一测多评

适宜于中药特点的质量评价方法一测多评法,一测多评“药控”易行白云山和黄推进中药现代化http:/www.tech-2011-4-2911:44:14中国食品科技网,虽然中药有5000年的历史，但中药制剂的质量控制一直是难以攻克的问题。古代人们通常用“原产地”来辨别药材是否“道地”，这种方法显然不适应中药现代化。随着科技的进步，中药质量评测正朝着“鉴别性状、化学成分”的方向发展。近年来，白云山和黄中药率先将“一评多测”技术应用到消炎利胆片的质量控制上来，大大提高了药品的安全性和有效性，引起国际医学界的广泛关注。据专家介绍，中药成分的复杂性决定了单一成分或指标评价难以评定其质量。因此，“多成分质量控制、多指标质量评价”模式应运而生，但此模式必需有足够量的化学对照品作为支持，由于某些成分的对照品分离难度大、单体不稳定等因素，使得该模式仅限于少数科研项目，难以广泛应用。对此，国家中医药管理局评审专家王智民教授提出了多指标质量控制的“一测多评”法。即通过中药有效成分间存在的内在函数关系，通过对一个对照品易得成分的测定，来实现多个成分，尤其是那些对照品匮乏成分的同步监控。王智民介绍，“一测多评”的研究思路侧重从量上阐明主要成分或药效成分间的相互关系，校正因子的运用能够实现在对照品短缺的情况下，进行多指标成分的含量测定。实验证明，“一测多评”技术具有极强的普适性。而白云山和黄中药更率先实现了这一技术的应用。据白云山和黄中药相关负责人介绍，近几年，白云山和黄中药与中国中医科学院中药研究所联合开展了消炎利胆片的生产技术和过程控制技术标准的研究项目。其中重点攻坚“一测多评”技术方法。目前这一研究已取得阶段性成果。通过“一测多评”方法，白云山和黄可同时检测消炎利胆片的穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去养穿心莲内酯四种有效成分的含量，大大提高了检测效率。此外，白云山和黄中药还采取了消炎利胆片近红外检测技术，以多指标质量控制和药效评价为技术依托，针对中药制剂生产过程中的共性技术问题，重点开展工艺和生产技术规范化、PAT适应性和技术规范等研究，大大提升了中药生产的质量控制能力和质量控制水平。白云山和黄中药负责人告诉记者，实现中药质量可控，建立我国独立知识产权的中药质量检验标准系统，是中药实现现代化和走向世界的关键。因此，“一测多评”技术方法是中医药现代化进程中具有标志性意义的一步。目前，白云山和黄正将这一技术方法申请专利。他还透露，“一测多评”技术方法也很可能进入2015年中国药典。,提纲,一测多评法的提出一测多评法的原理一测多评法在中药质量评价中的应用,提纲,一测多评法的提出一测多评法的原理一测多评法在中药质量评价中的应用,如何科学客观的评价中药质量？如何设立科学合理的标准？所设立的标准是否实用？检测方法是否具可操作性？检测成本和效率是否适宜科研、生产和监督？,目前中药质量评价的焦点和难点,定性评价指标专属性成分（群）特征指纹群（对照药材、对照提取物）定量评价指标药效成分(群)与功效具有相关性的指标性成分（群）,适宜于中医药特点的中药质量评价模式,一测多评的基本设想,单一指标的质量控制不能反映中药的质量适宜于中医药特点的多指标的质量控制模式已成为目前中药质量评价的重要发展方向之一由于对照品缺乏，限制该方法的实际应用含量测定时，能否先建立成分之间的某种关系通过测定某成分的含量，推算其它相关成分含量,一测多评法的发展回顾,2006年首次应用于木通的质量评价2007年获得中医药行业科技专项资助2010年作为新的质量评价方法，为中国药典所采纳，应用于黄连质量评价，目前已应用于木通、大黄、黄芩、人参、三七、秦皮、金银花、连翘、吴茱萸等药材的定量评价SFDA等领导给予充分肯定，今后一测多评评价模式将作为主流模式在其它品种中大量推广,成分间RCF建立重现性专属性准确性定量限线性范围耐用性方法的再验证,一测多评评价模式的总体思路,提纲,一测多评法的提出一测多评法的原理一测多评法在中药质量评价中的应用,核心思想：在相同条件下，化合物结构类似，紫外响应近似,一测多评法的基本原理(QuantitativeAnalysisofMulti-componentsbySingle-marker，QAMS),技术路线,技术路线,提纲,一测多评法的提出一测多评法的原理一测多评法在中药质量评价中的应用,一测多评法在中药质量评价中的应用,药材黄连、木通、人参、三七、黄芩、秦皮、大黄、连翘、金银花等成分生物碱、皂苷、黄酮、香豆素、蒽醌、酚酸、环烯醚萜,一测多评技术在黄连质量评价中的应用,黄连药材中的主要有效成分为5个生物碱：药根碱，表小檗碱，连碱，巴马汀，小檗碱中国药典2005版黄连定量评价标准，只以其中一个成分（小檗碱）为指标，不能全面反映其质量，黄柏中也含有大量小檗碱，标准缺乏专属性有必要建立多指标评价标准，但常规的多成分同步定量评价需要多个对照品,黄连药材质量评价研究背景,目前市场上很少有表小檗碱对照品供应，黄连碱价格昂贵2000元/20mg，小檗碱价格相对便宜。在自制表小檗碱和黄连碱的基础上，建立小檗碱与其余四个生物碱（黄连碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱）之间的校正因子，并探讨开展一测多评研究的可行性。