（药理学专业论文）当归四逆汤对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响.pdf

弋。一，略 个人简历0 000 3 3 中文摘要 当归四逆汤 对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响 摘要 缺血性心脏病( i s c h e m i ah e a r td i s e a s e ，i h d ) 即冠状动脉性心脏病 ( c o r o n a r yh e a r td i s e a s e ，c h d ) ，简称冠心病，系指冠状动脉器质性或功 能性改变引起冠状动脉血流供应和心肌耗氧需求之间不平衡而导致心肌 缺血缺氧为主要特征的心脏病。近年来西医药对于该病的治疗进展很快， 但其死亡率仍居高不下。中医虽无“缺血性心脏病 病名，但相关记载早 已有之，属“胸痹 、“心痛“真心痛等范畴。当归四逆汤( d a n g g u is i n i d e c o c t i o n ，d s d ) 原为张仲景伤寒论治疗厥阴伤寒良方，由当归、桂 枝、芍药、细辛、炙甘草、大枣、通草组成。根据“谨守病机，异病同治 原则，其应用已拓展到临床各科。查阅资料显示，目前有该方用于冠心病 的临床报道，但尚未见有关其防治心肌缺血的整体动物实验报道，故选择 该方进行实验研究，探讨其防治心肌缺血的作用及机制，为临床应用本方 防治c h d 提供实验依据。 目的：观察当归四逆汤对实验性心肌缺血动物模型的影响，并初探其 作用机制，为临床应用本方防治c h d 提供实验依据。 方法： 5 0 只健康雄性w i s t a r 大鼠随机分为5 组，即空白对照组、模型组、 d s d 低剂量组( 5 9 生药k g d ) 、d s d 高剂量组( 1 0 9 生药k g d ) 和阳 性对照组( 复方丹参滴丸o 0 8 1 9 k g d ) ，每组1 0 只。空白对照组和模型 组灌服蒸馏水，其余各组灌服相应药物，每天1 次，连续5 天。第5 天灌 胃给药后1 h ，除空白对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均腹腔注射 垂体后叶素p i t ( 3 0 u k g ) 进行造模，并记录注射p “前1 0 m i n 和注射后5 、 1 5 、3 0 m i n 时间点i i 导联心电图。在注射p i t1 h 后处死大鼠，颈动脉取血， 检测血清一氧化氮( n o ) 水平；取心尖部位的心肌组织，甲醛固定后， 石蜡包埋，制作病理切片，h e 染色，观察病理学改变，并采用免疫组化 法检测内皮型一氧化氮合酶( e n o s ) 活性；其余心肌以生理盐水制成1 0 匀浆，检测超氧化物歧化酶( s o d ) 和丙二醛( 如a ) 。 中文摘要 结果： 1 对心电图的影响注射p i t 前各组心率无显著差异( p 0 0 5 ) 。注射 p i t 5 m i n 后，各组与空白对照组相比，心率均显著减慢( p o 0 1 ) ，d s d 高、低剂量组及阳性对照组与模型组相比，心率虽有升高，但未见统计学 差异；注射p i t1 5 m i n 和3 0 m i n 后，模型组心率减慢情况未见恢复，而d s d 高、低剂量组及阳性对照组与模型组相比，心率明显改善( p o 0 1 或p o 0 5 ) 。 2 对血清n o 的影响模型组与空白对照组相比，血清n o 水平显著下降 ( p o 0 1 ) 。d s d 高、低剂量及阳性对照组与模型组相比，血清n o 水平 显著升高( p o 0 1 或p 0 0 5 ) 。 3 对心肌e n o s 活性的影响光镜下显示：模型组e n o s 活性弱于空白对 照组，而d s d 高、低剂量及阳性对照组e n o s 活性均强于模型组。 4 对心肌组织病理学的观察光镜下显示，空白对照组心肌纤维排列整 齐，心肌细胞核位于心肌纤维的中央，胞浆着色均匀；模型组心肌纤维排 列轻度紊乱，呈波浪状改变，部分心肌细胞核出现溶解；d s d 高、低剂 量组及阳性对照组心肌纤维排列较整齐，细胞结构未见明显病理改变。 5 对心肌s o d 和m d a 的影响模型组与空白对照组相比，s o d 活性明 显降低( p o 0 1 ) ，m d a 含量明显升高( p 0 0 1 ) 。