微生物第八章病原学诊断与防治.ppt

第八章病原学诊断与防治,广州医学院病原生物学教研室陈晓湘,诊断病原学检测血清学检测防治特异性防治：人工主动免疫、人工被动免疫非特异性防治：抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物,第一节细菌学诊断,细菌学诊断检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断检测患者血清中特异性抗体,一、病原菌检测,标本采集与送检原则：根据不同疾病和不同病期，采取不同标本。无菌操作，避免杂菌污染。应在使用抗菌药物前采集标本。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。做好标记，详细填写化验单，保证各环节准确无误。,致病菌的检验程序,标本,形态结构检查,分离培养与鉴定,病原菌抗原检测,其它检测,光镜、电镜、染色法,形态特征,培养特征,生化反应,药敏试验,血清学反应,沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹,细菌代谢产物（气相色谱）PCR查细菌核酸噬菌体分型细菌素测定分子生物学技术,动物试验,人体受致病菌感染后，免疫系统产生特异性抗体。抗体的量常随病程而增加，表现为效价（滴度）升高。用已知的细菌或抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为感染性疾病的辅助诊断。由于一般采取病人血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。,二、血清学诊断,第二节病毒学诊断,一、标本的采集与送检早期（前驱期、急性期、发病前12天）根据不同病毒感染，采集不同部位标本病毒室温易失活，应低温保存，快速送检无菌采集与抗生素处理（防止细菌污染）血清学实验检查抗体应采集双份血清,二、病毒的分离培养与鉴定,（一）病毒的分离动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：分离病毒最常用的方法（1）原代细胞来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞，可用于病毒分离和疫苗生产。（3）传代细胞能在体外无限传代的细胞，多由癌细胞或二倍体细胞突变而来，不能用于疫苗生产。,病毒在培养细胞中增殖的指标,细胞的变化细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、溶解、脱落等）细胞融合：形成多巨核细胞包涵体：某些病毒在培养细胞胞浆或核内形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。红细胞吸附干扰现象细胞代谢改变（pH）,正常细胞,病变细胞,（二）病毒的数量与感染性测定,滴定：测定单位体积中感染性病毒的数量蚀斑测定法病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑。蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示。50%组织细胞感染量鸡胚动物或细胞后，引起50%发生死亡或病变的最小量。,（三）新分离病毒的鉴定,核酸类型的测定理化性状的检测形态学观察血清学鉴定基因测序和生物对比,三、病毒感染的血清学诊断,用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病。中和试验补体结合试验血凝抑制试验凝胶免疫扩散试验,四、病毒感染的快速诊断,（一）形态学检查电镜和免疫电镜直接观察病毒普通光镜观察包涵体,（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）常用方法：免疫荧光技术（IF）固相放射免疫测定（SPRIT）酶免疫技术（EIA）等。,（三）检测病毒特异性IgM抗体,检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染。,（四）检测病毒核酸,1核酸杂交斑点杂交（dothybridization）原位杂交（insitehybridization）DNA印迹杂交（Southernblot）RNA印迹杂交（Northernblot）2核酸扩增聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）反转录PCR（ReversetranscrptasePCR，RT-PCR）3基因芯片技术（genechip）,第三节真菌学诊断,标本,直接镜检,深部标本染色标本G染色G+圆形大小不均有芽生孢子,分离培养沙氏培养基菌落观察,角质标本不染色10%KOH观察菌丝、孢子,类型大小颜色皱摺鉴定,动物实验（致病性真菌）接种观察发病情况死亡后取标本进一步鉴定,皮肤超敏反应,快速诊断血清学实验核酸检测真菌毒素检测,新生隐球菌脑脊液涂片,假菌丝,第四节特异性预防与治疗,一、人工主动免疫(artificialactiveimmunity)将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。,疫苗死疫苗活疫苗新型活疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成疫苗亚单位疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗,类毒素外毒素0.3%0.4%甲醛类毒素,用于人工主动免疫的生物制剂,二、人工被动免疫(artificialpassitiveimmunity),注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫。人工被动免疫作用作用发挥迅速，但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。,抗毒素抗菌血清胎盘丙种球蛋白、血清丙种球蛋白其他免疫制剂,用于人工被动免疫的生物制剂,两种人工免疫的比较,三、细菌感染的治疗,抗菌药物人工合成化学药物微生物合成的抗生素,（一）抗菌药物种类按生物来源分按化学结构和性质分（二）主要作