乳及乳制品中蛋白质检测技术的研究进展.docx

宋思远，李巧玲，刘英华，等 乳及乳制品中蛋白质检测技术的研究进展j 江苏农业科学，2012，40( 5) : 279 282乳及乳制品中蛋白质检测技术的研究进展宋思远1 ，李巧玲1 ，刘英华2 ，邢健1( 1 河北科技大学生物科学与工程学院，河北石家庄 050018; 2 河北科技大学分析测试中心，河北石家庄 50018)摘要: 总结了乳及乳制品中蛋白质检测的方法，综述了各方法的研究进展情况，并对几种方法进行了对比分析。关键词: 乳; 乳制品; 蛋白质; 检测方法中图分类号: ts252 1文献标志码: a文章编号:1002 1302(2012)05 0279 03离5 。然而，刘莹等发现三氯乙酸 凯氏定氮法测定添加了三聚氰胺的液态奶中蛋白氮含量比理论值偏高，这是因为三聚氰胺不溶于 15% 三氯乙酸溶液，使得三聚氰胺在三氯乙酸 作用下无法与液态乳蛋白质分离6 。说明三氯乙酸 凯氏 定氮法的局限性在于其不适用于人为添加不溶或微溶于三氯 乙酸溶液的非蛋白含氮物质的乳品中的蛋白氮测定。蛋白质含量是乳制品的重要指标之一。近年来，一些不法分子和商家为了提高乳和乳制品中蛋白质的含量，谋取利 益，屡屡对乳和乳制品进行掺假。2008 年，三聚氰胺事件的 出现给我国乳业带来一次空前沉重的打击，同时人们也清楚 地意识到，掺假者在巨大利润的驱使下正在不断变换着掺假 手段和技术，以应对检测。乳品中蛋白质的掺假主要包括向 原料乳及乳制品中加入豆奶、胶原水解蛋白、尿素、三聚氰胺、 铵盐、亚硝酸盐等蛋白质混合物、变性物和非蛋白氮等。本文 重点综述了蛋白质检测的传统方法以及近年新出现的一些新 技术。1 2分光光度法分光光度法主要包括双缩脲法、福林 酚法、考马斯亮蓝法及紫外吸收法。双缩脲法 双缩脲( nh3 conhconh3 ) 是 2 分子的脲1 2 1经 180 加热放出 1 分子氨后得到的产物，在强碱溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物，成为双缩脲反应。凡具有 2个酰胺基或 2 个直接连接的肽键，或问隔 1 个碳原子相连的肽键结构的化合物都可以发生双缩脲反应7 。由于蛋白质分子中含有多个肽键，在碱性溶液中与铜离子络合成紫红色 络合物，在一定条件下其颜色深浅与蛋白质含量成正比，而与 蛋白质分子量及氨基酸组成无关，该络合物在 540 nm 处有最 大吸收峰8 ，据此可用吸收光度法测定蛋白质含量。该方法 的优点是速度快，因此常用于不需要十分精确的蛋白质快速 检测中。吴文卫等利用双缩脲试剂和 723 型分光光度计通过 试验发现，工作曲线在 0 0 20 g /100 ml 蛋白质浓度范围内 线性关系良好，线性相关系数为 0 999 5，平均加标回收率为92% 108% ，相对标准偏差小于 5% ，方法的检出限为 0 3 mg / ml9 。双缩脲分光光度法是利用肽键的特征性反应，而三聚氰胺中没有肽键，不能与双缩脲试剂反应产生有色物质，其缺陷是不能区分真蛋白与水解蛋白等小肽类非蛋白 含氮物5 。刘莹等经过改良之后又提出了一种经三氯乙酸 使蛋白质沉淀后，用双缩脲比色法测定沉淀物中蛋白质含量 的三氯乙酸 双缩脲比色法( t + b 法) 6 。经与双缩脲法的 对比试验得出，t + b 法 由于经过三氯乙酸前处理，使水解蛋 白、尿素、甘氨酸等非蛋白含氮物均可与蛋白质分离，所以 t + b 法不仅可以较为准确地测定含有三聚氰胺及尿素、甘氨 酸等非蛋白氮液态乳中真实的蛋白质含量，而且还可以较为 准确地测定添加水解蛋白液态乳中真实的蛋白质含量。1 2 2 福林 酚试剂法 福林 酚法( folin 酚试剂法， lowry 法) 是由 lowry 在双缩脲方法的基础上发展的，他在双 缩脲试剂的基础上又增加了一种增强显色的试剂 磷钼酸和 磷钨酸的混合液，它们被蛋白质中酪氨酸残基的酚羟基还原， 产生深蓝色( 钼蓝和钨蓝的混合物) ，以增加显色量，从而提蛋白质的国标检测方法1三聚氰胺事件之后，政府及相关部门对食品尤其是乳制品中蛋白质加大了检测力度。2010 年 6 月 1 日实施了新的 国家标准，即 gb5009 52010食品中蛋白质的测定，该标 准代替了 gb / t 5009 52003，并对原标准部分内容进行了 修改和补充1 。