甾体激素类药物的分析.ppt

第十章,甾体激素类药物的分析,基本要求,1掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方法之间的关系。2掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3掌握甾体类药物的含量原理与方法。4熟悉甾体类药物杂质检查的方法。,返回,基本结构：环戊烷骈多氢菲,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,概述,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,结构特点,肾上腺皮质激素,氢化可的松,地塞米松磷酸钠,醋酸地塞米松,雄性激素,甲睾酮,雄性激素,丙酸睾酮,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,孕激素,黄体酮,孕激素,醋酸甲地孕酮,雌性激素,炔雌醇,雌性激素,雌二醇,炔诺酮,此外,炔诺孕酮,返回,一、结构与性质,1.肾上腺皮质激素,2.雄性激素及蛋白同化激素,3.孕激素,4.雌性激素,返回,二、鉴别试验,（一）与强酸的呈色反应,甾体激素类药物,呈色,H2SO4H3PO4HClO4HCl,（母核）,与硫酸显色反应,显色荧光加水稀释,泼尼松龙深红絮状灰,泼尼松橙黄蓝绿,炔雌醚橙红黄绿红色,炔雌醇橙红黄绿絮状玫红,醋酸可的松黄或微褪色并澄带橙清,(二)官能团的反应,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐OH,1、C17醇酮基,还原性,呈色反应,此外还有斐林试液、多伦试液,甾酮类激素药物,呈色,羰基试剂,2.C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化钠间二硝基酚芳香醛,3.甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化纳,其他甾体,淡橙色不显色,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,4.有机卤素,茜素氟蓝硝酸亚铈,硝酸硝酸银,AgCl,呈色,雌激素类药物,红色偶氮染料,重氮苯磺酸,5.酚羟基,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,6.乙炔基的沉淀反应,(三)制备衍生物测定m.p.,1.缩氨基脲的生成,m.p.约180（分解）,2.酯的水解,m.p.为150156,-3-酮、苯环、其他共轭结构,（四）UV法,1.结构依据,240nm左右,280nm左右,2.示例,曲安西龙,丙酸倍氯米松,溶剂,甲醇,乙醇,20g/ml,浓度,20g/ml,结果判断,在238nm处有最大吸收,在239nm有最大吸收，A为0.570.60，在239nm与263nm的吸收度比值为2.252.45,结构特征：酚羟基、C17OHC17乙炔基,炔雌醇,（五）IR法,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羟基,醇羟基,1615cm-1,苯环的骨架振动,黄体酮,结构特征：-3-酮、C17-酮基,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,双键,（七）TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,（八）HPLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,返回,三、特殊杂质检查,（一）其他甾体的检查,检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.,检查方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）,（1）TLC法（高低浓度对比法）,判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色,例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1）浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60g/ml层析：供试液点样、展开、斑点检出。对照液判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。,（2）HPLC法（主成分自身对照法）,判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积,硒的检查,（二）,来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,有毒,方法,药物,氧瓶燃烧,二氨基萘比色法测定,（三）有机溶剂残留量的检查,（灵敏度法）,甲醇不得出峰检测限=3.1ng,丙酮5.0%内标法+校正因子,以地塞米松磷酸钠为例GC法,地塞米松磷酸钠,检查甲醇和丙酮,精密称取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)与丙酮100l(79mg)置100ml量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得出现甲醇峰。,（二）游离磷酸盐的检查,地塞米松磷酸钠,对照品比色法,供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝：740nm对照液：同上,（对照液0.0035%KH2PO4）,返回,USP、BP、JP均采用,RPHPLC（大多内标法）,（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）,四、含量测定,测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。,示例：黄体酮的含量测定色谱条件：固定相ODS，流动相甲醇-水（65:35），检测波长254nm，内标物己烯雌酚系统适用性试验：n1000，R符合规定。,测定样品：黄体酮原料、注射液。定量方法：内标法,（二）UV法,-3-酮240nm（）,肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药,苯环280nm（）,雌激素,示例：醋酸地塞米松片的含量测定（1）配制供试液（2）测定：240nm（3）计算,肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,C3酮基,（1）原理,异烟腙（黄）,酮基,异烟肼,-,3,C,HCl,（缩合）,（三）比色法,异烟腙（黄色）,（2）方法,对照品法,（3）讨论,反应速度（反应专属性）,A.,C3=OC17=O、C20=OC11=O不反应,反应专属性C3酮基,B.溶剂的选择,异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇,无水甲醇无水乙醇,C.水分、温度、O2与光线的影响,含水量腙水解A%,不挥发溶剂、不吸收水分时O2与光线无影响,t,D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度,肾上腺皮质激素类,C17-醇酮基,强还原性,（1）原理,2.四氮唑比色法,三苯甲瓒深红,H,蓝四氮唑（BT）,（2）方法,对照品法,B.溶剂、水分的影响,以无醛乙醇为溶剂,C.O2与光线的影响