（食品科学专业论文）丝瓜中苷类化合物的分离及其生物活性研究.pdf

中英文摘要 丝瓜中苷类化合物的分离及其生物活性研究 摘要 丝瓜为葫芦科植物丝瓜属的鲜嫩果实，或霜后干枯的老熟果实， 一年生攀缘性草本植物。有8 个品种，分布于东半球热带和亚热带地 区。我国2 个品种，即丝瓜陋伽t y 砌挑c 口，仁i b 锄】或粤丝瓜【三伽 a 洲缸馏“肠r o x b 】，且各地均有栽培。丝瓜不仅富含人体所需要的多 种营养成分，而且也含有多种药用化学成分，具有抗应急、增强免疫、 镇静抗炎、抗氧化和抗病毒等功效。为进一步揭示丝瓜药理活性的化 学物质基础，开发其活性成分，对丝瓜的苷类化学成分进行了系统的 研究，并测定分离组分的抗过敏和抗氧化活性。 丝瓜正丁醇提取物采用a b 8 大孔树脂，利用水和3 0 、5 0 、 7 0 和9 5 的乙醇溶液洗脱提纯得不同极性的糖苷类化合物。3 0 洗脱部分以氯仿一甲醇一异丙醇一水( 5 ：6 ：1 ：4 ) 为溶剂系统采用 高速逆流色谱分离得到4 个酯苷类化合物和一个酸，分别为：阿魏酰 - p - d 一葡萄糖( 1 一f e m l o y l b d - g l u c o s e1 ) ；1 0 - p 一香豆酰一b d 一葡萄 糖( 1 一o 巾一c o u m a m y l 一p d g l u c o s e i i ) ；对羟基苯甲酰葡萄糖( 1 一( 4 一h y d r o x y b e n z o y l ) g l u c o s ei i i ) ：咖啡酰一p - d - 葡萄糖( 1 - c a 彘o y l - b - d g l u c o s e ) ；香豆酸( p c o u m 撕ca c i dv ) 。5 0 洗脱部分以氯仿一甲醇一水 ( 1 3 ：7 ：8 ) 为溶剂系统采用高速逆流色谱分离得到2 个黄酮苷类化 中英文摘要 合物，分别为：柯伊利素一7 一o b d 一葡萄醛酸苷甲酯( c h r y s o e r i o l - 7 o p d g l u c u r o n i d cm e m y le s t c r ) ；芹菜素- 7 一。一b d 葡萄醛酸苷甲酯 ( a p i g e n i n 一7 一o d d g l u c u m n i d em e t h y le s t e r ) 。7 0 洗脱部分以氯 仿一甲醇一水( 1 3 ：7 ：8 ) 为溶剂系统采用高速逆流色谱分离得到1 个皂苷化合物丝瓜皂苷h ( l u c y o s i d e sh ) 。化合物初步鉴定为新 化合物。化合物i 一都是首次从该植物中分得。 0 o c h 3 o h o i 阿魏酰一p d - 葡萄糖 1 一o - p 一香豆酰d d 葡萄糖 o o i i i 对羟基苯甲酰葡萄糖 咖啡酰一b d 葡萄糖 函一面一 商一函一 o v香豆酸 柯伊利素一7 0 - d d 葡萄醛酸苷甲酯 芹菜素一7 o p - d - 葡萄醛酸苷甲酯丝瓜皂苷h 在o 9 m l 含透明质酸酶( 3 4 6 u m 1 ) 的溶液中添加o 0 0 2 8 m 化合 物i 测定它们对透明质酸酶的抑制试验结果表明，i 没有明显 的抗过敏活性。高浓度下的抗过敏活性以及体内抗过敏活性试验有待 于进一步研究。 化合物i - 用采d p p h 法测定抗氧化活性的大小顺序是：v v c i i i i 。构效关系为：化合物分子中的酚 羟基的数目和可以形成氢键的酚羟基数目与分子的抗氧化活性正相 关；化合物邻二酚结构有一个羟基被甲氧基取代后，其抗氧化活性降 低，但其抗氧化活性仍大于含一个酚羟基的化合物；化合物的双键能 够促使苯环失电子后形成自旋形成更稳定的自由基，提高其抗氧化活 性；化合物结构中的羧酸具有吸电子功能，也能使苯环失电子后形成 固一 中英文摘要 更稳定的结构，因此具有很高的抗氧化活性，羧酸结构和糖类成酯苷 后抗氧化活性降低。皂苷也具有一定的抗氧化活性，其机理有待进一 步研究。 关键词：丝瓜，苷类化合物，高速逆流色谱，抗过敏，抗氧化 中英文摘要 s t u d i e so nt h ei s o l a l l o na n db 1 0 a c t i t y o fl y c o s i d ec o m p o u n d sf r o m 三u 删c m 刀列删三( l ) r o e m a b s t r a c t t o w e lg o u r d sa r et h e 舭s hf h l i t so f 勘廊w h i c hb e l o n g st oc u c u r b i a c e a ef a m i l y i th a s8v 撕e t i e s ，d i s t r i b u “n gi nt l l ee a s t e mh e m i s p h e r et r o p i c sa n dt h e 鼬t r o p i c sa r e a t h e r ea r c2v a i i e t i e si nc h i n a ，三咖缈砌批， 仁jr o 伽a n d 伽口侧缸，掣，口r o x b ，d i s t r i b u