d s d 高、低剂量及 阳性对照组与模型组相比，s o d 活性明显升高( p o 0 1 或p 0 0 5 ) ， m d a 含量明显降低( p o 0 1 或p 0 0 5 ) i nt h ef i 胁 m i n u t ea f t e r i n j e c t i o n so fp i t ，t h eh e a r tr a t e si na l lo fg r o u p sd e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l yc o m p a r e dw i t ht h eb l a n kc o n t r o lg r o u p ( p 0 01 ) t h eh i g h d o s e a n dt h el o w - d o s e o fd s da n dt h ep o s i t i v ec o n t r o lm e d i c i n ed i dn o ta f f e c t d e r e a s e dh e a r tr a t eb yp i ti n je c t i o n ai nt h ef i f t e e n t hm i n u t ea n dt h e t 1 1 i r t y m i n u t ea f t e ri n j e c t i o n so fp i t ，s l o w e dh e a r tr a t ei nt h em o d e lr a t sh a dn o tb e e n s e e nt h er e c o v e r y ，b u tr a th e a r tr a t e si nt h ed s d h i g h d o s e ，t h el o w d o s e g r o u pa n dt h ep o s i t i v ec o n t r o lg r o u pw e r er e c o v e r e ds i g n i f i c a n t l yc o m p a r e d w i t ht h a ti nt h em o d e lg r o u p ( p 0 01o rp 0 0 5 ) 2t h ee f f e c t so nt h ec o n t e n to fn oi nm e s e r u m ：c o m p a r e dw i t ht h a t i nt h e 4 英文摘要 b l a n kc o n t r o lg r o u p ，t h ec o n t e n to fs e r u mn oi nt h em o d e lg r o u pd e c r e a s e d o b v i o u s l y ( p 0 01 ) c o m p a r e dw i t ht h a ti nt h em o d e lg r o u p ，t h ec o n t e n t so f s e r u mn oi nt h ed s d h i g h d o s eg r o u p ，t h el o w d o s eg r o u pa n dt h ep o s i t i v e c o n t r o lg r o u pi n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ( p 0 01o rp 0 0 5 ) 3 1 1 1 ee f f e c t so nt h ea c t i v i t yo ft h em y o c a r d i a le n o s ：u n d e rt h eo p t i c a l m i c r o s c o p e t h ea c t i v i t yo fe n o si nt h em o d e lg r o u pd e c r e a s e dc o m p a r e d w i t ht h a ti nt h eb l a n kc o n t r o lg r o u p ，w h i l et h ea c t i v i t i e so fe n o si nt h ed s d h i 曲一d o s eg r o u p ，t h el o w - d o s eg r o u pa n dt h ep o s i t i v ec o n t r o lg r o u pe n h a n c e d c o m p a r e d w i t ht h a ti nt h em o d e lg r o u p 4t h ee f f e c t so nm y o c a r d i a lh i s t o p a t h o l o g y ：u n d e rt h eo p t i c a lm i c r o s c o p e ，i n t h eb l a n kc o n t r o lg r o u pm y o c a r d i a lf i b e r sa l i g n e di no r d e r ，m y o c a r d i a ln u c l e i l o c a t e di nt h ec e n t e ro ft h em y o c a r d i a lf i b e r s ，c y t o p l a s m as h a d i n ge v e n l y ；i n t hm o d e k r o u pm ) ：d i a lf i b e r s g e d nm i l dd i s o r d e r a n dhowedthem o d e lg r o u pm y o c a r d i a