（发酵工程专业论文）抗哮喘免疫乳的研究.pdf

! ! ! ! 竺型! ! ! 型! ! 型型竺! ! 璺= 型! ! 竺竺竺兰! ：! ：竺! 兰竺型! 竺竺竺坚!：! ! 型! ! ! 璺 t h es t u d yo na n t i a s t h m a m m u n o mi l k a b s t r a c t t h ea s t h m ai s e p i d e m i ci nm a n yp l a c e so fc h i n a ，as u r v e ya b o u tt i l ea s t h m a n d i c a t e st h a tt h ei n c i d e n c eo fa s t h m ar a i s e dr e c e n t l y i na d d i t i o n t h e r ei sap r o b l e m w i t ht h em e d i c a t i o na n dt h em e t h o dt h a tw a su s e dt ot r e a ta s t h m a i tb r i n g sd i f f i c u l t y t ot h ep r o p e rt h e r a p yo na s t h m a s o ，i ti s n e c e s s a r yt o f i n dn e wm e d i c a t i o na n d m e t h o d h ei m m u n o m i l ki san e wh y g i e n i c a ll b o dw h i c hc a l li l o to n l yo f f e l ln u t r i t i o r lt o p e o p l eb u ta l s oc a r lp r o v i d et h ei n , a i o ra n t i m i c r o b i a lp r o t e c t i o na g a i n s tn i i c t o b i a li n l i 二c t i o na n d c o n l e rap a s s i v ei n u l l u n i t yt op e o p l e w eh a v e i m m t l n i z e dt i l ep l e g l l a n tc n 、w i t ha n t i ；i s t h t l l a v a c c i n ea n dg o t t e ni l n m u n em i l k w ea l s oh a v et e s t e dt h e s ej l l l f l ll 刈) h 【l i i 1 h 1p o l e n c x ni l n l l l t l a c m i i kw i t l le l i s aw eh a v eg o t t e nat e c h n o l o g yt op l o d u c td l yw i l e yw h i c hc o t l c i t i t c j , 【r , c p a r a l c f a t t i n e s sa n dc a s e h lf r o mi m m u n o m i l kb yc e n t r i f u g a le f f e c t f r e e z e - dr y i n ga n ds ot i l l h 。- , t u d i e d h ea s s i m i l a t i o no l i m m u n o g l o b u l i nw i t hr a b b i t t h er e s u l ti n d i c a t e st h a ti n m l u n o g l o b u l i i ti sn o ta n u t r i t i o n a lp r o t e i nb u taf u n c t i o n a lp r o t e i nw h i c hc a l lp r o v i d ep r o t e c t i o nt op e o p l e w ea l s oh a v ea s t u d y0 1 1t i l ec u r a t i v ee f t e c to fa n t i a s t h m ai m m u n o m i l k f h er e s u l ti n d i c a t e st h a t i th a se f f e c to n p r o t e c ta n dc ur ea s t h m aw eh a v eap r i m a r ys t u d yo nt h es e p a r a t i o no ft g gb ys a l t i n g ( ) l i t k e yw o r d s ：a n t i a s t h m ai m m u n o m i l kd r yw h e y c u r a t i v ee f f e c ta s s i m i l a t i o n s e p a r a t i o na n d p u r i f i c a t i o n 天日嚏学院硕士学位论文前言 第一章前言 1 1 麓疫乳的研究进展 1 1 免疫乳的概念 赣乳动物的乳汁是机体免疫协调作用分泌产物之一。