1 1凯氏定氮法凯氏定氮法的原理: 食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，用酸的消 耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量1 。但是凯氏定氮法 测量出的是乳中的粗蛋白2 ，也就是说，一旦乳中被掺入非 蛋白氮( npn) 用此方法无法检出。由于凯氏定氮法的局限 性，国际标准 iso89685: 2001 / idf20 5: 20013 采用三氯 乙酸 凯氏定氮法来解决这个问题。邵秋荣等也做了相关试 验，用 12% 的三氯乙酸沉淀乳与乳制品中的原蛋白，过滤沉 淀后，检测乳与乳制品中的非蛋白氮的含量，再与凯氏定氮法 结合，从而测出样品中非蛋白氮的含量4 。这种方法的原理 是，利用溶解性的不同将乳品中真蛋白与非蛋白含氮物分收稿日期: 2011 10 16基金项目: 教育部留学回国人员科 研 启 动 基 金 ( 编 号: 教 外 司 留20091001 号) ; 河北省石家庄市科学技术研究与发展计划( 编 号: 11713026a) ; 河北省科技支撑计划。作者简介: 宋思远( 1987) ，女，河北石家庄人，硕士研究生，研究方 向为食品安全与检测。e mail: 112798368 qq com。通信作者: 李巧玲，博士，副教授，硕士生导师，研究方向为食品安全 与检测。e mail: lql98119 126 com。 280 江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 5 期高检测蛋白质的灵敏度。该测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，可检测的最低蛋白质量达 5 g，通常测定 范围是 20 250 g; 缺点是费时较长，要精确控制操作时间。 因 lowry 反应的显色随时间的延长不断加深，因此各项操作 必须精确控制时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一 性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样 容易干扰 lowry 反应，而且对后者的影响更大10 。1 2 3 考马斯亮蓝法 该方法是由 bradford 等于 1976 年建 立的一种测定微量蛋白质的方法11 。考马斯亮蓝 g 250 染 料所含的疏水基团在酸性条件下与蛋白质的碱性氨基酸特别 是精氨酸及芳香族氨基酸残基通过疏水作用结合形成蓝色蛋 白质染料复合物，在 595 nm 处有最大吸收峰，在一定的蛋白 质浓度范围内蛋白质染料复合物在 595 nm 处的吸光度与蛋 白质含量成正比，用于测定蛋白质的含量12 。南亚等用配制 好的考马斯亮蓝显色剂与样品混合，3 min 后用 722 型分光光 度计在 595 nm 波长下进行比色，试验结果证明考马斯亮蓝法 精密度高、稳定性和重现性好、抗干扰能力强、对仪器要求较 低、简单快捷、灵敏度高( 比 lowry 法约高 4 倍) 13 。赵静等对以上几种蛋白质的测定方法在液态乳中的适用 性作了对比，试验结果表明，利用凯氏定氮法难以准确测定添 加非蛋白氮后液态乳中蛋白质的真实含量14 。以牛血清蛋 白作标准曲线时，福林 酚法、考马斯亮蓝法和 t + b 法测定 的液态乳蛋白质量分数均与液态乳蛋白的实际值有显著差 异，难以真实反映液态乳的蛋白含量。以酪蛋白作标准曲线 时，福林 酚法测定的液态乳蛋白含量与液态乳的实际蛋白 质量分数有极显著差异; 考马斯亮蓝法和 t + b 法则能较好 地反映液态乳的真实蛋白含量，考马斯亮蓝法灵敏度高，对于 液态乳需要经过稀释才能进行测量，而 t + b 法则不用。1 2 4 紫外吸收法 利用紫外分光光度计测定蛋白质的方 法大致可分为 2 类: ( 1) 一类是用于测定掺假样品中的羟脯 氨酸含量，以 n，n 二甲基 4 氨基苯甲醛溶液作为显色 剂，反应生成红色化合物，用紫外可见分光光度计在 558 nm 处测吸光度，从而得出羟脯氨酸的质量浓度。动物胶原水解 蛋白是一种廉价的蛋白原料，有些就是皮革工业中的下脚料， 掺入到乳制品中会提高蛋白质含量，能使不法分子获取暴利。 