lt i b e r sa r r a n g e ai nm l l od l s o r o e r a n gs n o w e gw a v y c h a n g e ，p a r to fm y o c a r d i a ln u c l e u sw a sd i s s o l v e d ；i nt h ed s dh i g h d o s e g r o u p ，t h el o w d o s eg r o u pa n dt h ep o s i t i v e c o n t r o lg r o u pt h ep a t h o l o g i c a l c h a n g e so fm y o c a r d i a lf i b e r sd e s c r i b e da b o v e w e r eo b v i o u s l yi m p r o v e d 5t h e e f f e c t so nt h ea c t i v i t i e so fs o da n dt h ec o n t e n t so fm d a i nt h em y o c a r d i u m ： c o m p a r e dw i t ht h a ti nt h eb l a n kc o n t r o lg r o u p ，t h ea c t i v i t yo fs o d i nt h e m o d e lg r o u pd e c r e a s e do b v i o u s l y ( p 0 01 ) ，w h i l et h ec o n t e n to fm d a i nt h e m o d e lg r o u pi n c r e a s e do b v i o u s l y ( p o 01 ) c o m p a r e dw i t ht h a ti nt h em o d e l g r o u p ，t h ea c t i v i t i e so fs o d i nt h ed s d h i g h d o s eg r o u p ，t h el o w d o s eg r o u p a n dt h ep o s i t i v ec o n t r o lg r o u pi n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ( p 0 01 o rp 0 0 5 ) ， w h i l et h ec o n t e n t so fm d ad e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ( p 0 01o rp 0 0 5 ) 。注射p i t5 m i n 后，各组与空白对照组相比，心率均显著减慢( p o 0 1 ) ，d s d 高、低剂量组及阳性对照组与模型组相比，心率虽有升高， 但未见统计学差异；注射p i t15 r a i n 和3 0 m i n 后，模型组心率减慢情况未 见恢复，而d s d 高、低剂量组及阳性对照组与模型组相比，心率明显改 善( p o 0 1 或p 0 0 5 ) 。见附表t a b l e1 。 2 对大鼠血清n o 的影响模型组与空白对照组相比，血清n 0 水平显著 下降( p o 0 1 ) 。d s d 高、低剂量组及阳性对照组与模型组相比，血清 n o 水平均显著升高( p o 0 1 或p 0 0 5 ) 。d s d 高剂量组升高n o 作用 与低剂量组相比，有升高趋势，但未见统计学差异。见附表t a b l e2 。 3 对大鼠心肌e n o s 活性的影响光学显微镜下显示，模型组e n o s 活性 弱于空白对照组。d s d 高、低剂量组及阳性对照组e n o s 活性均强于模 型组。见附图f i g 5 f i g 9 。 4 对大鼠心肌组织病理改变的影响光镜下显示，空白对照组心肌纤维排 列整齐，心肌细胞核位于心肌纤维的中央，胞浆着色均匀；模型组心肌纤 研究论文 维排列轻度紊乱，呈波浪状改变，部分心肌细胞核出现溶解；d s d 高、 低剂量组及阳性对照组心肌纤维排列较整齐，细胞结构未见明显病理改 变。见附图f i g 1 0 f i g 1 4 。 5 对大鼠心肌s o d 、m d a 的影响模型组与空白对照组相比，s o d 活性 明显降低( p o 0 1 ) ，m d a 含量明显升高( p o 0 1 ) 。d s d 高、低剂量 组以及阳性对照组与模型组相比，s o d 活性明显升高( p o 0 1 或p o 0 5 ) ，m d a 含量明显降低( p o 0 1 或p 0 0 5 ) 。d s d 高、低剂量组间 s o d 活性及m d a 含量均无显著差异。见附表t a b l e3 。 