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检验医学概论论文 毕业论文 题目：乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证 姓名： 学号： 系别： 年级： 专业： 指导教师： 二一一年十二月 目录 中文文献.英文摘要.前言.错误！未定义书签。 1.材料与方法.错误！未定义书签。 1.1试剂盒. 1.2仪器. 1.3方法. 1.3.2铺板方案. 1.3.3加样步骤. 2.结果. 2.1标准曲线与线性范围. 2.2准确度（回收率）的验证.2 2.3精密度的验证. 2.3.1板内精密度的验证. 2.3.2板间精密度的验证. 2.4检测限（LOD）计算.5 3.讨论.5 3.1乙肝表面抗原定量分析的意义.5 3.2常用定量分析方法.6 3.3方法概述.6 3.4方法学验证内容.6 3.5结果分析及应用评价.7 参考文献.7 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证 摘要 目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml，低浓度样品（1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。 关键词 乙肝表面抗原ELISA定量分析方法学验证 ThereificationoftheHBsAgELISAquantitativemethodology Abstract Object:toverifythequantitativemethodologyofFuzhoublueprintbiologicalengineeringpanytomakesurewhetheritcabeusedtotheanalysisofClinicalSample.Methods:ELISAquantitativemethodology,makeanApplicationofthestandardHBsAgkitfromtheconcentrationof8ng/mldo2timesdilutedsixconcentrationgradienttoconstituteastandardcurve,testingWith6,3,1.5ng/ml3aconcentrationgradient5auratelypreciseanddetection.Results:standardcurve,R2=0.997,theauracyofRSDof1.5ng/mis16.78%，theRSDthatcannotmeetthedemandofng/mlbasiclevelislessthan15%inmon.TheLODis0.172ng/ml,thetestingofLowconcentrationsamples（1.5ng/ml）arelowerthanhighconcentrationsamplesinbothauracyandprecision,whichasaresultmakeitunsuitableforlowconcentrationsampletesting.Conclusion:theELISAquantitativeanalysiskitofHBsAgcannotbeusedfortheanalysisofClinicalSample. Keywords HBsAgQuantitativeanalysisVerificationMethodology. 前言 乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义1。ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。 1.材料与方法 1.1试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。 1.2仪器 酶标仪：Bio-Rad680；洗板机：Bio-Rad1575；超纯水系统：MilliporeElix；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。 1.3方法 1.3.1溶液配置 1PBS缓冲液的配置：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。 标准品的配置：原始标准品浓度为8ng/ml。取6个2mlEP管，分别标记为S1-S6。50ul/well,共1孔需50ul，每孔配置60ul备用，按照下表稀释方案进行稀释。 质控品的配置：50ul/well,共5复孔需250ul，配置300ul备用，取3个2mlEP 1.3.2铺板方案取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条，按照下表铺板方案进行铺板在相应孔中依次加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔50ul。空白对照加入1PBS缓冲液。 1.3.3加样步骤 加入酶标抗体，50ul/well，震荡。37电热恒温培养箱温育60min，取 出后洗板4次，加入A、B液,50ul/well，37电热恒温培养箱温育15min。加入终止液，50ul/well。酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上打开MicroplateManager5.2软件，选择450nm波长（参照波长630nm），设置LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值。 2.结果 2.1标准曲线与线性范围 以HBsAg理论浓度为横坐标，所测OD值为纵坐标作图，绘制标准曲线观察线性关系，结果显示R2=0.9973，显示具有良好的相关性 Absorbance(OD)0123456789 Conc(ng/ml) 2.2准确度（回收率）的验证 质控品理论稀释浓度对应实测浓度值 谈我国检验医学的发展及面临的挑战 摘要多年来，我国检验医学获得长足发展。其已拥有众多亚专业学科；技术类别、水平，亦愈加丰富和获得提升；人才、设备和产业亦发展、更新、壮大。但放眼世界先进水平，仍须研究挑战、赶超医学、生物技术领域的前沿、高端技术，并提升医疗服务层次。 关键词中国检验医学检验医学发展发展挑战 r446.1b1005-0515（xx）-08-294-01 1我国检验医学的发展情况 1.1学科专业发展我国检验医学已建立众多亚分支专业,包括临床的检验、免疫、生化和血液学等。各亚专业发展迅速,如临床生化领域的医学检测：心肌损伤标志物除传统的检测项目外,增加了肌钙蛋白t(i)、脑钠肽(bnp)和同型半胱氨酸等；血脂测定从最基本的胆固醇检测，发展到脂蛋白a(lpa)和高、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)等检测；糖尿病的相关诊断和治疗效果检测,则从单纯的血糖测定发展到糖化血红蛋白和糖化血清白蛋白等新指标。 分支专业有自身免疫、肿瘤免疫、细胞免疫和感染免疫等项目。细胞免疫采用目前最为先进的流式细胞术代替手工方法,可检测白血病免疫分型、活化t细胞、t细胞亚群、nk-t细胞和干细胞等。肿瘤免疫均从定性检测做到定量检测,如癌胚抗原(cea)、甲胎蛋白(afp)及游离前列腺特异性抗原(f-psa)等。 1.2学科技术发展临床血液学的检测从单一的形态学诊断,发展 医学检验分析的质量保证 【摘要】浅谈医学检验分析的质量保证 【关键词】医学检验；质量 医学检验分析的质量保证有前、中、后三个阶段的控制过程,分析中和分析后的质量控制已被广大检验工作者所重视,通过规范操 作、设立室内质控品和室间质评来监控检测的整个过程，使结果分析的准确性有了很大的提高,但分析前质量控制因具有相对不可控性,对检测的结果影响大,在整个检验过程中就显得非常重要。1检验项目的正确选择 检验项目选择是否合理和必要,是检验信息是否有用的前提。随着科技的进步和先进仪器的引进,对于各种疾病的检测有不同的检测项目和方法,对于临床医生来说,熟悉检验科的各种新的检测方法和检测项目就显得很重要,