t i n gi nn o n ha n ds o u t hp 1 a c ei nc h i n a t o w e lg o u r d sn o to n l yr i c h l yc o n t a i n sm em a n yk i n d s o fn u t r i t i o ni n g r e d i e n t sw h i c ht h eh u m a nb o d yn e e d s ，b u ta l s oi n c l u d e sm e m a n yk i n d s o f m e d i c i n a lc h e m i c a lc o m p o n e n t sw h i c hp o s s e s si m p m v i n gi m m u n i t y 、e a s i n gp a i n 、r e l i e v i n gac 彻g ha n da n t i v i m s i no r d e rt oi n v e s t i g a t et h ep h a m a c o l o g yb i o a c t i v ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so f 上m 励c y 砌西百c 口弛jr o e m d e 印1 y ，t h ei s 0 1 a t i o n 、a n t i a l l e 曙i ce 虢c ta n da n t i o x i d a n ta c t i v i t yo fg l y c o s i d e sc o i i l p o u n d sw a ss t l l d i e d t h en b u t a l l o le x t r a c to f t h e 曲i t so f 三m 骆砌打i ，仁jr o e m w a s e l u t e dt h r o u g ha b 一8m a c r o p o r o u sa d s o l p t i o nr e s i nw i t hw a t e ra n d3 0 、 5 0 、7 0 、9 5 e t l l a n o la se l u a n tt oo b t a i nt h eg l u c o s i d ec o m p o u n d s v 一 ! 茎苎塑至 。 w i t hd i f 诧r e n tp l a r i t y t h ee x t r a c t i o no f 3 0 e t h a n o le l u a n tw a ss e p a r a t e d b yh s c c cu s i n ga 呐o - p h a s es o i v e ms y s t e mc o m p o s e do f c h i o r o f o 咖，m e t h a n o l ，i s 叩r o p y ia l c o h o ia 1 1 dw a t c r ( 5 ：6 ：l ：4 ，v ，v ) a st h es o l v e n ts y s t e m t oy e i l dl - f e m l o y l p d g l u c o s e ( i ) ，l 一0 p c o u m a r o y l b d 9 1 u c o s e ( i i ) ，l ( 4 。h y d r o x y b e i l z o y l ) g i u c o s e ( i n ) ，1 c a 疏o y l d d g l u c o s e ( ) a i l dp c o u m a f i ca c i d ( v ) t h ee x t r a c t i o no f5 0 e t h a n o le l u a n tw a ss e d a m t e db yhs c c cu s i n gat w o p h a s es o l v e ms y s t 锄c o m p o s e do fc h l o r o f o 册，m e t h a n o la i l dw a t e r ( 1 3 ：7 ：8 ，v v ) t op r o d u c e c h d ，s o e r i 0 1 7 一o b d g l u c u m n i d em e t h y le s t 呱) a 1 1 da p i g i 1 1 7 - o p d g l u c u r o n i d e m e l h y le s t e f ( ) t h ee x t r a c t i o no f 7 0 e m a n o le l u a n tw a l ss 印a r a t e db yh s c c c u s i n gt h es 锄es 0 1 v e n ts y 瓯e l l lt ob r i n gl u c y o s i d eh ( ) c o m p o u n d w a s an e w c o m p o u n d ，c o l 丑p o u n d si 一w e r ei s o l a 七e df o rt h ef i r s tt i m ef 如mt 王l i s p l a n t h o o c h 3 o h o i l f e n l l o y l d d - 茸u c o s ei i 1 一。