气相色谱法同时测定花生中12种有机磷农药残留量.pdf

3 2 化学分析计量 2 0 0 9年 ， 第 l 8卷 ， 第 3期 气相色谱法同时测定花生中1 2 种有机磷农药残留量 朱臻怡冯民何健熊华萱曾义 ( 淮安出入境 检验检疫局 ， 淮安2 2 3 0 0 1 ) 摘要建立了气相色谱法同时测定花生中1 2种有机磷农药残留量的方法。花生中有机磷农药残留通过 乙腈提 取， 经液 一液分配后有机相浓缩以丙酮定容， 应用氮磷检测器( N P D) 检测。除敌百虫和杀扑磷的检测限分别为 2 0 、 5 O g k g以外， 其余 l 0种有机磷农药检测限均为 1 0 g k g 。加标回收率为6 8 7 0 1 0 8 4 5 ， 测定结果的相对标 准偏差为3 o 5 一1 9 1 0 ( n=5 ) 。该法与单独测定这 1 2种有机磷农药的加标回收率和相对标准偏差基本符合。 关键词气相色谱有机磷农药花生 有机磷农药是用于防治植物病虫害的有机化合 物 ， 在花生种植 中被广泛使用 。有机磷农药对 人体 毒性大 ， 许多发达国家和 国际组织对花生 中农 药残 留制定了严格的限量标准。花生作为我国在国际市 场具有相对竞争优势的农产 品， 其 出 口遭受 到了一 系列 的 S P S措施的阻碍 ， 其 中农药残 留限量标 准 日 趋严格， 检测项 目不断增加 。因此花生 中有机磷农 药残留量检测对于保障人们饮食健康， 保障我国花 生进出口贸易具有重要意义。 目前在我 国， 有机磷农药 已被定为出 口花生残 留监控的一个项 目， 但还没有相关的残留分析方法 标准 ， 特别是多残 留同时测定 的方法。对于有机磷 农药 的残 留分析 ， 国内外报道较多。王江 报道了 应用固相萃取 一气相色谱法检测蔬菜 中 1 7种残留 的有机磷农药 ， 农业部 制定 了蔬菜和水果 中有机磷 农药多残 留检测方法标准 。但到 目前为止， 国内 外 尚未有花生 中有机磷农 药多残 留分析方法 的报 道。笔者利用气相色谱( G C N P D ) 技术， 对在花生 进 出口贸易中经常被 限制 的 1 2种有机磷农药进行 同时测定 ， 以乙腈提取、 液 一 液分配浓缩 的简便操作 手段 ， 有效地对该 l 2种农药残留进行测定 ， 检测灵 敏 度 高， 满 足 了残 留 检 测 和 目前 国外 检 测 限 量 ( MR L ) 的要求 ， 该法 的建立提高 了目前花生中有机 磷农药的多残留检测能力。 1 实验部分 1 1主要 仪 器与 试剂 气相色谱仪： A g i l e n t 6 8 9 0 N型， 配有氮磷检测 器和 A g i l e n t G 2 0 7 0 A A化学 工作站 ， 美 国安捷伦 公 司 ； 电子天平 ： Me t t l e r A E 2 4 0型 ， 瑞士梅特勒公司； 均质机 ： N I S S E I AC E型 ， 日本精机制作所 ； 旋转蒸发器 ： R一2 0 1型 ， 上海 申生科技有限公 司 ； 正 己烷 、 丙酮 、 乙腈 ： 农残级 ， 美 国 T e d i a 公司 ； 三唑磷农药标准品 ： 8 1 0 ， 购 自德 国 D r E h r e n s t o r f e r 实验室 ， 用丙酮溶解并制成 1 0 m g mL标 准储备液， 再逐级稀释成标准工作溶液； 苯线磷 、 灭线磷 、 敌百虫、 对硫磷 、 二嗪农、 甲胺 磷 、 甲基对硫磷、 杀螟松、 乐果 、 甲拌磷、 杀扑磷农药 标准品： 浓度均为 1 0 0 Ix g mL ， 购 自农业部环境保护 科研监测所 ， 用丙酮稀释成 1 0 g mL标准储备液 ， 再逐级稀释成标准工作溶液。 1 2 气相 色谱分析条件 色谱柱 ： D B一1 7 ( 3 0 m0 5 3 mm， 1 0 0 m) ； 检测器 ： 氮磷 检测器 ； 载 气 ： 高 纯氮气 ， 流速 为 1 0 m L m in ； 检测器支持气： 氢气， 流速为 3 0 m L m in ， 空气流速为 6 0 0 0 m L mi n ； 进样 口温度 ： 2 2 0 ； 检 测器 温度 ： 3 2 0 ； 柱 温 ： 初 始 柱 温 1 5 0 o C， 维 持 2 ra i n ， 以 1 0 C m i n升至 2 5 0 ， 维持 1 2 mi n ； 进样量 ： 1 0 t x L ， 采用分流阀关闭 3 0 s 的不分流进样方式。 1 3样 品预 处理 样品经花生粉碎机粉碎均匀。 ( 1 ) 提取准确称取粉碎后的样 品 2 5 g ( 精确 到 0 0 1 g ) 于2 5 0 mL均质杯中， 加人 5 0 m L乙腈 ， 均 质 2 m i n 。在 1 0 0 m L具塞量筒 内放 5 g氯化钠 ， 放 一 铺有滤纸的玻璃漏斗 ， 过滤均质好的样品， 过滤完 全后盖上塞子 ， 剧烈震荡 1 rai n ， 在室温下静置约 l 0 ra i n ， 使乙腈相和水相分层。准确吸取 1 0 mL乙腈相 溶液( 上层 ) 置入鸡心瓶中， 在 5 0 c I = 水浴上减压旋转 蒸发至干。 ( 2 ) 净化将鸡心瓶 中残渣用 1 0 m L丙酮溶 解并混匀 ， 用 0 2 滤膜放在 5 m L注射器顶端 ， 收稿 日期 ： 2 0 0 9 0 3 1 4 朱臻怡， 等： 气相色谱法同时测定花生中 l 2 种有机磷农药残留量 3 3 将丙酮溶液过滤 ， 进行 G C分析。 2结果 与讨论 2 1 样品预处理条件的选择及优化 根据相 似相容原理 ， 以试样种类 、 待测农 药特 性 、 提取溶剂性质 3方面综合考虑 ， 以采用单一溶剂 或混合溶剂进行提取是确定选用提取溶剂的原则。 本方法采用极性相对较强的乙腈作为提取溶剂可兼 顾多种农药种类和样品基质 的需要。通过比较旋转 蒸发与氮吹浓缩提取溶液时发现 ， 两者 回收率 几乎 均达到 1 0 0 ， 但对于大容量溶液 ， 前者速度明显快 于后者 ， 且前者可以避免 由于氮吹而可能带进 的杂 质 ， 因此选用了旋转蒸发器进行浓缩。 花生样 品中通常含有一定量 的水分、 糖分 和油 脂等成分 ， 因此 ， 高效净化多基质样品干扰物是高灵 敏多种农药残留检测的关键。本方法采用有机相和 水相液 一 液分配的方法 ， 即对提取液采用加氯化钠 形成氯化钠水溶液以除去水分 、 糖分等部分基质干 扰物。经试验 ， 本方法净化效果较好 。 2 2线 性 范 围与检 测 限 选用 3份阴性未加有机磷的样品进行分析 ， 以 阴性样品在保 留时间前后 0 5 ra i n的噪音的标准偏 差的 3倍所对应 的浓度为方法的定量检测限。分别 取一定浓度的有机磷标准溶液进行气相色谱分析 ， 以色谱峰面积 Y对标准溶液浓度 作 图， 线性方程、 相关系数及检测限见表 1 。 表 1 花生样品 中有机磷农药的最低检测限和线性范围 检测限 线性范围 相关 农药名称 线性 回归方程 系数 n g g 一 n g g l 三唑磷 1 O v=1 9 5 44 x一1 5 0 0 3 1 O1 O o o 0 9 9 93 苯线磷 1 0 v =2 9 4 5l x一 5 4 5 7 4 1 01 O 0 0 0 9 9 8 6 敌百虫 2 0 v=7 1 7 x-I- 4 5 7 3 4 2 01 0 0 o 0 9 9 78 对硫磷 1 0 v： 2 7 5 3 8 x+2 3 9 8 3 1 01 O 0 o 0 9 9 5 8 二嗪农 1 O y=3 0 6 1 8 x一 3 2 0 8 4 1 01 0 o O 0 9 9 7 6 甲胺磷 1 O y=3 6 9 4 x 4 - 0 4 8 42 1 01 0 0 0 0 9 9 9 6 甲基对硫磷 1 O v =4 4 4 48 x一1 3 7 5 6 1 01 o o 0 0 9 9 91 杀螟松 l O v= 2 6 7 5 l 5 5 9 4 1 01 o o 0 0 9 9 9 3 乐果 1 O v： 2 3 4 2l x一1 1 7 8 6 1 0l o o O 0 9 9 9 8 甲拌磷 l 0 v= 2 2 0 7 x+0 8 6 5 5 1 01 0 o O 0 9 9 8 5 灭线磷 1 0 v：1 4 0 8l x+5 2 9 1 7 1 01 O o o 0 9 9 7 4 杀扑磷 5 0 v =9 2 1 6 4 x+ 0 7 4 6 6 5 0l O 0 0 0 9 9 9 9 2 3 单组分的加标 回收试验与精 密度试验 在花生阴性样品中分别单独添加检测限浓度水 平 的有机磷农药标准溶液 ， 并进行重现性测定 ， 结果 见表 2 。由表 2可知 ， l 2种有机磷农药的加标 回收 率为 9 0 1 1 0 ， 测 定 结果 的相对 标 准偏 差 为 1 0 7 1 8 6 9 。 