（水产养殖专业论文）中华倒刺鲃消化系统发育的研究.pdf

摘要 中华倒刺钯消化系统发育的研究 水产养殖专业硕士研究生高元或 指导教师郑永华副教授 摘要 中华倒剌鳃( s p i n i b a r b u s s i n e n s i s ) 是长江水系的重要经济鱼类。为了探讨其系统发育的 规律，并为中华倒刺纪苗种的培育提供一定的理论基础，本试验在重庆市北碚区科委重点科 技项目“中华倒刺鳃养殖技术试验研究和苗种基地建设”的资助下，以中华倒刺喜巴仔稚鱼为 研究对象，从以下三个方面对中华倒刺鳃仔稚鱼消化系统的发育等进行了试验研究，试验一 采用组织学方法研究了中华倒刺鳃消化系统的胚后发育；试验二利用生物化学的方法研究了 不同饵料条件下中华倒刺钯仔稚鱼消化酶活力的变化情况；试验三研究了饥饿和补偿生长对 中华倒刺钯仔稚鱼消化酶活力的影响研究结果如下： 1 不同饵料条件下中华倒刺鲍消化系统胚后发育的比较 利用组织切片技术对不同饵料条件下中华倒刺售巴鱼消化系统的胚后发育特点作了系统的 观察研究结果表明，中华倒刺钯仔鱼的消化道发育过程中出现两个重要的形态分化时期， 第一时期为出膜后5 天至外源摄食之前，消化道由初孵仔鱼的真管状分化为食道、肠，并且 肠道开始分化为前肠、中肠、后肠，各消化系统的分化基本完成，但其发育仍不完善；第二 时期是在1 8 2 4 日龄，其食道结构与成鱼基本类似，前、中，后肠的发育也已基本完成，至 此，中华倒刺鳃消化系统的结构已接近成体。活饵组、饲科组、饥饿组的中华倒剌毒巴仔鱼消 化系统的发育不尽相同，饥饿组仔鱼在1 6 日龄时死亡，1 6 日龄的肠道、肝脏、胰脏生长情 况同9 日龄卵黄囊完全吸收后的生长情况相近，即仔鱼进入外源营养时期后。没有外部营养 的摄入，其消化系统的生长基本陷入停滞；而活饵组仔鱼的消化系统发育状况好于饲料组， 除了肠腺细胞更为强壮、褶皱更多以外，肝、胰组织更为致密，颜色更深。 2 不同饵料条件下中华倒刺喜巴消化酶活力的变化 在本试验中测定了中华倒刺鳃仔稚鱼在分别喂养活饵、淡水微囊饲料以及饥饿的条件下， 各个试验组鱼的生长和消化酶活力。在中华倒刺壹巴仔稚鱼1 、2 、3 、4 、5 、7 、9 、1 2 ，1 5 ，1 8 、 2 2 、2 6 、3 0 、3 5 、4 0 、4 5 、5 0 日龄取样作体长、体重、胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白含 量、a k p 的测定试验研究结果如下： 西南大学硕士学位论文 舞皇皇量皇圈i 量毫日量置皇量置日曹皇| 曼舅舅| 一 在整个试验期间，中华倒刺鳃鱼活饵组的特定生长率为2 7 0 5 。饲料组的特定生长率为 3 4 5 8 。胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、a k i 均在第一天就检测到活性。各种酶活力在仔鱼出 膜后随着生长而发生变化 1 日龄到1 2 日龄，三个试验组胰蛋白酶活力处于剧烈变化期，在4 日龄时达到峰值，然 后下降至极小值。7 日龄时，饲料组和饥饿组的胰蛋白酶活力再次上升到最大值，活饵组则是 在9 日龄达到了极大值，其中饥饿组试验鱼在1 6 日龄死亡，饲料组保持一个比较平稳的变化 趋势，而活饵组则在保持一段时间的平稳变化后。再次进入剧烈变化期饲料组同活饵组的 变化趋势类似，活饵组胰蛋白酶活力在交化幅度上显著大于饲料组( p o 0 5 ) ， 1 8 日龄后两组之间一直存在显著性差异，在加日龄时存在极显著性差异( p o 岱) ，与饥饿组比较差异显著( p o 舾) ，其他生长时间都具有显著性差异( p o ) 。 3 饥饿和补偿生长对中华倒刺鲍酶活力的影响 中华倒刺鲍仔鱼的饥饿和补偿生长试验分六组进行，分别为正常生长( 计为饥饿组) 以及分别饥饿1 d 、3 d ，5 d 、7 d 、9 d 组，待各组饥饿期结束后开始投喂饲料即恢复生长试验 过程中分别测定中华倒刺鳃仔鱼的生长情况和消化酶活力变化情况其o d 、l d 、3 d 、5 d 7 d 、 9 d 组的特定生长率分别为1 1 舳。1 1 5 2 。1 0 6 7 ，加5 4 ，9 3 8 ，8 5 1 ，这表明随着 饥饿时间的延长，仔鱼生长情况整体下降 饥饿不同时间的各个试验组之间在饥饿结束分别恢复生长3 0 d 。随着饥饿时问的增加和 恢复生长时间的延长。胰蛋白酶活力和淀粉酶活力都呈现总体下降的趋势，脂肪酶活力呈现 先下降，后上升，再下降的变化规律；a k p 活性的变化趋势差别较大。饥饿5 d 、7 d 组的试验 鱼同饥饿3 d 组之间不具有显著性差异。