廿c o u r n a r o y l p d 一西u c o s e ho h o 0 i i i l 一( 4 - h y d r o x y b e l l z o y l ) 百u c o s e 1 一c a 腩o y l p d 一菩u c o s e v l 函一 函一 函 中英文摘要 o v p c o 哪a d ca c i dc l l r y s o e r i o l - 7 一。一d d 一辱u c u r o n j d em c t h y le s t e r a p i g c i i i n 一7 一op - d g l u c u r o f l i d em 如y le s t e rl u c y o s i d e sh a n t i a l l e 唱i ca c t i v i 哆o fc o m p o u n d si 一w a si n v e s t i g a t e db ym e a s u r i n gt h e i ri n h i b i t i o ne 疵c t s0 nh y a l u r o n i d a s ef r o mb o v i n et e s t i si nv i t r o t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e yd i dn o td i s p l a yas i g n i f i c a n ti l l l l i b i t i o na c t i v i t yt oh y a l u r o n i d a s e ( 3 4 6 u - m 1 ) a ta d o s eo f o 0 0 2 8 m d e t e c t i o no f a n t i o x i d a n ta c t i v i t yo f c o m p o u n d si 一b yd p p h m e t h o d t h e 抽t i o x i d a t i v ee 珩c i e n c yo f t h ei s 0 1 a t e dc o m p o u n d sw a si nt h eo r d e r o f p c o u m a r i ca c i d ( v ) v c c h d r s o e r i o l 7 0 一d d - g l u c u m n i d e m e t h y le s t e “) l - c a f 矗y l d d g l u c o s e ( ) 1 - f e n l l o y l p d g l u c o s e ( i ) a p i g e n i n - 7 旬一b d g l u c u r o n i d em e t h y le s t e “) l - o - p c o u m a r o y l - d - d - g l u c o s i i ) 1 一( 4 - h y d m x y b e n z o y l ) g l u c o s e ( i ) l u c y o s i d e h ( ) t h er e l a t i o n s h i pb e t 、v e e nt h ea c t i v i t ya n dt h es t m c t u r es u g g e s t s 国一 国 而一 固一 中英文摘要 t h a tm e 衄m b e ro f p h e n 0 1 i ch y d m x y lg r o u p sa n dt h ei n t r a j n o l e c u l a rh - b o n do ft h em o l e c u l e sa r e 也em a i nf a c t o f sa f f & t i n ga n t i o x i d a n ta c t i v i 哆a s a na d j a c e n tp h e r l o l i cg r o u pi sr 印l a c e db yam e m o x y lg r o p ，t h ea n t i o x i d a n ta c t i v i 哆o f t h ec o m p o u n dr 。