（生药学专业论文）裂叶星果草的生药学研究.pdf

贵阳中医学院硕士学位论文相关声明一蜘 原创性声明 本文声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表论文中撰写过的研究成果，也不包含为获得贵阳中医学院或其他 单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均 已在论文中作了明确说明。 作者： 够瑶 日期： 夕o 匆年咩角2 日 关于学位论文使用授权说明 本文了解贵阳中医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 学位论文，允许学位论文被查阅和借阅：学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文；学校可根据国家或贵州省有 关部门规定送交学位论文。 作者签名：穆匿 刷醛蟹l 习咩 日期：2 6 o 年午月2 日 ， h l 目录 中文摘要1 英文摘要3 嘀矿言5 一日u舌 正：虫：6 实验研究6 1 贵州产裂叶星果草的生药学鉴别6 1 1 实验仪器、材料和试剂6 1 2 实验方法与结果6 1 3 结果j ：7 1 4 讨 仑15 2 贵州产裂叶星果草的理化鉴别1 6 2 1 实验仪器、材料和试剂1 6 2 2 实验方法与结果一17 2 3 结果与讨论1 8 3 贵州产裂叶星果草的含量测定1 8 3 1 实验仪器、材料和试剂l8 3 2 实验方法与结果1 9 3 3 样品测定2 7 3 4 结果与讨论2 7 4 贵州产裂叶星果草的抑菌试验2 8 4 1 实验仪器、材料和试剂2 8 4 2 实验方法与结果2 8 4 3 结果与讨论3 0 全文总结与展望3l 参考文献。3 4 附录一英汉缩略语名词对照3 5 附录二文献研究3 6 附录三附图3 6 访j 4 9 人简历5 0 贵阳中医学院顺 ：学位论文 摘要 目的：对贵州产的我国特有的毛莨科植物裂叶星果草a s t e r o p y f u m c a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d m m m e th u t c h 在性状、显微、理化等方面进行实 验研究，为裂叶星果草药材的鉴定、制定质量标准提供科学依据。 方法：通过原植物的光学显微鉴别、扫描电镜超显微鉴别( s e m ) 等方法对 贵州产裂叶星果草的根、根茎、叶、叶柄及花粉粒进行了鉴定：理化方面，通过 薄层色谱、高效液相色谱等方法对活性成分进行定性及定量分析；最后，根据其 在民间的应用及疗效，本课题进行了部分抑菌试验。 结果：本文在文献研究的基础上，采用光学显微观察和电子超微扫描对贵州 产裂叶星果草进行了组织形态学研究。结果表明： 1 、在组织构造方面，根：表皮上有根毛，内皮层明显，可见凯氏点，无髓； 木质部为三原型。根茎：皮层有根迹维管束、叶迹维管束存在，髓部明显。根 和根茎的皮层的薄壁细胞中含有大量的草酸钙簇晶和淀粉粒。叶：叶表皮具单 细胞非腺毛，气孔不定式，副卫细胞4 - 5 个。叶柄：叶柄横切面类圆形，直径 约1 0 0 0 - t m ，有5 7 个外韧型维管束。花粉粒：花粉粒球形或近球形，有六个 萌发孔。 2 、采用薄层色谱法对裂叶星果草进行初步的理化鉴别。结果表明：裂叶星果 草中含有盐酸药根碱和盐酸巴马汀两种生物碱，与黄连所含成分很相似；两种生 物碱在苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水( 6 ：3 ：3 ：1 5 ：o 5 ) 系统中具有良好 的展开性。 3 、本文在理化鉴别的基础上，采用高效液相色谱法对裂叶星果草的两种生物 碱进行含量分析。结果表明：在裂叶星果草药材中，盐酸药根碱的含量( 9 7 9 2 3p g g ) 比盐酸巴马汀含量( 3 6 2 7 8 6p g g ) 少；本实验建立的色谱条件和含量测定方法简 便准确，重现性好。 3 、本文通过体外抑菌试验，研究裂叶星果草的抗菌作用。结果表明：裂叶星 果草对于金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌有较强的抑制作用，而对于大肠杆菌无明显 作用。 结论：本文从药材鉴别及化学成分的定性与定量分析、抑菌试验三个方面对 贵州产裂叶星果草进行了较为系统的研究。对其组织构造进行了较为深入的研究。 贵阳中医学院顾t ：学位论文 了其中两种化学成分的含量，以及在抑菌方面的作用，为开发利用少数民族 资源，评价裂叶星果草的药用价值，制订该类药材质量标准提供科学依据。 