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(农产品加工及贮藏工程专业论文)中华寿桃采后生理及果肉褐变机理的研究.pdf.pdf 免费下载
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文档简介
中文摘要 本文以优良晚熟桃品种中华寿桃为试材,从采后桃果肉褐变入手,研究了中华寿桃 采后耐藏性,影响桃果肉褐变的主要因素,对中华寿桃果肉褐变关键酶一多酚氧化酶进 行了分离、纯化和酶学性质分析,对中华寿桃果肉褐变天然底物进行鉴定,研究了乙烯 受体抑制剂1 甲基环丙烯( 1 - m c p ) 在中华寿桃冷藏保鲜上的效果,以及1 m c p 处理 所引起桃果实生理生化代谢和果肉细胞结构变化,探讨了中华寿桃果肉褐变机理和贮藏 保鲜技术,研究结果可为中华寿桃保鲜提供最佳技术条件。 中华寿桃属于典型的呼吸跃变型果实,在室温和低温贮藏过程中均有呼吸和乙烯释 放高峰,中等成熟度中华寿桃的冰点约为2 1 ,冻结点约为一5 2 。在冷藏过程中, 中华寿桃果肉褐变严重。在3 2 冷藏5 0 天和室温1 6 3 天货架期后,2 0 0 0 年中华寿 桃果肉褐变指数为7 0 ;在2 1 冷藏5 0 天和室温1 6 3 天货架期后,2 0 0 1 年桃果 肉褐变指数为8 0 ;桃果肉褐变严重地影响了桃果的质量。 影响中华寿桃果肉褐变的因素很多。成熟度对桃果褐变影响较大,成熟度低( 果肉 硬度平均值为6 8 k g - c m 4 ) 与高( 果肉硬度平均值为4 7 k g c m 2 ) 的果实在3 2 冷藏 5 0 天和室温1 6 3 天货架期后果肉褐变指数分别为1 3 3 和5 3 3 ,成熟度低的果实几 乎不发生褐变,但感官评定结果较差;1 低温冷藏桃果在冷藏5 0 天和室温1 6 3 天 货架期后果肉褐变指数为2 0 ,果肉褐变较轻,但果实表面出现水浸状斑点;气调贮 藏( c 0 2 :o 5 ,0 2 :l 5 ) 的桃果在3 2 冷藏5 0 天和室温1 6 3 天货架期后果 肉褐变指数为3 3 3 ,抑制果肉褐变效果较好感官评定结果也较好;高浓度二氧化碳 限气贮藏( c o :o 0 、0 2 :0 5 2 l ) 的桃果在3 2 冷藏s o 天和室温1 6 3 天货 架期后果肉褐变指数为3 3 3 ,高c o :未造成果肉严重褐变,但感官评定效果较差。间 歇升温各处理未能减轻果肉褐变,间歇升温处理l 即每间隔1 0 d 升至室温( 1 6 2 ) 2 4 小时、处理2 即每间隔1 5 d 升至室温2 4 小时、处理3 即每间隔2 0 d 升至室温2 4 小时、 处理4 即每间隔1 0 d 升至室温4 8 小时的果肉褐变指数分别为6 0 0 、8 0 o 、7 3 3 和 8 0 0 ,而对照为7 0 0 ,对于间歇升温处理在晚熟桃保鲜上应用需要进一步验证。 1 m c p 能够抑制贮期桃果果肉褐变。1 0 0 0 n l l 。1 1 m c p 处理的中华寿桃在冷藏5 0 犬和室温1 6 3 天货架期后果肉褐变指数较低,2 0 0 0 年( 3 2 ) 与2 0 0 1 年( 2 1 ) 分别为2 6 7 和2 0 ,褐变指数显著低于气调贮藏;1 m c p 处理推迟了中华寿桃冷藏 期间呼吸和乙烯释放高峰的到来,1 m c p 刺激了贮藏初期氨基环丙烷1 。羧酸( a c c ) 的含量增加,延缓了贮藏前期a c c 氧化酶( a c o ) 活性r 降;阻l e 了维生素c 和总酸 等营养物质的降解,保持了果肉较高硬度:1 m c p 能够抑制冷藏t l 亓期果肉多酚氧化酶 v i i ( p p o ) 活性,刺激了苯丙氨酸解氨酶( p a l ) 活性,抑制总酚的降解;l - m c p 处理提 高了桃果肉超氧化物歧化酶( s o d ) 、过氧化物酶( p o d ) 和过氧化氢酶( c a t ) 等植 物衰老抗性酶活性。抑制了活性氧代谢产物氢过氧化物的生成,在一定程度上提高了采 后桃果实抗性,同时,1 m c p 能够抑制丙二醛( m d a ) 和游离脯氨酸的含量的升高, 延缓了膜脂过氧化,保持了果肉细胞结构的完整性,延缓了桃果肉细胞内容物的分解, 保护了p p o 与酚类物质的区域化分布,抑制了桃果酶促褐变的发生;l m c p 结合防腐 剂、包装方式的综合保鲜试验结果表明,分别使用浓度为7 5 0 n l l - 。1 - m c p 和浓度为 1 0 e m 。t x z 对预冷后的中华寿桃进行熏蒸2 4 小时然后使用o 0 5 m m 厚聚乙烯袋进行 包装的综合保鲜技术路线贮藏效果较好,在2 l 冷藏5 0 天和室温1 6 3 天货架期后 果肉褐变指数为2 0 。一定浓度的l m c p 在中华寿桃冷藏保鲜方面具有较好的效果。 通过使用3 0 硫酸铵盐析、p h e n y lt o y o p e a r l 柱层析、9 0 硫酸铵再次盐析、s e p h a d e x g 2 5 、d e a e s e d h a r o s e 柱层析等分离步骤对中华寿桃果肉p p o 进行分离纯化,结果从 中华寿桃果肉中分离得到电泳均一的p p o ,p p o 纯化倍数为1 l o 倍,产率为o 3 6 ,p p o 的分子量约为6 6 o k d ;对纯化的酶进行酶学性质分析,结果表明中华寿桃果肉6 6 k dp p o 的最适d h 值约为6 5 ,最适反应温度为6 0 左右,该酶对温度有较强稳定性,其最适 作用底物为绿原酸、儿茶酚和对羟基苯甲酸,f e s o 。