d u c e s b u ti t sa n t i o x i d a n ta c t i v i t yi ss t i l is t r o n g e rt h 觚t h ec o m p o u n dc o n t a i n i n go n l yo n ep h e n o l i ch y d r o x y lg r o u p t h es t n l c t u r eo fd o u b l e b o n dl i n 姑n gb e i l z e i l ec a ni n c r e a s ea n t i o x i d a t l ta c t i v i 吼t h e 咖c t i l r eo f c 拍o x y l i ca c i di nt h ec o m p o u n d s h a v em e 如n c t i o n o fa t t r a c t i n gd e c t r d i l i c s ，c a u s em eb e n z e n er i n gt ol o s em ed e c t r o nt of o r mas t a b l e rs m l c t i l r et oi n c r e a s e 锄t i o x i d a n ta c t i v i 锣t h ea n t i o x i d a n ta c t i v i 够d e c r e a s c sw i m ah y d r o x y le m e r i f i c a t i o no rg l y c o s i d a t i o n n es 印o n i n a l s oh a sc e n a i na n t i o x i d a i l ta c t i v i t ya n di t sm e c h a n i s mw a i t sf o rf h 曲e r s t l l d i e s k e y w o r d s ：三幼白炻拧西 f 仁r o e m ，g l y c o s i d e s ，h s c c c ， a n 6 一a l l e 略i ca c t i v i 饥a n t i o x i d a n la c t i v i t y v j 绪论 第一章绪论 第一节丝瓜的研究概况 一、引言 丝瓜为葫芦科植物丝瓜属的鲜嫩果实，或霜后干枯的老熟果实，一年生攀缘 性草本植物。由于其老熟后呈丝络状，故名日丝瓜。有8 个品种，分布于东半球 热带和亚热带地区。我国有2 个品种，即丝瓜咖钞砌办 犯jr o e m 】或粤丝 瓜皿咖口删加删缸r o x b 】，且各地均有栽培1 1 1 。在日本有盖形丝瓜陋m 驹印e ，c “肠缸c o 驴】。普通丝瓜又称水瓜、天罗、布瓜等，分布地方较广，我国南北各地 均有栽培；有棱丝瓜，又称胜瓜、奴瓜、角瓜等，南方较多，以广东为最多，故 又称粤丝瓜。供食用的丝瓜，可分普通丝瓜和有梭丝瓜。普通丝瓜果实长圆呈条 形，果实绿色，少数品种肉较薄，纤维较多，但味道好，较好的品种有上海的香 丝瓜、湖南的肉丝瓜等；棱角丝瓜为广州特产，呈棒状，有明显棱角，皮薄肉厚， 质嫩纤维少2 1 。 丝瓜耐湿、耐热、喜阴，有农谚说，“丝瓜种 南坡一定强，丝瓜种北墙一定丧”，就是这个意思。 丝瓜呈棒状、蛇形状，皮呈绿色或黄绿色，外表有 条纹或皱缩。全国著名丝瓜品种有：北京棒丝瓜、 南京长丝瓜、上海香丝瓜、武汉白玉籍瓜、浙江青 柄白肚瓜等。 丝瓜原产印度，如今广泛种植在亚洲、澳洲、 南美洲和非洲等热带地区。丝瓜约在宋朝的时候传 入我国，南宋中期的陆游在其所著( 老学庵笔记) 上提到：“丝瓜涤砚磨洗，余演 皆尽，而不损砚。”宋朝的杜北山( 咏丝瓜) 的诗日：“寂弃衡户人泉声，不见山 容亦自清。数日雨晴秋草长，丝瓜沿上瓦墙生。”就说明那时丝瓜已经在我国一 定的地区普及了。因此，可以说丝瓜在我国种植已有一千多年的历史了。 丝瓜传到中国后，开始食用其瓜，应用其络，逐渐发现丝瓜各部分f 根、藤。 叶、花、瓜蒂、瓜肉、瓜子、瓜络、瓜皮) 均有活性，可用来治疗多种疾病，本 草纲目上总结了丝瓜的多种功效和应用方剂。丝瓜嫩果中含有皂甙、丝瓜苦昧 质、多量粘液、瓜氨酸等，食之有清热化痰，凉血解毒之功效，另外可以治疗热 病烦渴，咳嗽痰喘，便血尿血等。丝瓜种子含有脂肪酸2 3 5 3 8 9 ，主为亚油 酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸等的甘油脂以及磷脂、角鲨酸、卜菠菜甾醇、三萜 皂甙、黑色素和葫芦素b ，其它还有蛋白质和糖类，具有利水、除热的功效，还 可以治疗肢面浮肿、石淋、肠风、痔痿。丝瓜叶和藤中含有甙，有止咳去痰及抗 菌作用。丝瓜叶内服可清暑去热，外用可止血消炎，捣烂外敷可以治疗疮、肿痛； 丝瓜藤有舒筋活血、止痛健脾杀虫的作用。瓜藤中的汁液又叫天罗水，它可以镇 咳、治头痛、腹痛、感冒、水肿以及酒精中毒和神经性皮炎等。丝瓜花中含有多 种氨基酸，其性寒昧甘，有清热去痰、止咳、止咽喉痛的作用。丝瓜籽中含有喷 瓜素，有下泻作用，还可杀虫，并能润燥通便、清热化痰。老熟瓜制成丝瓜络， 微火煅烧，其灰入药，有通经活络、清热化痰、利尿解毒、消肿止血的功效。丝 瓜果皮可以治疗疖，瓜蒂可治咽喉肿痛，丝瓜根能消炎解毒、活血通络，用其熬 水洗患处，有去腐生肌的功效。丝瓜水是上等的美容佳品，可取粗大的瓜藤在前 一天浇足水，然后近地6 0 锄剪断，将地面留下的一段插入洁净的瓶中收集丝瓜 水，过滤后使用；或取丝瓜嫩果从一端扒皮取汁。用丝瓜水擦脸，可防止皱纹生 成，红颜不老，青春永驻。