而胶原蛋白中特有的氨基酸就是羟脯氨酸，目前都是通过检 测羟脯氨酸而达到测定动物胶原水解蛋白的目的。测定原理 是胶原蛋白在浓酸或浓碱的条件下，经过高温长时间水解，彻 底变成游离的氨基酸，其中的羟脯氨酸首先用氯胺 t 氧化 生成含 吡 咯 环 的 物 质，然 后 以 高氯酸溶液除去剩余的氯 胺 t，加入 n，n 二甲基 4 氨基苯甲醛溶液作为显色剂， 生成红色化合物，用紫外可见分光光度计，在 558 nm 处测吸 光，得羟脯氨酸的质量浓度14。李景红等在浓盐酸条件下，110 水解 6 h，使胶原蛋白彻底变成游离的氨基，依照上述 原理测得羟脯氨酸的质量浓度，最小检出量为 7 0 mg / l15 。( 2) 另一类是利用蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨 酸残基在 280 nm 处具有紫外吸收的原理，其吸光度与蛋白质 含量成正比，从而可以直接测定蛋白质含量16 。陈静等在乳 样品中加入氯化钠溶液稀释定容后，离心 10 min，采用紫外分 光光度计，在 280 nm 处测定其吸光度，建立分光光度法测生 鲜牛乳中的真蛋白质量浓度的分析方法，测定的相对标准偏差为 2 06% ，并通过人为添加氯化铵、硫酸铵、尿素等物质，确定非蛋白类含氮物质对分光光度计检测真蛋白质量浓度的结果无影响17 。1 3杜马斯燃烧法杜马斯燃烧法包括样品燃烧、氮的还原、气体净化及检测等步骤。样品燃烧后生成的氮氧化物在钨上还原为分子氮，分子氮由二氧化碳载气运送到 tcd 热导检测器，氮气体积分 数引发一种电子测量信号，经过标准物质独立校正被测样品 中氮含 量，然后转换为蛋白质的含 量18 。 早 在 1998 年 etheridge 等采用杜马斯燃烧法和凯氏定氮法分别对动物饲 料成分中的氮含量进行了比较，通过 36 种样品的测定结果可 以看出凯氏定氮法测定样品中含氮量值比杜马斯燃烧法测定 的含氮量值偏低，二者存在一定的相关性，但结果相差不大， 不过与凯式定氮相比，杜马斯燃烧法试剂用量少且省时，可以 缩短测定时间和减少测定费用19 。2004 年，saint denis 等 对杜马斯燃烧法测定蛋白质的条件进行了优化，并将该方法 成功地应用到牛奶总氮的测定，将传统凯氏定氮法的 2 3 h 工作缩短到 5 min20 。杜马斯燃烧法的不足之处在于同凯式定氮一样，无法区 分样品中蛋白质氮和非蛋白质氮。2 检测蛋白质的新技术2 1 高效液相色谱法若不只局限于乳制品，羟脯氨酸的测定方法除了上述提到的比色法21 外，还有氨基酸分析仪法、hplc 法22 、电泳法 等。李景红等建立了采用高效液相色谱测定牛乳中掺加胶原 水解蛋白的方法，其基本原理是先通过高效液相色谱法测得 羟脯氨酸的含量，再由测得的羟脯氨酸含量换算得出乳中掺加的胶原水解蛋白的 量23 。 以 symmetry c ( 150mm 183. 9 mm 0 5m) 为色谱柱，2，4 二硝基氟苯为衍生试剂，梯度洗脱流动相 a 为 0 05 mol / l 乙酸钠缓冲溶液 ( ph 值6. 5，含 10 ml / l 四氢呋喃) ，流动相 b 为乙腈 水( 体积比1 1) 。羟脯氨酸质量分数在 2 10 mg / l 的范围内与峰面积之间具有良好的线性关系，检出限为 2 5mg / l。2 2电泳法2 2 1 聚丙烯酰胺凝胶电泳 高巍等利用 sds 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对牛乳进行快速质量检测。通过对试验条件的摸索得出，快速聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定牛乳蛋白质的 最佳条件是: 用 8% 分离胶在 120 v 电压下电泳，使用超级灵 敏度蛋白质电泳快速染液染色，煮沸染色 1 min，振荡10 min， 可实现快速鉴定牛乳蛋白的目的24 。毛细管电泳 利用毛细管电泳，可以基于酪蛋白和乳2 2 2清蛋白占总蛋白的比例间接测定乳制品中是否掺假。牛奶中蛋白质的质量分数为 3% 3 5% ，其中约 80% 为酪蛋白，20% 为乳清蛋白，这二者的含量在牛奶蛋白质中基本稳定，尤其是酪蛋白占的比重较大25 。