（法医学专业论文）氯胺酮在家兔体内的分布及其稳定性研究.pdf

山西医科大学硬士学位论文 氯胺酮在家兔体内的分布及其稳定性研究 摘要 目的：研究氯胺酮在急性中毒家兔体内的分布情况，探索氯胺酮在中毒家兔体液和组织 中的稳定性及样品中氯胺酮含量随时间和温度变化的规律。 方法：1 气相色谱质谱联用( g c m s ) 、气相色谱( g c ) 分析方法：样品中加入内标 物s k f 5 2 5 a 后碱化，乙酸乙酯萃取，利用保留时间结合特征离子峰( g c m s ) 定性分析， 内标法和工作曲线法( g c ) 定量分析样品中氯胺酮含量。2 分布研究：实验组家兔阻氯 胺酮1 5 0 m g k g 灌胃，3 0 分钟后处死，取其血液、尿液、胆汁、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、 肾脏、脑，检测其中氯胺酮含量；对照组家兔以等体积生理盐水灌胃，其余处理同实验组。 3 稳定性研究：实验组家兔以氯胺酮1 5 0 m g k g 灌胃，3 0 分钟后处死，取其血液、尿液、 心脏、肝脏、肾脏、肌肉、脑，分别置于室温( 1 8 2 4 ) 、冷藏( 4 ) 和冷冻( 2 0 ) 条件下，不同时间检测其中氯胺酮含量；对照组家兔以等体积生理盐水灌胃，各对应样品 为空白对照。 结果：1 氯胺酮在血液和肝脏样品中检测线性范围为o 2 - - - 4 0 l a g m l ( 1 a g g ) ，最低检出限为 o 0 5 0 e g r n l ( u g ) 。提取回收率为7 6 3 6 - 8 3 2 3 ，r s d 均小于1 0 。氯胺酮在急性中毒家 兔组织和体液中的分布趋势为：尿 肝脏 胆汁 肾脏 血 脾脏纠山脏 肺脏 脑。2 样品反 复冻融三次后，氯胺酮含量无明显变化：对液一液萃取后的样品进行检测，2 4 h 内分析结果 无显著性差异。3 冷冻保存时心脏、肝脏、肾脏、脑、肌肉、血液和尿液中氯胺酮含量 变化均无显著性差异：冷藏保存时心脏、肌肉、脑、肝脏和血液中氯胺酮含量随存放时间 延长显著下降，肾脏和尿液中氯胺酮含量先上升后下降；室温保存时心脏、肌肉和脑组织 中氯胺酮含量下降有显著性差异，肝脏、肾脏、血液和尿液中氯胺酮含量均呈先上升后下 降趋势。 结论：1 氯胺酮主要经肾脏和胆汁排泄，对疑为口服氯胺酮急性中毒的死亡案件，除要 采取血液外，还应选择尿液和l j b _ i _ t 作为检验材料，其检出量较高，且样品中内源性杂质干 扰少，其次可采取肝脏、肾脏、脾脏等组织为检验材料，根据毒物分析结果并结合案情和 中毒症状综合分析做出结论。2 含有氯胺酮的肝脏和血液样品经液一液萃取后在室温下至 少可稳定存放2 4 h ；反复冻融对氯胺酮的稳定性没有影响；储存温度与存放时间均影响样 品中氯胺酮含量变化，氯胺酮在冷冻条件下保存时稳定性较好，室温不宜作为氯胺酮样品 的保存条件。 关键词：氯胺酮，样品，分布，稳定性，温度 山西医科大学硕士学位论文 t h ed i s t r i b u t i o na n ds t a b i l i t yo fk e t a m i n e a b s t r a c t o b j e c t i v e s t u d i e so ft h ed i s t r i b u t i o no fk e t a m i n ei na c u t ep o i s o n e dr a b b i t sa n dt h es t a b i l i t yo f k c t s m i n ei ns p e c i m e n so fb o d yf l u i d sa n dt i s s u e s e x p l o r et h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g eo fk e t a m i n e a l o n gw i t ht i m ea n dt e m p e r a t u r e m e t h o d s ：1 g c m sa n dg cm e t h o d s ：a f t e ra d d e ds k f 5 2 s a ( i n t e r n a ls t a n d a r d ) t ob o d yf l u i d s a n dt i s s u e s ，t h es p e c i m e n sw e r ea l k a l i f i e da n de x t r a c t e db ye t h y la c e t a t e t h eo r g a n i cl a