中药化学6黄酮.ppt

第六章黄酮类化合物教学内容：6.1概述6.2结构与分类6.3理化性质及检识6.4提取分离6.5结构研究6.6实例：槐米、黄芩、葛根、银杏叶重点：定义、主要类型结构、重要理化性质、提取分离、检识、结构研究。,6.1概述一、黄酮类化合物的定义广义的黄酮：C6-C3-C6,狭义的黄酮：2-苯基色原酮,二、分布分布广泛，多存在于高等植物中，特别是被子植物中。黄酮唇形科、玄参科、爵床科、菊科黄酮醇双子叶植物二氢黄酮蔷薇科、芸香科、豆科、杜鹃花科二氢黄酮醇豆科异黄酮鸢尾科、豆科的蝶形花亚科双黄酮松柏纲、银杏纲、凤尾纲少数以游离态存在，大部分与糖结合成苷的形式存在。苷花、叶、果苷元木质部,三、生物活性1、心血管：葛根总黄酮、银杏叶总黄酮、芦丁、橙皮苷、葛根素、槲皮素2、镇咳、祛痰：杜鹃素、川陈皮素、3、保肝：水飞蓟素、异水飞蓟素、4、抗炎：芦丁、羟乙基芦丁、橙皮苷5、抗菌、抗病毒：木犀草素、黄芩苷、槲皮素6、解痉：异甘草素、大豆素7、抗肿瘤：牡荆素、桑色素、d-儿茶素8、雌激素样作用：大豆素、染料木素、金雀花异黄素等异黄酮,6.2黄酮类化合物的结构与分类依据A环和B环之间三个碳是否成环、氧化程度、是否有羟基取代及B环连接位置，将天然黄酮类化合物分类如下：一、黄酮(flavone)和黄酮醇(flavonol),芹菜素木犀草素,山奈酚槲皮素,黄芩苷杨梅素芦丁羟乙基芦丁,二、二氢黄酮(flavanone)和二氢黄酮醇(flavanonol)2、3位为单键,甘草素R=H橙皮素R=H甘草苷R=glc橙皮苷R=rutinose,二氢槲皮素二氢桑色素,三、异黄酮(isoflavone)和二氢异黄酮(isoflavanone)3-苯基取代,大豆素R=H葛根素R=glc大豆苷R=glc,紫檀素（-CH3）三叶豆紫檀苷（-glc）高丽槐素（-H）,四、查尔酮(chalcone)和二氢查尔酮(dihydrochalcone)2-羟基查尔酮红花苷梨根苷,补骨脂甲素补骨脂乙素,查尔酮为苯甲醛缩苯乙酮类化合物，2,-羟基查尔酮是二氢黄酮的异构体，二者可以相互转化。例如：红花在不同时期花的颜色不同，原因是所含主要成分不同：初期：新红花苷及微量的红花苷（淡黄色）中期：红花苷（深黄色）后期：醌式红花苷（红色或深红色）,五、橙酮(aurone)C环为五元环较少见，主要存在于玄参科、菊科、苦巨苔科和单子叶植物沙草科中。硫磺菊素,六、花色素类(anthocyanidin)C环无羰基,1位氧原子以佯盐形式存在，带正电荷。在中药中多以苷的形式存在。,七、黄烷醇类1、黄烷-3-醇(儿茶素类)：主要存在于含鞣质的木本植物中。,2、黄烷-3,4-二醇(无色花色素类)：含鞣质的木本植物和蕨类植物中多见。,八、双黄酮类治冠心病,九、其他黄酮口山酮(双苯吡酮或苯色原酮xanthone)，高异黄酮(homoisoflavone)，黄酮木脂素，生物碱型黄酮等,止咳祛痰,高异黄酮,水飞蓟素榕碱,6.3理化性质及检识一、理化性质（一）性状1、形态：多为结晶性固体，少数为无定形粉末。2、颜色:多为黄色与交叉共轭体系及助色团（羟基、甲氧基）的种类、数目以及位置有关。查尔酮黄酮（醇）异黄酮二氢黄酮（醇）、黄烷醇黄-橙黄灰黄-黄微黄近无色,在4,或7-位引入供电子基，因形成P-共轭，促使电子转移、重排，使化合物颜色加深。PH8.5蓝色,（二）旋光性苷元：二氢黄酮（醇）、黄烷醇、二氢异黄酮有旋光性，其他类型无旋光性；所有类型的苷：均有旋光，且多为左旋。（三）溶解性1、游离黄酮：易溶于甲醇、乙醇，乙酸乙酯，乙醚及稀碱水中，不溶或难溶于水。,在水中溶解度大小：花色素二氢黄酮（醇）、异黄酮黄酮（醇）、查尔酮原因：平面型：分子中存在着交叉共轭体系，包括黄酮醇、黄酮、查尔酮。分子排列紧密、分子间引力较大，不利于水分子进入。非平面型：二氢黄酮、二氢黄酮醇（分子中吡喃环已被氢化，成为半椅式结构）、异黄酮（B环受4位羰基的立体阻碍）。分子排列不紧密、分子间引力降低，有利于水分子进入。