所谓免疫乳是指给哺乳 动物s 如q 二，山羊等) 选择性地接种一些能够引起人或动物疾病的细菌、病毒或 其他謦来抗原，刺激机体产生免疫应答以分泌特异性抗体到乳中，这种含特异抗 体的萋叫免疫乳。这一过程称为高度免疫。在此过程中，机体的免疫系统被激发 并持缕不断地分泌抗体到乳中。这就是免疫乳生产的基本原理。 母乳不仅可以为新生动物提供营养，而且还可以使其获得被动免疫。在出生 后的一段时间内免受病原微生物的感染。许多研究表明：一种动物的乳汁不仅可 咀为翼自己的幼仔提供免疫保护而且还可以为其他不同种的动物提供免疫保护。 这是稳喟其他哺乳动物( 如牛，, l l 羊等) 的免疫乳为人类健康服务的埏础。山抗 原刺激机体免疫应答而产生的抗体可以与抗原发生特异性的荆j 互作川仃将蚶l 和，利用引起人或动物疾病的病原微生物免疫哺乳动物( 如牛，l f l 羊等) 【| j 住j l 乳中获得特异抗体，再用这些特异抗体中和人或动物体内的病原微生物。这足利 用免疫乳预防和治疗疾病的根据。 1 1 2 免疫乳的发展简史 “免疫乳”这个名词是被誉为“免疫学之父”的德国科学家h l l ll i h r c h 在1 8 9 2 年首先提出并使用的。他发现：母鼠通过乳汁向幼子传递被动免疫，使 之增强了抗病毒能力。在其后5 0 多年间有许多科学家都致力于免疫乳的研究， 1 9 0 6 年，v b e h r i n g 提出给婴儿饮用免疫乳预防结核病的设想。l q l 6 年，科学 家发现：在牛乳房淋巴问隙接种流产布氏杆菌( b r u c e l 】aa b o rl u h ) ，接种2 4 小时后，乳汁中发现该菌的抗体；同年，发表了有关免疫乳和添加免疫血清的 山羊乳服用后治疗效果良好的报道。在此期间人们对免疫乳的认识还存在着不 足。1 9 2 3 年前后，一些权威性研究报告认为母亲初乳抗体对婴儿的免疫保护作 用可以忽略。1 9 2 8 年，f l e m m in g 发现青霉素后，以强化机体自身免疫力为宗旨 的免疫乳研究受到冷落，疾病的防治研究由天然抗体开发转到抗生素合成上。 1 9 5 0 年，美国明尼苏达大学教授、著名乳品科学家w t s c n 等人重新提出免 天津禹学皖硕士学位论文前言 疫乳的重要意义。他们明确指出，牛乳房结缔组织乳腺小泡间隔处存在能够产 生抗体的细胞。经乳头通道注射灭活细菌，会在乳汁中发现相应特异抗体。钙 外的研究小组发现，经山羊乳头通道注射b 族病原链球菌也会局部产乍免疫应 答。同年，对牛进行系统免疫后，在乳腺发现破伤风( h i _ l r i i s ) 抗体。此问研 究表明，局部免疫应答与系统免疫应答所产生的抗体不同。 2 0 世纪j 0 年代，科学家发现母乳喂养的婴儿呼吸道感染发病率较低，即人 乳的抗体对婴儿的抗病能力有贡献，从而再次提出了母乳喂养的重要性。经过 数年的研究，1 9 5 5 年l e i ：- s er l 等人重新整理并提出了利用免疫乳控制人体疾病 的设想，认为从产生特异性抗体角度看，通过乳头通道的局部免疫要优r 机体 系统免疫，首次使用了“通过乳头免疫”这一术语。p o t e f s c n 等人的研究得出 两个重要结论：( 1 ) 通过免疫作用，机体分泌进入乳汁中的特异性抗体使免疫 乎l x , 1 人体健康全面有益：( 2 ) 抗体经过胃肠道时，以完整形式! 段收的数量已经 足以发挥其功效。他们认为乳抗体的吸收是由于大耸含有高浓度抗体的乳蛋f ，i 进入胃肠道“淹没”了蛋白酶因而抗体分子可能以完整的形式吸收。 阶t s o n 等人发表了免疫乳改善类风湿性关节炎和过敏症( 花粉热) 的l 陆， 床研究报告，并于1 9 6 9 年在美国申请了免疫乳应用专利。饮用免疫乳的痫人， 芙节疼痛或花粉过敏状况均大为缓解。他们的研究多为泌乳1 ( ) ( 1 内的乳汁，随 泌乳期延续，乳汁中的抗体含量逐步下降。这说明乳头通道免疫力+ 法产7 t - 机体 的效率不高。实际上，一些研究发现系统免疫产生抗体的效果至少与局部免疫 相同。 但是，i ) e t e r s e n 的观点再次受到质疑。一些学者认为乳汁抗体以其提出的 肠道吸收机理而发挥被动免疫作用缺乏足够证据，甚至是不可能得。6 ( 】年代中 期p e t e r s e n 等人创办了免疫乳杂志，力图推动免疫乳应用可行性及发展前 景的研究，但后来新的实验数据较少，使免疫乳的研究又一次陷入低潮。 2 0 世纪6 0 年代，s t o l l e 首先改进了免疫方法一，在s t 0 1c 实验室工作的 科学家研制出一定量的疫苗，并通过肌肉注射的方法对牛进行系统免疫生产免 疫乳。