而饥饿5 d 组的仔鱼在整个恢复生长的过程中，其体 重达到或接近正常生长组在相同时闻内的增重量，这说明饥饿5 d 后恢复投喂中华倒刺钯的 仔鱼可出现完全补偿生长的现象 关键词，中华倒刺鳃消化系统组织学消化酶补偿生长 h s t u d y o nt h ed e v e l o p m e n to f d i g e s t i v es y s t e m o f s p i n i b a r b u ss i n e n s i s c a n d i d a t e ：g a oy u a n y u s u p e r v i s o r ：a s s o p r o f z h e n gy o n g h u a a b s t r a c t s p i n i b a r b u ss i n e n s i si so n ek i n do ff i s hw i t i li m p o r m e n tv a l u ei nt h ey a n g z i r i v e r i no r d e rt op r o b ei n t ot h e 。d e v e l o p m e n tl a wo ft h ed i g e s t i v es y s t e m ，t h r e e e x p e r i m e n t sw e r ed e s i g n e d i nf i r s te x p e r i m e n t , t h ed e v e l o p m e n to fd i g e s t i v es y s t e m w a si n v e s t i g a t e d h i s t o l o g i c a l l y ；i ns e c o n de x p e r i m e n tt w o ，g r o w t h ，t h ev a r i e t yo f d i g e s t i v ee n z y m e sa c t i v i t i e si ns p i n i b a r b u ss i n e n s i sj u v e n i l ew a si n v e s t i g a t e d ；i nt h i r d e x p e r i m e n t ，t h ev a r i e t yo fd i g e s t i v ee n z y m e sa n dg r o w t hi ns p i n i b a r b u ss i n e n s i s i n f l u e n c e db yh u n g r yw a si n v e s t i g a t e d t h er e s u l t se x t r a c t e df r o mt h ee x p e r i m e n tl i s t a sf o l l o w s ： 1 t h ed e v e l o p m e n to fd i g e s t i v es y s t e mi ns p i n i b a r b u ss i n e n s i sl a r v a e t h ed e v e l o p m e n to fd i g e s t i v es y s t e mw a si n v e s t i g a t e dh i s t o l o g i c a l l y t h er e s u l t s o f e x p e r i m e n t a sf o l l o w s ：t w o m a j o rp e r i o d s o fd i f f e r e n t i a t i o nc o u l db e d i s t i n g u i s h e d d u r i n gt h ef i r s tp e r i o d ，w i t h i nf i v ed a y so fh a t c h i n ga n dp r i o rt o e x o g e n o u sf e e d i n g t h ed i g e s t i v et r a c t e x h i b i t e de x t e n s i v ed i f f e r e n t i a t i o nf r o ma s t r a i g h tt u b et oal o o p e da l i m e n t a r yc a n a lw i t hc l e a r l yd i s t i n g u i s h a b l eo e s o p h a g u sa n d g u t t h es e c o n dp e r i o dc o r r e s p o n d e dt ot h ef o r m a t i o no ft h eg a s t r i cg l a n d sa r o u n d 1 8 2 4d a y s s o m ep a n c r e a t i ct i s s u e se v e ne x t e n di n t ot h el i v e r 2 t h ee f f e c to fd i f f e r e n td i e t so ng r o w t ha n dd i g e s t i v ee n z y m ea c t i v i t i e si n s p i n i b a r b u ss i n e n s i sl a r v a e g r o w t h , t h ea c t i v i t i e so fs o m ed i