维生素类药物的分析 .ppt

维生素类药物的分析,1,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。人体不能合成维生素。,2,发现简史,公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年-胡萝卜素被发现。1905年-甲状腺肿大被碘治愈。1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。,3,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。1922年-维E被发现。1928年-科学家发现维B至少有两种类型。1933年-维E首次用于治疗。1948年-大剂量维C用于治疗炎症。1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。1957年-Q10多酶被发现。1969年-体内超级抗氧化酶被发现。1970年-维C被用于治疗感冒。1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果,4,必需维生素13种,维生素A，维生素B，维生素C，维生素D，维生素E，维生素K，维生素H（生物素），维生素P，维生素PP，维生素M，维生素T，维生素U，水溶性维生素。,5,必需维生素？,外源性：人体自身不可合成，需要通过食物补充；微量性：人体所需量很少，但是可以发挥巨大作用；调节性：维生素必需能够调节人体新陈代谢或能量转变；特异性：缺乏了某种维生素后，人将呈现特有的病态。,6,VitA、D2、D3、E、K1等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,分类：,VitM,VitPP,7,常见维生素的生理活性,维生素A：有VA1-3，其中VA1活性最高，又称为视黄醇；维生素A是眼睛中视紫质的原料，也是皮肤组织必需的材料，人缺少它会得干眼病、夜盲症等。对人体的生长、视觉和生殖功能都很重要。,8,维生素D：又称钙化醇，与钙、磷代谢及植物神经系统、内分泌及血管系统有密切关系，具有皮质类固醇激素样作用。可用于治疗异位性皮炎、红斑狼疮、斑秃、聚合性痤疮、泛发性脓疱性银屑病等；与晒太阳有关。维生素E可用于治疗冻疮、多形红斑、结节性红斑、单纯性紫癜、色素性紫癜性皮肤病、肢端紫绀症、痛经以及治疗抑郁症。,9,维生素K促进肝脏合成凝血酶原及血浆因子，与皮质类固醇激素有协同作用。可用于治疗紫癜、慢性荨麻疹、淋巴瘤伴皮肤瘙痒病等。维生素B1可用于治疗湿疹、皮炎、脓皮病、念珠菌病、光感性皮肤病、带状疱疹后遗神经痛、多发性神经炎等。,10,维生素B2可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢性脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、寻常须疮、口周湿疹、日光性皮炎等。维生素B6可用于治疗脂溢性皮炎、脂溢性脱发、寻常痤疮、酒渣鼻、湿疹、渗出性银屑病、神经性皮炎、妊娠痒疹、斑秃、唇炎等。,11,维生素B12是体内多种代谢过程中必需的辅酶，参与核蛋白的合成，甲基的转换以及脂肪和糖的代谢，可用于治疗慢性荨麻疹、接触性皮炎、早期银屑病、扁平疣、水痘、带状疱疹、扁平苔癣、脂溢性皮炎、光感性皮肤病等。维生素C主要用于抗炎和抗衰老，可用于治疗紫癜性皮肤病、湿疹、荨麻疹、黄褐斑、黑变病、特发性斑状色素沉着、早期银屑病、砷剂皮炎等。,12,-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯,R:,第一节维生素A的分析,全反式,13,（一）为一个具有共轭多烯侧链的环己烯,1.具有UV吸收,2.存在多种立体异构化合物,14,维生素A325.5100%全反式新维生素Aa32875%2顺新维生素Ab320.524%4顺新维生素Ac310.515%2，4顺异维生素Aa32321%6顺异维生素Ab32424%2，6顺,相对生物效价,顺反异构,15,VitA2,VitA3,3.易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,16,或有金属离子存在时氧化临床使用时成酯后，溶于植物油中；阴凉干燥处保存，还需加入N2或一定抗氧剂提高稳定性。,共轭多烯侧链易被氧化,（二）,17,环氧化物,VitA醛,VitA酸,18,CHCl3,溶解性,（四）,不溶于水，微溶于乙醇；易溶于有机溶剂和植物油等,19,(五)紫外吸收特征,共轭多烯紫外吸收；325328nm范围内有最大吸收，可用于鉴别和定量测定；,20,条件：无水、无醇,CHCl3,鉴别试验,二、,SbCl3,水,SbOCl,乙醇可使碳正离子的正电荷消失,21,蓝色,紫红,22,max为326nm一个吸收峰,max为350390nm三个吸收峰,23,去水VitA（VitA3）,VitA,24,25,USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值,BP对照品法显色剂三氯化锑,26,立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）,UV法（三点校正法）,（一）,27,三点校正法1.前提条件：（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。,28,测定对象：VitA醋酸酯,第一法等波长差法,第二法等吸收比法(皂化法),测定对象：VitA醇,2.