糖酵解中间产物的测定.doc

_华南农业大学实验报告 专业班次 11农学一班 组别201130010110题目 糖酵解中间产物的测定 姓 名 梁志雄 日期【实验原理】利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2，4二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2，4二硝基苯肼丙糖的棕色复合物，其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比【实验材料和试剂】实验仪器：恒温水浴锅、离心机、电子天平实验用品：试管、移液管、玻璃棒实验材料与试剂：酵母、10%三氯乙酸、5%葡萄糖、0.75mol/L NaOH、0.002mol/L碘乙酸、2，4-二硝基苯肼溶液、0.56mol/L硫酸肼【实验步骤】1、发酵过程观察 取干燥试管3支，编号13，分别加入0.2g酵母，再按下表所示加入试剂表一管号12310%三氯乙酸（ml）1000.002mol/L碘乙酸（ml）0.50.500.56mol/L硫酸肼（ml）0.50.505%葡萄糖（ml）55537保温45min，观察气泡多少，并记录没有气泡，有白浆状的物质沉淀在底部，上部位乳白色溶液，少量气泡底部沉底有少量白浆状物质，上部有较多乳白色泡沫，有较多气泡底部几乎没有白浆状物质，试管上部有许多乳白色泡沫，有较多气泡加完葡萄糖后每支试管立刻分别插入玻璃棒1支，搅拌均匀，玻璃棒留在试管中，在37摄氏度保温时用留在试管中的玻璃棒间断搅拌12次。2、终止发酵和补加试剂 37摄氏度保温45min后，按下表所示添加试剂表二管号12310%三氯乙酸（ml）0110.002mol/L碘乙酸（ml）000.50.56mol/L硫酸肼（ml）000.5加完试剂后，立刻用原来留在试管中的玻璃棒搅拌，这时发酵终止，取出玻璃棒。3、发酵液过滤 上述3支试管分别过滤，取滤液用于显色鉴定4、显色鉴定 取3支试管，按下表所列顺序加入试剂，观察各管颜色的深浅，记录表二管号123过滤液（ml）0.50.50.50.75mol/L NaOH（ml）0.50.50.5室温放置5min2，4-二硝基苯肼（ml）0.50.50.50.75mol/L NaOH（ml）3.53.53.5观察颜色深浅，并记录浅灰色茶红色灰色【实验记录】实验记录与上述表格中【实验结论】1、 在步骤1中，三氯乙酸是一种蛋白酶的变性剂，可以是酵母中的所有的酶失活，使糖酵解反应无法或只可很小程度上进行。在表一的1号试管中，由于加入了三氯乙酸，使酵母中的酶失活，不能分解葡萄糖，所以不能产生气泡；至于2号试管，由于加入了碘乙酸和硫酸肼，使糖酵解反应过程中的3-磷酸甘油醛累积，但是它门不能使反应完全停留在生成3-磷酸甘油醛这个阶段，碘乙酸和硫酸肼只是起到了延缓的作用，所以还是有部分葡萄糖被酵母菌分解生成CO2和H2O，3号试管中做为空白对照，葡萄糖被酵母菌分解，产生大量CO2和H2O2、 步骤2中，在表二的2号和3号试管中分别加入三氯乙酸是让两试管中的葡萄糖分解反应终止，加入试剂后立刻用玻璃棒搅拌是因为酶的作用很迅速；3、 步骤4的表四中，两次加