,黄连药材质量评价研究背景,黄连药材质量评价研究背景,黄连生物碱结构式,黄连色谱条件优化,HPLC图A-黄连药材样品;B-对照品：1药根碱；2表小檗碱；3黄连碱；4巴马丁；5小檗碱,A,B,混合对照品溶液的制备供试品溶液的制备线性范围检测限和定量限精密度、稳定性、重复性、加样回收试验,方法学考察,黄连药材一测多评方法学的建立,相对校正因子（RCF）的计算公式：,af小檗碱/药根碱f小檗碱/f药根碱,各成分相对校正因子（RCF）,校正因子重现性考察,不同色谱柱和液相色谱仪考察不同流速不同PH值不同实验室考察,不同仪器和色谱柱测得相对校正因子,不同流速相对校正因子,不同pH值相对校正因子,不同实验室测得相对校正因子,不同仪器和色谱柱测得的相对保留值,相对保留值,黄连生物碱色谱峰定位,与常规方法的含量的比较（28批药材）,a一测多评法，b常规外标法,续表,a一测多评法，b外标法,本部分研究结论,小檗碱为黄连中主要药效成分，含量最高，且定量用对照品价廉易得，因此本方法选用小檗碱为内参物，进行一测多评研究；小檗碱对药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的校正因子分别为：1.0886、0.9824、0.9329、1.0083，大致范围在0.91.1之间研究结果经重庆市中药研究院核实（同行论证）研究结果提交四川省药检所复核（药检所复核）研究结果、核实结果、复核结果提交国家药典会（药典会审核）,一测多评技术在药典中的应用,-中国药典2010版新增方法,小檗碱R1+R2=-OCH2O-,R3=-OCH3,R4=-OCH3巴马汀R1=-OCH3,R2=-OCH3,R3=-OCH3,R4=-OCH3黄连碱R1+R2=-OCH2O-,R3+R4=-OCH2O-表小檗碱R1=-OCH3,R2=-OCH3,R3+R4=-OCH2O-,一测多评法同步测定黄连中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱的含量,黄连药材HPLC色谱图,同步评价黄连中多个指标成分,黄连各成分间校正因子的建立,考察了三种色谱柱、两种仪器、三种柱温、三种PH值流动相、三种流速下校正因子重现性的影响，重现性良好，RSD范围为0.41-4.3%；盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀对盐酸小檗碱的相对校正因子分别为：0.971、1.035、0.973，接近于1.0,含小檗碱以盐酸小檗碱计不得少于5.5%，含表小檗碱以盐酸小檗碱计不少于0.8%，含黄连碱以盐酸小檗碱计不少于1.6%，含巴马汀以盐酸小檗碱计不少于1.5%。,新版药典黄连定量评价标准演示,2005版薄层扫描小檗碱不低于3.6%；2010版高效液相色谱法一测多评小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀可控成分达到10%；整体上体现黄连有别于黄柏等。,小檗碱在多种植物中均有大量分布，作为黄连唯一的指标，标准的客观性和专属性较差。,标准的先进性和专属性,三棵针（定性、定量）功劳木（定性、定量）关黄柏（定性、定量）黄连（定性、定量）黄柏（定性、定量）,一测多评法在黄芩药材中的应用,黄芩中四种黄酮类成分,黄芩药材HPLC色谱条件优化,HPLC图A：黄芩混合对照品色谱图；B：样品色谱图（产地兰州）（1：黄芩苷；2：汉黄芩苷；3：黄芩素；4：汉黄芩素）,色谱条件：流动相甲醇（A）-0.2%磷酸水（B），洗脱比例为：0-10min，45%A；10-55min，45%-70%A.；流速1.0mLmin-1；柱温25，检测波长274nm。,黄芩中各成分间的相对校正因子,相对校正因子的重现性考察,不同色谱柱不同仪器重现性考察,a色谱柱型号为：（4.6mm250mm,5m）；b色谱柱型号为：（4.6mm150mm,4m）.,色谱条件1：流动相为甲醇（A）-0.2%磷酸水（B），洗脱比例为：0-10min，45%A；10-55min，45%-70%A；色谱条件2：流动相为乙腈（A）-0.2%磷酸水（B），洗脱比例为：0-10min，23%A；10-20min，23%-35%A；20-40min，35%-50%.,不同流动相组成及配比重现性考察,不同流速下黄芩各成分的校正因子,流速1为：1.0mLmin-1；流速2为：0.8mLmin-1.,不同检测波长下相对校正因子,成分间保留时间差成分间的相对保留值,黄芩待测组分色谱峰的定位,不同色谱柱下目标成分间保留时间差,aRt汉黄芩苷/黄芩苷=Rt汉黄芩苷-Rt黄芩苷；b色谱柱型号为：(4.6mm250mm,5m);c色谱柱型号为(4.6mm150mm,4m),aRRt汉黄芩苷/黄芩苷=Rt汉黄芩苷/Rt黄芩苷；b色谱柱型号为：(4.6mm250mm,5m);c色谱柱型号为(4.6mm150mm,4m),不同规格色谱柱下目标成分的相对保留值,一测多评法同步测定人参中多个皂苷类成分,人参中的4个三醇型皂苷对照品,GinsenosideRg1R1=glu,R2=gluGinsenosideRh1R1=glu,R2=HGinsenosideReR1=glu(21)rha,R2=gluGinsenosideRfR1=glu(21)glu,R2=H,人参中的5个二醇型皂苷对照品,GinsenosideRcR1=glu(21)glu,R2=glu(61)ara(f)GinsenosideRb1R1=glu(21)glu,R2=glu(61)gluGinsenosideRb2R1=glu(21)glu,R2=glu(61)ara(p)GinsenosideRb3R1=glu(21)glu,R2=glu(61)xylGinsenos