g e s t i v ee n z y m e sw a ss t u d i e di ns p i n i b a r b u s s i n e n s i sl a r v a e d u r i n g t h e f l a yd a y s o f l i f e s a m p l e s w e r et a k e n a t 1 , 2 ，3 ，4 ，5 ，7 ，9 ，1 2 ，1 5 ，1 8 ，2 2 ，2 6 ，3 0 ，3 5 ，4 0 ，4 5 ，5 0 d a h i no r d e rt om o n i t o rg r o w t h ，ap o o lo f 2 0l a r v a ew a ss a m p l e di nt r i p l i c a t e f o rg l l z y m ed e t e r m i n a t i o n s a te a c hs a m p l i n gt i m e p o o l e ds a m p l eo fb e f i t t i n g l a r v a ew e r ec o l l e c t e di nt r i p l i c a t e o l d e rl a r v a ew e r e d i s s e c t e di no r d e rt oo b t a i nt h ea b d o m e ns e g m e n t t h es u p e m a t a n tw a ss u b s e q u e n t l y u s e df o ra n a l y s e so fe n z y m ea c t i v i t ya n dp r o t e i nc o n t e n t t h er e s u l t sa sf o l l o w s ：t h e s g rw a s2 7 0 5 ( d i e tg r o u p ) ，3 4 5 8 ( m i c r o p a r t i c u l a t eg r o u p ) i n1 d a y , t h ea c t i v i t i e s o f p r o t e a s e ，a m y l a s e ，l i p a s ea n da k p h a dd e t e c t e d t h ea c t i v i t i e so f d i g e s t i v ee n z y m e a e x h i b i t e dap a n e mc h a r a c t e r i s t i co fd e o e l o p i n ga n i m a l s ：f r o ml d a yt o4d a y s ，t h e s t r o n gi n c r e a s e i np r o t e a s ea c t i v i t i e st ot h em a x i m u m ，t h e n , t h ep r o t e a s es p e c i f i c a c t i v i t i e sp r o g r e s s i v e l yd e c r e a s e d , t h es p e c i f i ca c t i v i t i e sw e r em i n i m u mp o i n t ，t h e r ea r e m a r k e dd i f f e r e n c e so nt h ep r o t e a s ea c t i v i t yo f3 9 r o u p s ，i nf i n a lp e o r i dt h ep r o t e a s e a c t i v i t yo fd i e tg r o u pi sh i g h e rt h a nm i c r o p a r t i c u l a t eg r o u p t h ea c t i v i t yo fa m y l a s e h a v ea ni n c r e a s ei na l lg r o u p s ，a n dm a r k e dd i f f e r e n c e sa r er e m a i nt h es a m e ，t h es t r o n g m a r k e dd i f f e r e n c e si na m y l a s ea c t i v i t i e se x h i b i t e di n l 5 d a h t h e nk e e pt h i si r e n di n f i n a lp e o r i d t h el a p i s ea c t i v i t yc h a n g e si na l le x p e r i m e n ta c u t e l ya n dr i s e sb yt u r n s ，i n a l lg r o u p s ，e x t r e m em a r k e dd i f