（中药学专业论文）麻叶千里光化学成分研究.pdf

摘 要 目的：分离并鉴定麻叶千里光的化学成分。 方法：采用硅胶柱色谱、sephadex lh-20 凝胶柱色谱等方法进行分离和纯化，根据波 谱学数据和理化性质进行结构鉴定。 结果：分离得到 19 个化合物，利用谱学分析及化合物理化性质鉴定了 15 个化合物的 结构，分别为对苯二酚（hydroquinone，1）、对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid， 2） 、（6r,7as） 6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofuranone， 3、 对羟基苯乙酸 （p-hydroxy benzeneacetic acid， 4） 、 2， 5-二羟基苯乙酸甲酯 （methyl 2,5-dihydroxy benzeneacetate， 5） 、4-甲基邻苯二酚（4-methyl-o-phenol，6） 、-谷甾醇（-sitosterol，7） 、邻羟基苯 甲酸（o-hydroxy benzoic acid，8）、齐墩果酸（oleanolic acid，9）、麻叶千里光内酯 a（cannabilolactonea，10）、山萘酚（kaempferol，11）、绿原酸（chlorogenic acid， 12） 、 3， 4-二羟基苯甲酸 （3,4-dihydroxy benzoic acid， 13） 、 对-羟基苯乙酸甲酯 （methyl p-hydroxy benzeneacetate， 14） 、 2， 5-二羟基苯乙酸 （2,5-dihydroxyl benzeneacetic acid， 15）。 结论：其中化合物 6 为属内首分，化合物 9 和 11 为种内首分。 关键词：麻叶千里光；化学成分；结构鉴定；hplc studies on chemical constituents of senecio cannabifolius less. abstract objective: to study the chemical constituents of senecio cannabifolius less. methods: the compounds were isolated by chromatography on silica gel column, sephadex lh-20 and identified on the basis of physico-chemical constants and spectral analysis. results: 15 compounds were of hydroquinone (1), p-hydroxybenzoic acid (2), (6r,7 as)6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofuranone(3), p-hydroxy benzeneacetic acid (4), methyl 2,5-dihydroxy benzeneacetate (5), 4-methyl-o-phenol (6), -sitosterol (7), o-hy droxy benzoic acid (8), oleanolic acid (9), cannabilolactonea (10), kaempferol (11)， chlorogenic acid (12), 3,4-dihydroxy benzoic acid (13), methyl p-hydroxy benzeneac etate(14), 2,5-dihydroxyl benzeneacetic acid(15). conclusions: among these compounds, compounds 6 were isolated from this generic for the first time and compounds 9,11 were isolated from this plant the first time. key words: senecio cannabifolius less., chemical constituents, structural elucidation, hplc. author:jia hui tutor:wu liju 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 2 缩 略 语 说 明 1h-nmr 核磁共振氢谱 (proton nuclear magnetic resonance) 13c-nmr 核磁共振碳谱 (carbon 13 nuclear magnetic resonance) br 宽的 (broad) s 单峰 (singlet) d 双峰 (doublet) dd 双二重峰 (doubled doublet) t 三重峰 (triplet) m 多重峰 (multilet) hplc 高效液相色谱 (high performance liquid chromatography) ir 红外光谱 (infrared absorption spectrum) uv 紫外光谱 (ultravoilet visible spectrum) 麻叶千里光化学成分研究 1 引 言 麻叶千里光 （senecio cannabifolius less.） ， 别名宽叶返魂草， 为菊科 （compositae） 千里光属（senecio l.）