F_性传播疾病实验室相关检查PPT课件.ppt

性传播疾病实验室相关检查,1,目的,加强沟通,2,一、概述二、重点介绍艾滋病、梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、生殖器疱疹、软下疳的临床检测方法的选择及临床意义；,3,概述,历史上：（传统）把通过性活动传染的疾病称为性病（Venerealdiseases,VD）主要指:梅毒(syphilis)淋病(gonorrhea)性病肉芽肿软性下疳四种又称经典性病,4,概念更新,上世纪年代以来发现许多病原体也可以通过性生活传播概念有了大幅度的更新迄今为止大约已发现余种性病同时：四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制,5,性病的发病“顺位谱”，有了变化，鲜为人知的性病提前，而久为人知的性病占到了后位1970年，世界卫生组织把旧名称“性病”改为“性传播疾病”。（Sexuallytransmitteddiseases,STD）,6,性病（VD）：是指通过性交传染的、具有明显生殖器损害症状的全身性疾病。4种性传播疾病（STD）：是指通过性接触可以传染的一组传染病,在我国,人们简称为性病。包容20余种,7,病毒,生殖器疱疹单纯疱疹病毒(HSV)(主要由HSV-2引起)生殖器CMV感染巨细胞病毒(CMV)乙型肝炎乙型肝炎病毒(HBV)甲型肝炎甲型肝炎病毒(HAV)尖锐湿疣人乳头瘤病毒(HPV)生殖器传染性软疣传染性软疣病毒获得性免疫缺陷综合征(AIDS)人类免疫缺陷病毒(HIV),8,非细菌性微生物,性病性淋巴肉芽肿(CTL型引起)非淋菌性尿道(宫颈)炎沙眼衣原体(CTDK型引起)解脲支原体（UU）人型支原体(MH)生殖道支原体(GU)梅毒梅毒(苍白)螺旋体(TP),9,细菌,淋病奈瑟淋病双球菌(NG)腹股沟肉芽肿肉芽肿荚膜杆菌(DG,CBG)软下疳杜克雷嗜血杆菌（HD)细菌性阴道炎加特纳嗜血杆菌(GV)志贺氏菌属痢疾志贺氏菌感染弯曲杆菌病弯曲杆菌B群链球菌阴部感染及阴道病细菌性阴道病某些阴道厌氧菌,10,真菌,由白色念珠菌/拟酵母菌：念珠菌性阴道炎念珠菌性龟头包皮炎外阴阴道真菌感染表浅部真菌：股癣,11,原虫：滴虫性阴道炎尿道炎（阴道毛滴虫）阿米巴病（溶组织阿米巴原虫）蓝氏贾第鞭毛虫感染体表寄生虫：阴虱病（阴虱）阴部疥（疥螨）,12,让患者能接受社会性很强的疾病,13,我国重点防治的性病,艾滋病(AIDS)梅毒(syphilis)尖锐湿疣(condylomaacuminatum)淋病(Gonorrhea)生殖器疱疹(genitalherpes)非淋菌性尿道炎(NGU)软下疳(chancroid)性病性淋巴肉芽肿(lymphogranulomaVenereum),14,STD的诊断：病史接触史临床表现实验室检查STD监测和疗效判断的重要依据实验室检查,15,性病实验室检查特点,诊断技术种类较多（形态学、微生物学、免疫学、分子生物学等许多检测方法）临床检验工作中不确定性（需借助图谱病原体形态典型和不典型，可借助书籍资料篇幅有限疾病的社会性（健康、精神、经济、家庭和声誉）,16,性病实验室诊断原则,慎重：不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益和客观条件，新技术：对待新技术一定要科学比对，慎重使用,17,一、艾滋病的实验室诊断,理论依据大量血清学流行病学资料:V几周IgM抗体出现很快IgG抗体出现并一直存在（无免疫源性）实验目的：检测抗HIV抗体（IgG主）用于诊断实验：HIV血清学初筛试验HIV血清学确证试验,18,HIV血清学初筛试验,试验要求：HIV-1+2或HIV1/2初筛试验要求：敏感性高要求，理论上要达100%特异性要求允许少量假阳性假阳性可通过重复试验和确证实验排除具备至少两种初筛方法,19,初筛实验方法,颗粒凝集试验（PA）酶联免疫吸附试验-ELISA第三代（双抗原夹心法）金标法：乳胶快速敏感性100%，特异性99.8%标本要求：新鲜全血2ml，无抗凝,20,确证实验方法,蛋白印迹试验（Westemblot）试验要求：准确性特异性强有资质的实验室进行检测,21,临床意义,临床诊断初筛试验：阴性结果:基本可排除HIV感染，必要时2-3月复查阳性结果:其它初筛方法重复试验，阳性报告HIV抗体待查，进一步做确证试验确诊试验：结果阳性的标本可报告HIV抗体阳性,22,其它相关试验,用于预后及抗病毒治疗疗效观察实验室指标的检测：1CD4+细胞和CD8+细胞计数CD4+淋巴细胞正常值为500-1600个/ul,CD4+/CD8+的正常比值为（1.5-1.7）：12病毒载量测定(viralload,VL)实际上，体内复制的病毒的数量是不能直接测量的，一般用血浆中HIVRNA的拷贝数代表HIV的病毒载量。