利用这种新方法生产的免疫鲜乳冷冻储藏，供关节炎病人饮用，其功效 至少与p e t e r s e n 免疫乳相同。此后，s t o l l e 很快发明了一种不破坏免疫乳中抗 体免疫活性的喷雾干燥技术，为免疫乳制品的大规模生产扫清了障碍。 天津裔学院硬圭学位论文 前言 7 0 年代，免疫乳研究开发进展较快。1 9 7 5 年，欧洲雀巢咖啡公司也相继以 不同病原微生物免疫即将分娩的乳牛，研究相应免疫乳免疫特性。雀巢公司采 用含l ：j 种肠病原性大肠杆菌的混合疫苗注射即将分娩的乳牛，乳牛分泌的初乳 经过脱脂、酸化及离心过程分离出乳清，再经过超滤浓缩和冷冻干燥获得含高 浓度1 9 的蛋白浓缩物。采用超滤加工方法，不仅能够去除污染菌而且可以保留 抗体的活性。美国s t o l l e 公司长达2 8 年的实践、调查的结果显示，s 【0 | l o 脱 脂免疫乳与冷冻免疫鲜乳一样，对8 8 6 的类风湿性关节炎患者具有不同程度的 疗效。同时，大量动物和人体实验确认了免疫乳制品的安全性。1 9 6 1 年，吼( ，ll e 免疫乳制品获准在美国俄亥俄州销售。1 9 8 5 年，美国f d a ( 美国食品及药物管 理局) 也批准免疫乳制品上市。1 9 8 8 年，s t o l l e 研究与开发公司与新西兰乳品 局合作成立了sl o l l e 国际乳生物制品公司( s t 0 1 1cm i 】k 0 1 ( 1 9 ic n t e r n o li o 胁j ，简称s m b i ) 在世界范围内开发、制造和销售各利，形式的免疫乳 制品，包括免疫脱脂乳粉、超滤高蛋白免疫乳粉和免疫乳清蛋白浓缩物等。h 前，s l 0 】ic 公司申请的美国专利包括：牛乳治疗炎症的方法、治疗心l f i l 管疾病 和呼吸系统失调的方法、类风湿性关节炎防治方法、抗高血压方法、保护胃肠 道方法、预防龉齿的方法、保护肺部方法、免疫抑制产物制造方法等。l9 9 7 年 新西兰i l e a l t h o rc s 有限公司开发的商品名为“n e ulr i ”( 新赐康) 的粉状 和片状牛初乳产品在我国上市。 上海和内蒙古在这方面的研究工作也取得了较大进展”1 。上海生理所选择甲 肝、乙肝病毒及幽门螺旋杆菌等3 种以上的疫苗注入奶牛体内，经过处理后的 奶牛所产的奶中含有抗甲肝、乙肝与抗幽门螺旋杆菌的抗体，这种免疫乳对加 强人体免疫系统因子，提高抗病能力有明显效果。内蒙古农大选择大肠杆菌、 沙门氏菌和轮状病毒的疫苗作为免疫原( 抗原) ，对乳牛经过生物技术处理后， 通过系统免疫，使奶中含有对人体肠道病原菌具有抑制和杀灭作用的高活性免 疫球蛋白，其活性是一般常乳中免疫球蛋白活性的8 倍。食用这种乳及乳制品 ( 乳粉) 可抑制肠道病原微生物生长，从而达到预防和治疗肠道疾病的目的。 9 0 年代以来，我国也陆续开发了一些强化牛初乳【g 的婴儿食品，如黑龙江 完达山食品厂的婴儿配方奶粉等。1 9 9 5 年，北京牛奶公司利用牛初乳生产的具 天津商学院强壬学位论文 i g ( ：活性的巴氏消毒乳“来福乳”和初乳粉，也很受消费者欢迎。巴氏消毒免疫 乳也已经在一些城市上市。 1 1 3 免疫乳的疗效 腹泻是威胁人类健康的常见病，营养失调和艾滋病患者受胃肠道病原微生物 感染的几率更高。常规的预防和治疗措施( 如免疫或化学疗法) 很难杜绝感染或 控制这些疾病，而且过量使用抗生素很容易导致耐药菌的出现。因此，寻找一种 有效抵抗胃肠道病原微生物感染的方法成为人们关注的焦点。人们早就认识到母 乳可以通过免疫球蛋白和辅助因子为新生动物提供被动免疫，这就是最早“免疫 乳“”概念的由来。1 9 6 0 s ，随着免疫球蛋白的结构的鉴定尤其是i 9 7 0 s 粘膜和 分泌免疫系统的识别，使人们对抗体在胃肠道疾病的预防和治疗中的作用有了新 的认识“，被动免疫的机理也得到阐明。1 9 8 0 s ，大量的研究表明从被免疫牛的 乳中获得的抗体可以有效地预防和治疗人或动物由肠道致病菌引起的某些疾病 ? 。因此，借助动物分泌的免疫球蛋白预防丰n 治疗这些疾病不失为。个良策。 乩i r 等证明浓缩的免疫乳或从免疫乳中纯化的抗体具有使新生动物抗轮 状病毒感染的作用1 e c c c 等”i 的研究结果表明免疫乳对患有丙种球蛋白缺乏疵 的动物有一定的保护作用。s c h a l l 。r 等i 以猪作为动物模型对抗轮状病毒免疫乳 的研究结果表i 调适当剂量的免疫乳可以很好地减少甚至杜绝轮状痫繇对猜的感 染，hl t c s o i 等”“。同样以猪作为动物模型证明了免疫乳在治疗大肠杆菌g l 起的 腹泻方面的疗效。t a c k e t 等”“让志愿者分别服用抗啪t e x m v j 的免疫乳和常 乳两天后用。啪1 t e x n e r ，j 感染，结果l o 名服用免疫乳的志愿者均没有发病而服 用常乳的1 1 名志愿者中有5 人发病。m ie t e n s 等。i 用免疫乳对6 0 名由大肠杆菌 引起腹泻的儿童进行治疗，他们按每千克体重服用l 克浓缩免疫乳的剂量让6 0 名儿童连续服用l o 天，结果5 1 名中的4 3 名病情明显好转，之后又有人对成年 人做了同样的治疗，结果也非常满意“。