石蜡切片法四染色封藏实验原理1染色细胞ppt课件

实验十五石蜡切片法（四）染色、封藏一、实验原理1.染色：细胞和组织的不同结构之所以能被染成各种不同的颜色，是由于染料对它们所起的物理与化学综合作用的结果。(1)物理作用：如渗透作用、吸收作用、吸附作用等。(2)化学作用：是因为细胞内含有酸性和碱性物质可分别与染料中的阳离子和阴离子互相结合，这种反应使组织细胞染上颜色。,1,以常用的苏木精-伊红对染法为例：细胞核内含有酸性物质，易与碱性染料苏木精中有染色作用的阳离子结合，细胞核被染上蓝色。细胞质含有碱性物质，易与酸性染料伊红中有染色作用的阴离子结合，细胞质被伊红染上粉红色。,2,2封藏：封藏是使已经透明的材料保存在适合折光率的封藏剂中，使材料能在显微镜下清晰的显示出来，并能长期保存。,3,二、试剂与器材1.试剂：各级酒精（50%、70%、85%、95%、100%）、1/2二甲+1/2无水乙醇、二甲苯、埃利希氏苏木精染液、1%曙红水溶液、中性树胶.2.器材：镊子、解剖针、染色缸、显微镜。,4,三、实验程序1.染色的一般方法由于要染的切片包在石蜡之中，而所用的染色剂又常常为水溶液，因此在染色之前，必须再度复水，石蜡切片在二甲苯中溶去石蜡，经过各级酒精，下降至水，经染色后需再脱水，上升到二甲苯透明然后封藏。,5,苏木精伊红（简称H.E）对染法(1)二甲苯脱蜡5-10min。(2)二甲苯与纯酒精等量混液5min。(3)纯酒精，95%、85%、70%、50%酒精各2min。(4)蒸馏水2min。(5)埃利希氏苏木精染色液20-30min。(6)水洗(换几次，共约5min)。(7)1%盐酸酒精分化数秒钟(如染色合适，此步可取消)。(8)自来水洗数秒至1min。(9)氨水中“蓝化”34s。,6,(10)蒸馏中漂洗5min(换一次)。(11)1%伊红水溶液15min。(12)70%酒精数秒。(13)80%、95%、纯酒精(2次）各2min。(14)纯酒精与二甲苯等量混合液5min。(15)二甲苯510min。(16)封藏:封藏于中性树胶中。,7,2.封藏的方法在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下，避免产生气泡。,8,四、注意事项1、脱蜡应彻底；2、水洗时水流不能太急；3、“分色”、“蓝化”时间要掌握好；4、脱水要彻底；5、适量滴加封藏剂。,9,五、实验结果细胞核蓝色，细胞质粉红色。,10,六、思考题在染色、封藏过程中容易出现哪些不正常现象？应如何解决？,11,附：冰冻切片法冰冻切片法具有制片速度快并能完整保存细胞结构及生物大分子活性（如脂肪、酶等）的优点，常用于临床上的病理快速诊断及细胞化学的制片。,12,一、操作程序1.取材：取新鲜的组织。2.固定：组织固定于10%中性福尔马林,冰冻切片。3.切片：(1)利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度，调整切片角度，安装切片刀。(2)将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。(3)将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出后染色观察。,13,4.染色显示脂类的苏丹黑B法：(1)组织固定于10%中性福尔马林或10%钙福尔马林液，冰冻切片。(2)于70