研究论文 附图 f i g 1m o d e lg r o u pr a t s e l e c t r o c a r d i o g r a mo ft e nm i n u t e sb e f o r et h el a s t i n j e c t i o no fp i t f i g 2m o d e lg r o u pr a t s e l e c t r o c a r d i o g r a mo f f i v em i n u t e sa f t e rt h el a s t i n j e c t i o no f p i t 1 3 研究论文 f i g 3m o d e lg r o u pr a t s e l e c t r o c a r d i o g r a mo ff i f t e e nm i n u t e s a f t e rt h el a s t i n j e c t i o no f p i t f i g 4m o d e lg r o u pr a t s e l e c t r o c a r d i o g r a mo ft h i r t ym i n u t e s a f t e rt h el a s t i n j e c t i o no f p i t 1 4 一一一 峨溉。 ，77 。1 l ? 二j，。；。，j ? ，； 弘鱼o 。t 髟囊 f i g 5i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i nf o re n o si nr a t s m y o c a r d i u mo fb l a n k c o n t r o lg r o u p ( 2 0 0 ) 嚣；i 囊二警i 鬟舅尹吃矗f 。一耋_ 二：一二： ，二：_ = 二，：j 。一一 ，一，j 4 。- 声， = 。二一：o ，：i0 - j ，、 _， ，。巴。! 一j ，二一- = j r _ _ ，一，二? 矿，r 一 。，1 ，一二奠一。乏，乞二，0 。一：一f 二一一。，二 一 一一一 二4，2to，= 孳一 f i g 6i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i nf o r m o d e lg r o u p ( 2 0 0 ) o si nr a t s m y o c a r d i u mo f 二、 i k 研究论文 f i g 7i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i nf o re n o s i nr a t s m y o c a r d i u mo f d s dl o w - d o s eg r o u p ( x2 0 0 ) f i g 8i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i nf o re n o si nr a t s m y o c a r d i u mo f d s d h i 曲- d o s eg r o u p ( x2 0 0 ) 1 6 鬈、，霸，：，；t_! ；l ；。 o 一一 。 ， 。_ p 。零 r。， ， ：- _ i，、hr一_气0。-_。kh ! ，te。卜h i 一门，一。一，ky卜。；a ，工 q ，”1 。 ；九。?。n -，；0 。 ， 。0 ”卢 1 、 r 0、。一：_0。o咐。 ”争良，：卜、u，、， 叠，；勺蠢“o 一 、 f ，；，； ， i 一。0。，一。j_：。 l f霹，o；、“ 3， qt，2、；，rl ， 矗 。 ， 一f h 0 0之芦，卜， * ，量。矮 t 铲严 ，。，删 7一事，厂矗。一 厂h二二_卜一，一|_。，一，穗，、筝多0一。j，。髟o 巧-，t。一 _搿巧，。鬈 一。一。玉一一。f一 。， p， ， 歹，一 i；尹7，一，。r h f o 研究论文 f i g 9i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i nf o re n o si nr a t s m y o c a r d i u mo f p o s i t i v ec o n t r o lg r o u p ( x2 0 0 ) f i g 1 0b l a n k c o n t r o lg r o u p ( 1 0 0t i m e s ) f i g 1 1m o d e lg r o u p ( 1 0 0t i m e s ) f i g 1 2d s d l o w d o s eg r o u p ( 10 0t i m e s ) 1 8 研究论文 f i g 1 3d s dh i g h - d o s eg r o u p ( 1 0 0 t i m e s ) f i g 14p o s i t i v ec o n t r o lg r o u p ( 1 0 0t i m e s ) 1 9 研究论文 附表 t a b l e1t h ee f f e c to f d s do nh e a r tr a t eo f r a t s ( x s ) ( n = 1 0 ) 空白对照组 模型组 d s d 低剂量组 d s d 高剂量组 阳性对照组 5 1 0 3 5 8 _ _ _ 2 13 4 9 - - + 1 7 3 4 6 - + 1 6 。