y e r c o n t a i n i n gk e t a m i n ew a sa n a l y z e db yg ce q u i p p e dw i t hn p da n dg c m s f u l ls c a nm o d ew i t h t h ei o nf r a g m e n t a t i o na n dr e t e n t i o nt i m ew a sa p p l i e df o rq u a l i t a t i v ea n a l y s i s ，i n t e m a ls t a n d a r d m e t h o da n dw o r k i n gc u r v e sw e r ee m p l o y e df o rq u a n t i t a t i v ea n a l y s i s 2 d i s t r i b u t i o ns t u d y ：t h e r a b b i t si i le x p e r i m e n t a lg r o u pw e r eg i v e ni n t r a g a s t r i ca d m i n i s t r a t i o no fk e t a m i n ew i t had o s eo f 1 5 0 m g k ga n dw e r ee x e c u t e da f t e r3 0m i n u t e s b l o o d ，u r i n e ，b i l e ，h e a r t ，l i v e r ，s p l e e n ，l u n g ， k i d n e ya n db r a i nw e r et a k e nt od e t e c tk e t a m i n e r a b b i t si nc o n t r o lg r o u pw e r eg i v e ni n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o no fp h y s i o l o g i cs a l i n e t h es a m p l e sw e r et a k e nc o r r e s p o n d i n g l ya n du s e da sb l a n k c h e c k 3 s t a b i l i t ys t u d y ：t h e r a b b i t si n e x p e r i m e n t a lg r o u p w e r e g i v e ni n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o no f k e t a m i n ew i t had o s eo f1 5 0 m g k ga n dw e r ee x e c u t e da f t e r3 0m i n u t e s b l o o d ， u r i n e ，h e a r t ，l i v e r ，k i d n e y ，m u s c l ea n db r a i nw e r es t o r e da tv a r i o u st e m p e r a t u r e s ( 4d e g r e e s ， 1 8 2 4d e g r e e s ，一2 0d e g r e e sc 1t od e t e c tk e t a m i n ea td i f f e r e n tt i m ep o i n t s r a b b i t si i lc o n t r o l g r o u pw e r eg i v e ni n t r a g a s t r i ca d m i n i s t r a t i o no fp h y s i o l o g i cs a l i n e t h es a m p l e sw e r et a k e no u t c o r r e s p o n d i n g l ya n du s e da sb l a n kc h e c k r e s u l t s ：1 t h e l i n e a rr a n g e o f k e t a m i n e i n b l o o da n d l i v e r w a s o 2 4 0 p g m l ( p g g ) t h e l i m i t o f d e t e c t i o nw a