另外丝瓜皮、丝瓜根和丝瓜蒂都有一定的药理功效。 所以说丝瓜全身是宝。 丝瓜慨言之：丝瓜有”除热利肠、去风化痰、凉血解毒杀虫除癣、通经络、 行血脉、下乳汁、暖胃补阳、固气和胎”等多种功效【3 】。江户时代之前，丝瓜传 到日本。日本多识篇收载“倍知麻”( 即丝瓜) 的果、叶、茎等作为民间用药， 有消炎、镇痛、利水、解毒作用。中日两国民间很早已知收集丝瓜茎汁，称“天 罗水”( 丝瓜古亦称“天罗”事类合壁) 用来搽面营养皮肤，作为美容液，在 日本尤其被尝识。可见丝瓜作为防治疾病和卫生保健确有广泛的l 瞄床应用基础。 二、丝瓜的营养价值 丝瓜作为蔬菜，并不像黄瓜、菜瓜那样普便食用。其实它的营养成分以及烹 调出的多种佳肴的美味，与黄瓜、菜瓜相比并不逊色【4 】。丝瓜中含有人体所需要 的多种营养成分，如脂肪、蛋白质、粗纤维、碳水化合物、钙、磷、铁、钾、镁、 绪论 核黄素及多种维生素。其中钙、磷、铁及蛋白质等的含量在瓜类蔬菜中是最高的。 如在l o o g 可食部分中，含有蛋白质1 5 9 、碳水化合物4 5 9 、钙2 8 m g 、磷4 5 m g 、 铁o 9 m g 、硫胺素o 0 3 m g 、尼克酸0 3 m g 。特别是维生素c ，每1 0 0 克高达8 毫 克，这对防治坏血病大有好处【5 一。 三、丝瓜的化学成分研究进展 丝瓜化学成分的研究始于上世纪中叶，先后分离得到了三萜、生物碱、甾体 化合物、萜类色素、皂甙类、脑苷、黄酮体、酚类、蛋白质、氨基酸等多种化合 物【7 1 。 ( 一) 甾醇、三萜及皂甙类 从普通丝瓜叫砌如砌j i ) 果实及汁液中分离出人参皂甙r g l 和r e 、常春藤 配基一3 一。一p d 葡萄吡喃糖甙、齐墩果酸3 o p - d 葡萄吡喃糖甙【8 】o 从丝瓜叶和果实中分得丝瓜皂甙l u c y o s i d ea m 等1 7 种齐墩果烷型甙 【9 16 1 ，还有一种新脑甙脂，命名为l u c y o b r o s i d e 【1 7 1 8 1 。 地上部分鉴定出齐墩果酸、常春藤皂甙元、一种不明结构的三萜化合物、齐 墩果酸3 一d p - d 葡萄毗喃糖甙、人参皂甙r 9 1 和r e 和丝瓜皂甙l u c y o s i d ea g 和i 【1 9 瑚l 。 从丝瓜根中分离得到齐墩果酸、2 l b 一羟基齐墩果酸、3 一o _ b d 一葡萄吡喃糖 2 l d 羟基常春藤皂苷、2 0 l 一羟基常春藤皂苷元3 o b d 葡萄吡哺糖苷【2 “。 果皮和珠心中分得葫芦素b 。 种子中分得泄根酸( b 叫o n 0 1 i ca c i d ) 和丝瓜皂甙n 、o 、p 、q 、r 、i 、k 和g 。 雄花中分得b 谷甾醇、齐墩果酸和一种尚未确定结构的皂甙。 图l l 丝瓜皂甙的母体结构 f i g u 聪l l 仉p a 陀呲s u b s t 如c es t n l 曲鹏o f l 舡c y o s i d e s g l c ：- n g l u 。0 p 肿。刚( 毗喃葡萄糖)g a l ：一d _ g a l a c t o p y r 柚。刚( 吡喃半乳糖) 从盖形丝瓜果实中分得8 种达玛烷型皂甙i 唧l e r o s i d e s a 、b 、c 、d 、e 、f 、 g 、h 和4 种齐墩果烷型皂甙l i l p e r o s i d e sl 、j 、k 、l f 2 2 矧。 图l 一2 盖形丝瓜中的达玛烷型皂甙a _ h 的母体结构 f i g l l 佗1 - 2 n 屺p 册t 明b s t 卸c e s m l c t i l l e o f h l p e m s i d c s a - h 4 绪论 附：表l 一2 中i 、i i 、所对应的结构依次为、。r 、多、1 o 。、 o hh o o h 图1 3 盖形丝瓜中的齐墩果烷型皂甙的母体结构 f i g l l r el 一3t h ep a 姗ts u b s t a n c eg 缸u c t u f eo f h l p e m s i d 鼯i l 表l 一3 盖形丝瓜中的齐墩果烷型皂甙的差异 t a b l el - 3t h es t m c m f ed i f 赫l l c co f l 坤c r 璐i d 鼯i l h篱嘲 o m喀 从有棱丝瓜果皮中分得葫芦素b 、e 和齐墩果酸种子中分得葫芦素b 和一 甙元为齐墩果酸的皂甙。另外种子及其它部位中含有一定量的7 、5 和3 甾醇，其中以7 一甾酵为主。从果实中分得7 种皂甙a c u c o s i d e s a g 【2 4 1 。 图l 一4 粤丝瓜中的齐墩果烷型三萜皂甙的前皂配基结构( 即a c i l t o s i d a a ) f i g u f el - 4t h ep a 砌l t 鲫b s t 柚c es 枉u 咖r eo f a c u t o s i d e sa g 表l 一4 粤丝瓜中的齐墩果烷型三萜皂甙的差异 t a m ei 4 1 1 1 e s 廿1 l c t l l d i 岱j 嘲c e o f a c u t o s i d e s a g 附：表l 4 中s b 、s d 、s e 、s f 和s g 的立体结构图 。