多年生草本植物，生长于山沟林缘及湿草甸上，主要分布于 我国河北、东北等地及日本、朝鲜、前苏联远东地区。该植物通常被用做治疗各类炎 症及病毒性感冒等，在民间广为使用。如今以该植物为原料药的上市药品有返魂草颗 粒、肺宁颗粒、返魂草注射剂等。药效学实验表明，麻叶千里光的水提物除了具有显 著的抗菌、抗病毒作用以外，还有解热、镇痛、止咳、抗炎、平喘、祛痰及增强免疫 的作用。 为了进一步阐明其药效物质基础， 本文对麻叶千里光的化学成分进行了研究。 麻叶千里光粗粉（10kg） ，加 10 倍量的水浸泡，放置一夜,煮沸提 2h,连续提取 3 次， 过滤, 合并提取液,并将其浓缩至密度 1.1 左右 （在室温条件下） 26； 加乙醇 （体 积分数为 0.95）至醇度 0.7,静置 24h，回收乙醇,得浸膏 780g 26。取 500g，经水分散 后,依次用二氯甲烷（ch2cl2） 、乙酸乙酯（etoac） 、正丁醇（n-buoh）进行萃取， 回收溶剂得 4 种萃取物。 采用硅胶柱色谱、 ods 开放柱色谱、 hplc 及 sephadex lh-20 柱色谱等多种分离方法, 从中分离得到 19 个化合物，利用谱学分析及化合物理化性 质鉴定了 15 个化合物的结构，分别为对苯二酚（hydroquinone，1）、对羟基苯甲酸 （p-hydroxybenzoic acid， 2） 、 （6r,7as） 6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofuranone， 3、对羟基苯乙酸（p-hydroxy benzeneacetic acid，4） 、2，5-二羟基苯乙酸甲酯（methyl 2,5-dihydroxy benzeneacetate，5） 、4-甲基邻苯二酚（4-methyl-o-phenol，6） 、-谷甾 醇（-sitosterol，7） 、邻羟基苯甲酸（o-hydroxy benzoic acid，8）、齐墩果酸（oleanolic acid，9）、麻叶千里光内酯 a（cannabilolactonea，10）、山萘酚（kaempferol，11）、 绿原酸 （chlorogenic acid， 12） 、 3， 4-二羟基苯甲酸 （3,4-dihydroxy benzoic acid， 13） 、 对-羟基苯乙酸甲酯（methyl p-hydroxy benzeneacetate，14）、2，5-二羟基苯乙酸 （2,5-dihydroxyl benzeneacetic acid，15）。已知化合物 6 为属内首分，9 和 11 为种内 首分。 经文献调研及化学成分研究表明，麻叶千里光中富含酚酸类化合物。而这类化合 物也是麻叶千里光中抗菌、消炎活性的指标性成分，因此，深度开发麻叶千里光中的 酚酸资源、研究其生理及药理学作用，对于麻叶千里光的深加工及其在医药、保健、 食品领域的应用，具有重大的经济效益和社会效益。 麻叶千里光化学成分研究 3 第一章 千里光属植物的化学成分研究进展 1. 植物资源情况 菊科（compositae）千里光属（senecio l.）植物遍布于全世界，约有 1000 余种， 人们已研究了 270 余种。千里光属是千里光亚族中最大的属。中科院植物研究所陈 艺林教授 1将形态学、花显微形态学以及瘦果解剖学等相关学科结合利用，并仔细 研究了各地植物志，将我国的各个品种进行了系统而全面的整理分类，得出的结论 是：我国有 63 种该属植物，大多数分布于西南山区（浙江、江苏、安徽等地） ，少 部分也产于北部、西北部、东南部及南部（广西、云南等地） 。千里光为菊科千里光 属植物 senecio scandens buch-ham.的干燥地上部分, 是我国常用中药之一，其历史 悠久、疗效显著。在本草拾遗中最早收载,性寒,味苦、辛, 清热解毒,杀虫止痒， 明目退翳。临床上主要用于治疗流行性感冒、肺炎、急性扁桃腺炎等上呼吸道感染， 以及腮腺炎、黄疸型肝炎、急性肠炎、胆囊炎、菌痢、急性尿路感染、痈肿疖毒、 目赤肿瘤翳障、丹毒、干湿癣疮、湿疹、滴虫性阴道炎、烫烧伤等。可供药用的如 千里光（s.scandens buch.-ham.ex d.don） 、麻叶千里光（s.cannabifolius less.）等。 菊 科（菊 科（compositae） 8.千里光族（8.千里光族（senecioneae cass）9.金盏花族（9.金盏花族（calenduleae cass） 8-1.款冬亚族 （ 8-1.款冬亚族 （subtrib.tussilaginae dum.） 8-2.千里光亚族 （ 8-2.千里光亚族 （subtrib.senecioninae dumort.） 8-3.狗舌草亚族 （subtrib.tephroseridinae c . jeffrey et y.l.chen） 8-3.狗舌草亚族 （subtrib.tephroseridinae c . jeffrey et y.l.chen） 8-2-1.