s0 0 5 p g m l ( p g g ) t h ee x t r a c t i o nr e c o v e r yi nb l o o da n dl i v e rw a s7 6 3 6 一8 3 2 3 t h ei n t e r - a n di n t r a - d a yr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o no fp r e c i s i o nw e r el e s st h a n1 0 o t h e c o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ei nb i o l o g i c a lf l u i d sa n dt i s s u e so ft h ea c u t ep o i s o n e dr a b b i t sw a sa s f o l l o w s ：u r i n e l i v e r b i l e k i d n e y b l o o d s p l e e n h e a r t l u n g b r a i n 2 a f t e rf r e e z et h a w i n gf o r t h r e et i m e s ，t h ec o n c e n t r a t i o no fs a m p l e sh a v en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e a f t e re x t r a c t e dw i t h e t h y la c e t a t e ，t h ec o n c e n t r a t i o na td i f f e r e n tt i m ep o i n t si n2 4h o u r sh a v en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e 3 k e t a m i n ew e r ef o u n dt ob es t a b l ef o ru pt o9 0d a y sa t 一2 0d e g r e e sc t h ec o n c e n t r a t i o no f k e t a m i n ed e c r e a s e di nh e a r t ，l i v e r , b r a i n ，m u s c l ea n db l o o da t4d e g r e e sc t h ec o n c e n t r a t i o no f k e t a m i n ei n c r e a s e di nk i d n e ya n du r i n ea tf i r s ta n dt h e nd e c r e a s e da t4d e g r e e sc t h e c o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ed e c r e a s e di nh e a r t ，m u s c l ea n db r a i na t18 2 4d e g r e e sc t h e c o n c e n t r a t i o no fk e t a m i n ei n c r e a s e di nl i v e r ，k i d n e y ，b l o o d ，u r i n ea tf i r s ta n dt h e nd e c r e a s e da t 1 8 - 2 4d e g r e e sc 儿 山西医科大学碗士学位论文 c o n c l u s i o n ：1 b l o o d ，u r i n ea n db i l ew e r et h eb e s ts p e c i m e n sf o rd e t e r m i n a t i o no fk e t a m i n ei n t h ec a s e so fk e t a m i n ea b u s e 2 a f t e re x t r a c t e dw i t he t h y la c e t a t e ，t h ek e t a m i n ei nl i v e ra n db l o o d w e r es t a b l ea tl e a s ti n2 4h o u ra tr o o mt e m p e r a t u