荷移分光光度法测定克拉霉素.doc

荷移分光光度法测定克拉霉素【关键词】 克拉霉素 【Abstaract】 AIM: To establish a method for rapidly determinating the content of clarithromycin in preparation. METHODS: To utilize visible spectrophotometry based on the charge transfer reaction between clarithromycin as donor and alizarin as acceptor in alcoholwater solution. RESULTS: The apparent molar absorptivity of complex was 7.31103 L/(molcm) at 546 nm, while the composition ratio and stability constant of charge transfer complex were 11 and 3.4104 respectively. Beers law was strictly obeyed in the range of 1-100 mg/L of clarithromycin. The average recovery was over 98.0%. The average standard deviation of six determinations was 1.30% when the concentration of clarithromycin was 50 mg/L. CONCLUSION: The proposed method is stable, accurate, sensitive and rapid, which can contribute to satisfactory results for the determination of clarithromycin in preparation. 【Keywords】 charge transfer reaction; alizarin; clarithromycin; spectrophotometry 【摘要】 目的：建立测定制剂中克拉霉素含量的方法. 方法：利用克拉霉素与茜素在水醇介质中发生电荷转移反应，形成电荷转移络合物，采用可见分光光度法测定. 结果：荷移反应生成的荷移络合物在546 nm处有最大吸收，络合物的组成比是11，稳定常数是3.4104，表观摩尔吸光系数7.31103 L/(molcm), 药物浓度在1100 mg/L范围内服从比耳定律，方法平均回收率在98.0%以上, 克拉霉素浓度为50 mg/L时，相对标准偏差(RSD)为1.30%（n=6）. 结论：方法稳定、准确、灵敏、快速，对样品的测定结果令人满意. 【关键词】 电荷转移反应; 茜素;克拉霉素;分光光度法 0引言 克拉霉素为20世纪90年代开发的新一代大环内酯类抗生素，为6O甲基红霉素，具有对胃酸稳定、口服生物利用度高、清除半衰期长和对组织穿透力强的特点.对呼吸、生殖、泌尿、五官、皮肤及附属结构感染的疗效很好.目前已报道的分析方法主要有：分光光度法1，2、高效液相色谱法3，4、微生物检定法5 、电化学分析法6、LCMS法7和近红外漫反射光谱法8等，这些方法繁琐费时，我们利用克拉霉素与茜素间的电荷转移反应，建立了简便快捷的分光光度法, 用于测定药物制剂中有效成分的含量，结果与文献2方法一致，回收率在98.0%以上，同时测定了络合物组成和稳定常数，探讨了反应机制. 1材料和方法 1.1材料 7590型UVVIS单光束自动扫描分光光度计（山东高密分析仪器厂）；721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；CS501型超级恒温器（重庆试验设备厂）. 茜素(北京化工厂)；克拉霉素（对照品，中国药品生物制品检定所，批号130356200102）；所用试剂均为分析纯，实验用水为去离子水. 1.2方法 1.2.1标准溶液的配制茜素溶液（3 mmol/L）的配制：准确称取茜素144 mg溶于适量水中，并用乙醇稀释至200 mL；克拉霉素溶液（1.25 g/L）的配制：准确称取克拉霉素125 mg溶于适量乙醇中，并用乙醇稀释至100 mL. 1.2.2试样制备试样1: 取克拉霉素片（国药准字X20000154，标示量是100 mg/片）10片，准确称质量，而后再研细混匀，取总质量的八分之一，加适量乙醇，温热搅拌，使其溶解完全，冷却后过滤，滤液定容至100 mL（浓度约为1.25 g/L）. 