流感的相关知识及实验室检测PPT课件.ppt

流感的相关知识及实验室检测,陈宪楷,2018.5.24,C,流感病毒,流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。人类的流行性感冒病毒(influenza,简称流感），属正粘液病毒科，分A（甲）、B（乙）、C（丙）三型，呈球形或丝状，是一种造成人类及动物患流行性感冒的负链RNA病毒。,流感病毒的基因组,RNA与NP构成RNP,基因组由8个短的单链RNA构成，包含11个基因，编码11个蛋白：血凝素(HA),神经氨酸酶(NA),核蛋白(NP),M1,M2，NS1,NS2（NEP：核输出蛋白），PA,PB1（聚合酶基团1),PB1-F2和PB2。,NP（核蛋白）和MP基质蛋白(M1)抗原性稳定，具有型特异性，将流感分A（甲）、B（乙）、c（丙）三型,甲乙型流感主要亚型,血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原结构极易发生变异，有亚型的特异性，是甲型流感病毒分亚型的主要依据,甲型流感命名通常会遵照HN的规则命名，H代表血凝素，可分为16个亚型；N代表神经氨酸酶，有9个亚型。会季节性在人群中出现的亚型通常为H1，2和3，以及N1和2,根据乙型流感病毒表面血凝素蛋白的抗原特征主要分为B型(Yamagata)和B型(Victoria).,根据国家流感中心报道，今年监测到的流感病毒以甲型H1N1亚型和乙型（Yamagata）系为主，并且总体上甲型H1N1亚型的比例超过B（Yamagata）系。甲型H3N2亚型和B（Victoria）系以低水平共同流行。,我国流感流行现状及亚型,不仅在中国，在欧洲一些国家和地区，今冬流行的流感病毒优势毒株是B型（Yamagata），这一毒株沉寂已久，普通人群对它的免疫基本缺失,图.中国流感病毒检出率及其亚型分布,流感的季节性流行,长江以南,长江以北,流感病毒在我国的活动规律南北存在明显的差异。,高峰期,1.流感患者2.隐性感染者,1.近距离飞沫传播2.接触传播,流感的流行病学,传染源,传播途径,病毒变异快,65岁以上老年人、婴幼儿、慢性病患者,反复感染,并发症,感染流感的一般临床表现：,流感一般急性起病，主要表现为发热(可达39-40)，伴畏寒、寒战、头痛、肌肉关节酸痛、极度乏力、食欲减退等全身症状，常有咽痛、咳嗽，可有鼻塞、流涕，也可有呕吐、腹泻等症状。,一般来讲，流感全身症状比普通感冒重。流感为自限性疾病，发病3-4天后体温逐渐消退，全身症状好转。重症病例可导致慢性基础病加重，也可出现病毒性肺炎、心脏和神经系统损伤等并发症。,流感病毒的实验室检测,采集标本类型：常规特殊咽拭子鼻咽/呼吸道吸取物鼻拭子鼻洗液、含漱液血清呼吸道灌洗液,实验前处理,流感标本采集采集时间：病人发病的头3天内采集，最好是24h内,咽拭子采集,咽拭子用灭菌棉签（最好用聚丙烯纤维头的塑料杆拭子）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入含3-4ml采集液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。注意：采样前1h内不要进食和饮水，采样液中严禁加入抗生素,标本的处理和保存,标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液有：PH7.4-7.6的Hanks液或MEM,标本应在4保存24小时内送至实验室，实验室对收到的标本最好2448小时内进行检测或接种。,如不能在48h内检测或接种，标本应置于-70保存,实验室生物安全要求,季节性流感病毒分离鉴定在生物安全级实验室进行。,用灭活的抗原进行血清学检测时可以在生物安全级实验室进行,流感病毒分离鉴定及其它检测过程中所有能够产生感染性气溶胶的过程必须在生物安全级实验室的生物安全柜里操作。,常见的流感病毒实验室检测方法,季节性流感检测流程,临床标本采集,接种MDCK细胞,接种鸡胚,红细胞凝集抑制试验，鉴定病毒,红细胞凝集试验,流感病毒核酸检测阳性,PCR鉴定,流感病毒亚型的鉴定,流感病毒亚型的鉴定流程,红细胞凝集试验,4个凝集单位配制“回滴”,红细胞凝集抑制试验,判定流感病毒型别,红细胞凝集试验（HA）,MDCK细胞或鸡胚收获的标本分离物首先用鸡、豚鼠或人红细胞进行红细胞凝集试验（HA），确定病毒滴度,原理：流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白（HA）含有能结合并识别红细胞表面含唾液酸的糖蛋白或脂蛋白结构，许多哺乳动物和禽的红细胞表面均含有这两种成分。因此流感病毒能与其结合并识别，产生凝集现象。当血清中有特异性抗体与病毒血凝素结合后，可以抑制凝集现象出现,A,H,B,C,D,E,F,G,100ul病毒液,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,50ul,稀释完病毒液后加入50ul红细胞悬液,50ulPBS,稀释病毒加入配制好的红细胞悬液充分混匀，置室温孵育30-60分钟观察记录结果,操作简图,病毒原液,1:2,1:128,HA:32,HA128,HA:4,红细胞凝集试验（HA）结果判读,HA滴度8，进行红细胞凝集抑制（HI）试验；,若传12代后，HA滴度仍8者，可应用核酸检测方法进行鉴定,HA滴度60岁、体温在38.038.9之间，流感病毒阳性检出率高于其他组；,参考文献李珺，刘亚楠，田国保等.临床实验室流感病毒检测的相关影响因素分析J.国际病毒学杂志,2017，24（5）：331-335ISTIC张杰，武晶晶等.不同温度和不同放置