r e f r e e z et h a w i n gh a v en o te f f e c to nt h e s t a b i l i t yo fk e t a m i n e t e m p e r a t u ea n dt i m eh a v ei n f l u e n c eo nt h es t a b i l i t yc o n c e n t r a t i o no f k e t a m i n e k e t a m i n ew a ss t a b l ea tf r o z e n t h es a m p l e ss h o u l dn o tb es t o r e da tr o o mt e m p e r a t u r e k e yw o r d s ：k e t a m i n e ，s p e c i m e n ，d i s t r i b u t i o n ，s t a b i l i t y ，t e m p e r a t u r e i i l 山西医科大学硬士学位论文 刖再 氯胺酮( k e t a m i n e ) 是苯环己哌啶( n 1 一p h e n y c y c l o h e x y p i p e r i d i n e ，p c p ) 衍生物，n 甲基一d 一天门冬氨酸( n m e t h y l d a s p a r t a t e ，n m d a ) 受体拮抗剂，非巴比妥类静脉麻醉药 物，属精神药物中的致幻剂。它具有镇静、止痛、麻醉的作用，同时也会导致听觉、视觉、 感觉的幻觉、谵妄、遗忘、解离等副作用的发生，正是这些副作用导致了氯胺酮的溢用。 国际上氯胺酮的滥用已有3 0 多年历史，上个世纪七十年代美国就有氯胺酮滥用的病 例报道。氯胺酮在2 0 0 4 年7 月被我国列为一类管制精神药品，但吸食纯度很高的氧胺酮 粉末，也就是俗称的“k 粉”、“h i 药”在歌厅、舞厅仍然流行，且有愈演愈烈之势。有调 查显示，“k 粉”已成为青少年吸食毒品的主要种类，从1 9 9 8 年8 2 0 上升到2 0 0 3 年9 9 0 2 。 吸食氯胺酮的青少年大多认为“k 粉”没有特别大的戒断症状，又可以使他们的好奇心得 到满足，令他们兴奋、有快感，可以减压、解闷、逃避现实、感觉自由，但滥用氯胺酮对 青少年的身心健康有极大的损害i l 捌。 随着氯胺酮滥用的增多，涉及氯胺酮中毒和死亡的案件日趋增多 3 - 5 1 。在法医工作中， 通常依据中毒者血液或组织中毒物含量来判断其中毒原因或死因，但是在实际检案中，常 常由于各种原因不能立即对所取样品进行分析，样品在存放期间可能由于储存条件和时 间、温度、湿度、p h 值及保存容器等诸多因素的影响，使毒物发生降解及破坏或微生物的 作用使毒物浓度变化，给氯胺酮的鉴定和中毒原因判断带来困难。因此样品的保存条件及 时限对于分析结果的解释有着尤为重要的意义。目前国内外对氯胺酮的研究多集中在麻醉 学、药效学，药物动力学，作用机制及机体内氯胺酮的测定和含量分析等方面t 6 - 5 1 ，有关 氯胺酮中毒及死亡体内分布的毒物学资料尚未见系统的报道。国外关于滥用药物的稳定性 研究较多，主要有可卡因、海洛冈、吗啡、四氢大麻酚、苯丙胺类、咖啡因等药4 匆1 1 6 - 2 0 ， 且大多数研究均集中在血液和尿液的稳定性方面，对滥用药物在脏器中的稳定性尚未见报 道。h i j a z iy t 2 l l 等人研究了氯胺酮在人血清中的稳定性，但该研究是将氯胺酮添加到人的 空白血清中，置于冷藏( 4 ) 和冰冻( 一2 0 ) 条件下保存，不能全面地反映样品中氯胺 酮的稳定性。 本实验以家兔为研究对象，建立了氯胺酮灌胃( i g ) 急性中毒动物模型，对氯胺酮在 急性中毒家兔体内的分布及氯胺酮在样品中的稳定性进行研究，为氯胺酮中毒案件的合理 取材和人体内氯胺酮中毒分布情况提供参考，为优化氯胺酮样品的保存条件及j 下确评价毒 物分析结果提供科学依据。 山西医科大学硕士学位论文 第一章氯胺酮在家兔体内的分布研究 氯胺酮( k e t a m i n e ，俗称k 粉) 在临床上主要用作麻醉剂或麻醉诱导剂，具有致幻作用， 有一定的精神依赖性，是俗称的三大“迷奸药”( m d m a 、k 粉、y 羟基丁酸) 之一。氯 胺酮已成为娱乐场所热门毒品【1 , 2 1 ，对青少年危害极大。长期滥用氯胺酮有可能引发一些躯 体疾病及神经系统症状2 2 1 ，也有因滥用氯胺酮而致死和氯胺酮投毒案件的报道”1 。