、e d t a 和v c 等化合物可以抑制p p o 活性,c a c l 2 、c u s 0 4 和m n s 0 4 等则起促进作用:通过使用高效液相色谱( h p l c ) 分 析冷藏过程中桃果肉不同种类游离酚酸的含量变化,本研究认为中华寿桃果肉的天然褐 变底物为绿原酸和儿茶酚。 总之,采后中华寿桃果肉容易发生褐变,衰老是引发中华寿桃果肉褐变的主要原因。 在贮藏过程中,桃果衰老,自身抗病性和耐贮性不断下降,活性氧代谢失调,过氧化物 积累,p p o 活性增加,膜脂过氧化加剧,液泡膜和细胞内容物分解,p p o 与酚类物质 的区域化被打破。它们相互作用导致桃果酶促褐变。影响中华寿桃果肉褐变的主要因素 是内部因素即高活性的p p o 与一定含量的酚类物质,它们是桃果酶促褐变的前提;衰 老等外部因素对果肉褐变起辅助作用,它们引起细胞结构伤害,打破p p o 与酚类物质 区域化分布。一定浓度l - m c p 能够显著地抑制冷藏后期中华寿桃果肉褐变,延缓冷藏 桃果的衰老,增加桃果的抗病性和耐藏性。? 厂 关键词中华寿桃:果肉褐变;多酚氧化酶;1 甲基环丙烯 v i i i a b s t r a c t 。z h o n g h u a s h o u t a o p e a c h ( p ,肼蚶p 口坩f c 口l ) f r u i t s w h i c ha r ef a m o u sa n d e x c e l l e n ti a t er i p ep e a c hw e r ea p p l i e dt oj n v e s t i g a t et h e i rp h y s i o l o g i c a ic h a n g e st h r o u 曲o u t s t o r a g ep e “o d t h em a i nf a c t o r sr e s u l t i n gi n f l e s hb r o w n i n go fp e a c hf r u j t sw e r es t u d i e d d u r i n gc o l ds t o r a g ep e r i o d t h ep o l y p h e n 0 1o x i d a s e ( p p o ) i nt h ep e a c hn e s hw a s e x t r a c t e d a n dd u “f i e d t h ec h a r a c t e r so ft h ee n z y m ew e r ea n a l y z e d t h en a t i v es u b s t a n c e so ff l e s h b r o w n i n go fp e a c hf r u i t s w e r ei d e n t i f i e db yh i g h p r e s s u r el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) t h es t o r a g eq u a l i t y ,t h ec h a n g e so fp h y s i o l o g i c a la f l db i o - c h e m i c a la n dc e i lu l t r a s t r u c t u r ei n h a r v e s t e d p e a c h f r u i t st r e a t e d b y1 m e t h y l c y c l o p m p e n e ( 1 一m c p ) a se t h y i e n er e c e p t o r i n h i b i t o rw e r es t u d i e ds y s t e m a t i c a l l y t h em e c h a n i s mr e s u l t i n gi nn e s hb r o w n i n ga n ds t o r a g e t e c h n i q u e si n z h o n g h u a s h o u t a o p e a c h e sw o u l db es t u d i e dd ur i n gc o l ds t o r a g e t h e s t u d yw o u i df i n do p t i m u mc o n d i t i o no f p e a c h e ss t o r e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ep e a c ha sac i i m a c t e r i cf r u i th a do b v i o u s l yp e a k so f r e s p i r a t i o nr a t e a n de t h y l e n e p r o d u c t i o nd u r i n gs t o f a g e t h ef r e e z i n g p o i n t o fm i d 。