分子生物学及发酵工程实验室常用试剂与配方.docx

目录氨苄青霉素配方-Ampicillin2IPTG2X-Gal2LB培养基2LB/Amp培养基3SOB培养基3磷酸缓冲液4SDS-PAGE蛋白胶配置4SOC培养基6bbroth6LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基7氨苄青霉素配方-Ampicillin1. 组份浓度： 100 mg/ml 2. 配 制 量： 10 ml 3. 配制方法： . 称量1 g Ampicillin置于10 ml离心管中。 . 加入一定量去离子水，充分混合溶解后，定容至10 ml。 . 用0.22 m过滤膜过滤除菌。 . 小份分装（1 ml/份）后，-20保存。 IPTG 1. 组份浓度： 24 mg/ml 2. 配 制 量： 50 ml 3. 配制方法： . 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 . 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 . 用0.22 m过滤膜过滤除菌。 . 小份分装（1 ml/份）后，-20保存。 X-Gal 1. 组份浓度： 20 mg/ml 2. 配 制 量： 50 ml 3. 配制方法： . 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 . 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml。 . 小份分装（1 ml/份）后，-20避光保存。 LB培养基 . 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g . 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 一般不用调节pH. 加去离子水将培养基定容至1 L。 . 高温高压灭菌后，4保存。 LB/Amp培养基 1. 组份浓度（W/V）： Tryptone 1% Yeast Extract 0.5%NaCl 1%Ampicillin 0.1 mg/ml2. 配 制 量： 1 L 3. 配制方法： . 在1 L LB培养基中加入1 ml Ampicillin（100 mg/ml）后均匀混合。 . 4保存。SOB培养基 1. 组份浓度： 2%（W/V） Tryptone 0.5%（W/V） Yeast Extract 0.05%（W/V） NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgCl2 2. 配 制 量： 1 L 3. 配制方法： 配制250 mM KCl溶解。 . 在90 ml的去离子水中溶解1.86 g KCl后，定容至100 ml。 . 配制2 M MgCl2溶液。 在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高温高压灭菌。 . 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 20 g Yeast Extract 5 g NaCl 0.5 g . 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 . 量取10 ml 250 mM KCl溶解，加入到烧杯中。 . 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 . 加去离子水将培养基定容至1 L。 . 高温高压灭菌后，4保存。 . 使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。 磷酸缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。pH A液 （ml） B液（ml） 5.60 9.50 0.255.91 9.00 1.006.24 8.00 2.006.47 7.00 3.006.64 6.00 4.006.81 5.00 5.006.98 4.00 6.007.17 3.00 7.007.38 2.00 8.007.73 1.00 9.008.04 0.50 9.50SDS-PAGE蛋白胶配置下层：SDS-PAGE分离胶 12%胶 5mL蒸馏水 1.6mL30%丙稀酰胺混合溶液 (29:1) 2mL1M Tris-Cl (pH 8.8) 1.3mL10%SDS 0.05mL10%过硫酸铵 0.05mLTEMED 0.002mL上层：SDS-PAGE浓缩胶 5%胶 2mL蒸馏水 1.4mL30%丙稀酰胺混合溶液 (29:1) 0.33mL1M Tris-Cl (pH 6.8) 0.26mL10%SDS 0.02mL10%过硫酸铵 0.02mLTEMED 0.002mLSOC培养基 1. 组份浓度： 2%（W/V） Tryptone 0.5%（W/V） Yeast Extract 0.05%（W/V） NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgCl2 20 mM 葡萄糖 2. 配 制 量： 100 ml 3. 配制方法： . 配制1 M葡萄糖溶液。 称量18 g的葡萄糖溶于90 ml去离子水中,充分溶解后定容至100 ml，用0.22 m滤膜过滤除菌。 . 向100 ml SOB培养基中加入除菌的1 M葡萄糖溶液2 ml，均匀混合。 . 4保存。 bbroth 1. 组份浓度： 2%（W/V） Tryptone 0.5%（W/V） Yeast Extract 0.5%（W/V） MgSO 7H2O 2. 配 制 量： 1 L 3. 配制方法： . 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 20 g Yeast Extract 5 g MgSO47H2O 5 g . 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 . 滴加1 N KOH，调节pH值至7.5。 . 加去离子水将培养基定容至1 L。 高温高压灭菌后，4保存。 LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 1. 组份浓度： 1%（W/V） Tryptone 0.5%（W/V） Yeast Extract 1%（W/V） NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin 0.024 mg/ml IPTG 0.04 mg/ml X-Gal 1.5%（W/V） Agar 2. 配 制 量： 1 L 3. 配制方法： . 称取下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g . 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 . 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 . 加去离子水将培养基定容至1 L后，加