陶陆阳 【2 3 1 等报道一例氯胺酮慢性投毒致死案例，因多次使用氯胺酮而引起心肌纤维化并最终造成 心力衰竭而致死，l a l o n d eb r t 2 哪等研究了两例致死案例中氯胺酮在血液中的分布情况，研 究结果表明，氯胺酮对机体的损害与其在体内的分布密切相关。但目前国内外未见氯胺酮 中毒及死亡后体内分布的系统研究报道。本文建立了氯胺酮灌胃( i g ) 急性中毒动物模型， 对氯胺酮在急性中毒家兔体内的分布进行了研究，为氯胺酮中毒案件的合理取材和人体内 氯胺酮急性中毒分布情况提供参考。 1 1 材料 1 1 1 仪器 ( 1 ) t r a c eg c & d s q 气，质联用仪( g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r y , g c m s ) ，美国 t h e r m of i n n i g a n 公司： ( 2 ) t r a c e2 0 0 0g c 气相色谱仪( g a sc h r o m a t o g r a p h y , g c ) ，美国t h e r m of i n n i g a n 公司； ( 3 ) d l 一5 型低速大容量离心机，上海安亭科学仪器厂； ( 4 ) 华普达h y - 3 多功能振荡器，常州市华普达教学仪器有限公司； ( 5 ) k l 5 1 2 j 氮吹仪，北京康林科技有限责任公司； ( 6 ) 2 0 0 4 一m p 6 型电子分析天平，s a t o r i u s ，英国； ( 7 ) r t z - 1 0 a 型婴儿称，无锡市衡器厂； ( 8 ) q l - 9 0 1 涡旋混合器，江苏海门市麟麒医用仪器厂。 1 1 2 试剂 ( 1 ) 盐酸氯胺酮注射液，购于福建古田药业有限公司，批号：0 4 1 1 1 5 ( 2 ) 氯胺酮标准品、s k f s 2 5 a ( 丙基解痉素) 均购于公安部二所； ( 3 ) 其余试剂均为分析纯。 1 1 3 实验动物 健康白色家兔1 2 只，雌雄兼用，体重2 0k g _ + 0 1k g ，购于山西医科大学实验动物中 心。适应性喂养3 天。饲养环境：温度1 7 ，湿度4 5 6 5 ，通风换气良好，光照合 理，笼具和垫料卫生、无毒。 1 1 4 溶液配制 ( 1 ) 氯胺酮标准溶液的配制 精密称取氯胺酮标准品适量，用乙醇溶液溶解并稀释制成4 0 m g m l 的储备液。分别精 密量取该储备液适量，用乙醇稀释成浓度为4 0 o ，2 0 0 ，1 0 0 ，4 0 ，2 0 ，1 6 ，0 8 ，0 4 ， 0 2 ，0 1 6 ，0 0 8 m g m l 的氯胺酮系列标准溶液。置44 c 冰箱保存。 ( 2 ) 内标储备液的配制 精密称取丙基解痉素( s k f 5 2 5 a ) 标准品适量，用乙醇溶液溶解并稀释制成o m g m i 的储备液。置4 c 冰箱保存。 1 2 方法 1 2 1 家兔分组、染毒与检材的采取 将1 2 只家兔随机分为两组：实验组和对照组各6 只，禁食1 2 h 。实验组家兔以盐酸氯 胺酮溶液1 5 0 m g k g ( 根据小鼠的l d s o 体表面积换算) 灌胃；对照组家兔以等体积生理盐 水灌胃，3 0 m i n 后缺氧处死，在室温下解剖采取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胆 汁、血液和尿液，- 2 0 c 冷冻保存待检。 1 2 2 样品的处理方法 取血液、尿液及胆汁各l m l ，脏器组织各l g 匀浆后，分别置于1 0 m l 具塞离心试管中， 1 h c i 调p h 至2 。3 ，振荡1 5 m i n ，3 0 0 0r m i n 离心1 0 m i n ，吸取酸层于另一离心试管中， 加入内标s k f 5 2 5 a 5 l a g ，加入l m o l l n a o h 溶液调至p i l l 3 ，乙酸乙酯5 m l 萃取，振荡1 5m i n ， 3 0 0 0 r m i n 离心1 0 r a i n ，取乙酸乙酯层4 5 m l ，重复提取一次，合并有机相，8 0 c 氮气流水 浴挥干，残渣以2 0 1 a l 乙醇定容，旋涡混匀，取l u l 进样。利用保留时间结合特征离子峰( 气 相色谱质谱联用) 定性，内标法和工作曲线法( 气相色谱) 定量分析。 1 2 3 仪器条件 1 2 3 1 气相色谱质谱法条件 色谱柱为d b 一5 m s 毛细管柱( 3 0 r e x 0 2 5 m m x 0 2 5 1 a m ) ，e l 源7 0 e v ，扫描范围 5 0 a m u 一5 5 0 a m u ，柱温为程序升温：1 5 0 。