关键词：裂叶星果草显微鉴别扫描电镜理化鉴别高效液相抑菌实 盐酸巴马汀盐酸药根碱 a b s t r a c t o b j e c t i v e s ：t h et h e s i si sd e s i g n e dt or e s e a r c ho fa s t e r o p y r u mc a v a l e r i e i ( l e v i e t v a n t ) d m m m e th u t c h w h i c hi st h eg u i z h o uo r i g i no fp l a n t se n d e m i ct oc h i n a i nt h e p r o p e r t i e s ，t h r o u g hs u c hm e t h o d s a sp r o p e r t i e s ，m i c r o s t r u c t u r e ，c h e m i c a la n do t h e r a s p e c t so ft h ee x p e r i m e n t a ls t u d y f o r t h ei d e n t i f i c a t i o n ，d e v e l o p m e n to fq u a l i t y s t a n d a r d so fa s t e r o p y r u mc a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d m m m e th u t c h t op r o v i d et h e s c i e n t i f i cb a s i s f o rt h ef u r t h e rd e v e l o p m e n to fa s t e r o p y r u mc a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d m m m e th u t c h a n dr e l a t e dq u a l i t ys t a n d a r d sp r o v i d eat h e o r e t i c a lb a s i s m e t h o d s ：r e s e a r c ht h er o o t ，r o o t s ，l e a v e s ，p e t i o l e ，a n dp o l l e no ft h ea s t e r o p y r u m c a v a l e r i e ia s t e r o p y r u r nc a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d m m m e th u t c hb yu s i n go p t i c a l m i c r o s c o p i ci d e n t i f i c a t i o na n ds u p e rm i c r o s c o p i cs c a n n i n ge l e c t r o nm i c r o s c o p e t l c s c a n n i n ga n dh i 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) w e r e u s e dt od e t e c tt h e q u a n t i t a t i v eo ft h ea c t i v ei n g r e d i e n t s a c c o r d i n gt o t h ea p p l i c a t i o na n de f f e c ti nt h e f o l k ，d os o m eb a c t e r i o s t a t i ct e s t r e s u i t s ：o nt h e b a s i so fal i t e r a t u r er e v i e w , u s i n gt h em e t h o d ss u c ha so p t i c a l m i c r o s c o p ea n ds c a n n i n ge l e c t r o nm o r p h o l o g i c a ls t u d y t h er e s u l t ss h o w t h a t ： 1 、o r g a n i z a t i o n a ls t r u c t u r e ， r o o t s ：t h e r e a r es o m er o o t sh a i ra t t a c ht h er o o t ， e n d o d e r m i si so b v i o u s ，k a y sp o i n tc a nb es e e n ，n op u l p r h i z o m e ：e p i d e r m i s ， c o r t e x r o o ts k i nm a r ko rl e a ft r a c ev a s c u l a rb u n d l e