试样2: 取克拉霉素胶囊（国药准字H19990099，标示量是250 mg/粒）10粒，准确称质量，而后混匀，取总质量的二十分之一，加适量乙醇，温热搅拌，使其溶解完全，冷却后过滤，滤液定容至100 mL（浓度约为1.25 g/L）. 1.2.3检测方法取克拉霉素适量（0.5 mg）置于5 mL比色管中，加入茜素溶液2.0 mL，用溶剂（体积分数70%的乙醇）稀释至刻度，摇匀. 再以试剂空白为参比，测A546 nm. 2结果 2.1吸收光谱按1.2.3方法配制溶液，在400800 nm范围内扫描，克拉霉素在可见光区没有吸收，茜素的最大吸收峰是435 nm，克拉霉素与茜素反应生成的电荷转移络合物的最大吸收波长在546 nm (Fig 1), 且A546 nm与克拉霉素的浓度成正比，据此拟测定克拉霉素的分析方法，实验证明该方法可行. 2.2时间、温度、溶剂、水和乙醇体积比、茜素用量对反应的影响 2.2.1时间对反应的影响取克拉霉素乙醇溶液0.2 mL于5 mL比色管中，加入茜素溶液2.0 mL，用溶剂（体积分数70%的乙醇）稀释至刻度，以试剂空白为参比，分别放置5，10，15，20，25和30 min后测定吸光度，数据各为0.486，0.483，0.483，0.487，0.485和0.488，说明溶液配好后，产物吸光度基本不随反应时间变化，配好溶液后可比色测定，并且将溶液放置24 h后再测吸光度基本不变，说明溶液体系稳定性很好. 2.2.2温度对反应的影响按1.2方法配制溶液，分别在15，20，25，30，35和40的水浴中保温10 min后冷却至室温，测得溶液吸光度是0.488，0.482，0.481，0.485，0 .485和0.490，可见温度对反应基本无影响，因此，在当日气温下比色即可. 2.2.3溶剂对反应的影响按1.2方法配制溶液，只是改变溶剂. 分别选用水、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、三氯甲烷作溶剂，测得溶液吸光度为0.485，0.246，0.168，0.078，0.117和0.027，结果表明水作溶剂最佳. 实验还证明，如果向体系中加入酸、碱或缓冲溶液，会使反应灵敏度大大下降. 另外，考虑到克拉霉素在水中溶解度不太好，其标准溶液是采用乙醇配制，因此，本方法使用水和乙醇混合溶剂. 2.2.4水和乙醇体积比对反应的影响保持其他条件不变，只是改变体系中乙醇和水的体积比. 当乙醇和水的体积比分别是9/1，8/2，7/3，6/4和5/5时，溶液吸光度为0.415，0.480，0.483和0.490，浑浊，以上数据说明，乙醇的体积分数为60%80%时为反应灵敏度高峰区，本方法控制乙醇的体积分数为70%. 2.2.5茜素用量对反应的影响取克拉霉素乙醇溶液0.3 mL于5 mL比色管中，只是改变茜素的用量，当茜素用量分别是0.5，1.0，1.5和2.0 mL时，反应液的吸光度是0.580，0.715，0.740和0.740，说明用量为1.5 mL时，反应可以进行完全，为使反应进行彻底，本方法控制茜素用量2.0 mL. 2.3方法的精密度取克拉霉素溶液0.2 mL，按1.2.3方法平行配制六份溶液，测得溶液吸光度分别为0.490，0.485，0.495，0.497，0.487和0.480.通过计算可知，当克拉霉素浓度为50 mg/L时，六次测定结果的相对标准偏差为1.30%. 2.4比耳定律线性范围按实验确定的最佳条件配制反应液， 对测得数据进行统计处理，得回归方程为A=0.009695C-0.004251(浓度单位是mg/L)，相关系数是0.9999，表观摩尔吸光系数是7.31103 L/(molcm)，克拉霉素浓度在1100 mg/L范围内符合比耳定律. 2.5荷移络合物组成及稳定常数的测定应用等摩尔连续变换法测得克拉霉素与茜素作用生成的荷移络合物的组成比为11，稳定常数是3.4104（Fig 2）. 克拉霉素分子中的氮原子上有一对孤对电子，可作为n电子给予体，茜素是一平面缺电子体系，可作为电子接受体，克拉霉素与茜素作用，形成n电荷转移络合物.根据荷移络合物的组成和两种反应物的结构推断，此荷移反应的反应式为： 2.6试样分析 2.6.1回收率的测定取试样0.1 mL于5 mL比色管中，采用在样品中加入已知标准的方法作回收率实验，结果见Tab 1，回收率实验说明，样品中辅料对测定基本无干扰.表1回收率的测定结果（略） 2.6.2试样分析取试样适量于5 mL比色管中，分别以本法和文献2方法进行测定, 结