3 5 0 - + 1 8 3 5 2 2 92 2 5 2 5 3 5 0 5 82 4 4 4 6 3 4 9 2 82 4 2 4 1 0 0 8 13 5 3 3 32 4 6 3 3 2 1 7 2 82 1 4 2 9 2 5 2 _ _ _ 5 5 3 0 4 - + 4 3 2 5 7 - + 3 4 3 1 0 - + 2 8 2 6 0 4 - 3 0 3 1 8 - + 3 9 + n o t e s ：c o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p 木p 0 0 5 木木p 0 0 1 分 组 剂量( e c k g d ) n o ( u m o l l ) 空白对照组 6 3 7 7 - + 2 1 2 6 ” 模型组 一 1 9 4 7 - + 1 0 7 3 d s d 低剂量组 53 9 1 6 - + 1 0 5 8 d s d 高剂量组 1 04 8 2 4 - + 18 2 1 ” 阳性对照组0 0 8 1 5 1 2 4 - + 2 2 5 ” n o t e s ：c o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p 木p 0 0 5 凇木p 0 0 1 2 0 研究论文 t a b l e 3 t h ee f f e c to f d s do ns o d & m d ao fr a t sm y o c a r d i u m ( 三圭! 丛竺! q ! 坌竺( 翌g 支! 望墨竺垒! 竺竖竺! ! 空白对照组 模型组 d s d 低剂量组 d s d 高剂量组 阳性对照组 5 1 0 0 0 8 1 7 4 0 1 8 4 4 ”0 6 14 o 2 0 ” 6 0 5 5 1 4 5 01 0 9 4 - 0 2 7 7 4 - 3 14 - 1 1 8 3 0 8 5 4 - 0 1 5 7 3 8 1 1 6 3 6 + 0 7 14 - o 2 2 ” 7 9 4 0 4 - 1 3 6 0 “0 6 9 0 2 4 ” n o t e s ：c o m p a r e dw i t hm o d e lg r o u p 宰p 0 0 5 木木p 0 0 1 研究论文 讨论 l 中西医对缺血性心脏病的认识 西医认为，缺血性心脏病最常见的原因是冠状动脉粥样硬化或痉挛， 使冠状动脉血流供应和心肌耗氧需求之间不平衡而导致心肌缺血缺氧。其 中冠脉痉挛多数发生在已有粥样硬化病变的血管上，但也可发生在结构正 常的动脉上，且研究表明其发生与血管内皮功能障碍密切相关。 中医虽无“缺血性心脏病、“心绞痛”等病名，但相关记载早已有 之，如素问标本病传论有“心病先心痛 之谓，素问缪刺论 又有“卒心痛 、“真心痛”之称。中医文献中有关本病病因病机的认识亦 多有记载，如汉张仲景金匮要略归纳“胸痹 病机为“阳微阴弦”， 强调本病为胸阳不足，阴寒( 水饮或痰涎) 阻滞所致，认为证属本虚标实。 诸病源侯论中关于“心为诸脏之主而藏神，其正经不可伤，伤之则痛 而为真心痛”的论述与现代医学关于冠状动脉发生病变引发心绞痛、心肌 梗死的认识颇为吻合。在前人基础上，当代医家认为本病为本虚标实之证， 脏腑气血阴阳虚损为本，气滞、血瘀、痰结、寒凝等为标，其病位虽在心 及心之脉络，但与其他脏腑亦密切相关，尤其是肝脾肾。 2 对垂体后叶素所致心肌缺血模型的认识 垂体后叶素是从动物脑垂体中提取的，内含有加压素和催产素，能直 接使血管特别是毛细血管和小动脉收缩，引起心肌供血不足，同时收缩全 身小血管，导致心脏负荷加重，造成心肌缺血。实验证实由垂体后叶素所 诱导的心肌缺血模型与临床上人的冠状动脉供血不足所致心绞痛相似，比 较接近人的病理状态【l 】。且许多学者分别从心电图、冠脉流量、血流动力 学、组织形态学等多方面研究了垂体后叶素引起的心肌缺血效应，并对此 模型予以充分的肯定。加之其抗利尿素的作用，可加重心气虚症状【3 】，注 射垂体后叶素方法相对简单，技术成熟。本实验采用该方法成功复制了大 鼠心肌缺血模型，并探讨了当归四逆汤对该模型的影响及作用机制。 3 当归四逆汤药物组成及现代药理学研究 当归四逆汤原治厥阴伤寒，方中当归甘温、补血和血，桂枝辛温、温 经散寒，为君药；细辛助桂枝温通血脉，白芍助当归补益营血，共为臣药； 通草通经畅血，大枣、甘草益气健脾养血，共为佐药。重用大枣，既合当 研究论文 归、白芍以补营血，又防桂枝、细辛燥烈太过，伤及阴血。甘草兼调药性 而为使药。全方选药精简，配伍得当，温阳与散寒并用，养血与通脉兼施， 温而不燥，补而不滞。 现代药理学证实，当归具有扩张冠脉血管、增加冠脉流量、降低心肌 耗氧量、保护心肌细胞、抗血小板集聚、抗血栓形成、降血脂及抗动脉粥 样硬化等作用。