离子型：花色素类虽然是平面型结构，但以离子形式存在，具有盐的通性，因此水溶性好。,取代基的影响：黄酮的母核上引入羟基，水溶性增加，且与羟基数目成正比。引入甲氧基或异戊烯基后，脂溶性增加，水溶性降低。2、黄酮苷类：易溶于热水、甲醇、乙醇中。难溶或不溶于亲脂性有机溶剂中。多糖苷在水中的溶解度大于单糖苷。3-羟基苷的水溶性大于7-羟基苷。,（四）酸碱性1、酸性黄酮类化合物分子中具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱顺序：7，4-二羟基7或4-羟基一般酚羟基5-羟基5%碳酸氢钠5%碳酸钠0.2%NaOH4%NaOH,2、碱性黄酮类化合物因为分子中的-吡喃酮环上的1-氧原子，有未共用电子对，可与强酸结合生成烊盐，但极不稳定，加水分解。不同的黄酮溶于浓硫酸时形成烊盐，常表现出特殊的颜色：（二氢）异黄酮黄色黄酮（醇）黄色至橙色二氢黄酮橙色（冷时）至紫红色（热时）查尔酮橙红至洋红橙酮红色至洋红,苷,（五）显色反应酚羟基和-吡喃酮环的反应。1、还原反应（1）盐酸镁粉反应方法：样品的甲醇或乙醇液，加入少许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸，即可。现象：泡沫呈红色。结果：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）为阳性反应；查尔酮、橙酮、黄烷醇及多数异黄酮为阴性反应。注意：花色素及某些橙酮、查尔酮不加镁粉仅加盐酸即变红，容易干扰判断。,（2）钠汞齐反应乙醇液中，加入钠汞齐，放置数分钟至数小时或加热，过滤，滤液用盐酸酸化，则黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮显红色。黄酮醇显黄淡红色。二氢黄酮醇显棕黄色。（3）四氢硼钠反应方法：样品的甲醇液，加等量2%NaBH4的甲醇液，加浓盐酸或硫酸，生成红色紫红色。应用：二氢黄酮（醇）的专属性反应,2、金属盐类试剂的络合反应分子中具有3-羟基、4-羰基或5-羟基、4-羰基或邻二酚羟基的黄酮类化合物。（1）锆盐-枸橼酸反应应用：区分3-OH或5-OH黄酮方法：样品甲醇液中加2%Zrocl2/MeOH，生成黄色锆络合物，再加2%枸橼酸。结果：仍呈鲜黄色（不减褪）则有3-OH黄色显著减褪则为5-OH,（2）醋酸镁反应应用：鉴别二氢黄酮（醇）类化合物。方法：滤纸上滴加样品液，喷1%醋酸镁甲醇液，加热干燥，UV灯下观察。现象：二氢黄酮（醇）天蓝色荧光。黄酮、黄酮醇、异黄酮黄-橙黄-褐色,（3）三氯化铝反应应用：定性及定量分析方法：样品的乙醇液加1%三氯化铝乙醇液，365nm观察荧光。现象：鲜黄色荧光4，-OH或7，4，-OH黄酮显天蓝色荧光（4）氨性氯化锶反应应用：检识具有邻二酚羟基的黄酮。方法：样品的甲醇液，加0.01mol/L氯化锶甲醇液和氨气饱和的甲醇液各3滴。现象：绿色棕色黑色沉淀。,3、与硼酸的反应酸性条件下，5-羟基黄酮、6-羟基查尔酮与硼酸反应显黄色。4、与碱性试剂的反应黄酮类化合物溶于碱水中显黄色橙色红色，化合物类型不同，显色情况不同，查尔酮或橙酮显红或紫红色；二氢黄酮放置一段时间或加热后也会显红色。5、与五氯化锑的反应用于鉴别查耳酮，生成红或紫红色沉淀，但反应是在无水四氯化碳中进行，要注意无水操作。,二、黄酮的检识（一）理化检识HCl-Mg黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）-红色四氢硼钠二氢黄酮（醇）-红紫红色醋酸镁二氢黄酮（醇）-天蓝色荧光五氯化锑查尔酮-红紫红色锆盐-枸橼酸区别3-OH、5-OH黄酮-黄色减退氨性氯化锶邻二酚羟基黄酮-绿棕黑色碱性试剂查尔酮、橙酮-红紫红色,（二）色谱检识1、纸色谱：双向展开，现少用。2、硅胶薄层色谱：主要用于检识极性较小的黄酮。氯仿-甲醇或乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水等系统展开。