表 2单组分的添加回收试验 与精密度试验结果 农 药 添加 量 回收率 平均 回 R S D 名称 n g g 一 1 收薯 l 1 1 1 6 1 0 7 2 4 9 9 1 4 三唑磷 l 0 1 0 1 7 0 7 o 5 9 4 5 0 9 6 4 8 1 0 7 4 4 l l 2 0 6 8 8 7 4 苯线磷 l 0 9 3 1 2 1 4 71 8 2 3 2 9 0 2 2 7 7 9 2 1 1 4 2 5 1 0 4 2 4 敌百虫 2 0 1 0 7 2 O 4 4 7 1 0 4 1 3 1 o 6 1 8 9 0 5 8 9 2 1 2 对硫磷 l 0 9 2 0 0 1 0 7 9 2 7 2 9 2 5 6 1 l 6 0 o 1 0 1 5 4 9 7 3 6 二嗪农 1 0 9 9 1 2 1 0 7 1 8 9 O 2 91 6 8 1 0 o 5 6 1 0 3 8 4 甲胺磷 1 O 1 0 2 6 7 4 6 2 1 0 8 6 6 9 7 6 0 8 1 5 6 7 7 6 6 8 O 8 2 甲基对硫磷 1 O 9 0 41 1 8 6 9 9 3 3 O 1 1 8 7 2 7 7 4 6 9 3 1 4 杀螟松 1 O 1 o o 5 2 1 8 6 2 1 l 6 6 8 1 1 4 8 2 9 6 6 4 9 4 8 6 1 0 7 2 6 灭线磷 1 0 l 0 o 5 7 5 8 3 1 0 6 5 4 9 7 5 6 9 7 2 8 9 8 0 4 甲拌磷 l 0 9 9 61 2 2 8 1 01 6 6 1 01 4 4 9 9 5 4 8 8 6 8 乐果 1 0 9 2 O 8 5 61 91 5 4 8 8 5 4 1 1 8 7 2 1 0 6 2 7 1 1 3 9 7 杀扑磷 5 0 1 o 4 5 3 1 2 9 2 I l 1 0 6 8 2 7 8 9 4 3 9 2 4 多组 分的加 标 回收 试验 与精 密度 试验 在花生阴性样品( 农药的本底值均小 于检测限 水平 ) 中分别添加一定浓度水平 的有机磷农药混合 标准溶液 ， 各水平平行测定 5次， 结果见表 3 。鉴于 各有机磷农药本身的极性强弱 的关系 ， 以及各 自在 酸性 、 碱性及 中性溶液 中稳定性 的不 同， 还有来 自酸 度对农药 的降解作用各不相 同、 互有影响的缘故 ， 将 所分析的有机磷农药分成 2组。 表 3多组分添加回收试验与精密度试 验结果( n=5 ) 组别 名称 添加水平 n g g 回收率 R S D 敌百虫 2 0 9 9 2 2 1 1 2 7 甲胺磷 1 0 9 3 1 O 1 5 9 4 灭线磷 1 0 1 0 8 4 5 6 2 1 第 一 组 乐果 1 0 6 8 7 0 1 1 5 9 对硫磷 1 0 8 0 3 7 1 7 0 o 杀扑磷 5 0 9 7 6 2 1 9 1 0 甲拌磷 1 0 9 2 1 1 1 7 6 5 二嗪农 1 O 7 7 8 2 3 O 5 甲基对硫磷 1 O l 0 3 3 8 1 4 1 8 第二组 杀螟松 1 O 1 0 3 1 1 l 5 9 8 克线磷 1 O 7 5 9 4 4 3 9 三唑磷 1 0 9 2 1 1 l 7 6 5 实验结果表 明， 方法的平均 回收率 为 6 8 7 0 1 0 8 4 5 ， 相对标 准偏 差为 3 0 5 一1 9 1 0 。 检测限添加水平的 1 2 种有机磷农药色谱图见图 1 、 图 2 。 化学分析计量 2 0 0 9年 ， 第 1 8卷 ， 第 3期 0 2 4 6 8 l O 1 2 1 4 l 6 1 8 t mi n 1 一敌百虫； 2 一 甲胺磷 ； 3 一灭线磷 ； 4 一乐果 ； 5 一 对硫磷 ； 6 一杀扑磷 图 1 花生中添加 检出限水平有机磷农药色谱图( 第一组 ) 0 2 4 6 8 l 0 1 2 1 4 1 6 1 8 t | mi n 7 一 甲拌磷 ； 8 一二嗪农 ； 9 一 杀螟松 ； 1 0 一 甲基对硫磷 ； n一克线磷 ；1 2 一三 唑磷 图 2 花生中添加检出限水平有 机磷农药色谱 图( 第二组) 表 3中的回收率与精密度数据符合国家规定的 残 留分析对准确度与精密度 的要求 ， 从而说 明本方 法具有相当的可靠性与可行性 。 为了了解影响方法回收率的主要 因素， 在方法 的验证过程 中应用了“ 倒推式” 验证方法 ， 即通过添 加回收试验 ， 依次从方法的最后一个步骤到第一个 步骤对净化 、 提取等步骤中可供选择的手段方法进 行比较与筛选 ， 验证其 回收率 ， 从而分析出影响回收 率的主要步骤 ， 进而有所侧重地改善方法 ， 选择能达 到相对较 高回收率 的最佳方案。