合耳菊属 （ 8-2-1.合耳菊属 （synotis） 8-2-2.藤菊属 （ 8-2-2.藤菊属 （cissampelopsis） 8-2-3.千里光属 （ 8-2-3.千里光属 （senecio l.） 8-2-4.野茼蒿属 （ 8-2-4.野茼蒿属 （crassocephalum） 8-2-5.菊芹属 （ 8-2-5.菊芹属 （erechtites rafin） 8-2-6.菊三七属 （ 8-2-6.菊三七属 （gynura cass） 8-2-7.一点红属 （ 8-2-7.一点红属 （emilia cass） 8-2-8.爪叶菊属 （ 8-2-8.爪叶菊属 （pericallis） 组1.羽脉组组1.羽脉组 组2.番红菊组组2.番红菊组 组3.裸缨组组3.裸缨组 组4.曲茎组组4.曲茎组 组5.千里光组组5.千里光组 麻叶千里光（麻叶千里光（s.cannabifolius less.）千里光（千里光（s.scandens buch.-ham.ex.d.don） 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 4 麻叶千里光 千里光 2. 生物碱类 pa 是吡咯里西啶类生物碱，是目前所知最主要的肝毒性成分，pa 本身对肝脏 没有毒性，但其体内代谢产物-代谢吡咯（metabolic pyrroles）有较强毒性。至二十世 纪 50 年代，在全世界 14 类 460 种植物中分离得到大概 300 个 pa 2，绝大部分存在 于菊科的千里光属和 eupatorieae 属、紫草科和大豆科的 crotalaria 属，而植物的主 要来源为菊科的千里光属 3。短期过量摄入主要表现为肝细胞出血性坏死，此外还对 肺、肝、肾、血管、胰腺、胃肠道、骨髓、脑等具缓慢毒性。长期微量摄入则可导致 肝巨细胞症，肝肺静脉闭塞症，脂肪变性，代谢紊乱，胆道上皮细胞增生及肝硬化等 症状，有的甚至还有明显的致癌、致突变及致畸胎作用。 pa 生物碱对人的肝、肾、肺等器官产生严重损害，其结果是不可逆的，并有潜 在的致癌危险，对家畜等动物亦具有明显肝毒性。mclean 和 bull 分别对 pa 进行了 系统的研究，包括生合成途径、类型、其它生物活性以及毒性 4，5。 pa 由千里光次酸（necic acid）和千里光次碱（necine）组成 ，如图 figure 1-1 所示。千里光次酸部分可以是一元酸或者二元酸，通常由 5 至 10 个碳原子组成，且 带有侧链。而千里光次碱部分有两种情况：一是饱和的；二是具有 1，2 位不饱和的 双键。两者可形成 11 至 14 元大环双酯型 pa，或单酯 pa 等结构类型。 麻叶千里光化学成分研究 5 n ohch2oh oh cooh o + o n o o 1 2 35 6 7 8 9 11 13 15 16 necine necic acidpas figure 1-1 the structure of pa and schematic diagram of its formation 对肝脏毒性而言，pa 是目前己知的最主要的有毒成分 6，s.oxiphyllus 尤为突出， 它是本属植物中肝毒最强的一种，而致突变性最强的是肾形千里光碱（senkirkine） 。 具有强烈肝毒毒性的 pa 的结构特点是：在 c-1 与 c-2 间有双键，且双键不饱和。pa 类生物碱本无毒性，其真正有毒成分为代谢吡咯（metabolic pyrroles） ，是肝脏的代谢 产物 26。经肠吸收后，pa 在肝脏酯酶的作用下，千里光次碱和千里光次酸之间的 酯键水解，双酯 pa 转化为单酯 pa，最后产生游离的千里光次碱被排出 26。难水解 的不饱和 pa 在微粒体多功能氧化酶的催化下，氧化产生一种叫代谢吡咯的中间体 （figure 1-2） 。代谢吡咯的亲电性很强，能同有关酶、蛋白、dna 及 rna 迅速地结 合， 产生各种毒性。 从构效关系看， 随着千里光次碱部分的羟基增加， 其毒性减低 2,7。 n o o r2 o figure 1-2 the structrue of metabolic pyrrole pa 的诸多生理活性中，一些有肝毒性，而另一些有明显的抗肿瘤活性，令人惊 异。pa 具有潜在的抗肿瘤活性是因为：pa 在体内代谢，生成的代谢吡咯是一种活性 的烷基化试剂，可以对细胞的有丝分裂有效干扰。因此千里光属植物的全草中有一定 比例的 pa 存在，自然干燥的细茎和叶中 pa 的含量可占干重的 10%左右，总生物碱 含量一般在 7%左右，叶子、果实、种子中含量较多。该属植物 pa 含量达峰是在花 蕾形成期。据 molyneux 报道，从 s.riddellii 的叶中，分离得到的总生物碱为 17.99%， 与同属其它植物相比，生物碱含量更多 8。pa 类有些化合物的相对含量因采集时间 不同而有所差异，如 n-氧化物型，年幼的植物含 n-氧化物比成熟植物高出 45%95% 8。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 6 3. 倍半萜类 倍半萜类化合物是千里光属植物中的另一类特征性化学成分，毒性也很强。