sa n dp u l pa r ev i s i b l e ，e n d o d e r m i si s o b v i o u s l e a f ：c e l lr u l e s ，a p p r o x i m a t eo v a l c o m p o s eo fe p i d e r m i s ，s t o c k a d et i s s u e ， t h eo r g a n i z a t i o na n dv a s c u l a r t h eu p p e re p i d e r m i si sc o m p o s eo fe p i d e r m a lc e l l s a n d h a v el o t so fs i n g l e c e l l e dh a i r t h ec u t i c u l a ri sc o m p o s eo fc e l l s 、p o r o s i t ya n dg l a n d u l a r h a i r y p e t i o l e s ：i th a u s 5 7v a s c u l a rb u n d l e s ，f a i n ts e et h ep r o c a m b i u m c l a s sr o u n d ， d i a m e t e ri sa b o u tlm m c o m p o s eo fs u r f a c e ，c o r t e x ，v a s c u l a r e n d o d e r m i si so b v i o u s ， k a y sp o i n tc a nb es e e n ( 9 p o l l e ng r a i n s ：s p h e r i c a lo rn e a r l ys p h e r i c a l e a c hp o l l e n g r a i n sh a ss i xg e r m i n a la p e r t u r e s 2 u s i n gt l cs c a n n i n g f o rp r e l i m i n a r i l yp h y s i c a la n dc h e m i c a li d e n t i f i e do f a s t e r o p y r u mc a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d r u m m e t h u t c h t h er e s u l t ss h o wt h a t ： a s t e r o p y r u mc a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d r u m m e th u t c h c o n t a i n i n gh y d r o c h l o r i c a c i d j a t m r r h i z i n ea n dh y d r o c h l o r i ca c i dp a l m a t i n e ，a n dc o p t i s c h i n e n s i sf r a n c hc o n t a i n s 3 4 贵阳中医学院顺 ：学位论文 刖青 中国植物志收载星果草属植物有2 种1 1 。即星果草a s t e r o p y r u m p a l t a t u m ( f r a n c h ) d r u m m e th u t c h 和裂叶星果草a s t e r o p y r u mc a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d r u m m e th u t c h 。 裂叶星果草在贵州以全草入药，俗称水黄连。在湖北西部分别称其为金钱黄 连和鸭脚黄连，以根茎入药。具有清热解毒，除湿利水之功效，用于治疗热病， 腹痛和痢疾单昧或配方治疗黄疸、水肿，鲜品外敷治疗疔疮肿毒，跌打损伤。在 广西全州一带曾代黄连使用。 裂叶星果草a c a v a l e r i e i ( l e v i e tv a n t ) d m m m e th u t c h 我国独有植物种， 主要分布在云南东部、川西南、贵州贵定( 模式产地) 、湘鄂西及广西北部，当 地少数民族多用其治热病、腹痛和痢疾， 复方治黄疽、水肿；有时替代黄连使用， 鲜品捣烂治疗疮肿毒、跌打损伤。 具有清热解毒、除湿利水之功效单味或 且认为其清热泻火作用胜于黄连；全草 ! 裂叶星果草的形状鉴别【2 】及初步的化学成分研究在国内已报道过。据文献报 道，学者从裂叶星果草中分离得- 至l j 4 个季铵型水溶性生物碱，这4 个化合物系首次 从该植物中获得。