c ( 1 m i n ) 一1 2 c m i n 一2 7 0 ( 3 m i n ) ；离子源、传 输线和进样口温度均为2 5 0 ；分流进样，分流比为5 0 ：1 ；载气为高纯氦气( h e ，9 9 9 9 9 ) ， 流速1 5 m l m i n ，恒流模式。 1 2 3 2 气相色谱法条件 色谱柱为d b 一5 m s 毛细管柱( 3 0 r e x 0 2 5 m m x o 2 5 t a m ) ，柱温：1 5 0 c ( 1 m i n ) 一1 2 c m i n 一2 7 0 c ( 3 m i n ) ；进样i s 温度3 0 0 c ，载气n 2 流量1 5 m l m i n ，不分流方式进样。检测器 为n p d 。 t 2 4 统计方法 实验数据均用工签表示，并采用描述性分析方法。 1 3 结果 1 3 1 氯胺酮及内标s k f 5 勘的结构及质谱图见图卜l 和图卜2 。 山西医科大学硕士学位论文 雀 度 辨 z _ 1 j z 。吼t 1 it 二! e ：i f i i1 1 c 1 -吲z 冒 名吼【| lt 二t l 。j | iii 。1 肺比“，；) 图1 - i 氯胺酮结构及质谱图 f i gl 一1f u l l s c a nm a s ss p e c t r aa n dc h e m i c a ls t r u c t u r eo fk e t a m i n e - 、i 矿 蚕叫 i iih 1l ，。 i l 丫t ! s， i 罕 扁葡比h ，1 ) 图1 2s i c p 5 2 5 a 结构及质谱图 f i gl - 2f u l l s c a nm a s ss p e c t r aa n dc h e m i c a ls t r u c t u r eo fs k f 5 2 s 4 山西医科大学磺士学位论文 1 3 2 方法的专属性 通过标准品、空白样品以及用药后的样品总离子流色谱图，证明本实验所建立方法不 受体液和组织中内源性物质和其它杂质干扰。氯胺酮的气相色谱图及气，质联用图见图1 - 3 和图1 - 4 。 时同o d 的 图1 - 3 氯胺酮总离子流色谱图 f i g l 3t o t a li o nc u r r e n tc h r o m a t o g r a mo f k e t a m i n e ( t i c ) 氯胺酮k e t a m i n e t r = - 6 9 3 m i n 内标物i n t e r n a ls t a n d a r ds k f ，茑 t 仁- 1 0 3 7 r a i n 时日 图1 _ 4 氯胺酮的程序升温气相色谱图 f i g1 4 g c n p dc h r o m a t o g r a m o f k e t a m i n e 氯胺副k e t a m i n et r = 65 6 r a i n 内标物i n t e r n a ls t a n d a r ds k f s t r = 9 8 5 r a i n 5 山西医科大学硬士学位论文 1 3 3 回收率及精密度实验 取1 5 份空白血液各l m l ，1 5 份空白肝脏各l g ，均分为3 组。每组分别加入氯胺酮2 、 1 0 、2 0 j g ，按1 2 2 项方法提取并检测。同时取l d 内5 次测定结果计算日内相对标准差， 以3 d 内5 次测定结果计算r 间相对标准差结果见表l 一1 。 表1 1 氯胺酮回收率及精密度( n = 5 ) t a b l e i lr e c o v e r ya n dp r e c i s i o no f k e t a m i n e ( n = 5 ) 1 3 4 工作曲线 分别在空白家兔血液和肝脏中添加氯胺酮溶液及s k f 5 2 弘溶液，配制成含有氯胺酮0 2 、 o 4 、0 8 、1 、2 、4 、8 、1 6 、2 0 、3 0 、4 0 p g m i ( 或g g ) ，s k f 5 2 5 a s i i g 的系列样品，按1 2 2 项方法提取并检测。以氯胺酮浓度( p g m l 或p g g ) 为横坐标( x ) ，氯胺酮与内标的峰面 积之比为纵坐标( y ) 作图，求得直线回归方程、线性范围及最低检出限，结果见表l 一2 。 表1 2 血和肝中氯胺酮的提取回收率 t a b l e 卜2r e c o v e r yo f k e t a m i n ei nb l o o da n dl i v e r 1 3 5 氯胺酮在急性中毒家免体内的分布 氯胺酮在急性中毒家兔各个脏器及体液中的平均浓度见表l 一3 ，分布趋势见图1 5 。 