这些研究结果表明免疫乳可以很好地抵 抗胃肠道病原微生物的感染。然而，b r u n s e r 等“”却没能使服用抗大肠杆菌免疫 乳的儿童免受大肠杆菌的感染，究其原因可能是乳中所含抗大肠杆菌的特异抗体 的效价太低。而1 y e r l y 等。”的研究结果显示免疫乳可以保护动物免受细菌毒索 的侵袭。另一个研究表明，抗d i f f i c l e 的免疫乳不仅在体外有很好的抗菌效 果，而且可以使动物模型得到很好的治疗。“。由hp v l o r i 引起的慢性胃炎的治 夭津商学院硬士学位论文刖鬲 疗结果显示：成年人每天服用2 0 克，儿耄每天服用12 克含有抗 v j o ：1 7 抗体 的浓缩免疫乳，连续服用： _ q 周可以使病情大为缓解，极少数患者的胃炎得到根 除。这监研究的共同特点是免疫乳是否有疗效取决于免疫乳中是否含有抗特定 抗原的抗体以及这些抗体含量的多少。 龋齿也是一种常见病，服用免疫乳也可以很好地减少这些细菌的寄生量和毒 力。t ( 、1 l e m a r 成功地应用免疫乳降低了骨髓移植患者受c ? m d i d ? ll f ，n ? “n 的感 染率。对人和鼠的研究结果表明服用含抗乩r 印删。m u ? f i t s 抗体的免疫 乳可以有效地抗s t r e p _ o c o c c u , s m u z a n s 感染。最近的研究结果显示含有抗 ：f f u ( ：i n s 和1s o b r i n u s 抗体的免疫乳可以抑制这些细菌的某些酶合成多糖 j ，呈剂量依赖型抑制。l 肌，日，7 s 吸附到以唾液覆盖的羟磷灰石( 模拟牙齿) 上 或协助白细胞识别和杀死m ul h n s l “。 大鼠的l l f i ；床研究表明免疫乳可以帮助人抵抗轮状病毒，大肠杆菌等胃肠道病 原微生物的感染。表1 列出了最近关于免疫乳研究的一些主要成果。 表1 免疫乳在预防和治疗病毒或细菌感染类疾病方面的疗效 实螗对缘病原微生物效果 c a m p y l o b a c t e r 鸬 j p 。h m 预防：粪使中r 7 - t m 的古啭降低c ) 叭 治疗：粪便中( ：詹，的禽 ：降低t 埘 c l o s t r i d i u md i f f i c i l e 人封i 鼠。 ，：d 1 7 ，f - i ，pc ，7 ，r ，。ti n 预防：保护动物免受f ：d i l 7 ，h ，w ，t l o i 小鼠。c ? ? d i 7i c i i eo n | e r f o x i n侵袭 e s c h e r i c h j ac o l i治疗：缓解动物的病状 婴幼儿e n t e r o p a t h o g e n icec o 健康的。愿者“”i ! n t e v o f o xi g e n i cec o ，i治疗：降低粪便中正c o l i 的含茸 h 1 0 4 0 7 预防：保护受试者免受l n l e l o t o x ig e n ic ：i 1 17 名儿童。”l ! nl o r o p a t h o g e n ic c o i l感染 a n dr o t a v i r u s预防：服用免疫乳 个月后没有产生明显 健康的志愿者e i g h t d i f f e r e n t护作用 e n t e r o b a c t e r i a治疗：调节胃肠道菌群降低e n t e r o b a c t e r 健康的志愿者”l量，效果优于抗生素 e n t e r o t o x i g e n i c c o l i预防：保护受试者免受i ! n t e l o t o x i g e n ict ： 小鼠 感染 i n d i g e n o u s c o i预防：保护胃肠道菌群遭到破坏的小鼠免 哺乳期的小猪、染 e nl e i 一0 f o x i g e n i cec o l ， 预防：预防由t ：c o ，i 引起的腹泻 成年人。t i e l i c o b a c t e r 儿童i p y l o t i治疗：减轻胃炎症状 婴幼儿“ t t p y l o z 。j 治疗：减轻慢性胃炎症状 天津商学虢硬士学住谗文前者 成年人 i lp y l o t l i 治疗：没有明显减少胜p v o ，在胃中的生存蛄 小鼠。 t t p y l o l i治疗：没有明显减少p v o l 。j 在肖中的，i 二存带 小融m e l i s预防：保护小鼠免受i l 7 ，h 感染 疆fe i s 治疗：降低 ，i x n 叫、鼠肖内的q ：存龄 小鼠k 1 e b s i e j l a kp i u i i l l l o i i l h t ， 预防：保护小鼠免受 p m ，w 感染 小鼠、p r o t e u s ，jn h r a b i j qa n d 预防：保护小鼠免受，：m i t w h ，_ nr l d | ：，v u i g a r i s pv u l g a s j t 感染 小鼠 p s e u d o m o n a s预防：保护小鼠免受，：，# 7 1 i 、r i i ? o n h 感染 小鼠。