r i p e p e a c h e sw a s _ 2 1 p e a c h e sw o u l db ei n j u r e db yf r o z e nu n d e rt h i st e m p e r a t u r e t h en e s h b r o w n i n go f t h ep e a c h e sw a ss e v e r i t yd u r i n gc o l ds t o r a g e t h eb r o w n i n gi n d i c e si np e a c h e s a e s hw e r e7 0 b yt h ee n do fs h e l fl i f e ( 3d a y so fs t o r a g ea t1 6 2 r o o mt e m p e r a t u r e ) a r e r5 0d a y s o f c o i ds t o r a g ea t3 2 i n2 0 0 0 ,t h o s e i n2 0 0 1w e r e8 0 a t2 l al o to ff a c t o r sr e s u l t e di nt h en e s hb m w n i n go fp e a c hf r u i t s d u r i n gc o i ds t o r a g e m a t u f i 坶a f f e c t s t h e s t o r a g eb r o w n i n gd i r e c t l y t h eb r o w n i n g i n d i c e si n p e a c h e s f r u i t h a r v e s t e da tg r c e nm a t u r es t q g e ( 1 0 w - m a t u r i t y ,n e s hf i 丌n n e s si s6 8 k g c m 。2 ) a n dr e dm a t u r e s t a g e ( h i g h - m a t u r i t y ,f l e s hf i r m n e s si s4 7 k g c m 2 ) w e r e1 3 3 a n d5 3 3 s e p a r a t e l yb yt h e e n do fs h e l fl i f c a l t h o u g h g r e e n m a t u r e p e a c h e sh a dn o t a l m o s th o i d i n gb r o w n e d ,t h e y c o u l d n tr i p e nn o r m a l l y _ t h en e s hb r o w n i n gi n d i c e so fp e a c h e sw h i c hw e r es t o r e da t - 1 o 1 w e r e2 0 a n e r3d a y ss h e l fl i f ed u r j n g5 0d a y so fs t o r a g e t h ed e g r e eo fn e s hb r o w n i n g j nt h i sc o n d i t l o nw a sl i g h t ,b u t c h 1 1 i n gi n j u r ys y m p t o m sw h i c ht h e s u r f a c eo fp e a c h e s 8 p p e a r e d t h e s p o t a s w a t e o g g i n g w e r ef o u n di nf r u i t ss t o r e da tt h i s t e m p e r a t u r e t h e b r o w n i n gi n d i c e si np e a c h e so fc o n t r 0 1 l e da t m o s p h e r es t o r a g e ( c a ,c 0 2 :0 5 ,0 2 :1 5 ) w e r e3 3 3 a r e r3d a y ss h e i f l i f ed u r i n g5 0d a y so fs t o r a g ea t3 2 t h en e s hb r o w n i n g i n d i c e so fp e a c h e si n h i g h c o n c e n t r a t i o no fc a r b o n d i o x i d e ( c 0 2 ) w h i c ht h e m a x i m u m c o n c e n t r a t i o na c h i e v e d2 0 o fm o d 讯e da t m o s p h e r es t o r a g e ( m a ) w e r e3 3 3 a f t e rs h e l fl i f e d