其有效成分阿魏酸钠能使血流增快，能明显抑制血小板聚 集，也能使己聚集的血小板解聚率提高，亦可使血小板减少 4 1 ，可用来拮 抗垂体后叶素引起的兔心肌缺血和结扎冠脉所致心肌梗塞，并证明其能抗 脂质过氧化损伤【5 6 】。桂枝中的桂皮醛有中枢和外周性血管扩张作用，能 增强血液循环 7 1 。白芍具有解痉、镇痛、镇静、耐缺氧等作用，其有效成 分白芍总苷能有效对抗心肌缺血，保护心肌细胞，且白芍总苷还可清除自 由基，减轻自由基损伤【8 9 1 。细辛具有明显的抗氧化作用，能有效的减少 脂质过氧化作用，能避免有害物质对组织细胞结构和功能的破坏作用【1 0 1 。 4 当归四逆汤对缺血性心肌损伤的治疗作用及机制分析 4 1 当归四逆汤能改善大鼠异常心电图 心电图是临床冠心病人常用的检查方法。文献报道，动物注射垂体后 叶素后，会出现一系列典型心电图变化，主要表现s t 段抬高、t 波改变、 心率减慢等。 本实验结果显示，大鼠造模后心电图主要表现为t 波变化和心率减 慢。由于大鼠心率较快，且易受其它因素影响，波形相对变异较大，对t 波进行测量分析存在一定难度，而心率变化相对稳定，故实验选择检测大 鼠心率变化来进行分析，以研究药物的治疗作用。实验结果显示模型组心 率显著减慢，证实造模成功。而d s d 高、低剂量组大鼠心率减慢情况明 显改善，说明当归四逆汤能有效防止或减轻心肌缺血，具有保护心肌细胞 的作用。 4 2 当归四逆汤能改善内皮功能，减轻心肌缺血 现研究证实血管内皮细胞不仅是血管壁的一种保护膜，而且还是一个 内分泌器官，可以分泌多种因子，如内皮素( e t ) 、血管舒张因子( e d r f ) 等，这些活性因子发挥着重要的功能调节作用，因此内皮细胞在维持心血 管稳态中起着重要作用。研究表明内皮功能不全会导致心绞痛、急性心肌 梗死、急性冠脉综合症等。n o 作为血管内皮舒张因子，具有舒张血管平 研究论文 滑肌、维持血管张力、抑制平滑肌细胞增生、抑制血小板聚集以及清除氧 自由基等作用。其生物学效应与其产生来源、数量以及分泌时间、方式等 有关。n o s 作为n o 合成的关键酶，其活性变化直接调节n o 的生成量 及其生物学效应。n o s 至少有三种类型，神经元型( n n o s ) 、内皮型( e n o s ) 和诱导型( i n o s ) ，其中e n o s 与冠心病关系较为密切，n o 正是其以左 旋精氨酸为特异性底物催化生成的，具有保护心肌细胞的功能 i l 1 4 。 本实验结果显示，模型组血清n o 含量显著下降，同时e n o s 活性显 著降低，表明注射p “后，血管内皮功能发生障碍。d s d 高、低剂量组及 阳性对照组血清n o 含量显著升高，e n o s 活性增强，表明d s d 能有效 保护和改善内皮功能，提高e n o s 活性，促进n o 的产生与释放，舒张冠 脉血管而发挥抗心肌缺血作用。 4 3 当归四逆汤能改善心肌缺血所致病理改变 心肌缺血时，有氧代谢发生障碍，能量产生的方式转换为葡萄糖的无 氧酵解，细胞内p h 下降至5 8 - 6 0 t 1 5 】，细胞内乳酸、无机磷酸盐、肌酸 等显著增加【1 6 1 ，细胞内渗透压升高导致细胞水肿，同时引起心肌细胞酸中 毒，为了维持心肌细胞膜两侧的离子平衡，细胞外c a 2 + 进入细胞内，c a 2 + 浓度升高可以激活黄嗓吟氧化酶，使自由基生成增多，加重细胞膜功能异 常。由于心肌细胞功能丧失，细胞内c a 2 + 超载致心肌细胞挛缩，再加上周 围非缺血区功能正常的心肌细胞的牵拉，故出现心肌纤维的波浪样改变。 这些变化随缺血时间延长，心肌损伤的范围加大而愈加明显。 本实验结果显示，空白对照组心肌纤维排列整齐，心肌细胞核位于心 肌纤维的中央，胞浆着色均匀；模型组心肌纤维排列轻度紊乱，呈波浪状 改变，部分心肌细胞核出现溶解；d s d 高、低剂量组及阳性对照组心肌 纤维排列较整齐，细胞结构未见明显病理改变。实验表明，注射p i t 造成 的心肌缺血处于早期阶段，心肌组织病理变化尚不明显；d s d 具有一定 改善心肌缺血病理结构，缓解心肌缺血缺氧病理状态的作用。 4 4 当归四逆汤能抑制心肌细胞脂质过氧化损伤 研究表明氧自由基损伤是引起心肌损伤的重要环节。氧自由基( o f r ) 是一类具有高度化学反应活性的含氧基团，包括超氧阴离子( 0 2 ) 、羟 自由基( o h ) 等。在心肌缺血以及再灌注过程中产生大量的o f r ，其 作用于心肌细胞膜多聚不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化反应，并引发一系 研究论文 列连锁反应，结果首先会造成膜损伤，使心肌细胞膜的完整性遭到破坏， 膜的通透性升高，进一步则会导致整个细胞损伤，甚至心肌细胞死亡【1 7 】。 超氧化物歧化酶( s o d ) 是体内一种重要的o f r 清除剂，是机体防 御新陈代谢及其他生命活动中氧自由基损伤和破坏的抗氧化酶。它与体内 多种氧化酶结合可有效清除病理过程中产生的0 2 、o h 以及h 2 0 2 等， 并终止自由基连锁反应，从而清除o f r 。检测s o d 活性可了解其维持机 体自由基产生和消除之间动态平衡的能力，亦间接反映机体内氧自由基的 浓度。