科学 研究表明， 从一些千里光属植物中分离得到的呋喃雅槛兰型倍半萜 （furoeremophilane） 和 eremophilanolide 型倍半萜也表现出显著的肝毒性，并产生中毒症状。 二十世纪 80 年代，德国学者 bohlmann 等人调查研究了 23 种千里光属植物的化 学成分后发现，该属植物的化学成分虽然都各不相同，除少数几种含有 eremophilane 类倍半萜之外，大多数种都含有呋喃雅槛兰型倍半萜。 至今从本属植物中已分离得到了近 700 个倍半萜。 千里光属植物中存在的倍半萜 类型主要有:furanoeremophilane（呋喃雅槛兰型倍半萜） ，eremophilane，bisabolane， oplopane，cacalol，eudesmane（桉烷型倍半萜） 10等结构类型（figure 1-3） ， o o 15 14 or 1 2 3 4 5 6 7 8 12 11 13 9 10 furanoeremophilane o 12 13 ro h oh 1 2 3 4 15 14 6 7 8 9 10 5 11 eremophilane o oac or o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 131112 14 15 bisabolane o h h 1 2 3 4 9 8 10 7 65 11 1213 1415 oplopane or1 r r2 o o 1 2 34 5 15 14 6 711 13 12 8 9 10 cacalol 1 2 3 4 5 6 7 8 9 14 11 12 1315 eudesmane figure 1-3 the main types of sesquiterpene from senecio l. 4. 其他类成分 4.1 酚酸类 酚酸类为麻叶千里光中重要活性成分，也是抗菌、消炎的指标性成分。主要有：对羟基苯甲 酸、对羟基苯乙酸、邻羟基苯甲酸，咖啡酸，绿原酸、香荚蓝酸，氢醌，焦粘酸等。 4.2 黄酮类 本属植物中含黄酮类化合物。且千里光经化学预试也显示其中含有黄酮类成分， 如山萘酚等。 麻叶千里光化学成分研究 7 oho ho o oh c ho o oho oho oh oh 2-(2-o-p-hydroxybenzoyl-c-d-glucopyranoxyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone11 oho ho o oh c ho o oho oho oh oh 2-(2-o-p-hydroxybenzoyl-c-d-glucopyranoxyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone11 o o o oh oh oh aco ho oh oh oh okanin 4-methyl 3-o-d-(6-acetyl)glucopyranoside12 o o o oh oh oh ho ho oh oh oh okanin 4-methyl 3-o-d-glucopyranoside12 ho o o oh aco oac oac oh oh oh o okanin 4-o-d-3,4,6-triacetyl)glucopyranoside12 oho oh oh oh oh oh cl- delphinidin glycosides(翠雀素、 飞燕草色素葡萄糖苷）13 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 8 oho oh oh oh cl- pelargonidin glycosides (花葵素葡萄糖苷)13 oho oh oh oh astragaline14 o oho oh oh oh quercetin(槲皮素)15 o oh rutine（芦丁）14，kaempferol-3-o-d-galactoside(山奈酚-3-o-d-半乳糖苷)，q uercetin-5-o-d-glucoside(槲皮素-5-o-d-葡萄糖苷)， isorhamnetin-3-o-d-glucuron ide(异鼠李素-3-o-d-葡萄糖醛酸苷)15，glucosyl-3-quercetine，galactosyl-3-querceti ne，arabinoyl-3-quercetine16，glucosyl-3-quercetine acetyle，glucosyl-3-queroetine dia cetyle，glucosyl-3-kaempferol acetyle， isorhamnetin-3-o-d-galactoside(异鼠李素-3-o- -d-半乳糖苷)，quercetin-3-o-d-galactoside(槲皮素-3-o-d-半乳糖苷)，rhamnosyl -3-quercetine，cinerarin17。 