么到甜测 6 o “蜂z 蕞群* 勰 6 绪论 ( 二) 黄酮体和酚类 丝瓜砂砌如砌d 雄花中分得芹菜配基。 cv e n k a t a r a r n a i a | l 等分析了有棱丝瓜花中的酚类成分，这些成分有绿原酸、 雷锁酸等1 2 种。 a 皿a m a t h as h e t t y 研究发现其叶的绒毛霉病变与叶中总酚类成分浓度有关， 高浓度的酚类是抑制绒毛霉病变的内部因素。 ( 三) 蛋白质和氨基酸 文献报道，普通丝瓜种子蛋白质的含量为4 0 2 3 ( 印度产) 、2 3 6 0 ( 埃及产) 、 5 5 6 6 ( 阿延产) 。种子中分得两种具有抗早孕活性的蛋白质，剂量为3 3 m 鲋吨 时，小鼠腹腔注射一次的妊娠终止率为1 0 0 ；多种具有抑制核糖体和蛋白质生 物合成特性的蛋白质，包括l u 掇n 、l u 硒na 和b 、1 9 k ，p s i 、1 9 k p s i 和9 k p s i 等，其中1 9 k p s i 对游离细胞中蛋白质生物合成抑制率为r j c i n a c h a i n 的3 4 0 倍。 构效关系研究表明，l u m na 的抑制活性与处于2 3 l 位的赖氨酸上之氨基有关。 还分得一种球蛋白，一种血球凝集素，它对兔和家禽的红血球有凝集作用。另外 i v a i l p i c h l 等还分析了种子中的清蛋白、球蛋白、谷蛋白及其氨基酸组成。 有棱丝瓜可食部分中含1 2 的蛋白质。果实中分得两种外源凝集素，它们 分别对壳四糖和壳寡糖具有特征凝集作用，种子含3 3 4 的蛋白质，其组成氨基 酸有a l a f l i n e 、a 蝤n i n e 、a s p a r t i ca c i d 、c y s t e i n e 、羽u t a i i l i ca d d 、1 1 i s t i d i n e 、l 曲c i n e s 、 p h y l a l a l i i n e 、t h r c o n 锄e 、v a l i n e 、m e t h i o i l i n e 和s 丽n e 等1 2 种。 j d a s q y p t a 等测试了棱角丝瓜花中的游离氨基酸，发现雌花中g l u t 锄j c a c i d 、s p a r t i ca c i d 、a r g n i n e 和a s p a r a g h 玲的浓度比雄花中的高得多，而雌花中的 i v s i n e 和a l a n i n e 的浓度比雄花中的低。 ( 四) 油脂和有机酸 普通丝瓜种子含油量为2 3 9 ( 阿根廷产) 、8 9 ( 埃及产) 、4 3 3 ( 印度产) 、 2 0 1 ( 加拿大产) 。各种脂肪酸在总脂肪酸中的比例如下：含共轭三烯的脂肪酸 o 2 ( 重量，下同) 、十六烷酸1 3 o 、硬脂酸6 o 、油酸1 5 o 、亚油酸6 6 o 。 有棱丝瓜果实的可食部分中含油脂o 1 0 ，总有机酸含量o 1 4 ，包括苹果 酸o 0 8 、柠横酸o 0 6 。 种仁含油脂4 0 3 ，亚油酸和油酸构成其脂肪酸的主要部分，而亚油酸的 含量比油酸高。此外，丝瓜属植物还含由果胶、大量的维生素、糖类及微量元素 等。 四、丝瓜的药理研究 丝瓜具有较为广泛的医疗保健作用，为探明其疗效原理，近年来国内外的学 者作了大量的化学成分分离和药理研究工作。药理研究主要在以下诸方面取得一 定进展【2 5 】： ( ) 抗应急作用 作者研究证明：丝瓜皂甙有抗应激作用，对高温、缺氧、疲劳、辐射等造成 的小鼠损伤有显著的保护作用；对c c l 4 及付卜热息痛引起的肝损伤高转氨酶血 症有减轻作用i 还能抑制大剂量氢化可的松引起的小鼠“耗竭”现象发生。有地 滋证明：丝瓜皂甙对防止肾皮质激素致大鼠肾萎缩和血浆皮质溶胶量减少有显著 作用。以上结果证实：丝瓜皂甙确实有调节机体、扶正祛邪功能口6 如。 ( 二) 增强免疫作用 作者等研究证明：丝瓜皂甙能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能【圳，且对肾阳 虚小鼠显示更强作用，同时也能促进正常小鼠循环抗体溶血素( i g 嘲) 的形成， 表明丝瓜皂甙对非特异免疫和特异免疫都有增强作用。n g 、t 、b 、e ta l 综述了 8 种葫芦科植物( 包括丝瓜) 的生化特性和生物活性，指出其中多种蛋白具有免 绪论 疫调节活性。1 知a k as h i g e o 证明：从丝瓜培养细胞分得b f y o n o l i ca c i d ( 泻根酸) ( 1 ) 6 0 0 m 舭g 于大鼠腹膜内给药，抑制同种被动皮肤过敏反应比甘草亭酸( 2 ) 相同 剂量作用更强。化合物( 1 ) 也能显著抑制小鼠迟发过敏反应，化合物( 2 ) 则不能， ( 1 ) 较( 2 ) 毒性小，未见对小鼠的毒性作用，不损伤类固醇代谢中的肝酶活性。显 示丝瓜培养细胞提取物歇根酸是很好的免疫调节物。 ( 三) 镇静、抗炎作用 康白2 9 ，3 1 1 等报道：丝瓜络水煎剂对化学、热、电刺激所致的疼痛有明显抑制 作用，丝瓜络水提取物还能明显减少小鼠自发活动，对戊巴妥钠阈下剂量有良好 协同作用( p 防治激素副作用 众所用知：肾皮质激素特别是糖皮质激素具有多方面生理作用和广泛的临床 应用，作为药物用于治疗严重感染或炎症性疾病、过敏反应及自身免疫性疾病、 抗休克、血液病及多种皮肤病都起重要作用，然面却有许多不良反应。