基于这个原理，可以通过间接测定其质量分数确定掺假情况。宋宏新等选择未涂层的熔融 石英毛细管进行蛋白分离，电泳优化条件为磷酸盐缓冲液( ph 值 2 5 ) ，柱温 35 ，分离电压 26 kv，紫外检测 波 长214 nm，牛乳及 各 种 掺 假 牛 乳 在 30 min 内得到较好的分 离26 。试验通过对牛乳混样与不同比例的掺假( 大豆分离蛋宋思远等: 乳及乳制品中蛋白质检测技术的研究进展 281 白、明胶、乳清蛋白) 乳比较分析，可以确定出掺假蛋白的特征峰。此法可用于蛋白质定性测定，且通过峰面积可以半定 量测定牛乳中掺假蛋白的添加比例。miralles 等则依据基于 乳清蛋白的原理，使用毛细管电泳、十二烷基磺酸钠毛细管电 泳、四阶导紫外分光法 3 种方法测定生鲜乳、巴氏杀菌乳、 uht 灭菌乳的乳清蛋白与乳总蛋白比值，试验结果表明，这 种检测方法不受牛奶加工过程中热处理的影响27 。但是目 前，毛细管电泳仪器价格较高，使其普及率较低。参考文献:1gb 5009 52010 食品中蛋白质的测定s 北京: 中国标准出版社，20102盛成乐 关于凯氏定氮法测定蛋白质的几个问题j 中国酿造，2002( 2) : 43 443barbano d m iso 8968 5: 2001 / idf 20 5: 2001 milk deter-mination of nitrogen content part 5: determination of protein nitro-gen contents american: the international organization for stand-ardization and international dairy federation，20014邵秋荣，张 文，方邢有 乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定j 分析实验室，2009，28( 5) : 240 2415杨 光，王加启，卜登攀，等 乳及乳制品蛋白质掺假检测研究进展j 食品科学，2010，31( 9) : 306 3126刘 莹，傅泽田，侯彩云，等 人为添加三聚氰胺液态乳中蛋白质含量测定方法的研究j 中国农业大学学报，2009，14( 2) : 22 267李宏梁，丁 慧，郭 文，等 双缩脲法和凯氏定氮法测定牛乳中酪蛋白质量分数的比较j 食品科学，2010，35( 8) : 229 2318张厚峰，张淑萍 双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的比较研究j 中国饲料，2008( 7) : 34 389吴文卫，雷金宝，张光明，等 双缩脲 分光光度法测定乳与乳制品中蛋白质含量j 中国卫生检验，2008，18( 7) : 1335 133610许家喜 蛋白质的检测方法与乳制品中蛋白含量测定j 大学化学，2009，24( 1) : 66 6911bradford m m a rapid and sensitive method for the quantitation ofmicrogram quantities of protein utilizing the principle of protein dyebindingj analytical biochemistry，1976，72: 248 25412王爱军，王凤山，王友联，等 低浓度蛋白质含量测定方法的比较j 中国生化药物杂志，2003，24( 2) : 78 8013南 亚，李宏高 考马斯亮蓝 g 250 法快速测定牛乳中的蛋白质j 检测与分析，2007，10( 12) : 41 4414李启明，印佰星，顾瑞霞 原料乳微生物特性对 esl 牛乳货架期的影响的研究j 中国乳品工业，2005( 7) : 17 1915李景红，杨再山，孟祥晨 比色法检测乳中掺加的动物胶原水解蛋白j 中国乳品工业，2007，35( 9) : 50 5216田志梅，张永顺 紫外分光光度法快速测定液态奶奶粉中蛋白质含量j 中国卫生检验杂志，2008，18( 2) : 263 26417陈 静，王玉英，王婷婷，等 生鲜牛乳真蛋白快速检测方法j 中国乳品工业，2010，38( 