波长的选择：（1）1VitA的max（如VitA酯328nm）（2）23分别在1的两侧各选一点,29,30,第二步：求,3、测定法（1）基本步骤:第一步：A选择，A328测定或A328校正,第三步求效价,31,第四步：求标示量,A*D*换算因数*W,32,换算因数：,单位E1cm数值所相当的效价数,（由纯品计算而得）,33,34,35,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,36,判断是否在326329nm之间,改用第二法,是,否,求算并与规定值比较,37,规定值差值,判断差值是否超过,38,第二法,第二法,计算A328（校正）,用A328计算,有超过0.02,无超过,f,39,VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物0.2399g至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,40,A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216,A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299,求本品中维生素A的含量？,41,A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.344,0.5550.9071.0000.8110.299,+0.010.010+0.02+0.04,=,42,43,适用于维生素A醇,（等吸收比法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,皂化法、6/7A法,（3）第二法,44,水溶性,脂溶性,45,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,46,判断A300/A325是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),47,0,3%,3%,f,48,三氯化锑比色法,（二）,优点：简便快速,max618nm620nm,标准曲线法,49,（三）高效液相色谱法,流动相：正己烷异丙醇（9973）检测波长：325nm,50,第二节维生素B1的分析,一、结构与性质,51,1.溶解性,(1)易溶于水,(2)水溶液呈酸性,3.UV,共轭双键,max=246nm,二、性质,2.硫色素荧光反应,52,4.与生物碱沉淀试剂反应,杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。,5.氯化物的特性,6.硫元素反应：与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；,7.红外光谱特征,53,54,专属性反应,二、鉴别试验,55,56,硫色素,2H,57,VitB1,H+,H+,H+,H+,58,S元素反应,Cl-反应,H+,59,三、含量测定,喹那啶红亚甲蓝(紫红天蓝),（一）,非水溶液滴定法,60,UV法,（二）,61,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,ChP,1,1,（每ml）相当于标示量的,62,注意,维生素1的紫外吸收峰随溶液的pH变化而不同：pH2.0时，最大吸收波长在246nm处；pH7.0时，2个吸收峰：232233和266；可采用差示分光光度法测定其含量；,63,NaOH,（三）,硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应,64,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇,+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇,S,d,A,b,对照液,供试液,d,S,b,A,C样,-,-,=,C标,（1）灵敏度高，线性范围宽（2）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂分析，体液分析等。,65,硫色素荧光法特点,为维生素B1的专属性反应，可用于维生素B1及制剂的含量测定；不受氧化破坏产物的影响，结果较准确；但操作比较复杂，受干扰因素多；氧化剂除了铁氰化钾外，还可以使用氯化汞或者溴化氰；,66,第三节维生素C的分析,L抗坏血酸,（一）结构,二烯醇内酯两个手性碳（C4,C5）,67,C3OH的pKa=4.17,C2OH的pKa=11.57,2.酸性,一元酸,（二）性质,1.溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,68,L(+)抗坏血酸活性最强,手性C（C4、C5）,3.旋光性,*,*,69,有活性,有活性,无活性,4.还原性,二烯醇结构,70,与碱反应,5.水解反应,71,72,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,6.具糖的性质,73,7.UV特征,nm,nm,max,OH,max,H,265,l,243,l,-,+,74,利用还原性：与氧化剂的反应,75,（一）与AgNO3反应,（二）与2，6-二氯靛酚反应,氧化型,玫瑰红色,76,（玫瑰色）,（无色）,77,与碱性酒石酸铜反应,USP,与KMnO4反应,（三）与其他氧化剂反应,（四）糖类的反应,78,（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,79,BP,0.01mol/LHCl,（五）UV,80,三、杂质检查,（一）溶液的澄清度与颜色检查,（二）铁、铜离子的检查,维生素C原料药片剂注射剂,维生素C原料药,糠醛缩合呈色,催化Vc氧化分解,原子吸收法,81,(三)草酸的检查,草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对Vc的原料，尤其是注射液，要进行草酸检查；加入CaCl2，比浊法；,82,指示剂淀粉指示液,（一）碘量法,四、含量测定,原理：利用Vc强的还原性,H+,83,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。