u r i n g5 0d a y so fs t o r a g ea t3 2 t h eh i g hc o n c e n t r a t i o no f c 0 2 ( c 0 2 :0 2 0 、0 2 : o 5 2 l ) c o u l d n tb r l ”gs e v e r e n e s hb r o w n i n g t h et r e a t m e n t s o fi m e m i t t e n tw a r m i n g d u “n gc o l ds t o r a g ec o u l d n ti n h i b i tn e s hb r o w n i n g i nt h i sr e s e a r c h t h eb m w n i n gi n d i c e so f p e a c h e sn e s hi nd i f f e r e n tw a m i n gt r e a t m e n t s ( c o n d i t i o n s o fi n t e r m i t t e n tw a r m i n g :1 0 “d ,r o o m t e m p e r a t u r e ,2 4 h o u r ;1 5 “d ,r o o mt e m p e r a t u r e ,2 4 h o u r ;2 0 “d ,r o o mt e m p e r a t u r e ,2 4 h o u r ;1 0 “ d ,r o o mt e m p e r a t u r e ,4 8 h o u r ) w e r e6 0 ,8 晰,7 3 3 ,a n d8 0 s e p a r a t e l ya r e rs h e l fl i f e d u r i n g5 0d a y so fs t o r a g e a t3 2 t h ea p p l i c a t i o no f t h ei n t e m m e n tw a m i n gt r e a t m e n tf o r s t o r a g eo f t h el a t e r i p ep e a c h e ss h o u l d t h e r e f o rb er e s t u d i e d t h et r e a t m e n to fl m c pc o u l di n h b i tt h en e s hb r o w n i n go fp e a c hd u r i n gc o l ds t o r a g e e 仃e c t i v e l y t h ef l e s hb r o w n i n g i n d i c e si np e a c h e st r e a t e db y1 0 0 0n l l 。1 一m c pw e r e2 6 7 a n d2 0 s e p a r a t e l ya f t e rs h e l fl j f ed u r i n g5 0d a y so fc o l ds t o r a g ei n2 0 0 0a n d2 0 0 】t h e p e r f o r m a n c eo fs t o r a g ei np e a c h e s t r e a t e db y1 - 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m c p i n c r e a s e dd u r i n gc o l ds t o r a g ea t2 1 t h ed e c r e a s eo fc o n t e n t so ft o t a lp h e n o l l np e a c h e s t r e a t e db y1 - m c pw a sd e l a y e dd u r i n gc 0 1 ds t o r a g ea t2 1 t h ea c t i v i t i e so fa n t i o x i d a n t e n 纠m es u c ha ss u p e m x i d a s ed i s m u t a s e ( s o d ) p e r o x i d a s e ( p o d ) a n dc a t a i a s e ( c a t ) i n p e a c h e st r e a t e db yl m c pi n c r e a s e da b o v et h o s eo f c o n t r o ld u r i n gc o i ds t o r a g ep e r i o d t h e c o n t e n t so fh y d r o p e r o x i d e s ( h o o ) w e r el o w e rt h a nt h o s eo fi nc o n t r o ld u r i n gc o l ds t o r a g ea t 2 l t h ec o n t e n t so ff r e ep r 0 i i n eo rm d ai np e a c h e