6 山西医科大学硕士学位论文 表1 3 氯胺酮在家兔体内的分布( p g m l 或p g 幢n ：6 ) t a b l el 一3d i s t r i b u t i o no f k e t a m i n ei nr a b b i t s ( n = 6 ) 窨 8 墨 袈 ? _ | | | | | | - 一一 山西医科大学硕士学位论文 织和体液中的氯胺酮浓度大小依次为：尿 肝 胆汁 肾 血 脾 心 肺 脑。而急性中毒大鼠 体内各组织和血液中氯胺酮的浓度大小依次是：肾 脑 肝y 0 肌 肺 外周血i ) 血，组织脏 器中浓度显著高于血液”i 。除在脑中分布特征有差异外，氯胺酮在家兔体内的分布与在大 鼠体内( 大鼠无胆汁) 的分布基本相同，其中尿液、肾脏、胆汁和肝脏中含量较高。氯胺 酮在大鼠和家兔体内的分布不同可能是由于种属差异。 影响药物在机体中分布的因素很多，主要有：药物的脂溶性、毛细血管通透性、器官 和组织的血流量、与血浆蛋白和组织蛋白的结合率等。氯胺酮在肝脏中含量较高可能是因 为其7 0 9 0 在肝脏代谢，存在首关消除也可能是其影响因素：氯胺酮主要经由肾脏、 胆汁排泄，且由于肾小管对氯胺酮的重吸收导致肾脏、尿液及胆汁中含量较高：氯胺酮的 高脂溶性可能是造成其在心肌和肺中含量较低的主要原因。l i c a t am 等恤j 报道一例氯胺酮 滥用致死案例，m o o r ek a l 2 9 】等报道了一例氯胺酮与酒精混合滥用致死的案例，两个案例中 肝脏、肾脏、胆汁及尿液中浓度较高，这与本实验结果基本吻合。 药( 毒) 物在体内的分布变化是受多种因素影响的复杂的动态变化过程，急性或慢性 中毒、剂量、给药途径、种属、再分布等因素均可影响其在体内的分布，现有药物动力学 数据多为静脉或肌肉注射途径治疗量给药时获得，本文仅对口服给药途径，氯胺酮急性中 毒家兔体内分布情况进行了探讨，需进一步研究其分布是否有剂量依赖动力学特征，急性 中毒致死和延缓死亡、慢性中毒死亡后在体内的分布趋势是否有差异。 1 4 3法医学意义 氯胺酮的滥用多采取气雾法鼻吸、口服、肌注、静脉注射等方式，不同入体途径的体 内分布特点也不同，并且急性中毒致死和延缓死亡、慢性中毒死亡后药物在体内的分布趋 势也可能不同，本实验仅研究了口服氯胺酮急性中毒家兔体内的分布情况，其余模型有待 于进一步研究。本研究为氯胺酮急性中毒死亡案例的检材采取提供科学依据，建议法医师 们在涉及口服氯胺酮急死的案例中，除要采取血液外，还应选择尿液和胆汁作为检验材料， 其检出量较高，且样品中内源性杂质干扰少，其次可采取肝脏、肾脏、脾脏等组织为检验 材料，根据毒物分析结果并结合案情和中毒症状综合分析做出结论。 山西医科大学硬掉位论文 第二章氯胺酮在保存样品中的稳定性研究 氯胺酮近年来在某些娱乐场所出现，常与其它毒品混合滥用，成为一种新型毒品。快 速、准确提取检验氯胺酮已经成为司法鉴定需要，目前国内外关于氯胺酮提取检澜的报道 较多n , 1 2 ，方法己比较成熟。法医师们常根据所取样品中氯胺酮的含量来判断其服用量及 是否中毒或死亡，但在实际检案中，常常由于各种原因不能立即对所取样品进行分析，样 品在存放期间氯胺酮的含量是否会发生变化，时间和温度等因素是否会对样品中氯胺酮含 量产生影响，尚需要进一步研究。h i j a z iy 【2 ”等人研究了氯胺酮在人血清中的稳定性，但 该研究是将氯胺酮添加到人的空白血清中，置于冷藏( 4 ) 和冰冻( 一2 0 ) 条件下保存， 不能全面地反映样品中氯胺酮的稳定性。 本实验将中毒家兔各个脏器组织和体液分别置于室温( 1 8 2 4 c ) 、冷藏( 4 ) 及冷 冻( 一2 0 ) 条件下保存至9 0 天，气相色谱法测定不同时间样品中氯胺酮含量，观察其稳 定性，对疑为氯胺酮滥用中毒的案件其滥用是否达中毒量或致死量、正确评价毒物分析结 果提供一定参考依据。 2 1 材料 2 1 1 仪器 ( 1 ) t r a c eg c & d s q 气，质联用仪( g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r y ，g c m s ) ，美国 t h e n n of i n n i g a n 公司； ( 2 ) t r a c e2 0 0 0g c 气相色谱仪( g a sc h r o m a t o g r a p h y ，g c ) ，美国t h e r m of i n n i g a n 公司； ( 3 ) d l 5 型低速大容量离心机，上海安亭科学仪器厂； ( 4 ) 华普达h y - 3 多功能振荡器，常州市华普达教学仪器有限公司； ( 5 ) k l 5 1 2 j 氮吹仪，北京康林科技有限责任公司： ( 6 ) 2 0 0 4 一m p 6 型电子分析天平，s a t o r i u s ，英国： ( 7 ) r t z - i o a 型婴儿称，无锡市衡器厂； ( 8 ) q l 一9 0 1 涡旋混合器，江苏海门市麟麒医用仪器厂。 