HIV病毒载量与疾病进展速率和预后有强相关关系，,23,其它相关试验,P3实验室：病毒分离培养相关抗原检测小结：,24,二、梅毒的临床分期,后天梅毒：一期梅毒二期梅毒三期梅毒(晚期梅毒)先天梅毒,25,梅毒一期皮损-硬下疳,26,梅毒二期皮损,27,梅毒晚期损害,28,二、梅毒的实验室诊断,检查病原体的试验测抗体血清学检查,29,检查病原体的试验,暗视野显微镜检查法（WHO推荐）Fontana-Tribondean镀银染色法（难、敏感性差）浓盐酸蒸汽显示法（操作中烧伤）单克隆免疫银光法（DFI）-PCR,30,31,暗视野显微镜检查临床意义,1.可确证梅毒-直接检查到梅毒螺旋体2.对早期现症梅毒检测最好的方法（一期、二期梅毒皮损或淋巴节结、孕妇羊膜穿刺）,32,选择试验注意事项,1.清洁皮损表面但不能用消毒液2.取材-渗出液、尽量避免出血（降低阳性率）3.口腔溃疡要谨慎4.阴性结果不能排除梅毒可能性-取材不当、皮损致数量不足、近期使用抗生素、损害接近自然消退等,33,试验选择合适国情,34,梅毒血清学检查,两组试验：1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验（初筛）2.梅毒螺旋体抗原血清学试验（确证）两组试验的目的都是检测抗体非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-脂质抗体-非特异性）梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-梅毒螺旋体抗体-特异性）无免疫源性,35,非特异性梅毒的血清学初筛试验,方法：1.性病研究实验室试验VDRL2.不加热血清反应素试验USR3.快速血浆反应素环状卡片试验RPR4.甲苯胺红试验TRUST,36,四种初试验筛方法的比较,37,四种初筛方法,原理：相同目的：相同临床意义：相同不同：方法学上改良,38,四种初筛方法,原理：当人体感染梅毒螺旋体4周10周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG)目的：抗-脂质抗体,39,四种初筛方法,方法：定性法-意义局限定量抗体的效价滴度（倍比稀释）通过看化验单可判别定量或定性阳性原倍、1：2/1：4/1：8/1:64,40,梅毒初筛试验定性定量,阴性原倍1：21：4,41,梅毒血清学初筛实验临床意义,1.辅助诊断梅毒初筛实验有较高的敏感性和特异性2.观察滴度变化可用于疗效观察3.鉴别早期或晚期梅毒（前滴度快后慢）4.鉴别先天性梅毒（被动出生3-4月转阴，不降反升）5.发现复发或再感染病人复发或再感染时血清阳转或滴度上升，定量试验2次结果，滴度上升2个稀释度以上（1:21:8以上）才可判断为上升，要排除技术性因素，相同的实验方法才能进行滴度比较6.梅毒的筛查试验,42,注意事项,假阳性：1生理性孕妇0.4%2胶原性或自身免疫性病麻风、系统红斑狼疮3某些急性发热病后风疹、疟疾、水痘、肺炎4免疫接种鉴别方法：抗体效价特异性试验证实,43,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,目的:检测特异性抗梅毒螺旋体抗体-特异性强原理：(FTA-ABS)完整的梅毒螺旋体作抗原TPHA/TPPA超声裂解梅毒螺旋体提取抗原族致敏载体致敏的载体抗梅毒抗体/免疫血清适宜条件下肉眼可见凝集,44,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,方法：1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）快速、简便、准确而青睐3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)WHO推荐金标准,45,特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验,4.梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验TP-ELISA：TP-Ab是一种通过基因工程经利用梅毒螺旋体多肽抗原（KD47、KD42/KD15）包被于反应板的试验。它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，故可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰5.PCR方法（略）,46,用于诊断梅毒试验方法选择,要求准确率（特异性）TPHA在各期梅毒的特异性为98%99%，敏感性治疗前一期：69%90%；二期100%；潜伏期97%100%；晚期94%1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准,47,梅毒特异性试验的临床意义,1.诊断梅毒敏感性高、特异性强是梅毒较好的确证实验2.早期诊断梅毒（19SIgM）一期梅毒特异性试验比非特异性试验早一周出现，梅毒感染后第二周就可从血清中测出抗体IgM，而IgG要在感染后4周方可测出,48,梅毒特异性试验的注意事项,1.定性试验一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价1：802.不能作疗效观察指标、由于记忆细胞抗体复制能力强，特异性敏感性高，即使经抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往）3.1%生物学假阳性存在麻风、传单（嗜异性抗体）TPPA假阳性，红斑狼疮FA-ABS呈假阳性不主张叫确证试验,49,梅毒血清学试验选择,一、用于筛查：首选-TP其次-初筛试验二、由于诊断梅毒（首次）：必须1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验有效价2.梅毒螺旋体抗原血清学试验/TPPA/TPHA,50,梅毒血清学试验选择,三、用于疗效观察、治疗后随访：非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验有效价一张完善的检验单报告部分：结果：梅毒血清学初筛试验TRUST1:16阳性（梅毒螺旋体抗原血清学试验）TPPA阳性签名XXX日期XXXXX,51,其他实验,免疫印迹法：是一种诊断梅毒感染的特异性实验，胶体金免疫结合技术（TPAb）：是在酶免结合技术基础上发展起来的,具有简单、快速、不需任何仪器的特点。PCR试验：多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA,52,？,1.临床疑似梅毒患者就诊你怎样下医嘱？2.抗梅治疗中患者观测病情是选择什么样的检查？,53,三、淋病(gonorrhea)的实验室诊断,淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最多的一种病因：淋病奈瑟菌亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱状上皮细胞特点：局部化脓性感染细菌和毒素粘膜坏死、脱落、神经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出,54,所致疾病,主要是泌尿生殖道局部化脓性感染-淋病不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、前列腺炎、输卵管炎及盆腔炎甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎、心内膜炎及脑膜炎等,55,淋菌性尿道炎,56,诊断淋病的实验室检查,男性患者：急性期典型病例-尿频、尿急、尿痛，局部流脓首选：试验方法-分泌物涂片革兰染色试验目的-找革兰阴性双球菌女性可拒绝用此法,57,分泌物涂片革兰染色,原理：1急性患者尿道有大量脓性分泌物2淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态3有些脓细胞内可有许多淋球菌临床意义：1.镜检结果阳性可初步诊断淋病2.用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断,58,镜检白细胞中吞噬有阴性双球菌者为阳性,59,新生儿淋菌性结膜炎,常常在出生23天后双眼出现脓性分泌物，剧烈肿胀发红，不能睁眼，如不及时治疗还可侵犯到角膜，如角膜发生穿孔会导致失明,60,61,诊断淋病的实验室检查,女性患者及症状不典型的男性患者：经典方法：淋球菌分离培养原理：1标本中有淋球菌2合适的培养基（T-M选择性培养基）3生长呈特征性菌落（24H36H）4菌苔氧化酶呈阳性，糖发酵试验符合5菌苔涂片革兰染色呈阴性，菌体形态具特殊性,62,63,淋球菌培养临床意义,1.