研究证明： 丝瓜皂甙可防治肾皮质激素副作用。日本有地滋用丝瓜皂甙与肾皮质激素并用防 治慢性肾炎、慢性风湿性关节炎、以及烫伤，都能有效地防止了肾皮质激素的副 作用口9 】。除颈脖肥大症状、改善尿中皮质类固醇、甾醇含量和改善皮质机能；消 除浮肿、倦怠、疼痛和运动障碍：使烫伤迅速痊愈后不出现斑痕和色素沉着等。 表明丝瓜皂甙是临床上调理机体防治肾皮质激素副作用的好药。 六、丝瓜的保健作用 丝瓜的多种生物功效，除有较为广泛的治疗作用外，在卫生保健方面也有广 泛应用。随着科学技术的发展，这方面的应用更有所扩展，主要在保健食品相化 妆品方面应用最多【2 研。 ( 一) 作为人参成分食品 1 9 8 5 年日本专利报道，有地滋将丝瓜皂甙和绞股蓝皂甙合用，作成含有人 参成分的食品，实验证明：这种食品含有从丝瓜和绞股蓝提出的皂甙物质，与朝 鲜人参有相同的成分与功能，每日摄入2 0 一5 0 0 f n g ，连服1 个月以上，就可达到 强身、强耩、延年益寿的耳的，还可防止肾皮质激素副作用，又可有效地控制肥 胖。此成分比人参成本低，容易入口随食物成分一摄入体内。且证明丝瓜及其叶、 2 藤、籽、汁均合丝瓜皂甙，可作成多种形态食品。如( 散剂、颗粒、清凉、饮料、 主食、副食、点心、茶等) 。被日本称为划时代的食品。 ( 二) 作为化妆品 宋代赵梅隐在咏丝瓜中说：“黄花褪束绿身长，百结丝包困晓霜。虚瘦 得来成一捻，刚偎人面染脂香。”用丝瓜络洗澡擦身，实际上是一种皮肤按摩美 容法。丝瓜作为美容佳品，不容忽视的是用丝瓜藤汁外搽，具有清洁护肤，美容 养颜，防皱的功效，对于治疗皮肤色素沉着也具有一定的作用【5 1 。 因丝瓜汁可润肤美容，在此基础上，近代人们将丝瓜提取物作成多种化妆品。 1 ) 作皮肤光柔剂：取丝瓜萃取物和其它物质相伴作成皮肤光柔剂，增强皮肤光柔 作用，使之不发炎。2 ) 作成抗炎化妆品：对皮肤显示持久的抗炎作用，用于治疗 晒斑，6 小时红斑度数较对照组减少一半。3 ) 作成皮肤增湿剂、皮肤收敛剂，可 防止汗水和皮脂过分外溢。4 ) 制成洗发剂，可以防治头皮屑。 绪论 第二节丝瓜研究中的不足和课题的提出 丝瓜化学成分中报道最多就是丝瓜中的三萜皂苷，其它类的化学成分报道得 不多。况且报道的生物功效较多的是较早的临床经验的总结。即使是丝瓜中化学 成分的生物活性的研究大多是丝瓜总皂苷( l u c y o s i d e s ) 的生物活性，丝瓜皂苷具 有滋补、增强记忆、镇咳、利尿、抗应急、增强免疫和防止激素副作用的，皂苷 中那一种是主要的活性成分和单体皂苷成分的药理活性还未有报道。 因此，进一步提取和分离丝瓜中的化学成分，对其化学成分进行系统的研究， 特别是苷类化合物，以及对其有效药用成分开发利用，对寻找新药、开发医疗保 健品及综合利用资源等具有重要的意义。 第三节本课题的项目来源、研究目标及思路 本研究是中德科学基金“咖砌f o n ，s f m 加f m 西出砌h ，口耐6 f d 缸西w ， s c r e e 川n g 珂b o c t 如e 阳t t l m lp r o d t l c 招r o ms e l e c t e dt r d d 娃o n n lv e g e t d b k si nc h i 魏矿 的一部分，该研究总的目标是苦瓜、冬瓜、丝瓜、南瓜中的生物活性物质的筛选 与结构鉴定。 为了进一步揭示丝瓜的药理活性的化学物质基础，开发其活性成分，本论文 研究的总目标是分离丝瓜中的苷类化学成分的分离，并对其进行结构鉴定和抗过 敏、抗氧化活性的筛选。 由于丝瓜中含糖和色素较多，丝瓜中苷类化合物的提取和分离采用乙醇提取 物的正t 醇萃取部分通过大孔树脂除去糖、蛋白质和色素先得到各洗脱部分。由 于苷类化学成分的极性都较高，如果采用传统的硅胶柱层析则样品容易被吸附损 失，不利于含量较少的化合物的分离和鉴定，因此本试验采用无样品吸附损失的 高速逆流色谱( h s c c c ) 作为主要的分离方法3 3 4 5 】。 在获得一定量的化合物后通过透明质酸酶抑制试验( m o r g a n e l s o n 法) 抗过 敏、游离自由基( d p p h ) 抑制实验，探讨这些化合物的抗过敏和抗氧化活性。 4 丝瓜中苷类化合物的提取和分离 第二章丝瓜中苷类化合物的提取和分离 第一节仪器与试剂 一、仪器 l 、分析型高速逆流色谱仪( h s c c c d 1 0 0 ) 、半制备型高速逆流色谱仪( h s c c c d 4 0 0 ) 和制备型高速逆流色谱仪( h s c c c d 1 0 0 0 ) ：浙江工商大学食品与生物工程 研究所白发研制 2 、部分收集器：b s z 1 0 0 自动部分收集器( 上海沪西分析仪器厂) ，b u c h i f r a c t i o nc o l l e t i o nb 一6 8 4 ( 德国b n c h i ) 3 、玻璃色谱柱：中8 c l n 1 0 0 c m 、中2 锄1 1 0 c m ( 杭州常盛科教器具厂) 