表底物浓度，Km称为米氏常数。,米-曼氏方程：,7,（Vmax-v）SKm=v,当v=1/2Vmax时，Km=S。因此Km值为反应速度相当于最大反应速度一半时的底物浓度。Km值是酶的特征常数，具有重要的应用价值。,由米-曼氏方程可以导出：,8,Km值是酶的特征常数，在反应条件一定时，只与酶的种类和底物的性质有关，与酶的浓度无关。不同种类的酶其Km值不同，对于一种未知的酶，可在规定的条件下测定其Km值加以鉴定。,Km值的应用,9,测定酶活性时注意事项：,1、要规定反应条件2、标本要新鲜3、配制的底物浓度应准确且足够大，底物溶液中应加入不抑制该酶活性的防腐剂并冰箱保存，以防止底物被分解或变质4、在测定过程中所用器材应绝对清洁，不应含有酶的抑制物5、使酶活性测定在线性期内进行,10,测定酶活性时注意事项：,6、应正确设计适当的对照管，以消除所测结果中非酶反应生成的那一部分。测定管中的产物量必须减去对照管中的产物量才是有酶催化生成的产物量。（1）样品对照：只加样品不加底物（2）底物对照：不加样品只加底物（3）时间对照：含有酶和底物但反应时间为零的对照管；也可以先用蛋白沉淀剂或其他试剂停止反应后，再加底物予以抵销。,11,酶的区域化分布,表7-3诊断常用血清酶的来源,血清酶符号来源,鸟氨酸氨基甲酰转移酶OCT肝卵磷脂胆固醇酰基转移酶LCAT肝谷氨酸脱氢酶GLDH肝山梨醇脱氢酶SDH肝丙氨酸氨基转移酶ALT肝、肾、心异柠檬酸脱氢酶ICD肝、胎盘、心-谷氨酰转肽酶-GT肝、胆、肾、小肠5-核苷酸酶5-NT肝、胆道单胺氧化酶MAO肝、肾、脑天门冬氨酸氨基转移酶AST心、肝、骨骼肌肌酸激酶CK骨骼肌、心、脑乳酸脱氢酶LDH心、肾、骨骼肌、肝、肺碱性磷酸酶ALP小肠、胎盘、肝、肾酸性磷酸酶ACP前列腺、红细胞、血小板淀粉酶AMS胰、唾液腺脂肪酶LPS胰,12,酶活性测定在临床诊断中的应用,（一）在肝脏疾病诊断中的应用（二）在急性心肌梗死诊断中的应用（三）在急性胰腺炎诊
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