sd e c r e a s e dd u r n gc o l ds t o r a g op e r i o d a t2 1 t os o m ee x t e n t t h en e s hc e l iu l t r a s t r u c t u r ei np e a c h e st r e a t e dw i t hl - m c pw a s m o r ei n t e g r a t et h a nt h a ti nc o n t m lw h e ns t o r e da t5 0d a y s d i s i n t e g r a t i o no fc e l lo r g a n e l l ew a s d e l a y e d b yl - 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n z h o n g h u a s h o u t a o p e a c h f m i t sw e r ei n t e r i o rf h c t o ri n c l u d i n gh i g hl e v e lo fp p o a n d p h e n o ls u b s t a n c e t h e yw e r et h ep r e c o n d i t i o no fe n z y m eb m w n i n gi n p e a c hf r u i t s t h e s u b o r d i n a t ef 赴t o r sw e r ee x t e r i o rf 乱t o r s - s e n e s c e n c e s e n e s c e n c eb r o k er e 叠i o n “i s a t i o n so f p p oa n dp h e n o ls u b s t a n c e w h i l e1 - m c pt r e a t m e n tc o u l di n h i b j t p e a c h e sn e s hb r o w n i n g e f r e c t i v e l yb yt h ee n do f c o l ds t o r a g e 1 一m c pt r e a t m e n td e i a y e ds e n e s c e so fp e a c hf r u i t sa n d e n h a n c e dd i s e a s er e s i s t a n c ea n d s t o r a g ea b i i i t y k e yw o r d s :z h o n g h u a s h o u t a o p e a c h :f i e s h b r o w n i n g ;p o l y p h e n o lo x i d a s e l m e t h y l c y c l o p m p e 英文缩写表 a b b r e v i a t i o n 1 - m c p 1 - m e t h y l c y c l o p m p e n e 2 5 n b d2 ,5 - n o r b o r n a d i e n e a c c 1 a m i n o c y c l o p r o p a n e l c a r b o x y l i ca c i d a c oa c c o x i d a s e a o aa m m o n i ao x i d ea c e t i ca c i d a sa m m o n i u ms u i f 乱e c a c o n t m l i e da t m o s p h e r es t o r a g e c a tc a t a l a s e c kc o n t r o l c p c y c l o p m p e n e d a c p d i a z o c y c i o p e n t a d i e n e d e a e d i e t h y l a m i n o e t h y l d m c p 3 ,3 - d i m e t h y l - c y c l o p e n e f wf r e s hw e i g h t h o o h y d r o p e r o x i d e s k g f wk 1 0 9 r a m f r e s hw e i g h t m am o d m e da t m o s p h e r es t o r a g e m d am a i o n d i a l d e h y d e n b tn i t r o b i ut e t r a z o l i u m o d o p t i c a ld e n s i t y p _ a g e p o i y a c r y l a r n i d eg e ie l e c t o p h o r e s i s p a lp h e n v l a l a n i n e 啪m o n i a - l v a s e p b sp h o s d h a t e _ b u f f