裂叶星果草中所含的生物碱成分，与黄连中生物碱类似，从裂 叶星果草中分离得到的几种原小蘖碱型成分，文献均报道了其生理活性。主要是 抗菌、抗炎及心血管方面的作用【4 5 】。作为一种新的药用植物资源是很有价值的。 裂叶星果草在民间的实用很广泛，未有具体的药效学研究。本课题将以贵州 产裂叶星果草为研究对象，从生药学鉴别及化学成分的定性与定量分析、抑菌试 验三个方面进行研究。首先，利用植物解剖学知识研究原植物的解剖学特征。运 用电镜扫描，对植物的叶和花粉进行观察，并描述其特征。其次，对裂叶星果草 的化学成分进行提取，分别采用薄层色谱法对裂叶星果草所含的生物碱进行鉴别， 并采用高效液相色谱法检测其生物碱的含量。最后，选择常见的肠胃致病菌大肠 杆菌、痢疾杆菌，用裂叶星果草根茎进行体外抑菌实验。为开发利用少数民族医 药资源，评价星果草属植物的药用价值，制订该类药材质量标准提供科学依据。 离析液中。离析后，在蒸馏水中洗净，然后剥离上下表皮，除去叶肉细胞，常规 贵阳中医学院硕e 学位论文 法制片，阿拉伯树胶封片。 1 2 1 4 粉末制片 将实验材料干燥后，碾成粉末( 过6 0 目筛) 。取少量粉末，经水合氯醛透化 后，稀甘油封片。 1 2 2 电镜扫描 将野外采集生长正常植株成熟叶片先用水软化，然后移入各级酒精逐级脱水 ( 脱水钱剪切成合适的大小) ，用超声波清洗机清洗，以除去表面粘附的杂质和灰 尘，干燥后分别将叶片的远轴面侧或近轴面侧朝上，用双面胶固定贴在样品台上， 用高真空镀膜机进行真空镀膜，用扫描电子显微镜扫描，观察并且选择具有代表 性的区段拍照。 将花药上的花粉尽可能多的刮落到样品台上，用双面胶固定，用高真空镀膜 机进行真空镀膜，用扫描电子显微镜扫描，观察并且选择具有代表性的区段拍照。 1 2 3 显微常数测量 制片后在o l y m p u sb x 6 1 光学显微镜下观察。各项指标分别测量数据2 0 组， 取平均值，统计相关数据。 气孔密度为每单位面积内的气孔数，测量2 0 个数据的平均值。 计算气孔指数时，随即选取1 0 个视野计数。计算公式为： i = s e + s 其中i 为气孔指数，s 为一个视野内的气孔数，e 为同视野内的表皮细胞数。 1 3 结果 1 3 1 原植物的形态鉴定 多年生草本，植株高约1 0 - - , 2 0 c m 左右。根状茎不规则结节状或短圆柱形，质 坚，粗糙，长1 c m - - 5 c m ，折断面外侧棕色，内侧木质部黄色，髓部细小，灰棕色， 根茎及节上的须根棕黄色至棕褐色；根多条从根茎的节上发出，近圆形，直径约 l m m 。叶柄平滑不容易折断，长5 c m , - 一1 5 c m ；叶2 - - 7 枚，叶片浅裂或深裂成五角 形，直径4 1 4 c m ，顶端急尖，基部近截形，裂片三角形，边缘呈微波状，叶片暗 绿色，上表面着生黄褐色硬短毛，下表面无毛，掌状网脉明显；花葶2 - - 6 枝，高 1 0 - - 2 0 c m ，无毛：花一朵，直径1 3 1 6 c m ，着生于花葶顶部，萼片5 枚，白色， 花瓣状，椭圆形或倒卵形，长7 8 m m ，宽3 - - 5 m m ，花瓣5 ，黄色，较小，长不及 图1 裂州星果草原植物图 8 贵阳中医学院硕l ：学位论文 1 3 2 根的特征 裂叶星果草的根直径约o 8 1 1 m m ，近椭圆形。由表皮、皮层、中柱组成。 表皮：表皮由l 列类方形细胞组成，直径9 1 “m 1 1 7 9 m ，其外壁增厚，微 木栓化。根毛密集、长短不一、粗细均匀。 皮层：皮层约占横切面1 2 ，由数层薄壁细胞组成，其厚度大约是3 8 4 8 l , t m - - 1 6 4 4 5 1 t m ，靠外的细胞略呈多边形，中部的细胞类圆形，靠内的细胞渐小，排列 规则，内皮层明显，可见凯氏点，皮层细胞内含大量的淀粉粒和草酸钙簇晶，淀 粉粒成类圆形，脐点、层纹不明显，簇晶钝形，其大小约为2 0 2 4 p , m - - 3 7 9 51 a m 。 木质部：三原型，由导管、木纤维和木薄壁细胞组成，导管主要由螺纹导管组成； 韧皮部由筛管、韧皮纤维和韧皮薄壁细胞组成，筛管呈多角形。见图2 、图3 6 7 图2 裂叶星果草根横切面简图( x 1 0 0 ) 1 表皮2 皮层3 内皮层4 木质部5 韧皮部6 根毛7 草酸钙簇品 _ f i 。z i + 。y 一臻驾 ， 0 ， 、 i n z 。础一“口，d h k g 日# m ；m 图3 光学显微镜下裂叶星果草根横切面( x1 0 0 ) i 镬 。j 。醯。纽羹 ， l 2 3 4 5 r：；、 图5 光学显微镜下裂叶星果草根茎横切面( x 1 0 0 ) 贵阳中医学院硕i ：学位论文 1 3 4 叶柄的结构特征 裂叶星果草的叶柄类圆形，直径约l m m 米左右。叶柄的结构主要由表层、皮 层、维管束组成。 表皮：由l 列类方形细胞组成，形状规则、排列紧密，直径约是l o g m ，表皮 下有2 3 列与表皮细胞相似的细胞。 