诊断淋病（金标准）2.适用于男性女性标本，WHO推荐的筛查淋病的唯一方法3.判断病人治愈依据只可选择此方法4.-内酰胺酶阳性：表明该菌对PG，氨苄西林和阿莫西林耐药,64,淋病病人实验室诊断步骤,淋菌感染男性患者女性患者尿频、尿急、尿道分泌物脓性宫颈分泌物/无症状脓性分泌物涂片G-染色拒绝做G-双球菌细胞内取宫颈分泌物初步诊断MTM培养基培养治疗典型菌落形态G-双球菌、OX(+)、糖发酵试验确诊,65,关于取材,正确采集标本是试验结果成功的关键环节涂片取材：清洁尿道口手指由后向前挤出脓液轻轻涂布玻片上排尿前或排尿后23小时采集,66,培养标本采集,关键是深度一定要够男性取材：拭子深入尿道2cm-4cm处并转动蘸取少量粘膜女性取材：子插入宫颈12厘米处稍转动并停留10秒30秒，以获得上皮细胞，取出棉拭子时不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染,67,其他相关试验,1.直接免疫银光染色2.SPA协同实验3.酶反应4.白细胞脂酶快速法5.固相酶免疫试验,68,小结,诊断淋病1泌尿生殖道分泌物涂片革兰染色找阴性双球菌2泌尿生殖道分泌物淋球菌分离培养3其他方法不能作为常规诊断应用关注标本采集,69,四、非淋菌性尿道炎-NGU,临床：尿道炎表现，分泌物查不到淋球菌临床合并症：附睾炎、输卵管炎、宫外孕、不孕症等威胁人们健康流行病学：西方国家自60年代发病超过淋病跃居STD首位，国内发病不断增加已占STD的第三位,70,非淋菌性尿道炎-NGU,病因：沙眼衣原体CT（DK）40%50%支原体（UU、MH）20%30%阴道滴虫、白念和单疱病毒10%20%,71,NGU-CT检测,生活史特性：严格细胞内寄生亲和性：泌尿生殖道柱状上皮细胞血清学试验对诊断衣原体感染价值有限1.迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CT的检测2.CT感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难以得到3.血清抗体持续时间长，单一血清标本只能显示曾经感以前染过CT4.双份血清效价比有4被增高才有临床意义临床标本直接检查-目前最合适的方法,72,NGU-CT检测方法,1.细胞涂片的吉姆萨染色-发现一定数量的包涵体（原体呈紫色，包涵体呈金黄色）不适用于NGU,73,NGU-CT检测方法,2.涂片碘染色法：包涵体中有糖原遇碘呈棕色敏感性差，不适用于NGU3.直接免疫荧光法染色：敏感性93%，特异性96与培养并列为金标准对试剂，显微镜质量要求很高，操作人员技术要求高，价格昂贵4.衣原体酶免疫测定EIA：抗CT单抗包被固相载体+标本再+多克隆抗体+IgG酶标抗体酶标仪检测适用于批量筛查NGU衣原体感染5.衣原体分离培养：McCoy、Hela、BHK-21细胞培养,74,NGU-CT检测方法,6.PCR7.“立明“（Clearview)衣原体快速免疫测定法：原理：沙眼衣原体检测试剂盒采用高特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测临床标本中是否含有沙眼衣原体抗原。临床意义：NGU衣原体感染诊断参考该试验是目前诊断NGU衣原体感染普遍采用的方法,75,注意事项,1试验敏感性87%,特异性98.8%，但标本中需要有一定的抗原量，量低于敏感性可出现假阴性；2.检测试剂盒仅证明标本中存在沙眼衣原体抗原，不能区别是衣原体感染还是携带者，也不能区别衣原体死活，不能作为判愈试验；3.标本采集是关键,76,NGU-支原体感染,非淋支原体感染：UU为主，MH次之我国报道7个地区健康人携带率解脲支原体（UU）占10.59%人型支原体（MH）占5.34%正常菌群的组成部分,77,支原体检测方法,1.分离培养2.聚合酶链反应-PCR/DNA探针技术诊断3.血清学检测：代谢抑制试验、ELISA、间接免疫荧光都仅用于科研和流行病学调查上，不适于诊断用,78,支原体培养,固体培养基：生长耗时5天左右液体培养基-原理：UU尿素氨PH含酚红培养基由黄红MH精氨酸氨PH含酚红培养基由黄红,79,支原体培养,培养结果：阳性不一定有临床意义量化uu、mh104ccu/ml具有临床治疗意义临床意义：1.