细菌的检查方法PPT课件.ppt

,细菌学诊断,标本采集和送检六原则,避免杂菌污染,不同期不同标本,用抗生素以前,采集病变明显部位,标本作好标记,标本必须新鲜,1,显微镜放大法：普通光学显微镜：0.25um0.25mm电子显微镜：透射电镜、扫描电镜染色法,病原菌检测,细菌形态与结构检查,2,结晶紫1min,卢戈碘1min,95%乙醇30s,稀释复红30s,的意义1.将细菌区分为2大类,GramStain,2.指导选择抗菌药物3.用于细菌致病性等方面的研究,3,直接涂片镜检形态和染色性具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检有助初步诊断。痰液抗酸性细长杆菌结核杆菌脑脊液淤血点肾形,G-双球菌脑膜炎奈瑟菌脓液G+葡萄串状球菌葡萄球菌,病原菌检测,4,分离培养和鉴定确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准),有助于选用抗菌药物及评价疗效。普通培养法（需氧培养法）高渗培养法厌氧培养法,病原菌检测,5,临床标本,预处理,增菌,接种培养基，分离单个菌落,各种鉴定试验,涂片染色,快速诊断试验,生化试验,血清学实验,涂片染色,药敏试验,动物试验,初步诊断报告,一般检验程序,病原学诊断,6,分离培养和鉴定培养特征：营养、生长条件、菌落特征形态特征：细菌形态、排列、染色性生化反应：检测细菌对各种基质（糖类和蛋白质）的代谢作用和代谢产物的差异，借以区别和鉴定细菌。,病原菌检测,7,生化反应如:幽门螺杆菌尿素酶分解尿素产氨,使培养液变碱,pH指示剂变色。微量、快速、半自动或自动细菌生化鉴定和细菌药敏分析系统，使病原菌检出水平提高，时间缩短。,病原菌检测,8,病原菌检测,血清学试验用含已知特异性抗体的免疫血清，可有效检出标本中极微量细菌特异抗原，或与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，确定致病菌的种或型。常用方法有玻片凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、协同凝集、乳胶凝集、免疫电泳、间接血凝等试验。,9,病原菌检测,动物试验利用实验动物可进行病原菌的分离鉴定，检测细菌毒力等。常用实验动物有小鼠,豚鼠和家兔等。接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉等。,10,病原菌检测,药物敏感试验纸片法试管稀释法,11,病原菌检测,其他方法分子生物学技术核酸杂交技术PCR生物芯片技术,12,聚合酶链反应是一种模拟天然DNA复制的体外扩增法，其基本原理如下：加热使双链DNA解开螺旋在退火温度条件下引物同模板杂交在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物重复上述变性退火引物延伸过程至25-40个循环。靶序列被扩增上百万倍，达到体外扩增核酸序列的目的。,PCR技术,13,14,核酸杂交技术,杂交方法是一种分子生物学的标准技术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上，与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。,15,生物芯片技术,该技术系指将大量（通常每平方厘米点阵密度高于400）探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信