皮层：宽广，约占整个横切面1 2 ，薄壁细胞类圆形，直径约7 0 “m 1 2 6 5 9 m ， 内含有草酸钙簇晶和淀粉粒，草酸钙簇晶的大小约是2 5 3 p m - - 3 7 9 5 1 - l m 。淀粉粒 成类圆形，脐点、层纹不明显。 维管束：叶柄有5 7 个外韧型维管束，散在或近坏状排列。见图6 、图7 l 2 3 4 ，一 分j ，：+ 超声提取；盐酸巴 马汀的含量排列顺序为：加热回流提取 超声提取，所以选择回流提取方法。 综上所述，供试品溶液的制各方法为：精密称取裂叶星果草药材粉末0 1 5 9 ， 置5 0 m l 圆底烧瓶中，精密加入甲醇1 5 m l ，于6 0 水浴锅中加热回流3 0 m i n ，取出， 放至室温，用甲醇补足失去的重量，过滤后置于2 5 m l 容量瓶中，作为供试品。 3 2 6 色谱条件的选择 3 2 6 1 色谱柱的选择 在实验中我们考察了四种色谱柱，比较不同柱问图谱的差异。取盐酸巴马汀 对照品溶液，依次采用不同色谱柱，相同条件下分别测定，考察其对盐酸巴马汀 的出峰效果，结果见图2 0 、图2 1 、图2 2 ， f 笙1 2 0a g i l e n te c l i p s ex d b - c 1 8 ( 5 i t m ，1 5 0 x 4 6 m m ) 关系良好，结果见表1 、图2 3 表i 标准曲线各点峰面积表 贵阳中医学院顾 ：学位论文 图2 3盐酸药根碱的标准曲线 精密吸取盐酸巴马汀对照品溶液3 “1 、4 p 1 、5 “1 、6 p , 1 、7 1 x l 、8 p 1 分别进样 于3 4 5 m n 处测定峰面积。以进样量( i x g ) 为横坐标( x ) ，以峰面积为纵坐标( y ) 计算回归方程，得盐酸巴马汀的回归方程为y = 3 3 9 8 9 1 2 4 5 x 一0 7 7 7 8 0 3 5 ，r = 0 9 9 9 9 3 ， 线性范围为o 1 6 4 6 肛g - 0 4 3 3 3 p g ，表明盐酸巴马汀在此范围内峰面积与进样量线性 关系良好，结果见表2 、图2 4 表2 标准曲线各点峰面积表 进样量( “1 ) 34 567 8 盐酸巴马汀( a r e a ) 5 5 8 5 6 7 2 6 1 09 1 1 0 5 1 0 9 8 3 01 2 8 5 3 01 4 7 2 1 0 图2 4 盐酸巴马汀的标准曲线 3 2 7 2 精密度试验 精密吸取盐酸巴马汀对照品溶液1 0 p 1 ，连续进样6 次，记录峰面积，计算其 r s d ，结果见表3 2 3 贵阳中医学院颐 ：学位论文 表3 精密度实验结果 结果表明：盐酸巴马汀峰面积的r s d 为0 1 2 ，表明仪器的精密度良好。 3 2 7 3 重复性试验 精密称取裂叶星果草药材粉末0 1 5 0 0 9 ，6 份，按“3 2 3 ”项下方法制备供试品溶 液，依法测定，计算裂叶星果草药材中盐酸药根碱和盐酸巴马汀的含量及其r s d ， 结果见表4 、表5 表4 重复性实验结果 结果表明：盐酸药根碱含量的r s d 为1 8 1 ，表明该方法的重复性良好。 一 贵阳中l 廷学院硕。i ：学位论文 表5 重复性实验结果 结果表明：盐酸巴马汀含量的r s d 为1 1 3 ，表明该方法的重复性良好。 3 2 7 4 稳定性试验 精密称取裂叶星果草药材粉末0 1 5 0 0 9 ，6 份，按“3 2 3 ”项下方法制备供试品溶 液，分别在0 、2 、4 、6 、8 、1 0 h 进样，依法测定，计算裂叶星果草药材中盐酸药 根碱和盐酸巴马汀的含量及其r s d ，结果见表6 、表7 表6 稳定性实验结果 结果表明：盐酸药根碱含量的r s d 为1 8 0 ，表明样品测定在1 0 h 内稳定。 贵阳中医学院硕。l ：学位论文 表7 稳定性实验结果 时间( h )峰面积均值 r s d ( ) o1 2 3 8 5 0 21 2 3 8 1 0 41 2 6 0 9 01 2 4 6 3 01 1 3 61 2 3 6 1 0 81 2 6 7 5 0 1 01 2 3 6 7 0 结果表明：盐酸巴马汀含量的r s d 为1 1 3 ，表明样品测定在1 0 h 内稳定。 3 2 7 5 加样回收率试验 精密称取已知含量的裂叶星果草药材粉末0 0 7 5 9 ，1 2 份，其中6 份分别精密加 入盐酸药根碱对照品溶液适量，另6 份分别精密加入盐酸巴马汀对照品溶液适量， 按“3 2 3 ”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算盐酸药根碱和盐 酸巴马汀的含量及其r s d ，结果见表8 、表9 表8 加样同收率试验结果 称样量( g ) 样品中盐酸药根碱加入标准晶的苗测定量回收率 平均 r s d ( ) 含昔( t a g )( t a g )( t a g )( )回收率( ) 0 0 7 5 17 4 5 68 0 o o1 5 6 3 l1 0 2 1 9 0 0 7 5 07 4 4 68 0 0 0l5 5 0 910 0 7 9 0 0 7 517 4 5 68 0 0 015 2 7 89 7 7 89 9 7 61 6 8 0 0 7 4 97 4 3 68 0 0 0 l5 4 8 0 10 0 5 5 0 0 7 5 27 4 6 68 0 0 0l5 3 5 09 8 5 5 0 0 7 5 37 4 7 68 0 0 01 5 3 7 19 8 6 9 由表8 数据可知，盐酸药根碱平均回收率为，r s d 为1 6 8 ，表明该方法为准 确度高。 