2 1 2 试剂 ( 1 ) 盐酸氯胺酮注射液，购于福建古田药业有限公司，批号：0 4 1 1 1 5 ； ( 2 ) 氯胺酮标准品、s k f s 2 5 a ( 丙基解痉素) 均购于公安部二所； ( 3 ) 其余试剂均为分析纯。 2 1 3 实验动物 健康白色家兔3 6 只，雌雄兼用，体重2 0 k g o 1 蚝，购于山西医科大学实验动物中 心。适应性喂养3 天。饲养环境：温度1 7 ，湿度4 5 6 5 ，通风换气良好，光照合 理，笼具和挚料卫生、无毒。 山西医科大学硕士学位论文 2 2 方法 2 2 1 家兔分组、染毒与样品的采取 将3 6 只家兔随机分为三组：室温组、冷藏组和冷冻组各1 2 只，各组又分为实验组( 6 只) 和对照组( 6 只) ，禁食1 2 h 。实验组家兔以盐酸氯胺酮溶液1 5 0 m g k g 灌胃，对照组 家兔以等体积生理盐水灌胃，3 0 m i n 后缺氧处死，在室温下解剖采取心脏、肝脏、肾脏、 脑、肌肉、血液和尿液，分别置于室温( 1 8 2 4 ) 、冷藏( 4 ) 和冰冻( 一2 0 ) 条件下， 第1 天、3 天、5 天、1 0 天、1 5 天、2 0 天、3 0 天、4 5 天、6 0 天和9 0 天检测样品中氯胺 酮的含量。 2 2 2 样品的提取方法 取血液、尿液各l m l ，心、脑各0 5 9 ，肝、肾和肌肉各l g 匀浆后，置于l o m l 具塞离 心试管中，l h c l 调p h 至2 3 ，振荡1 5m i n ，3 0 0 0r m i n 离心1 0 m i n ，吸取酸层于另一 离心管中，加入内标s k f 5 2 5 a 5 g ，加入l m o l n a o h 溶液调至p i l l 3 ，乙酸乙酯5 m l 萃取， 振荡1 5r a i n ，3 0 0 0 r m i n 离心1 0 m i n ，取乙酸乙酯层4 5 m l ，重复提取一次，合并有机相， 8 0 c 氮气流水浴挥干，残渣以2 0 1 a l 乙醇定容，旋涡混匀，取1 u l 进样。利用保留时间结合 特征离子峰( 气相色谱，质谱联用) 定性，内标法和工作曲线法( 气相色谱) 定量分析。 2 2 3 处理后样品的稳定性 取空白家兔肝脏1 9 、血液1i l l l 各3 份，分别加入氯胺酮2 、1 0 、2 0 l a g ，经反复3 次一2 0 ( 2 冷冻，室温溶融后，测定样品中氯胺酮含量，以考察样品在反复冻融条件下的稳定性。每 一浓度进行3 样本分析。 同法配制浓度分别为2 ，1 0 ，2 0 1 t g m l ( i t g m g ) 的血液和肝脏样品，样品经液一液萃取处 理后，室温( 约2 0 ) 放置2 4 h 测定，以考察处理后的氯胺酮血液和肝脏样品在室温时的 稳定性。每一浓度进行3 样本分析。 2 2 4 仪器条件 2 2 4 1 气相色谱质谱法条件 色谱柱为d b 5 m s 毛细管柱( 3 0 m x 0 2 5 m i n x 0 2 5 1 a m ) ，e 1 源7 0 e v ，扫描范围 5 0 a m u 5 5 0 a m u ，柱温为程序升温：1 5 0 ( 1 m i n ) 1 2 c m i n 一2 7 0 ( 3 m i n ) ；离子源、传 输线和进样口温度均为2 5 0 c ；分流进样，分流比为5 0 ：1 ；载气为高纯氦气( h e ，9 9 9 9 9 ) ， 流速1 5 m f m m ，恒流模式。 2 2 4 2 气相色谱法条件 色谱柱为d b 一5 m s 毛细管柱( 3 0 m 0 2 5 m m x 0 2 5 p m ) ，柱温：1 5 0 c ( 1 m i n ) 一1 2 c m i n 一2 7 0 ( 3 m i n ) ；进样1 5 1 温度3 0 0 ，载气n 2 流量1 5 m l m i n ，不分流方式进样。检测器 为n p d 。 2 2 5 统计方法 各组数据用s p s s1 1 5 软件进行重复测量资料的方差分析。 o 山西医科大学硕士学位论文 2 3 结果 2 3 1 样品的稳定性 血液和肝脏样品经反复冻融三次后，3 个浓度的血液和肝脏样品中氯胺酮的测定均值 与加入值经统计学分析无显著性差异( p o 0 5 ) 。表明氯胺酮血液和肝脏样品在冷冻一溶融 循环三次实验中无明显降解。 液一液萃取处理后的样品室温( 约2 0 ) 放置2 4 h