钙、镁、磷的测定PPT课件.pptVIP

实验血清钙、镁、磷的测定,西安医学院检验教研室,（一）血清钙测定,西安医学院检验教研室,血浆钙的存在形式,血钙,可扩散钙,非扩散钙,离子钙可溶性不解离的钙盐,占血浆总钙60%，能透过毛细血管壁,与血浆蛋白结合，占血浆总钙40%，不能透过毛细血管壁,血浆中直接发挥生理作用的钙,相关知识,血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。总钙测定方法包括同位素稀释质谱法-决定性方法，原子吸收光谱法(AAS)参考方法、分光光度法和络合滴定法等。,分光光度法中以邻甲酚酞络合酮法（OCPC）、甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂比色法（Arsenazocolorimetry）最常用。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。,血清总钙测定邻甲酚酞络合酮比色法,西安医学院检验教研室,掌握：OCPC法测定血清总钙的基本原理及提高准确性的方法。熟悉：血清总钙测定的注意事项。了解：总钙与离子钙的关系,实验目的,邻甲酚酞络合铜是金属络合染料，同时也是酸碱指示剂，在碱性条件下与钙络合，生成紫红色络合物。在600nm处有特征吸收，用8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰，与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血钙含量。,原理,试剂与器材,1.R1：乙醇胺缓冲液。2.R2：OCPC、8-羟基喹啉3.氯化钙标准液：2.50mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即为工作液。4.分光光度计,操作步骤,取试管3支，按下表操作。,加入物（ml）空白管标准管测定管工作液3.03.03.0蒸馏水0.06标准品0.06血清0.06,充分混匀，37水浴5分钟，在波长600nm处，以空白管调零，读取吸光度值。,计算,参考范围：2.032.54mmol/L,用血清或肝素抗凝血浆；不能用钙的螯合剂及草酸盐做抗凝剂的标本；胆红素可产生负干扰，可用血清对照消除。镁离子也可与OCPC试剂产生紫红色络合物，因此，试剂中加入8-羟基喹啉是起络合镁离子的作用，以消除镁离子的干扰。,注意事项,pH对OCPC试剂的显色有很大影响，pH10.512时，反应的敏感性最好，所以选用pH11.0为宜。此法对钙离子有很高的敏感性，测定器皿要洁净，所有试剂应在聚乙烯瓶内保存；且配制试剂最好用高质量的去离子水或重蒸馏水。,临床意义,血钙增高常见于下列疾病：甲状旁腺机能亢进症、代谢性酸中毒、维生素D增多症、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤等。血钙降低见于下列疾病：甲状旁腺机能减退、慢性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬酸盐抗凝血等。,西安医学院检验教研室,（二）血清镁测定,镁是人体内含量占第四位的金属元素，50%以磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中，45%在细胞内液，细胞外液中仅占5%。血清中镁55%为离子型，15%与磷酸盐、枸椽酸盐等形成复合物，30%与蛋白结合。,相关知识,镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法，国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和比色分析，其中甲基麝香草酚蓝、钙镁试剂广泛应用于镁的自动分析或手工操作。,血清镁测定钙镁试剂比色法,西安医学院检验教研室,掌握：钙镁试剂比色法测定血清镁的基本原理。熟悉：有关试剂在反应中的作用。了解：本法检测过程中的注意事项及血镁检测的临床意义。,实验目的,血清中镁在碱性环境中与Calmagite染料生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。与同样处理的标准品比较，可求得镁的含量。溶液中加入EGTA可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除蛋白质而直接测定镁。,原理,试剂与器材,1R1：氢氧化钾、表面活性剂。2.R2：Calmagite、EGTA3.氯化镁标准液：1.0mmol/L工作液：取R1和R2等量混合即为工作液。4.分光光度计,操作步骤,取试管3支，按下表操作。,加入物（ml）空白管标准管测定管工作液3.03.03.0蒸馏水0.03标准品0.03血清0.03,充分混匀，室温放置3分钟，在波长546nm处，以空白管调零，读取吸光度值。,计算,参考范围：0.71.2mmol/L,1.溶血标本对本测定有明显的正干扰；脂血标本应去脂处理后，方可测定。2.试剂宜置于塑料瓶中保存。显色剂已褪色则不可使用。3.试剂防止污染，如自来水、器皿清洗不洁、试剂交叉污染等。4.溶液中的EGTA可消除钙的干扰；表面活性剂则可消除蛋白质的干扰。5.适合于手工操作及大多数自动化分析仪,注意事项,临床意义,血清镁增高：服用治疗剂过量、肾脏疾病、内分泌疾病（甲状腺机能减退等）、多发性骨髓瘤等。血清镁降低：镁摄入减少、镁由消化道丢失、镁由尿路丢失、内分泌疾病（甲亢、醛固酮增多症等）等。,西安医学院检验教研室,（三）血清磷测定,血清中的无机磷主要有H2PO4-和HPO42-两种磷酸盐阴离子。由于这两种阴离子在不同的pH环境中能快速相互转换，因而不能确切的说出无机磷酸盐的分子量。目前常用的测定无机磷的方法有磷钼酸还原法、染料结合法、紫外分光光度法、黄嘌呤氧化酶比色法、同位素吸收质谱法和原子吸收分光光度法。,相关知识,磷测定的决定方法是同位素稀释质谱法。WTO推荐的常用方法是比色法。目前我国推荐的常规方法是以硫酸亚铁或米吐尔（对甲基氨基酚硫酸盐）作为还原剂的还原钼蓝比色法。,血清磷测定还原钼蓝法,西安医学院检验教研室,掌握：还原钼蓝法测定血清磷的基本原理。熟悉：血清磷测定的临床意义了解：本法检测过程中的注意事项,实验目的,在酸性溶液中磷与钼酸铵起反应生成磷钼酸复合物，对甲基氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝，与同样处理的标准液进行比较，可求得血磷的含量。,原理,试剂与器材,1磷工作液：钼酸铵溶液、米吐尔溶液。2.磷标准液：磷酸二氢钾1.29mmol/L3.分光光度计,操作步骤,取试管3支，按下表操作。,加入物（ml）空白管标准管测定管工作液4.04.04.0蒸馏水0.1标准品0.1血清0.1,充分混匀，37水浴5分钟，在波长650nm处，以空白管调零，读取吸光度值。,计算,参考范围：成人0.971.62mmol/L儿童1.452.10mmol/L,1.血标本宜采用血清或肝素抗凝的血浆。应避免使用枸橼酸钠、EDTA和草酸盐作为抗凝剂。2.标本应避免溶血，因为红细胞中含有高浓度的有机磷酯，在贮存期间易水解生成无机磷。3.米吐尔试剂宜少量配置，放置时间不宜过长。4.血清中磷是稳定的，4可稳定数天，冷冻时可稳定数月。避免水分的蒸发,注意事项,临床意义,血清磷增高：肾小管对磷的重吸收增强（甲状旁腺机能减退）；排泄障碍（慢性肾炎晚期、尿毒症）；维生素D过多；多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病