2 6 贵阳中医学院硕i ：学位论文 表9 加样回收率试验结果 0 0 7 5 2 2 7 5 9l2 8 0 0 05 4 8 29 7 2 8 0 0 7 5 02 7 5 1 82 8 0 0 05 5 0 0 09 8 1 5 0 0 7 4 82 7 4 4 4 2 8 0 0 05 5 4 4 6l0 0 ol9 9 3 91 4 0 0 0 7 4 92 7 4 8 l2 8 0 o o5 5 7 6 41 0 1 0 1 0 0 7 51 2 7 5 5 52 8 0 o o5 5 6 2 7l0 0 2 6 0 0 7 5 22 7 5 9 12 8 0 o o5 5 4 8 19 9 6 l 由表9 数据可知，盐酸巴马汀平均回收率为，r s d 为1 4 0 ，表明该方法为准 确度高。 3 3 样品测定 精密称取裂叶星果草药材粉末0 1 5 0 0 9 ，按“3 2 3 ”项下方法制备供试品溶液， 依法测定，结果见表1 0 表1 0 贵州产裂叶星果草约材含量测定结果( n _ 3 ) 结果表明：裂叶星果草中盐酸药根碱含量为9 7 9 2 3 9 9 g ，盐酸巴马汀含量为 3 6 2 7 8 6 9 9 g ；由此看出，盐酸巴马汀含量远大于盐酸药根碱含量。 3 4 结果与讨论 3 4 1 采用高效液相色谱法，进行了盐酸药根碱和赫酸巴马汀的含量测定，并进行 方法学考察。方法学研究表明：盐酸药根碱在0 0 2 8 5 9 9 - - 0 1 7 0 5 9 9 呈良好的线性关 系( f o 9 9 9 8 4 ) ，重复性试验r s d 为1 8 1 ，平均回收率为9 9 7 6 ：盐酸巴马汀在 0 1 6 4 6 p g - 0 4 3 3 3 9 9 - 旱良好的线性关系( 产o 9 9 9 9 3 ) ，重复性试验r s d 为1 1 3 ，平 均回收率为9 9 3 9 ，此方法简便易行、重现性好，回收率高。 3 4 2 各样品的理论塔板数均不低于1 6 0 0 ：分离度大于1 5 ，说明分离度较好；拖尾 贵阳中医学院硕l ：学位论文 因子( t ) 在0 7 0 0 7 6 之问，说明其对称性良好，基本符合高效液相色谱测定要 求。 3 4 3 本课题组前期研究结果表明，裂叶星果草中盐酸药根碱和盐酸巴马汀有一定 的含量，且本实验建立的含量测定方法简便准确，重现性好。根据以上的研究结 果，我们认为盐酸药根碱和赫酸巴马汀作为裂叶星果草质量控制的指标性成分较 为合适。 4 贵州产裂叶星果草的抑菌试验 4 1 实验仪器、材料和试剂 4 1 1 实验仪器 手提式压力蒸汽灭菌器( 上海华线医用核子仪器有限公司) ： z x d h 2 6 3 0 t b s 型烘箱( 上海跃进医疗器械厂) ；普通琼脂平板，消毒钢管， 试管，刻度吸管( 1 m 1 ) ，滤纸( 均高压灭菌2 0 m i n 后备用) 。 4 1 2 实验试剂 肉汤培养基( 卫生部上海生物制品研究所) ；营养琼脂培养基( 上海中科昆 虫生物技术丌发有限公司) ，水为纯水。 4 1 3 实验菌种 金黄色葡萄球菌( s a u r e u s ) 、大肠杆菌( e n t e r o p a t h o g e m ce ) 和痢疾杆菌 ( d y s e n t e r y b a c t e r i a ) 均由贵阳中医学院中医基础实验室细菌培养室提供。 4 1 4 药材 本实验所用药材同“1 1 3 ”项。将野外采集生长正常植株粉碎成细粉并干燥。 4 2 实验方法与结果 4 2 1 供试品溶液的配制 加热回流提取：称取裂叶星果草药材粉末5 0 0 9 ，置1 5 0 m l 圆底烧瓶中加入水 1 0 0 m l ，于6 0 水浴锅中加热回流6 0 m i n ，取出，放至室温，并加水补足失去的重 贵阳中医学院硕十学位论文 量，过滤后浓缩至5 m l ( 浓度为1 0 0 ) ，作为供试品。 超声提取：称取裂叶星果草药材粉末5 o o g ，置1 5 0 m l 具塞锥形瓶中加入水 1 0 0 m l ，于6 0 水浴1 h ，取出，于4 0 加热超声4 0 m i n ，取出，放至室温，并加水 补足失去的重量，过滤后浓缩至5 m l ( 浓度为1 0 0 ) ，作为供试品。 4 2 2 药液的配制 制备的裂叶星果草试液1 号、2 号分别为加热回流提取和超声提取的原液；再 用2 倍稀释法制备裂叶星果草1 号、2 号( 稀释一倍) 、3 号( 稀释两倍) 的溶液。 