3、聚酰胺薄层色谱：各种黄酮游离黄酮氯仿-甲醇、氯仿-甲醇-甲酸黄酮苷甲醇-乙酸-水、甲(乙)醇-水,6.4提取分离一、提取溶剂：甲醇，乙醇，热水，碱性稀醇，碱水。多糖苷：沸水花色苷：0.1%盐酸水溶液提取。注意：苷类提取要防止酶解。,1、乙醇或甲醇提取：浓缩提取液得浸膏，加水分散，用乙醚萃取得苷元（游离黄酮），再用乙酸乙酯或正丁醇萃取得黄酮苷。净化除杂：石油醚脱脂，除去叶绿素，胡萝卜素等脂溶性色素。2、热水提取：仅用于提取黄酮苷类，冷后苷类沉淀析出。净化除杂：水溶液醇沉，除去蛋白质，多糖。,3、碱溶酸沉法：常用碱水：石灰水，Na2CO3，稀NaOH碱性稀醇：5%NaOH的50%乙醇酸沉：盐酸注意：酸碱浓度不宜过高（碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生成烊盐，影响产率）。石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质等有利于纯化。但浸出效果不及NaOH，且有些黄酮可与钙生成不溶性沉淀。稀NaOH：浸出效率高，但杂质也多。,二、分离分离依据：极性差异、酸性强弱、分子大小和特殊结构。（一）系统溶剂萃取法：总浸膏加水分散先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。（二）PH梯度萃取法：用不同强度的碱萃取分离（NaHCO3;Na2CO3;NaOH）。,（三）层析法1、聚酰胺柱层析（1）吸附原理：聚酰胺分子中酰胺基与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合而产生吸附作用。（2）吸附规律：A：与酚羟基的数目有关，酚羟基数目越多，吸附力越强。B：与酚羟基的位置有关，如果酚羟基所处的位置易于形成分子内氢键，则吸附力减弱。,C：分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，则吸附力越强。查耳酮二氢黄酮；黄酮二氢黄酮D：不同类型黄酮被吸附的强弱顺序为：黄酮醇黄酮二氢黄酮异黄酮（3）溶剂的洗脱能力由弱到强：水甲醇或乙醇丙酮稀氢氧化钠或氨水甲酰胺A环H糖上的H（一）A环质子1、5，7-二羟基黄酮：6-H、8-H：5.76.9ppm，d，J=2.5Hz8-H在较低场7位成苷后6-H和8-H均向低场移,2、7-羟基黄酮：ABX系统5-H：近8.0ppm,d,J=9Hz6-H：6.47.1ppm，dd,J=2.5,9Hz8-H：6.37.0ppm，d,J=2.5Hz,（二）B环质子,1、4-氧取代黄酮：AABB系统2,6-H:7.18.1ppm,2H,d,J=8.5Hz3,5-H:6.57.1ppm,2H,d,J=8.5Hz,2、3,4-二氧取代黄酮：ABX系统5-H:6.77.1ppm,d,J=8.5Hz2-H:6.77.2ppm,d,J=2.5Hz6-H:6.77.9ppm,dd,J=2.5,8.5Hz,3、3,4,5-三氧取代黄酮：2,6-H:6.57.5ppm,d,J=2Hz,（三）C环质子,1、黄酮类：3-H:6.3ppm,S2、异黄酮：2-H:7.67.8ppm,S,3、二氢黄酮：2-H:5.2ppm,dd,J=11,5Hz3-H:2.8ppm,dd,J=17,11Hz3-H:2.8ppm,dd,J=17,5Hz4、二氢黄酮醇：2-H:4.9ppm,dd,J=11Hz3-H:4.3ppm,dd,J=11Hz3-OH成苷后2-H和3-H均向低场移,5、查尔酮：-H：7ppm,-H：7.5ppm,d,J=17Hz6、橙酮：=CH：6.6ppm,S,（四）取代基上的质子,-CH3:2.042.45ppm-OCOCH3:2.302.50ppm-OCH3:3.504.10ppm5-OH:12ppm7-OH:11ppm3-OH:9.7,（五）糖上质子,三、碳谱,ppm：C=O-O-C