，ih o i i l g i l t o s h 小鼠“s a l m o n e l l a 治疗：延缓小鼠死亡 小鼠” p u l l o r u m 预防：保护小鼠免受，j z ) 7 m u t 1 1 1 1 1 1 感染 t y p h i m u r i u m预防：保护小鼠免受，：i ) w h i m u t u r nh i i d tt y p h i m t n l i u ma n dc i t l p l j fi d i s 感染 成年人tc v ，( ，+ i ，i d i s s h i g e l l a预防：保护受试者觅受i ，r l m ，感染 成 l ：人 i i h t x t | i s t r e p t 6 c o c c u s - 瀹疗：降低： , t i l l h i i _ n 爿j 未l ：的禽削 兔t i h ，h i i o 幼兔。盱b r i oc h o l e r a e治疗：降低死i 、：枣减轻川场j f 芏应脚 婴幼儿( h 0 1c l f jc n t er o l i x l i i 治疗：降低腹泻发病率 v i i 1 1 le n tc h o h lhv lh l k预防：保护婴幼儿免受s ；1 1 ) 感染 婴幼儿”1 1 ( 1 ii o l n y l 1i 1sv ， c ( 1n c0 儿童。 k “) ir 】ty 1 ) e2 预防：保护婴幼儿免受v | l i i sw ai 感染 k t l t h v jr i i sw a预防：保护儿童免受h i i i v i il i n 感染 婴幼儿l ：o u rh u m a ni - 0 l a yr u s s e l o t y p e s 治疗：保护婴幼儿免受l i t i l l l l i l l o th vj r ( ) 感 1 ( ) 名患有肠炎的儿l i u n l a l l1 oc a vj f u s m ( )染 音“ 缩短腹泻时间，减少人便频率 】? o u h u m a nl 0 t a v it 雌 矗r y d o , q 目前关于免疫乳的研究多数是预防和治疗某种特定的病原菌引起的疾病， 一一 而关于应用广普抗菌的免疫乳调节胃肠道菌群的研究却很少。t “n t n d e z 等。报 道用冷冻干燥方法制得的初乳粉可以使婴幼儿的腹泻得到缓解。在用x 射线照 射前后服用s t o l l e 公司生产的含有抗2 6 种致病微生物的特异抗体多功能免疫 乳可以调节肠道内菌群，保护照射后的动物免受大肠杆菌的感染，增加照射后 的动物存活率“。我国内蒙古农业大学的张和平等也根据我国肠道传染病的流 行情况制得了含抗2 4 种病原微生物抗体的免疫乳和抗某些单一病原微生物的免 天津商学院硬士学位论文前言 疫乳，但疗效方面的畏4 试没见报道“。这些研究结果表明广诺免疫乳在以后 有望作为婴幼儿调节胃肠道菌群的保健食品。 1 1 4 免疫乳的生产 根据免疫学观点，哺乳动物的乳汁、泪液等分泌产物是机体分泌的具有免疫 调节作用的产物。经自然接触或人为接种使机体受到抗原( 如各种细菌、病毒、 毒素等) 刺激而产生相应的抗体，他们与抗原在结构上具有互补性，两者结合后 抗原丧失活力。环境不同，哺乳动物接触病原微生物也就不同，乳中的特异抗体 也就不同，应用这种乳很难达到防病治病的目的。由于机体免疫系统可以同时对 许多种不同类型的抗原发生应答。因此，为了提高牛乳的功能，人们针对特定人 群乃至特定疾病有意识地通过接种单一或复合抗原改变牛乳中特定抗体的种类 和含量，达到预防和治疗某些疾病的目的。目前，大量的研究都是在奶牛的泌乳 期结束时应用特定的抗原重复免疫奶牛”1 “。其中对己孕奶牛通过乳腺注射或 r 岐抗熔的免疫方法效果不太明显“，通过乳腺和肌肉联合注射免疫的奶牛在啦 清和初乳中都有高浓度的抗体存在。在通常情况下，抗体的产生情犹与疫苗中 佐剂的种类和性质有关，研究表明完全或不完全福氏佐剂可以很好地刺激抗体的 产生。，但是它可能存在的副作用使它的应用受到限制，在许多情况下都使用 氢氧化铝作为佐剂。被免疫的奶牛的健康情况直接影响到产奶的质量，因此选择 健康的动物进行免疫也非常重要。在许多情况下我们还要考虑制定最合适的免疫 方案，以便降低被免疫动物的痛苦。 浓缩和分离免疫球蛋白的目的是使免疫乳中的特定抗体的浓度增大。基于膜 分离和色谱分离“。而建立的快速分离技术使免疫乳的浓缩和乳中抗体的纯化 工作得以简化，为以预防和治疗为目的的免疫乳的生产开辟了广阔的道路。雀巢 公司采用含1 3 种肠病原性大肠杆菌的混合疫苗注射即将分娩的乳牛，乳牛分泌 的初乳经过脱脂、酸化及离心过程分离出乳清，再经过超滤浓缩和冷冻干燥获得 含高浓度i g 的蛋白浓缩物。采用超滤加工方法，不仅能够去除污染菌而且可以 保留抗体的活性。 1 2 我国哮喘病现状 1 21 哮喘病的概念及症状 天津商学院碗圭学位论文前言 哮喘是一种炎症性疾病j “，虽然哮喘的病因尚未明确。但新近许多研究已表 明，哮喘是气道的一种慢性炎症性疾病。