4.3 单萜类21 o o 4-trans-or cis-4,5-dihydrocleviolide o o cleviolide 麻叶千里光化学成分研究 9 4.4 二萜类化合物 h h 1 1 bisabolene(红没药烯)18 h 2 2 sandarocopimardiene(山达海松二烯)18 oh h h o 3 3 8-hydroxy-sandaracopimar-15-en-11-one18 r1 oh h h r2 45678910111213 r1hoac oac ohohohhhohh r2hohhoh osen otigl osenotigl oac oh 4 4 1313 sandaracopimarene derivatives(山达海松烯衍生物)18 or2 coor1 r1r2 14h-l-arabinopyranosyl- 15-d-glucopyranosyl-l-arabinopyranosyl- 14 ent-15-(-l-arabinopyranosyloxyl)-kaur-16-en-19-oic acid19 15 ent-15-(-l-arabinopyranosyloxyl)-kaur-16-en-19-oic acid-d-glucopyranosyl ester19 4.5 三萜类化合物 ho ch2or cooh ho 1r=h 2r=-coch cc h o c h oh3 12 ,3 ,23-trihydroxy-urs-12,19(29)-dien-28-oic acid 20 2 2 ,3 ,23-trihydroxy-urs-12,19(29)-dien-28-oic acid -23-acetyl ester18 3 23-(trans-p-coumaroyloxy)-2 ,3 ,23-trihydroxy-urs-12,19(29)-dien-28-oic acid18 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 10 4.6 莽草酸衍生物 18,24 o o o ph ph o o o ro2c ph ro2cor3 or2 or1 2345678 r1tigltigltiglhactigl tigl r2senhactigl tigl tigl tigl r3 me(ch2)4cotigltigltigl tiglhac 1 4.7 甾体及其糖苷类 ， -amyrin( ， - 香 树 素 ) ， sitosterol-3-o-d-glueuronopyranoside22， campesterol( 菜 油 甾 醇 ) ， -sitosterol(- 谷 甾 醇 ) ， stigmasterol( 豆 甾 醇 ) ， stigmasta-3,5-dien-7-one，stigmasta-4,6-dien-3-one23。 4.8 苯并呋喃类 25 o o ho oo o ho oh oho o r1 r23456 r1hohoch3oh r2hhhoh 12 5. 千里光属植物的药理活性及毒副作用 5.1 药理活性 5.1.1 抗菌作用 千里光属植物抗菌作用的研究较多。千里光对于金黄色葡萄球菌、甲型副伤寒杆 菌、伤寒杆菌均有显著的抑制作用。在较高浓度下，对绿脓杆菌及致病性大肠杆菌也 有一定的抑制作用。千里光水煎剂 ph 大约为 5，将其调节 ph7 为时，抗菌作用不减 反增。千里光中酚酸类成分，如对羟基苯乙酸和氢醌，对肺炎球菌、流感杆菌、金黄 色葡萄球菌、变形杆菌等均有抑制作用；千里光水煎液对淋球菌具高度敏感性；对白 喉杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、大肠杆菌和痢疾杆菌也均有明显的抑制作用。体外实 验表明： 千里光全草水煎液及黄酮提取物对金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌均有明显 的抑制作用，说明含量较少的黄酮类成分也是千里光抗菌的有效成分之一。通过千里 光提取物对大肠杆菌、枯草杆菌抑制作用的实验，得出了结论：对于千里光有效成分 的提取，4 小时最为适宜，千里光提取液中抑菌有效成分可能为小分子物质，这是通 过其有效地抵抗高温、高压的影响而推断出来的，譬如酚酸类化合物。用 75%乙醇提 麻叶千里光化学成分研究 11 取、制备的改良千里光注射液对溶血性链球菌、大肠埃希氏菌有明显的抑制作用，且 体内抗感染作用明显；千里光的体外抑菌效果是应用了中药血清药理学方法，发现不 同剂量的千里光组对试验菌均有抑制作用，且呈一定的量效关系。千里光不同方法的 提取物对肺炎链球菌、 金黄色葡萄球菌 2 种致病菌的抗菌作用比较， 发现 85%醇提部 分抗菌作用最强。总之，血清中所含药物的直接作用是千里光抗菌作用的主要机制， 此外，中药激发或增强机体本身防御能力也有协同作用，因此它反映的是整个机体抗 御外邪的能力。 5.1.2 解热、镇痛作用 麻叶千里光水煎剂可显著抑制由对二甲苯引起的小白鼠耳肿胀、1%角叉菜胶引 起的大鼠足趾肿胀和大鼠棉球肉芽肿。 5.1.3 免疫作用 宽叶返魂草对机体免疫功能具有一定调节作用。 麻叶千里光水煎剂可使小鼠胸腺 萎缩，显著降低脾脏 t 淋巴细胞及其 b 淋巴细胞转化率,表明该植物有抑制体液免疫 应答的活性；同时，使脾细胞产生的 il22 轻度减少，说明宽叶返魂草对细胞免疫应 答抑制不明显。另外，碳廓清实验的结果显示，麻叶千里光可明显降低小鼠碳廓清指 数，表明该植物对非特异性巨噬细胞吞噬功能亦有抑制作用。 