-B环碳A环碳糖上碳1、C=O黄酮（醇）、异黄酮：175185ppm二氢黄酮（醇）、查尔酮：188197ppm橙酮：183ppm2、与氧直接相连的碳：140160ppm3、B环上碳：110130ppm4、A环上碳：110130ppm;一般6-C8-C,5、糖的端基碳：氧苷：98109ppm碳苷：75ppm酯苷：100ppm6、C-2,C-3:C-2（ppm）C-3（ppm）黄酮160.5163.2104.7111.8黄酮醇147.9136.0异黄酮149.8155.4122.3125.9二氢黄酮75.080.342.844.6二氢黄酮醇82.771.27、取代基：-OCH3:56ppm,四、质谱,（一）裂解途径（RDA裂解）插扫描图,（二）裂解途径,插扫描图,五、综合解析实例,从中药黄芩中分得一黄色结晶，mp：300-302，分子式为C16H12O6，HCl-Mg（+），FeCl3（+），Gibbs（-），SrCl2/NH3（-）。MS（m/e）：300（M+），285，118UV（max）：MeOH：277，328NaOMe：284，300，400NaOAc：284，390AlCl3：264（sh），284，312，353，4001HNMR（）ppm：3.82（1H，s），6.20（1H，s），6.68（1H，s），6.87（2H，d，J=8.5Hz），7.81（2H，d，J=8.5Hz），12.35（1H，加重水消失）1、请推测出该化合物的结构并简述理由。2、写出1H-NMR质子归属。,解析：HCl-Mg（+），FeCl3（+）：有酚羟基的黄酮类Gibbs（-）：酚羟基对位有取代SrCl2/NH3（-）：无邻二酚羟基UV：MeOH：277（带），328（带350）：无3-OHNaOMe：带328移至400(+72)：有4-OHNaOAc：带277移至284(+7)：有7-OH带328移至390(+62)：有4-OHAlCl3：带带均红移：有5-OH,1HNMR:12.35ppm：5-OH6.87（2H,d,J=8.5Hz）:3，5H7.81（2H,d,J=8.5Hz）:2，6H6.20（1H，s）:3H6.68（1H，s）:6H(因为5-OH对位必须有取代)3.82（1H，s）:8-OCH3综上所述该化合物结构为:5，7，4-三羟基-8-甲氧基黄酮MS:300为分子离子峰（222+48+30）285（M-15）;118（B1+.：102+16）,6.6实例：黄芩、槐米、葛根、银杏叶一、黄芩来源唇形科黄芩的干燥根。功效清热燥湿、泻火解毒、止血安胎。成分主要含黄酮类成分，另有氨基酸、挥发油、糖和甾醇。（一）主要成分的结构与性质有多种黄酮类成分。以黄芩苷含量最高（.），具有抗菌、消炎、降转氨酶作用。,黄芩苷：为葡萄糖醛酸苷。在酸水中溶解度小，可溶于热乙酸、含水醇，不易被酸水解，能被黄芩酶水解。黄芩素：溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯及热冰醋酸。溶于稀氢氧化钠呈绿色。黄芩素具有5，6，7-三羟基，在空气中易被氧化转为醌式结构而显绿色。汉黄芩苷：黄芩中特有的成分，5-羟基-8-甲氧基-黄酮-7-O-葡萄糖醛酸苷。除葡萄糖醛酸苷，也有葡萄糖苷。除黄酮外，也有少量的二氢黄酮及查尔酮。,黄芩素汉黄芩素,黄芩新素I黄芩新素II,（二）主成分的提取分离1.黄芩苷的提取分离（177页）黄芩水煎液酸化（PH12）离心沉淀碱化（PH7）加醇溶解滤液酸化（PH12）过滤沉淀水洗，50%乙醇洗、重结晶黄芩苷2.黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素及汉黄芩苷的分离：见下页流程图,黄芩粗粉乙醚提取（苷元）乙醚部分药渣聚酰胺层析95%乙醇热提（苷）氯仿洗脱乙醇提取物药渣黄色带1带2聚酰胺层析水煮提黄芩新素水洗脱水提液汉黄芩素盐酸沉淀汉黄芩苷反复结晶黄芩素黄芩苷,二、槐米来源豆科槐Sophorajapon