培养是检测支原体最好的方法2.临床有尿道炎症状、量其他检查阴性时，培养阳性有治疗意义量应重视支原体感染治疗,80,小结,目前应用较多诊断的非淋的试验1.支原体培养加药敏，注意量2.免疫层析金标/硒标衣原体检测非淋检测标本采集是关键,81,五、生殖器疱疹实验室检查,病因：单纯疱疹病毒HSVSHV-1主要感染上半身部位（15岁以下多）SHV-2主要感染腰以下部位（多见于青春期后）,82,生殖器疱疹检查方法,病原体检查：1.病毒体外细胞培养和鉴定：技术条件要求较高，不宜用于临床2.单纯疱疹病毒抗原检查(1）ELISA(3）DNA杂交(2)IFA(4）PCRPCR和DNA不能单独作为确诊指标病原学检查ELISA有敏感性高，特异性强，准确率高应用面广，操作简便等优点,83,生殖器疱疹检查方法,血清学检查-抗体检测：所有用于检测抗原的方法经适当改良后，均可用于抗体检查SHV感染个体中的不均一性和不稳定性成年人群中有很高的HSV抗体检出率，大多获自隐性感染，且抗体的存在尚不能完全保护机体免受疱疹病毒的重复感染;HSV抗体检测阳性对临床诊断帮助不大;一般HSV抗体检测对新生儿、婴幼儿感染诊断有一定意义,84,六、尖锐湿疣实验室检查,病因：人类乳头瘤病毒-HPV发病率：持续增长，我国急剧上升，已占各种性病第二位,85,六、尖锐湿疣实验室检查,尖锐湿疣检测：典型的尖锐湿疣通常不需作实验室检测便可作出诊断临床医生观察为主醋酸白试验有助于检查不明显的疣,86,尖锐湿疣,87,尖锐湿疣实验室检查方法,1.细胞学检查：病理皮损活检:发现有HPV感染的特征性凹空细胞的组织病理变化特点.(较可靠的办法)2.组织病理：基本上为角化不完整，棘层深层肥厚，奶头瘤样增生。粒层和棘层上部细胞有显著的空泡形成。棘细胞基底细胞有特别数量之核皴裂，很像癌变，但细胞排裂规则，且增生上皮和真皮之间规模清楚。,88,尖锐湿疣实验室检查方法,3.核酸杂交试验-PCR皮损活检中用抗原或核酸检测显示有HPV感染.常见的是HPPV6.11型.阳性率可达80%左右.当真性和假性尖锐湿疣鉴别困难时.可用HPV-DNA原位分子杂交进行鉴别.此法是目前一种敏感性和特异性很高的鉴别手段.阳性率可高达90%以上.,89,尖锐湿疣实验室检查方法,在操作中因引物不纯易导致假阳性但PCR检测HPV感染具有快速、方便、高度敏感和特异的优点在诊断HPV感染和癌症研究中有着光明的前景,90,七、软下疳实验室检查,病因：杜克雷嗜血杆菌诊断标准1.有不洁性交史2.会阴部发生于1-2个溃疡,周围可发生多个卫星状小溃疡,疼痛明显,基底软,上有脓性分泌物,腹股沟淋巴肿大、触痛、化脓3.梅毒血清学检查阴性,涂片或培养可检测出杜克雷嗜血杆菌,91,软下疳实验室检查,疾病特征：1.潜伏期1-30天，发病快进展快感染道溃疡46天2.初起一个或数个言行丘疹或结节周围红斑24H糜烂或溃疡圆形或椭圆形，相邻的可融合成大溃疡边缘不整齐，病变周围可发生卫星状病变，3.溃疡有脓性分泌物或蜡样脓苔，常有潜蚀性坏死和穿凿性窦道，晚期基地肉芽增生，形成不规则瘢痕可自愈可再发4.溃疡不形成硬韧基底，并变软，明显区别于硬下疳疾病初起都在生殖器也可见肛门、大腿上部、口腔和手,92,软下疳,93,软下疳实验室检查,流行病学：亚热带地区东南亚、北非和拉丁美洲发病率高，美国发病呈起伏史，男高于女9：1我国个别城市少数报道均为临床疑似病例，未经实验室证实我国发病率真低？注重加强实验室检测很有必要,94,软下疳实验室检查方法,1.涂片检查:取软下疳溃疡边缘下贮留脓汁或穿刺横痃抽吸的脓汁涂片行革兰染色,镜下可见革兰阴性短小杆菌，两端钝圆，有两极浓染现象单个、成堆或链状排列易产生假阳性假阴性不推荐用,95,软下疳实验室检查方法,2.培养检查:采用GCHGS或MHHb培养基培养.菌落常于接种后48小时形成,色灰黄而透明,直径约1-2mm,菌落涂片革兰氏染色呈阴性球杆菌,呈短链、团块或指纹状排列过氧化酶试验阴性,非卟嘛试验阴性,硝酸盐还原试验阳性.碱性磷酸酶试验阳性.典型的菌落和镜检典型的菌体形态鉴定结果符合标准结合临床可作出确定诊断报告,96,软下疳实验室检查方法,3.组织病理中央为溃疡,溃疡边缘表皮增生,溃疡下方可见三个炎症带,垂直排列,分别为:溃疡基底层:多形核白细胞为主、混有红细胞,有嗜中性白细胞、淋巴祖细胞及组织细胞浸泡,可见较多的纤维母细胞.深层:淋巴细胞、浆细胞弥漫性浸润,