5.1.4 抗螺旋体作用 千里光水煎剂浓度为 1:8001:1600 的情况下，对钩端螺旋体的生长有抑制作用。 其抗菌、 消炎指标性成分氢醌对钩端螺旋体的抑制浓度为 1:500000。 千里光的醚提取 液有显著的体外抗螺旋体活性。 5.1.5 抗滴虫作用 麻叶千里光水煎剂在试管中， 对人的阴道滴虫的抑制浓度为 1:40。 其抑制浓度随 着时间的增加而递减，24 小时抑制浓度为 1:40 以上，48 小时为 1:80 以上。 5.1.6 强心作用 从欧产千里光不同部位分离的生物碱或有效成分，可以麻痹运动神经，导致离体 豚鼠的子官收缩，且和洋地黄有一样的强心作用。它的同属植物 seneciosarrace-nius 分离得到的瓶千里光碱（sarracine） ，能降低血压，对大鼠肠管有明显解痉作用。欧 洲、南美洲、非洲及澳洲所产不同种类的千里光，人和牛等家畜食用后可中毒，严重 可导致肝硬化。千里光属中所含 pynolizidine 类生物碱具有抗肿瘤作用，这与引起肝 脏毒性间有一定的关系。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 12 5.1.7 保肝作用 小鼠肝损伤模型是用 ccl4建立的, 对不同剂量的千里光进行了保肝作用研究， 结 果发现千里光可抑制肝脏组织病理学的改变，显著降低血清 alt、ast 的升高，从 而有效保护肝脏功能，整个实验是以联苯双酯作为阳性对照的。同时还发现，随着千 里光剂量的不断增大，alt、ast 在不断下降。这一点表明千里光在一定范围内， 有剂量反应趋势。此观点同一般认为的 pa 类成分具有明显肝毒性的结论相矛盾，究 竟如何？有待进一步深入研究。 5.1.8 清除自由基及抗氧化活性 千里光水煎剂对能够有效抑制大鼠红细胞溶血，大鼠脑、肾匀浆脂质过氧化均可 有效抑制，且超氧阴离子和羟自由基清除活性很强，仅有较小的促氧化作用。 5.2 毒副作用 千里光的水煎剂及片剂口服毒性相当低。用千里光水煎剂在小鼠腹腔注射后，测 得的 ld50为 24 士 3.15g/kg。小鼠每日口服煎剂 3 次，每次剂量 15g/kg，连续给药 7 天，无任何异常反应；每日给小鼠口服 15g/kg 千里光片剂，连续给药 6 天，处死后 将其脏器作病理切片，结果显示：心、肝、肾等各脏器基本正常。在临床上，仅个别 病人服药后有恶心， 食欲减退， 大便次数增多等现象。 极少数病人可发生过敏性药疹， 应用抗过敏药物即可好转。 千里光全草有小毒，为中国植物图谱数据库收录的有毒植物。小鼠腹腔注射 15g/kg 全草水煎剂，3 至 4 分钟，2/5 小鼠惊厥死亡；ld50为 23g/kg。 6. 麻叶千里光的临床应用 麻叶千里光是菊科千里光属植物宽叶返魂草的干燥全草。始载于新华本草纲 要 ，为多年生草本植物。据本草记载：返魂草具有清热解毒、理气化痰、止咳平喘、 涩肠止泻之功效。原为长白山一带流行的民间用药，治疗感染性危重症，相传有起死 还魂的作用，故称为返魂草。其临床应用如下： 6.1 细菌性结膜炎 临床应用的返魂草滴眼液，主要成分是返魂草，由肺宁注射液配制而成。在细菌 性结膜炎的临床治疗过程中发现，返魂草滴眼液与利福平滴眼液相比较，药效占明显 优势。结合中医学理论证明：在五轮中白晴病属于气轮，在脏属肺，而肺又属金，主 皮毛，火盛克金，所以眼睛易受风、火、燥邪侵犯，肺经气分壅热则可致眼球结膜充 血或水肿；肺热迫血妄行或血热妄行则导致结膜下出血。由此可见，清热解毒的中药 麻叶千里光化学成分研究 13 显示抗菌疗效良好。 6.2 肺病 自 2000 年以来，返魂草作为治疗肺病的新药被很多医药生产企业研究开发，上 市产品如肺宁颗粒、返魂草冲剂、返魂草颗粒、返魂草注射剂等。 6.3 呼吸道感染 现代医学理论认为,返魂草的中药制剂能有效扩张支气管，缓解支气管平滑肌痉 挛。其机理可能与环腺苷磷酸与环鸟苷磷酸的比值（camp/cgmp）升高有关；同时 也能抑制肥大细胞释放组胺、 慢反应物质 （srs2a） 嗜酸性粒细胞趋化因子 （ecf2a） 等化学物质,从而缓解支气管痉挛，减轻咳嗽。对于肺内感染、急性呼吸道感染、慢 性支气管炎以及喘息性支气管炎等症状，返魂草冲剂确有良好的治疗效果。 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 14 第二章 麻叶千里光化学成分的分离与结构鉴定 1. 前言 麻叶千里光又名宽叶返魂草，为菊科植物麻叶千里光（senecio cannabifolius less.）的干燥全草。麻叶千里光水提物在临床具有较明显的抗菌、抗病毒作用，显著 的解热、镇痛、抗炎、祛痰、止咳、平喘及增强免疫的作用。本论文采用多种色谱分 离方法，对其水提取物进行了化学成分的分离。 麻叶千里光全草（10kg） ，用 10 倍量的水浸泡，放置一夜,煮沸提取 2h，连续提 取 3 次, 过滤, 合并提取液,将其密度浓缩为 1.1 左右（室温条件下） 26；加乙醇（体 积分数为 0.95）至醇度 0.7,静置 24h，回收乙醇,得浸膏 780g 26。取 500g,用适量水 溶解,再依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到氯仿层（5g） 、乙酸乙酯 层（23.8g） 、正丁醇层（108g）以及水层 26。