f e r e n c e sa r ee x h i b i t e di nw h o l eg r o u p s f r o ml d a yt o 1 5 d a y s ，a l lg r o u p se x h i b i t e ds i m i l a rt r e n d ，t h ea c t i v i t i e so f a k p b e t w e e nd i e tg r o u pa n d m i c r o p a r t i c u l a t eg r o u ph a v ea s a m eo r d e r l i n e s si na l le x p e r i m e n t 3 t h ee f f e c to fd i f f e r e n th u n g r yt i m eo ug r o w t ha n dd i g e s t i v ee n z y m ea c t i v i t i e si n s p i n i b a r b u ss i n e n s i sj u v e n i l e i nt h ep r e s e n te x p e r i m e n t , t h es p i n i b a r b u ss i n e n s i sj u v e n i l ew e r ed i v i d e di n t os i x g r o u p s ：t h ef i r s tg r o u pw a sh u n g r yf o ro d a y ( n oh u n g r yg r o u p ) ，t h es e c o n dg r o u pw a s h u n g r yf o rl d a y , t h e nh u n g r yf o r3 d a y s ，5 d a y s ，7 d a y s ，9 d a y se a c h s a m p l e sw e r et a k e na t 0 ，1 ，1 5 ，3 0 d a h i no r d e rt om o n i t o rg r o w t hi nt h i st r i a l ，ag r o u po f 2 0l a r v a ew a ss a m p l e di n b e f i t t i n gt r i p l i c a t e f o re n z y m ed e t e r m i n a t i o n s ，a te a c hs a m p l i n gt i m ep o o l e ds a m p l e o f j u v e n i l e w e r ec o l l e c t e di nt r i p l i c a t e t h er e s u l t so f e x p e r i m e n t 镐f o l l o w s ：t h es g r o f s p i n i b a r b u ss i n e n s i s j u v e n i l e w a s1 1 8 0 ( 0 d ) ，1 1 5 2 ( 1 d ) ，1 0 6 7 ( 3 d ) ，1 0 5 4 ( 5 d ) ，9 3 8 ( 7 d ) ，8 5 1 ( 9 d ) 。s i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei ns g rw a so b s e r v e d a m o n gt h ee x p e r i m e n tg r o u p s ( p 中华倒剌鳃，华鲮；鱼的食性不同，摄食能力不同。蛋白酶活性也不同，起淀粉酶的活性 顺序为：中华倒刺鳃 华鲮 黄颡鱼；消化酶在肠道分布，不同鱼表现不同特点i 1 但有关中 华倒蒯鲤消化系统胚后发育和消化酶方面的研究还未见报道。 9 第2 章引言 j i 曼曼曼曼鼍董皇鼍璺置曼曼曼量e 量鲁量量_ 第2 章引言 中华倒刺鳃( s p i n i b a t b u ss i m s i 潞称岩鲫，属鲤形且、鲤科、鳃亚科、四须喜巴属。它分布 于长江中下游及其支流中，在湘、资、沅、澧四水和洞庭湖均有分布。尤以沅水上游的沅陵、 泸溪境内较多，是重要经济鱼类之一中华倒刺壹巴鱼肉质肥美，细嫩多脂，被人们列为为上 佳食用鱼，因其具有个体大、生长快、食性杂饲料来源广等特点，使它已成为一种优良的 池塘、网箱养殖推广新品种。经济效益较高 近年来，许多学者也对该鱼进行了各方面的研究，包括生物学、繁殖生物学、养殖技术 等、对中华倒刺鳃的性腺发育、毒理研究、肌肉营养成分、耗氧率和窒息点等进行了研究， 但对中华倒刺鳃的早期生活史的研究则较少随着人工规模化地养殖中华倒刺纪，养殖规模 的不断扩大，养殖产量也随之增加，对中华倒刺鳃鱼苗的需求日渐增加，苗种的培育成另一 个相当重要的环节，而且鱼类早期生长的细微差别对其存活以及整个生活史阶段的生长，有 着重要的影响这就需要对中华倒刺鳃的早期生活史进行详细地研究，为菌种的培育提供完 善的理论基础，更好地为中华倒剌鳃地规模化养殖服务 本试验在重庆市北碚区科委重点科技项目。