丙二醛( m d a ) 为o f r 攻击生物膜中多不饱和脂肪酸引发脂质过 氧化反应而形成的脂质过氧化物之一，其含量高低可以反映脂质过氧化水 平，在一定程度上反映细胞损伤的程度。其含量升高，表明机体脂质过氧 化反应增强，细胞损伤加重。 本实验结果显示，模型组心肌s o d 活性显著下降，m d a 含量显著 上升，表明在垂体后叶素导致的心肌缺血过程中，机体保护性因素减弱， 自由基损伤因素增多。与模型组相比，d s d 高、低剂量组s o d 活性显著 升高，同时m d a 含量显著降低，表明d s d 能提高机体s o d 活性，减少 m d a 含量，增强机体清除氧自由基能力，从而抑制脂质过氧化损伤，保 护心肌细胞。 结论 研究结果表明d s d 高、低两个剂量均能有效防治由垂体后叶素所引 起的心肌缺血及缺血损伤，具有保护心肌细胞的作用。初步探讨机制表明： 1 该方可提高e n o s 活性，促进n o 生成和释放，扩张冠脉血管而发挥抗 垂体后叶素所致大鼠心肌缺血作用。2 该方能提高机体s o d 活性，减少 m d a 含量，通过抗氧化作用，防治心肌缺血过程中脂质过氧化反应所引 起的心肌细胞损伤，起到保护心肌细胞的作用。从而为临床应用本方防治 冠心病提供了一定的理论依据。 研究论文 参考文献 1吴伟康垂体后叶素性心肌缺血模型再探中国病理生理杂志，19 9 3 ， 9 ( 2 ) ：1 2 4 - 1 2 8 2赵明奇，刘艳，赵丹泽通心络改善缺血心肌供血的n o 机制研究中 国实验方剂学杂志，2 0 0 3 ，9 ( 6 ) ：4 3 - - 4 5 3张页，杨学娟，沈绍功冠心病心绞痛气虚痰浊症动物模型研究中国 中医基础医学杂志，2 0 0 0 ，6 ( 1 2 ) ：8 2 0 4 朱海勇，徐海燕，刘素芝邝可魏酸钠联合阿斯匹林治疗急性脑梗死临床 观察实用中西医结合临床，2 0 0 6 ，6 ( 5 ) ：7 5吴华璞，祝晓光，董淑英阿魏酸钠抗心肌缺血的实验研究中国基 层医药，2 0 0 0 ，7 ( 1 ) ：5 5 5 6 6李彬，李靖年肢体缺血再灌注损伤时细胞凋亡的变化及阿魏酸钠 保护作用中国骨伤，2 0 0 5 ，1 8 ( 2 ) ：9 7 - 1 0 0 7赵建国，张嘉硕，张建波h p l c 法测定肉桂挥发油中桂皮醛的含量 中草药，1 9 8 8 ，1 9 ( 3 0 ) ：1 2 8王朝红，闰知大芍药化学成分与药理研究时珍国医国药，1 9 9 9 ， 1 0 ( 7 ) ：5 4 4 5 4 6 9 祝晓兰，韦颖梅，刘桂兰，等白芍总苷对急性心肌缺血的保护作用 中国药理学通报，1 9 9 9 ，1 5 ( 3 ) ：2 5 2 , - - - 2 5 4 1 0 樊景坡苍耳子、细辛、枸杞子、白术对小鼠组织自由基代谢的影响 中医药信息，1 9 9 4 ，( 2 ) ：4 8 1 1 俞梦越，吴维力，高润霖内皮功能不全与冠心病心血管病学进展， 2 0 0 2 ，2 3 ( 4 ) ：3 9 1 3 9 3 1 2 王燕内皮功能障碍与冠心病心血管病学进展，2 0 0 4 ，2 5 ( 5 ) ：3 2 6 - 一 3 3 0 1 3 陈珊，金戈，单江孟鲁司特纳的心脏保护作用及对一氧化氮合酶的 影响药学学报，2 0 0 2 ，3 8 ( 1 1 ) ：8 2 1 8 2 5 1 4 魏丹宏，单江内皮型一氧化氮合酶与冠心病浙江医学，2 0 0 3 ，2 5 ( 4 ) ：2 5 2 2 5 4 研究论文 15f l e e t 下j o h n s o nt a ，g r a e b n e r c a 1e f - f e c to fs e r i a lb r i e fi s c h e m i c e p i s o d e so ne x t r a c e l l u l a r k + ，p h ，a n da c t i v a t i o ni nt h ep i g c i r c u l a t i o n ， 1 9 8 5 ，7 2 ( 4 ) ：9 2 2 9 3 2 16j e n n i n g s r b ，r e i m e r k a ， s t e e n b e r g e n c m y o c a r d i a l i sc h e m i a r e v i s i t e d t h eo s m o l a rl o a d ，m e m b r a n ed a m a g e ，a n dr e p e r f u s i o n j m o l c e l l c a r d i o ，1 9 8 6 ，18 ( 8 ) ：7 6 9 - - 一7 8 0 1 7 江一清，刘朝中，朱国英主编现代冠心病学北京：人民军医出版社， 2 0 0 3 ：1 9 2 1 9 4 2 7 综述 综述 当归四逆汤药理研究及心血管疾病应用进展 当归四逆汤出自张仲景之伤寒论厥阴篇，日“手足厥寒，脉细 欲绝者，当归四逆汤主之”。方由当归、桂枝、芍药、细辛、甘草、大枣、 通草组成。本方既可温经散寒，又能养血通脉，为素体血虚，寒凝经脉所 致之证而设。