4 、旋转蒸发仪：r e 5 2 型旋转蒸发仪( 上海博通) 5 、真空泵：s h z d 循环水式真空泵( 河南巩义市英峪豫华仪器厂) 6 、冷凝装置：d l s 融系列型低温冷却液循环泵( 郑州长城科工贸有限公司) 7 、恒流泵：w e l l c i 帅mp r 印a m t i v ch p l cp 啪pk 1 8 0 0 ( k n a u e r 德国) 8 、冷冻干燥机：f d 1 冷冻干燥机( 北京博医康技术公司) 9 、硅胶板：t l ca l 啪i n i u ms h e e t s2 0 2 0 c ms i l l c ag d6 0f 2 5 4 ( m 删【德国) l o 、电子天平：a y 1 2 0 ( s h i n l a d z u j a p 孤) 1 l 、加热器：f d - 2 密封式恒温可调电加热器( 浙江省嘉兴市风桥电热器厂) 1 2 、酒精计：余姚市黄家埠玻璃仪器厂 1 3 、其他仅器：吸管、毛细管、点样瓶( 2 m l ，4 m 1 ) 、烧杯、玻璃棒、滴管、量 筒( 5 0 m l ，5 0 0 m l ，1 0 0 0 m 1 ) 、分液漏斗( 1 0 0 恤l ，l o o o m l ) 、容量瓶( 1 0 0 m l ，l o o o m l ) 、圆底 烧瓶、吸耳球、展缸、止血嵌、铁架台、电炉、烘箱等 二、试剂 l 、有机溶剂：氯仿( a r ) ，甲醇( a r ) 、乙酸乙酯( a r ) ，正丁醇( a r ) 、乙醇( a r ) 、 n a o h ( a m 、h c l 、异丙醇、9 5 乙醇、硫酸等，购自杭州汇普化工试剂有限公 司 2 、分离材料： a b _ 8 型大孔树脂( 南开大学化工厂) s 印h a d c xl h 一2 0 1 5 丝瓜中苷类化台物的提取和分离 第二节丝瓜中化学成分的提取 新鲜丝瓜陋l 加啪l 枷犯jr o 咖】6 0 0k d 四川西昌) ，去皮后切成片状， 冷冻干燥得1 0 k g 丝瓜干品。丝瓜干品用9 5 乙醇5 d 浸提两次，每次用乙醇 5 0 l 浸提时间2 小时。提取液减压浓缩至无醇味后，浓缩物( 1 3 0 0 m 1 ) 分散在8 l 蒸馏水中，用等体积的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次分配萃取，萃取液浓缩回收 溶剂。浓缩物冷冻干燥得氯仿萃取物8 7 9 、乙酸乙酯萃取物lg 、正丁醇提萃取物 6 3 9 。过程如下图2 1 ：t 丝瓜干品l o k g 上9 5 乙醇提取 乙醇提取物 氯仿萃取物 水相 乙酸乙酯萃取物水相 厂气 正丁醇萃取物水相 图2 一l 丝瓜不同极性组分萃取流程 f i g u 2 - lt h ef l o w o fd i 触p o l a fc o m l m e n t 盟蚴如ml l d 静掣疗n d 咖她jr o 锄 第三节a b 8 大孔树脂分离丝瓜总糖苷 丝瓜正丁醇萃取物用a b 一8 大孔树脂粗分得丝瓜糖苷类化合物。 一、方法 丝瓜提取物萃取后得到的正丁醇萃取物6 3 9 甩3 0 0 0 f n j 水溶解，于中8 c i i l 1 5 m 的玻璃柱中装入大孔树脂5 k g ，依次用2 0 0 0 咖水、2 n a o h 、水、5 h c l 、 水、9 5 乙醇、水冲洗平衡后2 4 h 后上样，用水和3 0 、5 0 、7 5 和9 5 乙醇 沈脱，用酒精计检测洗脱液的酒精度，回收各部分的前、中、末及交叉部分的洗 脱液，浓缩后点于薄层层析硅胶板上，用氯仿：甲醇：水( 7 ：3 ；1 ) 下层液为展 开剂展开，晾干后用显色溶液浸泡5 s ，置于电热炉上方5 m i l l 烘干显色，观察所 含的成分。 1 6 丝瓜中苷类化合物的提取和分离 二、分离流程图 丝瓜正丁醇萃取物( 6 3 曲 l3 0 0 0 m l 水溶解 a b 8 大孔树脂 舯洗平衡 f 瓦i 下= 1 = 。，姗 水3 0 乙醇5 0 乙醇7 0 乙醇9 5 乙醇 洗脱部分洗脱部分洗脱部分洗脱部分洗脱部分 图2 2 大孔树腊分离流程图 f i g i i 咒2 - 2 嵋f l o wo f i s 0 1 a 石o nb ym a c r o p o r o u sa 出o r p 6 0 nr e s i n 三、结果与讨论 ( 一) 各洗脱部分豹t l c 结果图 各洗脱部分的t l c 结果见图2 3 ，其中l 、2 、3 、4 分别为3 0 、5 0 、 7 0 、9 5 乙醇洗脱部分。t l c 结果显示，3 0 洗脱部分有5 个斑点，5 0 洗脱 部分有2 个斑点，7 0 洗脱部分有2 个斑点。 圈2 3 大孔树腊洗脱结果t i c 图 展开剂：氯仿一甲醇一水( 7 ：3 ：1 ) 下层显色剂：1 0 硫酸乙醇溶液。 f i g 噼2 - 31 1 l et l ct e s u l to f e x 仃a c t i o nb ym c r o p o r o u sa d s o r p t i 蚰r e s i n d e v e l o p c h l o r o f o n m e t h a l l o