中华倒刺鳃养殖技术试验研究和苗种基 地建设”的资助下，以中华倒刺钯仔稚鱼为研究对象，主要进行了中华倒刺夸巴消化系统的胚 后发育、不同饵料条件下中华倒刺钯消化酶的变化以及饥饿和补偿生长对中华倒刺纪消化酶 活力的影响等方面的研究以期为中华倒刺钯的苗种培育提供一定的理论基础 1 1 第3 章中华倒刺童巴消化系统胚后发育研究 第3 章不同饵料条件下中华倒刺鳃消化系统胚后发育的比较 3 1 材料和方法 3 1 1 试验鱼 2 0 0 6 年6 月2 0 日于重庆市北碚区静观养殖场获得中华倒刺鳃初孵仔鱼仔鱼饲养于容积 1 7 0 l 的水族缸内，每个水族缸2 0 0 0 尾仔鱼。饲喂期间水质参数如下：温度2 9 如5 ；溶氧 5 1 0 - 1 0 3 1 m g l = 日光灯光照。仔鱼培育分为三组：活饵组、饲料组、饥饿组：其中活饵组投 喂卤虫( 4 1 6 日龄) 和水蚯蚓( 1 7 5 0 日龄) ，饲料组投喂淡水鱼用微囊饲料，以饥饿组为 对照组 3 1 2 样品处理 样品用b o u i n s 液固定后，用7 0 酒精保存样本常规脱水，二甲苯透明，石蜡包埋， 进行横向，纵向连续切片按日龄大小逐日切片，切片厚度8 u m ，切片h - e 染色，中性树胶 封片，o l y m p u s 显微镜观察摄影 3 2 结果和分析 3 2 1 卵黄囊 中华倒刺鳃1 且龄时，卵黄囊很大，位于肠道腹面，大小几乎占整个鱼体的三分之二左 右，形状为椭圆形。4 日龄时，卵黄囊呈不规则球形，位于消化道下方，大小约为鱼体的二分 之一左右，仔鱼处于内源性营养阶段 5 日龄开始，试验鱼分为三个不同的试验组5b 龄时，仔鱼卵黄囊形状并无太差别，卵 黄囊位于消化道侧腹面呈扁形状，纵贯整个鱼体。消化道被挤到一侧，此时仔鱼处于混合营 养阶段。7 日龄时，活饵组和饲料组仔鱼卵黄囊已彻底消失，而饥饿组卵黄囊被吸收仅残存卵 黄颗粒，分布于中肠腹面。9 日龄时，饥饿组仔鱼卵黄囊颗粒也被完全吸收，卵黄囊彻底消失， 鱼体进入外源性营养阶段。 3 2 2 消化道 3 2 2 1 口 在显微镜下观察，中华倒刺鳃仔鱼1 日龄时，未见口裂形成。3 日龄时，口裂形成，但 不能上下闭合4 日龄，口已经能够上下开启，仔鱼开始摄食，而4 日龄之前由于并未开始摄 食，因此活饵组、饲料组、饥饿组之间此时的口发育未出现明显的区别 3 2 2 2 食道 1 3 西南大学硕士学位论文 中华倒刺童巴仔鱼1 日龄时其消化道为直管状，食道、肠还无明显分化细胞捧列紧 密，无分化。2 曰龄时，食道、肠开始分亿3 日龄仔鱼的食道的粘膜细胞开始大量形成，并 捧列规则，食道褶皱开始形成。4 日龄时，食道的浆膜形成。食道结构已经很清晰，明显可见 粘膜、牯膜下层、肌层和浆膜，同时仔鱼开始摄食。3 1 0 日龄，仔鱼食道的褶皱数量逐渐增 多，褶皱高度逐渐增加。1 4 日龄开始，饥饿组食道褶皱不明显，饲料组食道褶皱数量达到1 4 个，活饵组食道裙皱达到1 5 个，并且活饵组食道褶皱高度超过饲料组。其褶皱细胞更强壮， 排列更紧密更规则( 图1 ，2 ，3 ) 中华倒刺鳃的食道在4 日龄时细胞的分化基本完成。随着 日龄的增加其结构逐渐完善。饥饿组试验鱼其食道发育自卵黄囊消失后基本处于停滞状态， 未见明显的褶皱出现；活饵组食道结构发育迅速，褶皱数量和高度的增加明显快过饲料组 到2 8 日龄时食道的结构接近成鱼，食道的发育基本完成。 3 2 2 3 肠 中华倒刺鳃仔鱼1 日龄时。具有原始的消化道，里直管状，无盘曲，位于鱼体腹面，紧 靠卵黄囊背部，前端伸抵耳囊后方，后端沿卵黄囊后缘下弯。形成肛突，消化道由单层未分 化的细胞组成，细胞具单一的圆形细胞核，核仁位于细胞中央，其整个消化道的直径、壁厚、 粘膜褶皱数、褶皱高度基本一直，没有明显的前后肠划分，但在后肠可见其肠粘膜基本无褶 皱。4 日龄时，肠腔迅速膨大，已基本分化出粘膜、粘膜下层、肌层核浆膜四层结构，粘膜层 发达，粘膜上皮为复层柱状上皮细胞，肠具雏形褶皱，肌层极薄，而且只看到一层环行平滑 肌，未见纵行平滑肌5 日龄时，可以较清楚看到前、中、后肠的分化，前肠膨大。后肠细直 9 日龄时，活饵组仔鱼的肠道壁变厚，褶皱数量达到1 0 个，其高度和褶皱细胞的排列紧密度 都超过饲料组仔鱼，饲料组仔鱼只见不明显的5 个褶皱，而饥饿组仔鱼则没有肠道褶皱的出 现，肠壁细胞捧列也很稀疏( 图4 ，5 ，6 ) 。1 8 日龄的仔鱼其肠管进一步膨大，肠前端明显比 后端租，肠上皮细胞出现大量空泡结构和杯状细胞，同时在中肠部分也能观察到空泡结构 随着日龄的增加，到3 0 日龄时，粘膜与粘膜下层肌层更加发达，粘膜褶皱数有所增加环行 平滑肌厚度增加，活饵组肠道褶皱更加发达，空泡结构远比饲料组为多( 图7 ，8 ) 中华倒刺鳃鱼4 日龄时，肠细胞基本分化，结构初步形成。5 日龄时，肠分化为前、中、 后肠随着日龄的增加，结构和功能进一步完善，日龄时。肠的发育基本完成 3 2 3 消化腺 3 2 3 1 肝脏 中华倒刺纪仔鱼2 日龄时，在其消化道左侧出现一颜色较深的肝细胞团。细胞之间界限 很不明显，细胞不规则5 日龄时。