11) : 50 5218梁芳慧，董丽丹，安卫东，等 乳及乳制品中蛋白质检测技术的研究进展j 现代科学仪器，2010，12( 6) : 154 15619etheridge r d，pesti g m，foster e h a comparison of nitrogen val-ues obtained utilizing the kjeldahl nitrogen and dumas combustionmethodologies ( leco cns 2000 ) on samples typical of an animalnutrition analytical laboratoryj animal feed science and tech-nology，1998，73: 21 2820saint denis t，goupy j optimization of a nitrogen analyser based onthe dumas methodj analytica chimica acta，2004，15: 191 19821prockop d j pleasant surprise en rout from the biochemistry of col-lagen to attempts at gene therapyj biochemical society transac-tion，1999，27: 15 3122bergman l，loxkey r two improved and simplified methods for thespectrophotometric determination of hydroxyprolinej analyticalchemistry，1963，35: 1961( 下转第 282 页)2 3近红外光谱法近红外光谱主要是由于分子振动的非谐振性使分子振动从基态向高能级跃迁时产生的。它常常受含氢基团 xh( c、n、o) 的倍频和合频主导，所以在近红外光谱范围内，测量的主要是含氢基团 xh 振动的倍频和合频吸收。因此，通过扫描样品的近红外光谱，可以得到样品中有机分子含氢基团的振动信息。牛奶中的大部分有机基团如脂肪、蛋白质、 糖类、水溶性盐类、水溶性维生素等含有各种氢基团，通过对 牛奶的近红外光谱分析可以测定这些成分的含量，从而可以 迅速鉴定牛奶28 。常敏等用近红外漫反射光谱技术对奶粉 蛋白质含量的快速无损检测进行了研究，以化学分析值作参 照，采用偏最小二乘回归算法建立奶粉光谱信息和蛋白质含 量的定量模型，预测均方根差为 0 68729 。采用波长选择对 模型进行优化后，波长点从 1558 个减为 11 个，大大加快了运 算速度。李晓云等采用便携式近红外光谱仪结合偏最小二乘 回归法研究了牛奶脂肪蛋白质和干物质含量的测定方法，建 立了近红外漫反射定量分析模型30 。2 4 低场核磁共振法低场核磁共振仪具有迅速、准确测定的特点，测定样品时不需要侵入样品内部，对样品不产生污染与破坏，一般不受样 品状态、形状和大小的限制31 。目前，低场核磁共振仪在食 品领域已在生鲜猪肉持水性32 、面制品加工和贮藏33 以及 米制品品质34 等各个方面取得了研究进展。姜潮等将低场 核磁共振仪应用于乳制品中蛋白质的测定，以掺假牛乳样品 为低场核磁共振检测对象，利用主成分分析法( pca) 分析处 carr purcel1 meiboom gill( cpmg) 序列的检测数据，探求 了一种能有效分析处理样品弛豫数据的快速方法，并将该方 法用于牛乳品质的监控35 。对几种常见掺假形式的( 掺入 水、食盐、尿素、豆浆等) 牛乳样品、复原乳以及纯牛乳样品进 行了检测和评价。试验结果表明: 纯牛乳和掺入不同物质的 掺假牛乳在主成分得分图上可以得到很好的区分，纯牛乳、复 原乳及其混合乳也得到了有效的辨识，同时各种掺假牛乳样 品随掺假物质的掺加比例在图中呈规律性分布。pca 法可 用于快速分析处理低场核磁共振数据，低场核磁共振结合 pca 法在乳制品的质量控制及评价中具有较大的应用潜力。结语3原料乳中蛋白质的检测方法多种多样，每种方法都有它的优缺点，在不同情况下有不同的适用性。有的方法可以检 测出非蛋白氮，有的则不能; 还有一些方法只适用于快速检测 蛋白质是否掺假，但不能定量检出真蛋白的质量分数。