采用硅胶柱色谱、sephadex lh-20 柱色 谱、ods 柱色谱等多种分离手段，对各萃取物进行分离得到 19 个化合物，利用谱学 分析及化合物的理化性质鉴定了其中 15 个化合物的结构，分别为对苯二酚 （hydroquinone，1） 、对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid，2） 、 （6r,7as） 6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofuranone ， 3 、 对 羟 基 苯 乙 酸 （ p-hydroxy benzeneacetic acid，4） 、2，5-二羟基苯乙酸甲酯（methyl 2,5-dihydroxy benzeneacetate， 5） 、4-甲基邻苯二酚（4-methyl-o-phenol，6） 、-谷甾醇（-sitosterol，7） 、邻羟基苯 甲酸（o-hydroxy benzoic acid，8） 、齐墩果酸（oleanolic acid，9） 、麻叶千里光内酯 a （cannabilolactonea，10） 、山萘酚（kaempferol，11） 、绿原酸（chlorogenic acid，12） 、 3，4-二羟基苯甲酸（3,4-dihydroxy benzoic acid，13）、对-羟基苯乙酸甲酯（methyl p-hydroxy benzeneacetate， 14） 、 2， 5-二羟基苯乙酸 （2,5-dihydroxyl benzeneacetic acid， 15）。已知化合物 6 为属内首分，9 和 11 为本种植物中首次分离得到，化合物结构 及鉴定方法见 table 2-1。 table 2-1 structures of compounds 1-16 isolated from senecio cannabifolius no. name structure main iden. methods 1 1，4-benzenediol oh ho 1h nmr 13c nmr 麻叶千里光化学成分研究 15 2 p-hydroxybenzoic acid cooh ho tlc 3 （6r,7as） 6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h) -benzofuranone o ho h o 1h nmr 13c nmr 4 p-hydroxy benzeneacetic acid ho cooh 1h nmr 5 methyl 2, 5-dihydroxy benzeneacetate ho oh ch2cooch3 1h nmr 6* 4-methyl-o-phenol ho ho ch3 1h nmr 7 -sitosterol ho tlc 8 o-hydroxy benzoic acid cooh oh tlc 9# oleanolic acid cooh ho 1h nmr 13c nmr 10 cannabilolactonea o o o ho ch2oh 1h nmr 13c nmr 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 16 11# kaempferol oho oh oh oh o 1h nmr 13c nmr 12 chlorogenic acid o o ho ho ooh ho oh oh tlc 13 3,4-dihydroxy benzoic acid ho hocooh tlc 14 methyl p-hydroxy benzeneacetate ho ch2cooch3 1h nmr 13c nmr 15 2,5-dihydroxyl benzeneacetic acid ch2cooh ho oh 1h nmr 13c nmr *标示为属中首次分离 #标示为种中首次分离 2. 化合物结构解析 化合物 1 白色针晶（环己烷） ，m.p.170171oc，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，示含有酚 羟基。1h-nmr（300mhz，dmso-d6）谱只显示一组质子信号 6.65（4h，s） 。13c-n mr（75mhz，dmso-d6）中存在两组碳信号，推测该化合物具有对称结构 26。1h-n mr 谱中 ：6.65（4h,s,h-2,h-3, h-5, h-6） 。13c-nmr 谱中 ：151.2（c-1,c-4）,11 6.7(c-2,c-3,c-5,c-6)。以上数据与文献 27中对-苯二酚数据基本一致,故将化合物 1 确定为对-苯二酚（1，4-benzenediol） 26。结构如下： oh ho 1，4-benzenediol 化合物 2 麻叶千里光化学成分研究 17 白色针晶（乙酸乙酯） ，m.p. 213214，三氯化铁-铁氰化钾反应呈阳性，示为 含有酚羟基；溴钾酚绿反应呈阳性,示为含有羧基。tlc 斑点灰色，与已知对照品对 羟基苯甲酸标准品共薄层，在三种溶剂系统下 rf 值均一致,混合后熔点不下降，故鉴 定化合物 2 为对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid） 。