细胞团体积增大，为单叶状，细胞团开始出现一些大的不 规则腔隙，肝细胞不规则，核大为圆形，核仁颜色较深7 日龄时，肝脏体积进一步扩大逐 渐填补卵黄被吸收后产生的空间，并分为左右两叶。包裹于肠道外边。9 日龄时，可见肝脏位 1 4 第3 章中华倒刺鲤消化系统胚后发育研究 于肝脏位于肠道的左侧，其内部出现一些空腔，为大的肝血窦，部分学都空腔彼此相同。肝 细胞比之前数量增多，单个细胞体积减小，捧列紧密，颜色变得更深。1 6 日龄时，活饵组试 验鱼肝组织最为致密，且大部分肝血窦都被肝组织所填满，而饲料组肝细胞之间具有不少肝 血窦，其细胞颜色比活饵组浅，饥饿组肝细胞则未见有致密生长的趋势排列较为稀疏，颜 色更浅( 图9 ，1 0 ，1 1 ) 2 6 日龄时t 肝脏内的血窦空腔因肝细胞的生长而被填满。肝细胞捧 列更为紧密。整个肝组织致密，肝细胞数量多，体积小，核仁明显。随着日龄的增加，肝组 织的发育愈加完善，4 4 日龄时，肝组织已经弥漫在整个体腔前部，包裹住肠道前端，活饵组 试验鱼肝组织的发育比饲料组更为强壮( 图1 4 1 7 ) 。 3 2 3 2 胰脏 1 目龄到4 日龄，胰腺细胞不明显出膜后5 日龄。胰腺细胞摊列成团状。细胞扁圆形，核 大而圆，居中，胞质被染成蓝紫色，胰岛细胞着色浅，细胞捧列疏松。7 日龄时，腺细胞主要 分布于体腔偏右侧的系膜中。1 2 1 3 龄时，胰腺细胞进一步发育，胰腺体积明显增加，位于消 化道和肝脏之间。1 8 日龄时，胰腺细胞捧列紧密，腺细胞团问有结缔组织分布，活饵组胰腺 组织比饲料组饲料组更致密，血管更为丰富，颜色更深，( 图1 8 ，1 9 ) 。2 0 日龄后，胰腺组织 基本完善，在肝脏、胰脏交接处有大型胰岛，随着日龄的增加，胰腺细胞颜色更深，细胞核 占细胞比例更大，活饵组的试验鱼其胰腺细胞体积增长比饲料组快，且排列更为紧密( 图2 0 2 3 ) 。 3 3 讨论 3 3 1 消化系统发育组织学结构特点 中华倒刺鳃仔鱼从刚出膜到5 日龄时，卵黄囊体积较大，到7 e l 龄时，仔鱼卵黄囊卵黄囊 被均匀吸收，逐渐缩小成扁椭圆形，即中华倒刺刍巴消化系统发生第一次重要形态变化。此段 时期，清化道组织结构从1 日龄未分化的原始状态，开始分化为食道、肠，消化腺包括肝，胰 脏也开始相继出现，仔鱼由完全内源性营养阶段向内源与外源混合营养阶段转变随着日龄 增加。各消化器官的结构初步形成。4 日龄时，仔鱼开口摄食，5 日龄时肠管开始分化为前肠、 中肠、后肠，肝脏、胰脏进一步发育。在该阶段消化系统的分化基本完成，但其发育仍不完 善 9 e l 龄后，中华倒刺鳃仔鱼卵黄囊被完全吸收，进入完全外源性营养阶段。该阶段各消化 器官的功能逐步完善，前肠膨大，粘膜褶皱增多，中肠长而盘曲，后肠细长，此时肠道是主 要的营养吸收场所。到2 4 时，中华倒刺鳃消化系统已完成第二次重要形态变化，食道结构与 成鱼基本类似，前、中、后肠的发育也已基本完成。至此，中华倒刺鳃的消化系统发育基本 完成，其结构已接近成体。 西南大学硕士学位论文 活饵组、饲料组、饥饿组三个不同试验组，其消化系统发育的状况不尽相同。饥饿在王6 日龄时死亡，至1 6 e l 龄时。其肠道、肝脏、胰脏生长情况同9 日龄卵黄囊完全吸收后的生长情 况相近，叩仔鱼进入外源营养时期后，没有外部营养的摄入，其消化系统的生长基本陷入停 滞而活饵组仔鱼的消化系统发育状况好于饲料组，除了肠腺细胞更为强壮、褶皱更多以外。 肝，胰组织更为致密，颜色更深 3 3 2 肝脏、胰脏的发生 本试验通过组织切片观察，在消化道左侧，紧贴卵黄囊有染色较深的肝细胞团，故中华 倒刺鳃的肝脏发生于消化道的腹部左侧。鱼类胰腺的分布根据尾崎久雄的划分可分尾三种类 型。即紧凑型( c o m p a c t ) ，呈一紧凑袄；弥散型( d i 伍雠) ，以叶状分开潜入体腔各处；散布 型( d i s p e l s e ) ，分散在体腔全表面。本试验的观察结果可以看出，胰脏发生在肝脏的右侧、消 化道的背侧。中华倒刺鳃的胰腺属于弥散型。出膜后4 日龄的仔鱼具备完整的消化腺，胰脏刚 开始时集中分布在肝之问，为一完整独立的器官，随着仔鱼的生长发育，从肝脏下方羽肠之 间多处分布。几乎充塞于整个消化道的空隙 3 3 3 肠的功能 中华倒剩壹巴初孵仔鱼其消化道为一原始的直管，由单层未分化的细胞组成。5 日龄时。 肠管出现明显的分化，肠管开始分化为前肠、中肠、后肠，前肠膨大，中肠肠腺细胞开始发 育，肠褶皱开始出现，随着日龄的增加，褶皱数量增加，高度增加，肠腺细胞长度增加，其 细胞核颜色变深，肠内吸收面积显著增大，有利于更好地吸收营养物质。 1 6 第4 章不同饵料条件下中华倒刺钯消化酶活力的研究 第4 章不同饵料条件下中华倒刺鲤消化酶活力的研究 4 1 材料与方法 4 1 1 试验方法 2 0 0 6 年6 月2 0 日于重庆市北碚区静观镇鱼种场获得中华倒刺鳃初孵仔鱼。仔鱼饲养于容 积1 7 0 l 的水族缸内。每个水族缸2 千尾仔鱼。饲喂期间水质参数如下：温度2 9 _ * 0 5 c ；溶氧 5 1 0 + 0 3 1 m g l ；日光灯光照。仔鱼培育分为三组：活饵组、饲料组、饥饿组；其中活饵组投 喂卤虫( 4 1 6 日龄) 和水蚯蚓( 1 7 5 0 日龄) ；饲料组投喂淡水鱼用微囊饲料；以饥饿组为 对照组 4 1 2 试验鱼饲养 试验用淡水鱼用微囊饲料购自山东升索渔用饲料研究中心。