在原 料乳的蛋白质检测中，需要综合考虑目的、时间、成本等众多 因素，选择合适的测定方法。 282 江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 5 期程春梅，董刘敏，师邱毅，等 超高效液相色谱法检测饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量j 江苏农业科学，2012，40( 5) : 282 283超高效液相色谱法检测饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量程春梅1 ，董刘敏2 ，师邱毅1 ，宋慧波1 ，曹小敏1 ，张境1( 1 浙江医药高等专科学校，浙江宁波 315100; 2 江苏省淮安市产品质量监督检验所，江苏淮安 223001)摘要: 建立了利用超高效液相色谱同时测定饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量的方法。采用 acquityuplc beh c18 色谱柱 ( 100 mm 2 1 mm，1 7 m) ，以 0 02 mol / l 的乙酸铵 甲醇 ( 95 5 ) 为流动相，流速0 3 ml / min，柱温 25 ，二极管阵列检测器在波长 230 nm 进行检测。整个分离过程在 2 4 min 内完成，安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸的回收率为 94 4% 104 2% 。该方法快速准确，适用于果汁、含乳饮料、茶饮料、汽水等常规检测。关键词: 超高效液相色谱法; 饮料; 安赛蜜; 糖精钠; 苯甲酸; 山梨酸中图分类号: ts272 7文献标志码: a文章编号:1002 1302(2012)05 0282 02近年来，由于消费者对食品的安全性日益关注，食品中各种添加剂，特别是人工合成添加剂的使用情况越来越受到人 们的重视。苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠等添加剂广泛应 用于饮料、酱腌菜、蜜饯等食品中，这些添加剂的长期过量食 用对人体有一定危害，在我国食品添加剂使用卫生标准( gb 27602007) 1 中对这些添加剂的使用范围和最大使用 限量均有明确规定。目前，大多数分析方法只能测定上述物 质中的 1 种或少数几种2 4 ，所用的方法主要有气相色谱法、 液相色谱法、离子色谱法等。超高效液相色谱( uplc) 原理 与 hplc 相同，但 uplc 提高了分析的速度、灵敏度及分离 度。因此，建立利用 uplc 同时检测饮料中苯甲酸、山梨酸、 安赛蜜、糖精钠含量的方法，将为饮料中上述 4 种添加剂的快 速检测提供参考。材料与方法11 1仪器与试剂waters acquity uplc( 配有二极管阵列检测器、自动进样 器、色 谱 工 作 站，acquity uplc c18 色 谱 柱:beh100 mm 2 1 mm，1 7 m) 。 标 准 溶 液: 苯 甲 酸 gbw ( e )100006、山梨 酸 gbw ( e ) 100007、安 赛 蜜 bw3510、糖 精 钠gbw( e) 100023，浓度为 1 00 mg / ml。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水电导率5 s / cm。1 2标准曲线的绘制准确移取浓度为 1 00 mg / ml 的苯甲酸、山梨酸、安赛蜜、糖精钠标准溶液 0 1、0 5、1 0、2 5、5 0 ml 至 100 ml 容量瓶中，用水定容，构成浓度分别为 1 0、5 0、10 0、25 0、50 0 mg / l的标准使用液系列。在选定色谱条件下测定，绘制标准曲线。1 3 试样制备所有样品均为市场采集 的 样 品，样品稀释液最后经 0 45 m滤膜过滤，其滤液为待测液。1 3 1 果汁饮料、茶饮料、汽水试样 取 5 10 g 样品，用水收稿日期: 2012 03 10基金 项 目: 浙 江 医 药 高 等 专 科 学 校 校 级 科 研 课 题 ( 编 号:z