,2、方法,原料药,84,（2）酸性环境稀醋酸,（1）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,3、讨论,85,4.附加剂干扰的排除,片剂过滤,86,87,(二)2，6-二氯靛酚滴定法,1、原理,2、方法,自身指示终点法,88,（2）快速滴定2min内,（1）酸性环境HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）亦可剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,3、讨论,89,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,专属性强，多用于含Vc的制剂和食品的分析,（5）优点,90,（三）高效液相色谱法,血浆中维生素C的测定标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存,91,第四节维生素D的分析,一、结构与性质,（一）结构,维生素D2(麦角骨化醇),维生素D3(胆骨化醇),92,1.性状无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味。2.溶解性宜溶于有机溶剂，在植物油中略溶，在水中不溶。3.不稳定性含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。,（二）性质,93,4旋光性维生素D26个手性碳原子维生素D35个手性碳原子5显色反应甾类化合物氯仿溶液黄色红色紫色绿色6紫外吸收特性无水乙醇265nm维生素D2为460490维生素D3为465495,醋酐硫酸,E,1cm,1%,E,1%,1cm,94,二、鉴别试验,（一）显色反应,1与醋酐-浓硫酸反应,氯仿溶液黄色红色紫色绿色,醋酐硫酸,2与三氯化锑反应,本品,1,2-二氯乙烷,三氯化锑试液,橙红色,粉红色,95,3其它显色反应,维生素D,三氯化铁,橙黄色,二氯丙醇乙酰氯,绿色,（二）比旋度鉴别,无水乙醇溶液,维生素D2,比旋度为102.5至107.5,维生素D3,比旋度为105至112,96,（三）其它鉴别方法,薄层色谱法、HPLC法制备衍生物测熔点,紫外、红外吸收光谱,（四）维生素D2、D3的区别反应,维生素D2,维生素D3,96%乙醇,10ml,取0.1ml,乙醇1ml和85%硫酸5ml,红色max570nm,黄色max495nm,97,三、杂质检查,（一）麦角甾醇的检查,维生素D290%乙醇溶液,洋地黄皂苷溶液,不得发生浑浊或沉淀,98,（二）前维生素D的光照产物,99,四、含量测定,正相高效液相色谱法,（一）维生素D测定法,含量以单位表示每单位相当于维生素D0.025g,注意：计算的是维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量,100,测定在半暗室及避免氧化的情况下进行,第一法：无干扰杂质,第二法：有VA及其他杂质干扰,第三法：用第二法时，前VD峰受杂质干扰仅VD峰可分离,101,第一法,内标物：邻苯二甲酸二甲酯,色谱条件及系统适用性试验：,填充剂：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）检测波长：254nm,无干扰杂质,102,维生素D3,光照,前维生素D3反式维生素D3维生素D3速甾醇D3,与维生素D3的比保留时间,分离度,1.0,1.0,溶液组成,先后进样5次，维生素D3峰面积的RSD2.0%,0.50.61.01.1,系统适用性试验,103,校正因子测定：,维生素D的校正因子:f1=Asmi/Aims,前维生素D折算成维生素D的校正因子:,f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）,含量测定：计算维生素D及前维生素D折算成维生素D的总量,mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As,104,第二法,第一步：皂化提取,有VA及其他杂质干扰,105,第二步：分离收集,供试品溶液A,RP-HPLC,维生素D前维生素D维生素A及其他杂质,叠峰,分离,收集,供试品溶液B,维生素D及前维生素D,第三步：按第一法进行含量测定（内标法）,挥干,内标的正己烷溶液,溶解,106,第三法,第一步：皂化提取,同第二法得供试品溶液A,第二步：,供试品溶液A,RP-HPLC,维生素D前维生素D维生素A及其他杂质,叠峰,分离,供试品溶液C,收集,挥干,异辛烷溶解,90、1.5h,挥干,正己烷溶解,前维生素D维生素D,第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量,用第二法时，前VD峰受杂质干扰,107,苯并二氢吡喃醇,第五节维生素E的分析,一、结构与性质,（一）结构,108,*,*,*,109,生物效价右旋体：消旋体=1.4：10,（天然品）,（合成品）,dl生育酚醋酸酯,110,（二）性质,1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水,4、UV：乙醇溶液中UV284nm,2、水解性：酯键易水解,3、氧化性：无氧条件下十分稳定，200度也不被破坏；,111,（一）,硝酸反应,橙红色,二、鉴别试验,112,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,113,三氯化铁联吡啶