哮喘所涉及的是一种特殊类型的炎症， 其共同特征是肥大细胞活化、嗜酸性粒细胞和被激活的t 淋巴细胞的浸洞。炎症 常累及气道上皮细胞。即使病人哮喘较轻，也能观察到这些炎症反应，支气管活 检也能观察到相似变化，炎症反应常引起痰多，一氧化氮呼出等。哮喘气道的这 种炎症反应同时伴有特殊的气道功能性异常。慢性哮喘的症状其基础是气道高反 应性( a h i ) “。当今我们已知有许多炎症性细胞参与了哮喘的炎症反应，甚至气 道的结构性细胞，如上皮细胞也可生成炎症性产物。在哮喘的气道中有许多炎症 性介质形成。包括引起支气管痉挛的介质( 如白三烯) ”“。，介导气道慢性炎症 的多种细胞因子等。慢性炎症反应显然是某些具有活性的i ) n a 联结蛋白所致，这 种称为转录因子的蛋白质能开启炎症性基因。这类炎症性介质对气道具有多种作 川，如0 l 起支气锊痉挛、| ：i i 浆渗出、l f n 管扩张、粘液分泌、神经活性增加及气 道商反应。气道除这踏急性炎症反应之外，还何慢性炎症改变从l i ：- 导敛气道发 生结构性改变( k ir i 】、h l lc l r a n g e s ) 称之为“重建”、i l i ( 1 t ，1i “) ，包括气道 i f 滑肌、m 符、猫汲分泌细胞和纤维性变等的增加。这批结构r i ：改变c ：j _ 皆敛7e 通 小可逆性狭窄。 1 22 我国哮喘病及其治疗现状 2 0 0 0 年全国2 7 个城市共调查0i4 岁儿童： 1 0 3 9 7 名渗断哮喘儿龋1 h j 2 名，患病率为】5 6 ，其中儿章哮喘4 ： 1 8 名( 8 9 ( ) ) ，婴幼儿哮喘5 ： 1 名( 1 】，( 】) 。 1 9 9 0 年2 7 市调查1 9 9 【g ：1 名，诊断哮喘儿童3 6 2 5 名，患病率为( 1 9 1 ，其中儿 章哮喘2 6 9 1 名( 7 4 2 ) ，婴幼儿哮喘9 3 4 名( 2 5 8 ) 。1 9 9 0 年2 7 市儿章哮 喘患病率波动在0 - 耻2 6 之问，2 0 0 0 年波动在0 4 2 一 9 1 之n “。2 0 0 0 年哮 喘患病率较十年前明显上升，平均约增加0 7 倍。2 7 市中除哈尔滨、长沙、广 州、遵义、深i ) l l2 0 0 0 年哮喘患病率较1 9 9 0 年减少外，其余2 2 市均较1 9 9 0 年 上升。 此次调查患病率以西南、华东为高，分别为2 3 、2 2 。而东北片较低为 0 9 。十年前患病率以华东较高，为1 3 8 ，华北偏低为0 4 7 。此次调查各片 患病率较十年前均有升高。 两次调查，哮喘儿童首次发病均以( ) 岁和l 岁所占比例最大。2 0 0 0 年分别 天津裔学院硕士学住论文 前言 为2 7 ，4 和2 ： 6 ，1 9 9 0 年分别为4 7 d 和2 2 6 。2 0 0 0 年首次发病除0 岁组所 占比例比l9 9 0 年减少e o # b ，l 岁以后各年龄组首发病年龄的百分比均较l9 9 0 年有所增多。 f1 ) 2 0 0 0 年我国儿童哮喘患病率为1 j 龋，较j 9 9 0 年的0 9 1 ；f j 有明显上升，约增加0 7 倍；( 2 ) 各地区以西南、华东儿童哮喘患病率为高 东北片较低：( 3 ) 35 岁儿童哮喘患病率较高，占2 4 j 。： 岁以内儿章哮喘患 病率较十年前明显下降，： 岁以上患病率明显上升”。 北京医科大学人民医院呼吸科何权瀛等对该院呼吸内科病房1 9 9 2 年1 月 1 9 9 8 年1 2 月期间收治的1 8 3 例次以支气管哮喘作为第一诊断者的有关住院费 用等资料逐项登记、分析1 ： 盘! i ! 丝二i ! 塑生焦瞳竖嗤星益匡冱置崮变也埴远 ! 塑! ! 塑2 11 塑4 11 塑! ! ! ! 塑z1 2 型 总例次 ，1 7： ： 人均甲均费川( 元j3 3 6 4 f i 2 7 0 人h 平均赞川( 元)1 4 9 2 6 8 床化赞( ) j8 2： 9 9 药费( ) 7 8 , 5 79 6 治疗赞( ，) 4 62 lq 6 放射赞( ) i 4 l0 9 , 5 检验费( * )3 7 0 1 1 5 1 特检赞( ) ：j7 82 9 l 6 1 5 ( ； 2 7 5 ： ! 1 8 i 8 ( j b 2 ( ) 2 7 0 8 ： 1 1 7 7 4 7 2 ： b 7 6 0 4 ： 5 ( j ： ： c ) 5 89 95 ，1 7 74 2 6 2 j ： 1 9 ，6 7j 80 4p , - 3 8 0 7 7 ( ) 7 9 】1 1 0 7 49 176 4 8 ：j7 5 4 6 3： 邮 j ：；： 6 7 8 ，6 9 8h ： 基宣【1 21 ：堕! ：! ! ：! ：!q ：3 81 ：4 21 ：! ! 塞! 塑! j 二! 塑8 生翅回壁瞳萤坷! ：! 互亘堡嘣鸯益埴逸 1 9 9 51 9 9 61 9 9 7 1 9 9 8 例次1 0 923 平均住院费用( 元) 1 6 4 9 9 7 62 4 3 8 5 1 8 83 4 1 3 8 2 5 02 4 1 5 7 8 3 3 平均住院天数 3 233 0 12 5 0 2 0 0 延出菰垡垂倒塑! ! 