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文档简介

超声酶解法1细菌培养及收集活化细菌，LB固体培养基活化培养24h，挑取单菌落接种液体培养基12h，收 集 菌 悬 液 ，412000g 离心 10min，弃上清液，细菌沉淀悬于生理盐水中，于 600nm波长处测定其吸光度值（A600），调整菌悬液吸光度 A600=0.52，浓缩 10,20，30，40 倍后将菌悬液分装于离心管中，每管 1m L，4 12000g离心 10min，弃上清液，细菌沉淀于 - 20保存备用2 超声波破碎菌体取保存的细菌沉淀，用生理盐水清洗2-3次，取菌悬液1ml，加入20ul溶菌酶（50mgml），37水浴锅恒温反应一小时，采用超声法裂解细菌，超声功率 300350W，工作 9.9s，间歇 9.9s，循环 152 次，冰浴。超声结束后立即取 10L 菌悬液，涂片进行革兰染色，显微镜下观察细菌破碎程度。3 提取菌悬液蛋白剩余菌悬液于 4 16060g 离心 10min，收集上清液。 Tris-Hcl 0.01molL PH7.4柠檬酸 20mM MnSO4 30mMNADP 20mM溶菌酶 50mg ml
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