PCR扩增检测乙肝病毒ppt课件.ppt_第1页
PCR扩增检测乙肝病毒ppt课件.ppt_第2页
PCR扩增检测乙肝病毒ppt课件.ppt_第3页
PCR扩增检测乙肝病毒ppt课件.ppt_第4页
PCR扩增检测乙肝病毒ppt课件.ppt_第5页
已阅读5页，还剩14页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验三：PCR扩增检测乙肝病毒,1,乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，我国发病率很高，HBV的检测极其重要。HBVDNA存在就可以引起乙肝的传染，乙肝病毒基因是乙肝病毒的核心成分，是病毒复制的发动机。,2,PCR技术可以检测出极微量的病毒，是判断其传染性最直接、最可靠的证据。PCR技术已成为公认的对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作最理想的方法之一。,3,一、实验目的1.掌握PCR技术扩增的原理2.熟悉PCR扩增检测乙肝病毒的基本操作过程。,4,二、实验原理聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction)简称PCR,是在体外条件下利用DNA聚合酶、催化一对引物间的特异性DNA片段合成的基因体外扩增技术，它包括三个基本过程：,5,1.变性：加热使双链DNA变为单链2.退火：急速降温使引物和互补模板在局部形成杂交链3.延伸：耐热DNA聚合酶按53方向催化以引物为起始点的延伸反应,6,模板DNA,高温变性,低温退火,引物,适温延伸,经过25-35次循环后，目的片段扩增2n倍,两条子代DNA,一次循环,Tap酶,5,3,3,5,3,5,5,3,5,3,7,三、主要器材及试剂1.主要器材：,9700型PCR仪,电泳槽、电泳仪,8,紫外分析仪,台式高速离心机,9,2.主要试剂：,10,四、操作步骤1.标本处理：取患者血清40l，加入DNA提取液40l，沸水浴10分钟，10000转离心5分钟，取上清液4l做PCR反应。,11,2.加样：加入提取好的标本4l，6000转离心10秒。,12,三个扩增步骤温度及时间,循环次数：25次,3.PCR仪上扩增：,13,PCR仪上扩增,加入标本,离心,6000转离心10秒,14,4.电泳检测：制备2%琼脂糖凝胶,2%琼脂糖的制备：,电泳槽的准备：,称取0.8g琼脂糖,40mlTBE电泳缓冲液（PH8.0)煮沸溶解,加入,冷却,60左右,加入溴乙啶EB20l,倒胶,15,加样：取扩增后的产物10ul点样于凝胶孔,取样,点样,16,电泳：点样端接“-”，稳压，50V，电泳30分钟。五、结果观察：紫外分析仪下观察，出现橙黄色条带则为HBV阳性,HBV阳性,HBV阴性,HBV阳性对照,HBV阴性对照,正极,负极,点样孔,17,五、注意事项1.试剂盒内阳性标本及DNA提取液使用前需充分融化离心。2.反应液的表面为固体封盖剂，电泳取样时从反应管底部吸液。3
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论