1 2 1 从表1 ，2 中可以看出与1 9 9 2 一】9 9 4 年相比，近几年住院哮喘患者人均住院 医疗费用虽然显著下降并且每年医疗费用过万元例次也显著减少，但是表i 资 j j - i k ? 一j 一) 9 h ? j 6 ， 7 7 一j 1 6 0 1 6 7 9 0 一) 7 7 j 天津商学甏硬g - 学位论文前言 料显示。每例次f 1 均医疗费用却在逐年增加。据健康报披露( 1 9 9 9 。4 17 ) 1 9 9 h 年全国銎i 三部属住院患者平均住院时间为1 2 6 天，平均每出院病人医疗费用 为7 0 7 6 簟元，其中药费占1 9 1 ，检查治疗费占2 j 隔。分析哮喘患者住院费 用较高嘲甄l 为，能是：【l 支气管哮喘是。种慢性疾病，容易复发。( 2 j 住院时 间长，这可能与病情重，合并症伴发病多有关。 j 外，免 疫乳征抗过敏、抗甲h f 年l l 己盯、艾滋瘸治疗力【f f i 还仃定的作川川f l - i 随卉免嫂 乳研究的不断进展，免疫乳在众多疾病的颅防和治j ，过程， 一会发挥越来越醺篮的 作j 】。 天津鸯学院硕士学住论文结论 第五章结论 5 1 本研究获得了生产抗哮喘免疫乳的路线 本实验用兰州生物制品研究所生产的对支气管哮喘、哮喘十牛支7 气管炎及慢性 支气管炎有预防和治疗作用的甲醛灭活菌苗通过臀部深层肌肉注射免疫已孕的 奶牛得到了含有高浓度特异抗体的免疫乳，并在产犊后测定了乳中抗体随时州衰 减的规律。结果表明乳中抗体的衰减情况和文献报道的结果一致。 5 2 本研究获得了制备无菌免疫乳清粉的路线 本实验将奶牛产犊后一段时期内的免疫乳进行了收集，经离心脱脂、等电点 离心沉淀酪蛋白获得了含有抗气管炎病原菌的抗乳清。用超滤浓缩的方法去除乳 清l f 】的大部分湿分后，用真空冷冻干燥的方法将浓缩乳清干燥制备了抗气舒炎病 原荫的抗乳清粉。并将抗乳消粉通过辐射灭菌的方法进行了灭菌处理。 5 3 本研究证明了抗体在体内不是作为营养蛋白被消化而是作为功 能蛋白起免疫保护作用 本实验以家兔为实验动物对抗乳清粉的毒性及抗体在体山的1 f i j 化规律进行 了研究。家兔在连续服用大剂量抗乳清粉后进食情况、排泄情况、精神状况均f f 常。并在家兔连续服用一定剂量的抗乳清粉后将家兔解剖，在其消化道上取点测 定了抗体在家兔体内的消化情况。测定结果表明，抗体在家兔消化道的远端仍有 8 0 左右的活性保留，说明抗体在家兔体内主要不是作为营养蛋白而是作为功能 蛋白起免疫保护作用。 5 4 本研究初步证明了抗哮喘免疫乳清粉的疗效 本实验于2 0 0 3 年2 月一2 0 0 3 年3 月，细菌感染性哮喘多发期，对山东省冠 县、河北省馆陶县的1 0 名志愿者用自制的抗哮喘免疫乳清粉进行了一次简单的 免疫乳治疗细菌感染性哮喘的疗效测试。测试结果表明虽然在服用免疫乳清粉的 过程中有部分志愿者感到轻度不适但这种不适很快消失，一些志愿者的病情在一 定程度上得到缓解和预防。 5 5 本研究对免疫乳中免疫球蛋白的分离纯化作了初步的探索 天津商学院硕士学位论文结论 由于时间所限，本实验只对免疫乳中免疫球蛋白的分离纯化作了初步的探索 性研究。初步确立了盐析法粗分免疫乳中免疫球餐白所用的赫类、豁浓度及操作 条件等，对抗体的收率等指标没有进行详细的弭宄。更进步的分离还应包括亲 和层析等分离方法的应用。 5 6 尚存在的问题及进一步的工作设想 本课题的主要目标是通过抗哮喘灭活菌苗免疫奶牛获得含有特异抗体的免 疫乳，并对免疫乳进一步分离、浓缩的道含有高效价特异抗体的免疫乳清粉，并 进一步对所获得免疫乳清粉对哮喘的预防和治疗效果做初步评估。以上目的均己 达到。 尽管我们已尽了最大努力，但由于时闻紧，实验仪器的配备不够全致使本课 题有些问题尚未解决，如：乳中抗体在浓缩过程中的收率没有办法测定，免疫 疗效测定只是做到了初步评估。凶此，本课题还有以下工作需要进一步研究和探 索： tj 免疫乳中抗体的进一_ 少分离纯化及操作过程中抗体的收率：( ：j 进步 的免疫，效测试，这包括：对患者的选择、免疫乳剂量的测定、患者服用免疫乳 后具体病理指标的改善状况等。( ： ) 免疫乳作为种保健品越束越得到各国科学 家和人民的认可，如何把免疫乳从实验室的研究推向商品化生产有待进步去研 究和探索。 自从1 h q 2 年h u li 一；h r 】ic h 提出免疫乳的概念至今已经有一卣多年的历史 了，在这一百多年中尽管关于免疫乳的研究有了长足进展。然而我国关于免疫乳 的研究起步较晚，而且对免疫乳品的生成投入的精力更少，我国内蒙古农业大学 的张和平等也根据我国肠道传染病的流行情况制得了含抗2 4 种病原微生物抗体 的免疫乳和抗某些单一病原微生物的免疫乳，但疗效方面的测试没见报道。免疫 乳品的生产要涉及到将乳品中特异抗体的含量定量化等一些问题，然而免疫鲜乳 中抗体的含量波动较大而且免疫鲜乳不易长期保存。这就涉及到免疫乳中特异抗 体的浓缩与干燥等一系列问题。可喜的是基于膜分离和色谱分离而建立的快速分 离技术使免疫乳的浓缩和乳中抗体的纯化工作得以简化，为以预防和治疗为目的 的免疫乳的生产开辟了广阔的道路。