b r c ds a l i n e p ep o i v e t h v l e n e p g p o l y g a l a c t u r o n a s e p m s fp h e n v l m e t h a ns u l f o n v ln o r i d p o dp e r o x m a s e p p o p o l y p h e n o lo x i d 鹊e p v p p o l y v i n y l p y r r o l i d o n e r hr e l a t i v eh u m i d i t v s d ss o d i u md o d e c v ls u l f a t e s o ds u d e r o x i d ed i s t m u a s e 1 、at i ”a t a b l ea c i d t i st 1 0 t a is o l u b es u b s t a n c e v cv i t a m i n c v 1 甲基环丙烷 2 ,5 降冰片二烯 1 氨基环丙烷1 羧酸 a c c 氧化酶 氨基氧乙酸 硫酸铵 气调贮藏 过氧化氢酶 对照 环丙烯 重氮环戊二烯 二乙氨乙基 3 ,3 二甲基环丙烯 鲜重 氢过氧化物 千克鲜重 自发限气贮藏 丙二醛 氯化硝基四氮唑蓝 光密度 聚丙烯酰胺凝胶电泳 苯丙氨酸解氨酶 磷酸盐缓冲液 聚乙烯 多聚半乳糖醛酸酶 苯甲基磺酰氟 过氧化物酶 多酚氧化酶 聚乙烯吡咯烷酮 相对湿度 十二烷基硫酸钠 超氧化物歧化酶 可滴定酸 可溶性固形物 维生素c 主里窒些查堂堕主兰垡丝塞! ! ! 丝:! ! 些壹! ! 墨亘生里墨墨塑塑壅垫堡堕墅塞 月l j 吾 桃( p r “n w 即 f c d ) 是深受人们喜爱的水果之一。不仅风味独特,肉质细腻,而且 营养丰富。我国北方的气候条件适合于桃树的栽培。近年来桃的产量逐年增加。据统计, 1 9 9 6 年全国桃树栽培面积达4 2 0 万亩,桃总产量达2 3 2 万吨,比1 9 8 6 年增加5 倍:1 9 9 8 年新型珍稀特晚熟品种中华寿桃在山东省莱西市的栽培面积达5 千多亩( 朱更瑞,2 0 0 0 : j 国琦,1 9 9 9 ) 。桃的产量在增加,新的早、中、晚熟的优良品种不断出现,延长了桃 的供应期,丰富了水果的供应。桃的采收季节变化较大,早、中熟的一般在6 7 月成 熟,晚熟的可延迟到9 1 0 月份,个别桃如冬桃可在1 1 月份采收;采收期不同桃果的 耐藏性和抗病性差异很大,早熟桃果不耐贮藏,中、晚熟桃果耐藏性较好。 中华寿桃是近年来新培育出的优良特晚熟不溶质粘核桃品种,1 0 月中旬采收,属 冬桃自然芽变的新品种,在我国山东省被广泛种植。该桃因其果个硕大( 单果平均重3 5 0 克) ,外观艳丽,果肉乳白色细嫩、不溶质、风味香甜无杂味,品质极优等优点而被 迅速种植。中华寿桃的营养价值极高,有清脑、和胃、健脾、润肠、软化血管和降低血 脂等多种功能。据测定:果实中可溶性固形物含量为1 8 2 6 ,总糖含量为1 4 6 ,总 酸的含量为0 0 9 ,糖酸比为1 5 l :1 ,维生素c 含量为7 m g 1 0 0 9 。此外,还含有蛋 白质、脂肪、维生素b l 、维生素b 2 等对人体具有保健作用的营养成分( 自立新,2 0 0 0 ; j 国琦1 9 9 9 :马作寿,1 9 9 8 ) 。 由于采收时气温较高,桃采后极易腐烂变质。低温贮藏可以抑制桃果乙烯释放率, 推迟桃果乙烯高峰的到来( 汪沂,2 0 0 0 ) ,在一定程度上解决了腐烂问题。但在桃果冷 藏过程中,存在的主要问题是果肉褐变、果实软化、绵化及风味丧失等( 杜建厂,2 0 0 0 : 刘彩莉,1 9 9 2 ) 。桃是冷敏性的水果,极易发生冷害,桃的外观虽然完好,内部却已出 现果肉褐变现象,严重地影响了桃的品质和风味,也就影响了桃的经济价值。中华寿桃 极易褐变,常温下1 0 天、冷藏条件下2 0 天,果心变成黑灰色,病因不明,始终没有找 到好的解决办法( 丁国琦,1 9 9 9 ;刘志坚,2 0 0 0 ) ,这就严重地限制了该桃的发展。1 9 9 9 年北京空港果蔬仓贮中心贮藏1 0 吨中华寿桃,由于贮藏后期果肉褐变而造成较大的经 济损火。 前人对桃果实采后褐变已经进行了较多研究( 王庆国,1 9 9 2 :陈秀芳,1 9 9 4 ;李丽 萍,1 9 9 5 :冯妍,1 9 9 6 ) 。一般认为桃果肉褐变是由于多酚氧化酶( p p o ) 催化酚类物质氧 化形成醌类化合物,从而导致褐变。目前防止桃果肉褐变的主要方法有采前、采后化学 药荆处理、间歇升温处理及气体成分调节等。这些方法在一定程度上可以防i r 桃果肉褐 变,j :f :! 目前还未见对中华寿桃果肉褐变机理进行系统研究的报道。由r 机理不清楚,防 前言 止桃果肉褐变就具有一定的盲目性,另外对于中华寿桃的综合保鲜技术的研究也未见报 道。中华寿桃的果肉褐变机制及综合保鲜技术的系统研究,对控制该桃贮期褐变,提高 该桃的保鲜质量,丰富桃果采后生理和果实褐变机理等都具有重要的意义。 桃果属于典型的呼吸跃变型果实,在采后贮藏过程中具有明显的呼吸高峰和乙烯释 放高峰,高峰过后桃
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