水蚯蚓购自市场，饲喂前用食 盐溶液消毒，剪碎后投喂各组仔鱼每天投喂3 次。时间分别为上午8 点，中午2 点，晚上8 点，每次饲喂后1 个小时将残余饵料清除干净 4 1 3 样品处理 试验所取样品为第1 、2 、3 ，4 、5 、7 、9 、1 2 、1 5 、1 8 、2 2 、2 6 、3 0 、3 5 、4 0 、4 5 、5 0 日 龄的仔稚鱼，均在清晨饲喂前取样所取仔稚鱼置于冰盘上致死，放入取样瓶内，放入冰箱 内，立即进行检测。 4 1 4 酶液制备 将所取大部分样品加入1 0 倍体积( w v ) 预冷重蒸水，在玻璃匀浆器中匀浆。匀浆后用离 心机( 6 0 0 0 r r a i n ) 离心1 5 r a i n ，分别取上清液0 2 m l 、l m l 、0 5 m l 、l m l 作胰蛋白酶、脂肪酶、 淀粉酶活力以及蛋白质含量的测定另外取一小部分样品加入1 0 0 倍体积( w n ) 预冷重蒸水 匀浆，离心方法同上，取上清液0 0 3 m l 作碱性磷酸酶测定。 4 1 5 测定方法 4 1 5 1 特定生长率的测定 在仔鱼出膜后第1 、2 、3 、4 、5 、7 、9 、1 2 、1 5 、1 8 、2 2 、2 6 、3 0 、3 5 、柏、4 5 、5 0 天。 每天取2 0 尾鱼，测定其全长和体重，取平均值特定生长率的计算公式如下： s g r - - - - - 1 0 0 ( 1 n f b w i n m 、j l ，) ，t 式中，l n f b w 仔鱼终末体重，l n w 仔鱼初始体重，t 耐问 1 7 茜南大学硕士学位论文 4 1 5 2 胰蛋白酶活力测定方法 采用甲苯磺酰l 精氨酸甲脂( t a m e ) 为底物测定法 以时问( t ) 为横坐标，光吸收a 为纵坐标作图在直线部分任取一时间问隔t 与相应的 光吸收值变化( a a ) ，按以下公式计算胰蛋白酶的活力单位和比活力 酶活力单位= a a 0 0 0 1 酶比活力= a a x l 0 0 0 e x 0 0 0 1 式中。a a 为1 分钟递增光吸收值；e 为测定时所用的胰蛋白酶量( 唔) ；1 0 0 0 为酶蛋白 的腭数转换程皿g 数时的转换值；0 0 0 1 为光吸收值，每增加0 0 0 1 定义为1 个t a m e 活力单 位的常数。 4 1 5 3 淀粉酶活力测定方法 采用b e n f e l d 法测定淀粉酶活力 淀粉酶活力定义为：一个淀粉酶单位相当于在规定条件下，于2 5 c 和p h 6 9 ，从可溶性淀 粉中释放出l m m l 还原物质( 以麦芽糖计算) 对所需的酶量 淀粉酶活力( u r a g ) = a n o l 麦芽糖侣 式中。3 一反应时间( 分) 4 1 5 a 脂肪酶活力测定方法 采用聚乙烯醇橄榄油法脂肪酶活力单位按下式计算： 脂肪酶活力( u g ) = ( a - b ) - n f t w 式中：k 酶液样品泊耗的0 0 5 n 氢氧化钠标毫升数， & 十照样品消耗的0 0 5 n 氢氧化钠标毫升数， 抖每毫升0 0 5 n 氢氧化钠溶液中所含氢氧化钠的微克分子数( 为5 0 ) ， f 一酶液稀释倍数， 僻测定时所用酶液的克致， - 穆作用时间( 分) 4 1 5 5 蛋白质含量的测定方法 采用考马斯亮蓝法测蛋白质含量。取1 0 r i d 酶液。加入1 0 m l 显色液，混匀；以蒸馏永作 参比。测定各管在波长5 9 5 n m 和波长4 6 5 n m 处吸光度a 值并计算a i - - a i - a 1 ( a 1 为空白管 吸光度值) 于标准曲线上查出对应蛋白浓度。 a i - = a 5 9 5 a 4 6 5 4 1 5 6 碱性磷酸酶的测定方法 1 8 第4 章不同饵料条件下中华倒刺e 消化酶活力的研究 采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测试。 其原理为，碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠，产生游离酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4 - - 氨基 安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物，根据红色深浅可以测定酶活力的高低定 义每克组织蛋白在3 7 0 与基质作用1 5 分钟产生l m g 酚为1 单位。 碱性磷酸酶活性按下式计算： 碱性磷酸酶( u g ) 一( 测定管吸光度标准管吸光度) x 标准管含酚量( 0 0 0 3 9 ) - i - 取样 中的蛋白克数 4 1 5 7 数据处理及分析 试验数据采用m i c r o s o f te x c e l - 和s p s s 统计软件进行分析处理 4 2 结果与分析 4 2 1 生长情况 中华倒刺钯仔稚鱼经过5 0 天的饲嚷后，其生长情况如表4 1 ，4 2 饲料组中华倒刺鳃仔稚鱼从1 日龄到5 0 日龄，体长从6 9 5 m m 增加到1 7 5 8 r a m ，体重从 2 9 l i n g 增加到1 3 8 1 8 r a g ，为初始体重的4 7 5 倍，特定生长率为平均每天2 7 0 5 从图4 1 。