现广泛用于内、外、妇、皮肤等临床学科，均取得了满意的 疗效。 1 组方原则 当归四逆汤原治厥阴伤寒，方中当归甘温、补血和血，桂枝辛温、温 经散寒，为君药；细辛助桂枝温通血脉，白芍助当归补益营血，共为臣药： 木通通经畅血，大枣、甘草益气健脾养血，共为佐药。重用大枣，既合当 归、白芍以补营血，又防桂枝、细辛燥烈太过，伤及阴血。甘草兼调药性 而为使药。全方选药精简，配伍得当，温阳与散寒并用，养血与通脉兼施， 温而不燥，补而不滞，故能收立竿见影之效。 2 药理研究 2 1 改善心肌血氧供应黄敬辉等【l 】用水煎醇沉后的药液实验后发 现，该方可增加离体兔心冠状动脉血流，增幅较药前达3 4 2 ( p o 0 1 ) ， 同时使离体兔心率减慢，而心肌收缩幅度无增加，提示其能减少心肌耗氧 且 里0 2 2 抗凝及抗血栓形成黄芳等【2 】发现该方可显著延长小鼠凝血时 间、凝血酶时间、血浆复钙时间，显著降低大鼠全血比粘度，抑制动静脉 旁路血栓形成，降低大鼠血小板凝聚性，促进小鼠自身皮下血肿吸收，有 显著的活血化瘀作用。 2 3 扩张血管家兔口服当归四逆汤后，可使其耳小血管扩张充血， 血管数明显增多，且作用维持时间较长，表明该方有扩张末梢血管，改善 血液循环的功能【3 】。 2 4 镇痛抗炎窦昌贵等【4 】以当归四逆汤灌胃对酒石酸锑钾所致小 鼠扭体反应和电刺激致痛嘶叫反应均显著抑制，表明该方有镇痛作用；对 巴豆油所致小鼠耳廓肿胀和角叉莱胶所致大鼠足跖肿胀均有抗炎消肿作 综述 用，表明该方具有消炎作用。 现代药理学证实，当归中的有效成分阿魏酸钠能使血流增快，能明显 抑制血小板聚集，也能使已聚集的血小板解聚率提高，亦可使血小板减少 f 习；桂枝中的桂皮醛有中枢和外周性血管扩张作用，能增强血液循环嘲； 细辛具有明显的抗氧化作用，能有效的减少脂质过氧化作用，能避免有害 物质对组织细胞结构和功能的破坏作用 7 1 。 3 心血管疾病治疗 3 1冠心病冠心病属于中医学胸痹、真心痛的范畴，心阳虚是冠 心病的主要病理基础。心阳不足，无力推动血行，其气也弱，使邪有所踞， 固可产生血瘀导致疼痛。当归四逆汤具有和厥阴、散寒邪、调营卫以通阳 气的功效，用于治疗本病获得良好疗效。邹爱萍【8 】运用当归四逆汤加减治 疗冠心病心绞痛2 2 例，其中显效7 例、有效1 3 例、无效2 例，总有效率 达9 0 9 。张玉焕【9 l 用当归四逆汤合瓜蒌薤白白酒汤，同时加用心脑康治 疗冠心病3 5 例，有效率8 8 6 ，患者全血比黏度、血浆比黏度、纤维蛋 白及红细胞压积治疗前后对比均有显著性降低( p o 0 5 或p o 0 1 ) 。杨传 印【1 0 】以当归四逆汤为基础方，在辨证的基础上治疗4 2 例寒凝心脉型冠心 病，总有效率为9 0 5 。孙捌1 1 】治疗冠心病心绞痛3 5 例用本方加川芎、 降香、地龙、水蛭、生黄芪、三七( 冲) 、丹参煎服，同时与血府逐瘀胶囊 治疗3 0 例进行对照比较，结果治疗组总有效率9 1 4 3 ，对照组总有效率 7 0 0 0 ( p o 0 5 ) 。 3 2心律失常心律失常中医亦称心悸怔仲，其病变主脏在心，多 以心中跳动、心悸不安、气短胸闷为主症。当归四逆汤不仅有温经散寒， 养心通脉之功，而且还具有健脾益气、温振心阳、强心和营的作用，用于 治疗属于心悸怔忡范畴的诸如窦性心动过速、阵发性心动过速、心动过缓 等心律失常，疗效较好。廖竹芬【1 2 】用当归四逆汤加味治疗8 0 多例心悸患 者，均取得明显疗效。袁安冬等【l3 】治疗证属气虚阳微，血亏寒郁，心失所 养之阵发性室上性心动过速、心肌劳损患者，予当归四逆汤加党参、附片 连服9d ，诸症消失。刘维【1 4 】治疗心阳瘀阻型病态窦房结综合征3 0 例，用 当归四逆汤加丹参、制附子、黄芪、川芎，水煎温服，对照组2 9 例予以 阿托品口服。15d 为1 个疗程。结果经2 个疗程治疗，治疗组总有效率 8 6 2 ，对照组总有效率6 8 9 ( p o 0 1 ) 。任尔济【15 】治疗缓慢性心律失常 综 述 3 0 例，用当归四逆汤水煎早晚空腹热服，西药组2 5 例采用阿托品口服。 两组均以1 个月为1 个疗程。结果中药组总有效率为8 6 7 ，对照组总有 效率为6 0 o ( p o 0 5 ) 。 3 3高血压病 高血压病常以肝肾阴虚、肝阳上亢论治。而曹贵珠【1 6 】 经过辨证论治主张凡由营少血损、阳虚阴凝、浊阴上犯、髓海脉络失于荣 养温煦所致的高血压病，应投当归四逆汤合吴茱英汤，以补养营血、通阳 祛寒、温中降逆，另加天麻、臭悟恫祛风定眩止痛，寓“无风不作眩 之 ：f 匕 思o 3 4 慢性肺心病中医认为慢性肺心病属本虚标实，病位在心、肺、 脾、肾，属于中医“肺胀”范畴。赵晓薇等【1 7 】在治疗上急则治其标，选用 当归四逆汤合泻肺平喘的葶苈大枣泻肺汤，疗效显著。 4 结语 目前，当归四逆汤治疗排在前六位的疾病依次是：寒凝腹痛、冻伤、 头痛、脉管炎、风寒痹痛及雷诺氏病( 合计为6 0 8 ) 0 8 ，而对于心血 管疾病治疗作用的研究仍处于起步阶段。虽然实验研究证明，当归四逆汤 有改善心肌血氧供应、抗凝及抗血栓形成、扩张血管、镇痛抗炎等作用， 而这些都是从宏观上突出其作用，今后的实验研究