相信随着科学的不断进步和对免疫乳研究的 逐步加深，免疫乳会得到更深刻的认识和更广泛的应用。 查苎堕兰生笙兰兰丝丝墨兰曼! 兰兰 参考文献 f 1 1p 劲侩等，卡j 乳功能一r ：食。 r l 扮 川i i j 扳社，( 2 0 0 0 ) ，15 7 1 8 1 2 1 h a n n uk o r h o n e l lp m a r l 、i l l a lisg i l l b o v i n em i l ka n l i b 。d c 。f o l 删锄 嘶。 o l l l l l ( 1 ir ：( n t t l r i l i o n ( 2 0 0 0 ) 8 4 ，s u p p l 1 、si3 5 _ s 、j 6 【3 1 b e c k lra n dz i m m e r l n a n s t o l l ei 1 1 1 m u n e i n i l k s t o l l em i l kb i 0 1 。9 1 。5 i n t e r n a t i o n a l ( s m b l ) ，( 19 8 9 ) 4 】隧i 柑兴韩海删等，q ：初乳及免疫乳功能食品的7 l ：2 2 d ：l i t ，1 1 l 码农业) i 学 食口 学院 f 5 1c a m p e b e i ib p e t e l - s e nw e ( 1 9 6 3 ) i m m u n e m i l k ah m 胁15 “。y 胁 s c i e n c ea h x t r a c l s2 5 3 4 5 3 5 8 f 6 1l a m mm i ：，w e i s z c a r r i n g t o np r 。u im ec ：；! ( 1 9 7 8 ) d c v e h ) p n l c “。l 、h 。l g a s vs e 【1 1i nt 1 1 c1 1 1 a 1 1 1 l _ 1 1 a r yg l a n d a d y ，( 。vi ，e x p c ，i t ，p ，( ，m e d i 。7 77 。“7 ，。， 1 1 0 7 ，35 - 4 2 7 g oj d 【1 1 a f la ( 19 8 9 ) h n n l u n o l o g i cs l l ) p i e i n e n t a t i o l l o t 、c o w s1 1 1 i l k 1 b 。“1 “l “1 1 。” h u l & t mq f t h ei d i 2 4 4 ，3 8 - 4 2 【s r u i zj l p ( 1 9 9 4 ) a 1 1 【d i e s f r o l l l 1 i l kf o ep r e v e n t i 。na 【、d t 叫t 川 t 删d i s c a s ch l d i g e 川“川t h n i 删h i ，1 ( 州, e t l “，i l k - i c c c i i ，d e i , e h q 小川。， s p e c i a l s s l t e9 4 0 44 ，1 0 8 1 2 i f 9 1w e i i l e rc ，p a nq ，h u r t i gme ta l ( 1 9 9 9 ) p a s s i v ei i l l i l l u n i t y8 9 8 m 5 1 ”8 “ p a n 、。g e n su s i n gb o v i n e a n t i b 。d i e sm ，i c a ，( d 脚咖删，加川f j 垤l l6 1 9 3 2 0 5 1 0 ls a i f l j & s m i t hl ( 1 9 8 3 ) e n t e r i cv i r a l i n f e c t i o n so f c a i v e sa “dp 8 3 5 1 。1 “1 m “m y j o u r a o f d a i r ) 7s c i e n c e6 b ，2 0 6 2 2 8 111 l e c c ej g , l e a r yh l j ，c l a r k ed a e ta i ( 19 91 ) p r o t e c t i 。n 。fa g a m 8 9 1 0 b l i “8 m i 。 p i g l e t sf i 。m 。o r c i n er 。t a v i m s i n f e c t i 。1 1b 3 a n t i b o d ya g a i l l s 【s i m i a nr 。t a ”i 。“ss a ll j o i l f m i q f c l i n i c a l m i c r o b i o l o g y2 9 ，1 3 8 2 1 3 8 6 1 2 1n o m o t ok m a t s u o k ak ，h a y a k a w a ke la 1 10 9 9 2 ) a n t i