4 2 可以看出，中华倒剌喜巴仔鱼从1 日龄到4 日龄体长体重均处于较慢的增长 趋势而在5 日龄过后，体长呈现较快速度的平稳上升的趋势，而体重在5 日龄后，2 6e l 龄 钱都呈现比较平稳的增长趋势，而在2 6 目龄以后，体重迅速增加。 活饵组中华倒刺鳃仔稚鱼从1 日龄到5 0 日龄的生长过程中，体长从6 9 5 m m 增加到了 2 2 2 6 m m ，体重从2 9 1 m g 增加到1 7 5 8 m g ，为初始体重的6 0 4 1 倍，特定生长率为平均每天 3 4 5 8 由图4 1 ，4 2 可知，活饵组仔稚鱼的体长生长情况同饲料组近似，从1 日龄到4 日龄， 体长体重增长都比较缓慢，在5 日龄后，体长呈现较快速度的平稳上升的趋势5 日龄后，体 重较快速度增加。在4 0 日龄到4 5 日龄时，体重有较大幅度的跳跃，饲料组也同样如此，只 是幅度不如活饵组大 饥饿组体长从1 日龄的6 9 5 m m 增加到7 日龄的9 1 m m 后开始回落，即开始出现负增加， 而体重从1 日龄的2 9 1 m g 增加到7 日龄的4 7 m g 后也同样开始回落，出现负增长的趋势，体 重降低至1 58 龄的3 1 m g ，1 6 日龄时饥饿组试验鱼全部死亡 饥饿组体长从1 目龄的6 9 5 m m 增加到7 日龄的9 1 m m 后开始回落，即开始出现负增长， 而体重从1 日龄的2 9 1 m g 增加到7 日龄的4 7 m g 后也同样开始回落，出现负增长的趋势。体 重降低至1 5 日龄的3 1 m g ，1 6 日龄时饥饿组试验鱼全部死亡 西南大学硕士学位论文 表4 1 中华倒刺靶仔稚鱼体长( m o 变化情况 t a b l e4 1 l e n g mo f s p i n i b a r b u ss i n e n s i sl a r v a e 图4 1 中华倒刺鲤仔稚鱼体长变化曲线图 l l i g4 ll e n g t ho t s p i n i b a r b u ss i n e n s i sl a r v a ed u r i n gt h e5 0d a y e x p e r ti m e n t 第4 章不同饵料条件下中华侄i 刺童巴消化酶活力的研究 表4 2 中华倒刺鳃仔稚鱼体重( m g ) 变化情况 t a b l e4 2w e i g h to f s p i n i b a r b u ss i n e n s i sl a r v a e 图4 2中华倒剌鲤仔稚鱼体重变化曲线图 4 2l e n g t ho f s p i n i b a r b u ss i n e n s i sl a r v a ed u r i n gt h e5 0d a y - e x p e r ti m e n t 西南大学硕士学位论文 7 日龄以前，饲料组、活饵组、饥饿组3 个试验对照组的仔鱼的体长和体重没有显著差 异( p o 0 5 ) 说明虽然4 日龄时仔鱼开口摄食，并且3 个试验组的饲喂方式完全不一样，非饥 饿组投喂不同饲料，饥饿并未投喂饲料。但是由于4 至7 日龄时仔鱼仍然处于混合营养阶段， 其生长同消化系统的发育进程有很大关系，其摄食器官和消化器官的机能都不完善。使其消 化和吸收效率较差，因而仔鱼内源性的营养在整个鱼体生长过程中所占的比例就相当大，这 样就在某种程度上抵消了由于外源营养不同所造成的生长差异。在7 日龄以后，随着摄食器 官和消化器官的逐步完善。内源营养的耗尽，不同饲喂条件下仔稚鱼的生长状况拉开了显著 的差距。饥饿组鱼出现了负增长，在1 6 日龄时死亡 田4 3中华倒捌鳃仔稚鱼饲料组体长与体重的关系 f j 9 4 3 r 咄m 呻曲i p k 押啪蛔i g m a n d w e i g h t o f s p i n i b a r b u s s i n e n s i s l a r v 扯 m i c r o p a r t i c u l a t eg r o u p 瞳4 4中华倒捌靶仔稚鱼活饵组体长与体重的关系 f i g4 4r 山u o 啮h i pb e t w nl e n g 恤a n dw e i g h to f s p i n i b a r b u s s i n e n s i sl a r v a ed i e tg r o u p 用w l t b 投合饲料组和活饵组体长与体重的关系，得到中华锄剌鳃仔鱼体长与体重的关 系分别为w - - - - 0 0 0 0 6 l 4 2 “( r 2 = 0 9 6 2 4 ) 和w - - - - - 0 0 0 1 i p “( r 2 = 0 9 7 0 6 ) ，如图4 3 4 4 兹 第4 章不同饵料条件下中华倒刺童巴消化酶活力的研究 4 2 2 胰蛋白酶活性 按照胰蛋白酶活力的检测方法将中华倒刺壹巴仔稚鱼样品进行测定，计算出胰蛋白酶活力， 所得数据如表4 3 表4 3 胰蛋白酶活力测定数据 t a b l e4 3s p e c i f i ca c t