制备碘酒作为阳性抑菌对照品。 4 2 3 菌液的配制 称取1 8 9 肉汤j 3 h , x 1 0 0 m l 蒸馏水，称取9 9 9 琼 j 旨j j t l , , x , 3 0 0 m l 蒸馏水，充分溶解， 放入压力蒸汽灭菌器中高压灭菌2 0 m i n ，取出倒入试管中( 约l o m l 左右) ，密封并 放入冰箱备用。 将菌种接种于肉汤培养基中，3 7 c 培养6 h ( 每m l 约含9 x 1 0 8 个细菌) 。用接种 环将菌液分别均匀涂布于各琼脂平板表面，稍后用镊子夹取消毒钢管等距离放置于 平板表面，再将试验用裂叶星果草原液、稀释液及对照用碘酒和中药阳性对照试液 1 ， 分别加入各个钢管内，并标记，随即将平板置于3 7 c 培养箱中培养1 6 - 1 8 h ，取出平板， 量取钢管周围抑菌环大小，记录，判断抑菌作用敏感强度。抑菌圈 2 6 m m 为高度敏 感；之1 l ， 2 6 为中敏感度；5 1 0 m m 为低敏感度。 结果见表，表l l 、表1 2 表11不同提取方法对二种常见致病菌的抑制作用 贵阳中医学院硕l ：学位论文 表1 2 不同浓度药液对二种常见致病菌的抑制作用 菌种1 号2 号3 号碘酒 金黄色葡萄球菌 1 6003 0 人肠杆菌000 2 8 痢疾杆菌 1 8003 1 4 3 结果与讨论 4 3 1 两种不同的提取方法的抑菌效果，加热回流提取对于金黄色葡萄球菌和痢疾 杆菌有较强的抑制作用，对于大肠杆菌无明显的抑制作用；而超声提取对于三种 常见致病菌均无明显的抑制作用。 4 3 2 本实验采用二倍稀释法，将裂叶星果草原液制备成不同比例的药液进行试 验，结果表明：稀释后的药液和原液对于金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌无明显的抑 制作用，对大肠杆菌同样无明显抑制作用。故配制药液时基于药效等方面的考虑 可直接配制成原液。 贵阳中医学院颀。卜学位论文 全文总结与展望 本论文在国内现有文献研究的基础上，从原植物形态、药材性状、光学显微 结构、电镜超微结构、理化鉴别、含量测定和体外抑菌实验等方面对贵州产裂叶 星果草进行了较为系统的生药学研究，以期为贵州产我国独有植物种裂叶星果草 的鉴定、制定质量标准提供科学依据。本文实验讨论如下： l 关于生药学鉴定的讨论 从形态组织学方面较为系统地考察了贵州产裂叶星果草药材的原植物形态、 性状特征、光学显微特征和电镜超微结构： 原植物形态及性状特征等宏观研究表明：裂叶星果草的形态特征，与中国植 物志及贵州植物检索表所描述的基本一致，一些细微差别可能是由于气候条件及 生态环境不同造成的。与植物志中描述的同属植物星果草比较，主要区别是裂叶 星果草的叶近五角星，叶柄无毛。其余特征区别不明显。 光学显微研究表明：根和根茎的构造与黄连属相似，根和根茎的皮层中含有 大量的草酸钙簇晶和淀粉粒：叶柄有5 - 7 个维管束，散生，隐约见形成层；叶的 上下表面均含有单细胞非腺毛；花粉粒球形或近球形，每个花粉粒具有6 个萌发孔， 花粉粒表面均匀分布着刺状雕纹。 本文对裂叶星果草的叶及花粉粒进行了电镜扫描，电镜超微结构研究表明： 上表皮无气孔器，叶表面细胞形状清楚，轮廓清晰可见。表皮细胞平周壁略为突 起。下表皮与上表皮的单细胞非腺毛相似，腺毛基部与中部膨大呈圆形，上部略 尖，表面平滑无雕纹。小表皮的气孔器排列不规则，与表皮细胞平或略低，副卫 细胞表面纹饰不明显。可较清晰地观察到花粉粒的形状及表面特征，与光学显微 结构基本一致。 2 关于薄层色谱鉴别的讨论 采用薄层色谱法对裂叶星果草药材进行初步的理化鉴别研究。结果表明：裂 叶星果草中含有盐酸药根碱和盐酸巴马汀两种生物碱。 裂叶星果草的这两种生物碱成分在苯：乙酸乙酯：甲醇：异丙醇：水( 6 ：3 ： 2 5 ：1 5 ：0 5 ) 系统中具有良好的展开性：紫外灯下显两个荧光斑点，其r f 值依次 为p 1 ( 1 8 2 ) 、p 2 ( 4 3 5 ) 。 贵阳中医学院颁 ：学位论文 以盐酸药根碱和盐酸巴马汀为对照品薄层色谱( t l c ) 鉴别中，盐酸药根碱 对照品r f 值为p 1 ( 1 8 5 ) ，盐酸巴马汀对照品r f 值为p 2 ( 4 3 6 ) ，表明裂叶星果草 中含有这两种生物碱。 在薄层鉴别试验中，中国药典2 0 0 5 版第一部黄连项下的展丌系统对于裂叶星 果草的展开效果不是很理想，斑点容易聚集，故本实验改变了系统的极性大小后 的展开效果较好。薄层鉴别试验中，考察了两种提取方法的提取效果，虽然两种 提取方法均显两个荧光斑点，但是超声的斑点较不明显，故需要通过高效液相色 谱法对这两种提取方法做进一步的考察。薄层板展开晾干后，半小时内必须观察 并记录，否则斑点颜色会逐渐消失。 3 关于高效液相色谱法测定含量的讨论 采用高效液相色谱扫描法对以鉴别的裂叶星果草中的两种生物碱进行含量测 定。结果表明：贵州产裂叶星果草中两种生物碱均有一定的含量，其中盐酸巴马 汀的含量比盐酸药根碱偏高。 