通过 多次验证试 验 ， 本方法中影响回收率的主要步骤为样品提取 ， 因 此 ， 本方法通过减少提取步骤而提高 了回收率。 3 结语 建立 了气相色谱法 同时测定花生 中 l 2种有机 磷农药残 留量 的方法， 并从线性范 围、 检出限、 准确 度、 精密度等方面进行了优化验证 ， 有机磷农药组分 在给定的色谱条件下得到了较好的分离 。方法的准 确度与精密度符合 残留分析质量控制指南的要求。 所建立的方法具有灵敏、 快速、 稳定、 简便等特点 ， 能 够满足实际应用的需要 。 参 考 文 献 1 N Y T 7 6 1 2 0 0 8 无公害食品蔬菜和水果 中有机磷 、 有机氯 、 拟除虫菊酯和氨基 甲酸酯类农药多残留检测方法 S 2 王江， 王辛 ， 梁晓聪， 等 固相萃取 一 气相色谱法检测蔬菜中 l 7 种残留的有机磷 农药 J 中 国卫生检 验杂 志 ， 2 0 0 8， 1 8 ( 2) ： 2 一2 5 7 S n仉， T ANEoUS DETE CT I oN oF 1 2 oRGANoP HoS P HoRUS PE S T I C) E RESI I ) UES I N PEANUT BY GC Z h u Z h e n y i ，F e n g Mi n，He J i a n，Xi o n g Hu a x u a n ，Z e n g Yi ( Hu a i a n E n t r yE x i t I n s p e c t i o n a n d Q u a r a n t i n e B u r e a u ，H u a i a n 2 2 3 0 0 1 ，C h i n a ) ABS TRACT 1 2 o r g a n o p h o s p h o r u s p e s t i c i d e r e s i d u e s i n p e a n u t w e r e s i mu l t a n e o u s l y d e t e r mi n e d b y g a s c h r o ma t o g r a p h Or g a n o - p h o s p h o m s r e s i d u e s w e r e e x t r a c t e d f r o m s a mp l e wi t I l a c e t o n i t r i l e T r o u g h l i q u i dh q u i d d i s t rib u t i o nt h e o r g an i c p h a s e Was e v a p o r a t e d j u s t t o d r y n e s s B e i n g d i l u t e d t o d e s i r e d v o l u m e w i t h a c e t o n e ， t h e r e s i d u e s w e r e ana l y z e d b y g a s c h r o m a t o g r a p h w i t h n i t r o g e n a n d p h o s p h o tos d e t e c t o r r h e d e t e c t i o n l i mi t s o f t r i c h l o r f o n and me t h i d a t h i o n we r e 2 0， 5 0 g k g r e s p e c t i v e l y ，a n d t h e d e t e c t i o n l i mi t s o f o the r 1 0 k i n d s o f o r g a n o p h o s p h o r u s p e s t i c i d e w e r e 1 0 g k g T h e r e c o v e ri e s w e r e 6 8 7 0 一1 0 8 4 5 ， and the r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a ti o n s o f d e t e c t i o n r e s ult s w e r e 3 0 5 一1 9 1 0 ( n= 5 ) T h e r e c o v e ri e s a