结构如下： cooh ho p-hydroxybenzoic acid 化合物 3 无色液体，1h-nmr（dmso-d6,300mhz,）谱的 sp2杂化质子区中，存在三个 烯氢质子。其中的一组质子信号 6.58（1h,dd,j =2.0,10.0hz） 、6.29（1h,br.d,j =10.0hz）,由它们的化学位移值以及偶合常数推测为顺式偶合烯氢质子信号 26。 13c-nmr（dmso-d6,300mhz,）给出八个碳信号，sp2 杂化区存在五个碳信号，即 结构中的 173.7（羰基碳） 、165.1（烯季碳） 、以及 146.7、119.5（烯氢碳） 26。 该化合物的 1h-nmr 谱中， 6.58 的 4 位质子与 5.03 的 7a 位质子存在 j=2.0hz 的 w 型远程偶合，而与 5.93 的 3 位质子不存在明显的烯丙偶合 26。根据梁晓天编著的 高分辨氢谱的解析和应用第 301 页所述“丙烯偶合当双面夹角 为 0或 180时， 4j 等于零；当 =90时，4j 值最大” ，因此推测 6.58 的 4 位质子与 5.93 的 3 位质 子处于同一平面，其二面角接近 0，迫使六元环以扭椅式构型存在 26。另外，6.29 的 5 位质子为一宽双重峰，除与 6.58 的 4 位质子以 j=10.0hz 偶合裂分外，几乎看不 到被其他质子裂分的样子，所以推测 h-5 与 h-6 的两面角接近 90 26。nmr 数据如 下表： table 2-2 nmr spectra data of compound 3 (300 mhz，dmso-d6) no 13c-nmr 1h-nmr 2 173.7 3 110.7 5.93(1h,s) 3a 165.1 4 119.5 6.58(1h,dd,2.0,10.0hz) 5 146.7 6.29(1h,br.d,10.0hz) 6 66.0 4.45(1h,ddd,5.2,6.4,10.4hz) 7 40.0 2.67(1h,ddd,5.2,5.2,10.4hz) 1.44(1h,td,10.4,13.2hz) 7a 78.5 5.03(1h,ddd,2.0,5.2,13.2hz) 6-oh 5.54(1h,d,6.4hz) 陕西中医学院 2011 届硕士学位论文 18 以上数据与文献 27中（6r,，7as）6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofuranone 数 据基本一致,故将化合物 3 确定为（6r,，7as）6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofura none 26。结构如下： o ho h o （6r,7as）6-hydroxy-7,7a-dihydro-2(6h)-benzofuranone 化合物 4 白色针晶（环己烷） ，m.p.151153，三氯化铁-铁氰化钾反应呈阳性，示为含 有酚羟基；溴钾酚绿反应呈阳性，示为含有羧基的酚酸类化合物 26。1h-nmr()谱显 示苯环对位取代的特征偶合系统:7.02 (2h , d , j = 8.4hz)和 6.67 (2h , d , j =8.4hz)。 1h-nmr(400 mhz ,dmso-d6 , ):7.02 (2h ,d , j =8.4 hz, h-2, h-6)、6.68(2h ,d , j = 8.4hz ,h-3 ,h-5)、3.41( 2h , s , h-7) 26。经与文献27对照，故鉴定化合物 4 为对-羟 基苯乙酸（p-hydroxy benzeneacetic acid） 26。结构如下： ho cooh p-hydroxy benzeneacetic acid 化合物 5 白色针晶（丙酮） ，m.p.117119，三氯化铁-铁氰化钾反应呈阳性，示含有酚 羟基。 1h-nmr（300 mhz, dmso-d6）谱中 ：6.56（1h，d，j = 8.4 hz） 、6.47（1h, dd, j = 8.4, 2.8 hz）和 6.52（1h, d, j = 2.8 hz）为苯环 abx 偶合系统质子信号 26。 1h-nmr（300 mhz, dmso-d6） ，8.72（1h, s, 5-oh） ，8.62（1h, s, 2-oh） ，6.56 （1h, d, j = 8.4hz, h-3） ， 6.52 （1h, d, j = 2.8hz, h-6） ， 6.47 （1h， dd， j = 8.4, 2.8hz， h-4） ，3.57（3h, s, h-9）, 3.46（2h, s, h-7） 26。以上数据与文献27中数 2，5- 二羟基苯乙酸甲酯数据基本一致,故将化合物 5 确定为 2，5-二羟基苯乙酸甲酯 （methyl 2, 5-dihydroxy benzeneacetate） 26。结构如下： ho oh ch2cooch3 methyl 2, 5-dihydroxy benzeneacetate 化合物 6 白色结晶，m.p.6466,三氯化铁-铁氰化钾反应为阳性，示含有酚羟基 26。 麻叶千里光化学成分研究 19 1h-nmr(300mhz,dmso-d6)谱中 ：7.08（1h, d,