在高相液相色谱扫描中，生物碱的峰型一直存在拖尾的问题，本实验的两种 成分也存在类似现象，本实验通过在流动相系统中加入乙腈改善了拖尾问题，并 且出峰时间较为理想。 从下图可以看到，供试品溶液的图谱在1 分钟左右出现两个未分离丌的峰，初 步判断为其他杂质峰，因试验条件有限，并未进一步对推测进行判断。为了能全 面的反映出裂叶星果草供试品溶液的图谱，保留了此部分，有待于以后的相关试 验对其进行研究。 鉴于薄层色谱鉴别对于加热回流提取和超声提取两种方法的比较中，未见明 显的差别，在高效液相色谱扫描中，进一步对这两种方法的提取效果进行比较。 结果表明：加热回流对于盐酸药根碱和盐酸巴马汀的提取效果均优于超声提取。 故本实验对于供试品溶液的制备均选用加热回流提取。 4 关于体外抑菌试验的讨论 体外抑菌试验中，也对加热回流和超声提取两种方法进行了考察。结果表明： 裂叶星果草对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌有较强的抑制作用，据文献报道，民间 的少数民族多用其治热病、腹痛和痢疾，具有清热解毒、除湿利水之功效。结合 试验结果观察，裂叶星果草在民间的应用有一定的依据，今后可以结合体内药效 贵阳中医学院顾l 学位论文 学试验进一步研究裂叶星果草的功效与所治病症。 根据文献报道，黄连对于金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌有较强的抑制作用，且 对于金黄色葡萄球菌较为敏感；民间常用裂叶星果草代替黄连使用，且认为功效 更甚于黄连，本实验结果表明，代替黄连使用有一定的依据，但对于具体的病症 是否甚于黄连还有待进一步通过体内药效学研究证实。 本文的创新之处： 1 首次对贵州产裂叶星果草的形态组织学特征进行了较为系统地研究，报道 了其光学显微和电镜超微结构，并给出了显微特征图，为全面鉴别裂叶星果草药 材提供了新的鉴别依据。 2 首次对贵州产裂叶星果草进行了薄层色谱鉴别和高效液相色谱定量分析， 摸索出了简单快捷的理化鉴定方法及含量测定方法，并对裂叶星果草药液的制备 进行了初步考察，为裂叶星果草药材的质量标准提供了新的依据。 3 首次对贵州产裂叶星果草进行了体外抑菌实验，并将其抑菌作用与文献中 报道的黄连抑菌作用进行比较，证实了民间对其运用有一定的依据，为裂叶星果 草药材的开发及利用提供了依据。 本文的不足之处： 1 由于文献中对于贵州产裂叶星果草的分布地报道较少，导致本实验未采集 到足够多地区的裂叶星果草，无法比较各地区之间的差异。 2 文献中报道指出，裂叶星果草中含有木兰碱，但由于目前中国生物制品检 验所没有此种生物碱的对照品，而医药公司所售的对照品价格昂贵且是自制，故 本实验未对木兰花碱进行研究。 ， 3 由于试验条件的限制，体外抑菌试验中所用菌种较少，不够全面，本实验 也未进行体内相关试验，今后的实验中还需进一步补充。 贵阳中医学院颀l ：学位论文 参考文献 1 】中国科学院中国植物：基编委会中国植物：恙第二十七卷北京：科学出版社1 9 7 9 2 】陈家春，陈旭东裂叶星果草的性状及显微鉴别 j 】中药材2 0 0 0 2 3 ( 1 0 ) ：1 0 3 】许汉林裂r r l 星果草化学成分的研究学位论文武汉：湖北中医学院，1 9 9 9 【4 】赵守训土编中草药有效成分手册人民卫生出版社，1 9 8 6 5 】王浴生等中药药理与应用人民卫生出版社，1 9 8 3 ：5 8 ，9 9 2 6 李正理植物制片技术 m 】j 匕京：北京科学出版社，1 9 8 7 【7 】张风玲，王翠婷生物技术【m 】艮春：东北师范人学出版社，1 9 9 3 8 】屠骊珠内蒙古两部地区九种旱生植物叶的解剖学观察 j 内蒙古大学学报( 自 然) 1 9 8 2 1 3 ( 4 ) 【9 】陈晓弧，胡成华，喻富根等方竹属竹亚科叶片表皮微形态特征【j 植物分类学 报1 9 9 3 3 3 ( 3 ) ：2 2 3 2 3 5 【l o 常艳芬，千任翔，陆树刚水龙骨哑科植物( 水龙骨科) 的形态解剖学研究【j 】云南植物研 究2 0 0 6 2 8 ( 6 ) ：5 8 7 - 5 9 2 【1 1 】k 伊稍著( 李正理泽) 种子植物解剖学 m 】j 匕京：科学出版社，1 9 8 6 【1 2 】许汉林，彭松等薄层扫描法测定裂叶星果草中盐酸药根碱与盐酸巴马汀的含量【j 中国中 医药信息杂：墨2 0 0 0 7 ( 3 ) ：2 4 1 3 】曾三平，雷鹏h p l c 法测定香连制刑中盐酸小檗碱、巴马汀和药根碱含量 j 】中国药 事2 0 0 7 2 1 ( 8 ) ：5 9 8 【1 4 】陈黎，王启斌等高效液相色谱法测定金果榄中盐酸药根碱与盐酸巴马汀含量 j 】医药导 报2 0 0 7 9 ( 2 6 ) ：1 0 8 6 3 4 贵阳中医学院硕七学位论文 英文缩写 m l n h m l p g n l n l a m r f 附录一英汉缩略语名词对照 英文名称 m i n u t