硝苯地平择时控释骨架片的研制.pdf

天津大学 硕士学位论文 硝苯地平择时-控释骨架片的研制 姓名：徐冬地 申请学位级别：硕士 专业：药剂学 指导教师：谭丰苹 20070601 中文摘要 硝苯地平为二氢吡啶类钙离子拮抗剂，广泛应用于高血压等心脑血管疾病的 治疗。临床上多使用其普通制剂，但不利于心肌缺血和心力衰竭的控制，而长效 钙离子拮抗剂没有这些不良作用。目前国内上市的长效制剂主要是德国拜尔公司 生产的硝苯地平渗透泵制剂，工艺复杂，成本高。本文目的是采用骨架片这一剂 型，通过调节处方组成，达到控释作用，简化生产工艺，降低成本，为硝苯地平 控释制剂的生产开辟新思路。在此基础上，依据时辰药理学和高血压疾病的节律 性变化原理研制硝苯地平择时控释骨架片，以顺应患者血压的节律性变化，达 到时辰治疗的目的，目前国内外尚无该方面的报道。 建立了紫外分光光度法，用于硝苯地平理化性质、制剂释放度和含量的测定； 建立了高效液相色谱法，用于药物与辅料相容性、有关物质及体内血药浓度的检 测。上述方法灵敏度高、专属性强，方便快捷，达到各项分析要求。 在处方前研究中，测定了硝苯地平在不同介质中的溶解度，油水分配系数 以及原辅料相容性，结果表明：硝苯地平具有很好的脂溶性，能很好的通过生物 膜；采用h p l c 法测定原辅料相容性结果表明，硝苯地平与所用辅料并未发生任 何化学反应，具有很好的相容性。筛选了体外释放条件，确定了药物体外释放度 的测定方法。 由于硝苯地平是一种难溶于水的药物，要制成长效控释骨架片，首先要解决 的问题是增加其水溶性，故首先制备了硝苯地平羟丙基甲基纤维素固体分散 体，以提高其水溶性。在此基础上，以释放度为判定标准，考察了处方因素、工 艺因素及溶出条件对释放的影响；并应用正交实验优化处方，筛选出最优处方 ( 即：硝苯地平固体分散体3 0m g ，聚氧乙烯( p e o ) 2 0m g ，甘露醇1 0r a g ) 制 成具有零级释放的控释骨架片；再通过考察包衣处方因素，确定了符和药物释放 时滞要求的包衣处方( 即p e o4 5m g ，p e g6 0 0 04 5m g ) ，制备了符合高血压时 辰节律性变化的择时给药制剂。 探讨了硝苯地平择时控释骨架片中药物的释放机制，发现该制剂中药物的 释放可以分为两个阶段：第一阶段为时滞过程，即包衣材料的溶胀与溶蚀；第二 阶段为控释过程，即骨架片以扩散和溶蚀的协同作用机制释放药物。 以自制普通片为参比制剂，进行了w i s t a r 大鼠单剂量口服给药硝苯地平控释 片( 5r a g ) 体内药物动力学研究。药动学参数计算结果表明：自制硝苯地平控释 骨架片c m 。为3 7 6 0 5ug m r ，t m 。为4l l r ，k 为0 3 6 ；在体内的血药浓度峰与谷 比值相对于普通制剂显著降低，且体内平均滞留时间( m i 盯) 也延长了4 小时。 生物利用度结果表明：硝苯地平控释骨架片生物利用度明显优于自制的硝苯地平 普通片。体内外相关性实验表明：硝苯地平体内吸收与体外释放具有良好的相关 性，达到了控释制剂设计的要求。故采用体外释放能预测择时释放控释骨架片药 物的体内吸收。 硝苯地平择时一控释骨架片的初步稳定性实验显示，其对热、光、均较稳定， 含量、释放度均无明显变化；在高湿情况下，片剂有明显的吸湿现象，但主药含 量并未发生显著性变化，并未有降解产物生成。所以应采用适宜的包装，避免在 生产、贮藏过程中的吸湿。将该制剂置于密闭容器中，又进行了三个月的加速实 验，结果表明硝苯地平择时控释骨架片质量稳定，达到了最初设计的目的。 关键词：硝苯地平固体分散体控释骨架片择时控释骨架片体内外相关性 a b s t r a c t n i f e d i p i n ei sad r u gb e l o n g i n gt oac l a s so fp h a r m a c o l o g i c a la g e n t sk n o w n a st h e c a l c i u mc h a n n e lb l o c k e r sa n ds e l e c t i v e l yi n h i b i t sc a l c i u mi o ni n f l u xa c r o s st h ec e l l m e n l b r a i l eo fc a r d i a cm u s c l ea n dv a s c u l a rs m o o t hm u s c l ew i t h o u ta l t e r i n g s e r u m c a l c i u mc o n c e n t r a t i o n n o wn i f e d i p i n ei s o t h e rd i s e a s e s t h ea i mo ft h i ss t u d yi s f o r m u l a t i o nt of i tf o rc h r o n o t h e r a p y u s e df o rh y p e r t e n s i o nd i s e a s e ，a n g i n aa n d t od e v e l o pan e wt i m e - c o n t r o l l e dr e l e a s e a c c o r d i n gt ol i t e r a t u r e ，u vs p e c t r o p h o t o m a t r yw a sd e v e l o p e df o ri n v i t r oa s s a y d u r i n g t h es t u d i e so fp h y s i c o c h e m i c a lp r o p e r t i e s ，c o n t e n t a n dr e l e a s e h i g h - p e ：r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yw a sa p p l i e di n d e t e r m i n a t i o no fr e l a t e d s u b s t a l l c e s n i f e d i p i n ea n de x c i p i e n tc o m p a t i b i l i t ya n dp l a s m ac o n c e n t r a t i o nm r a t s - t h em e t h o d sw e r ep r e c i s e ，a c c u r a c ya n ds e n s i t i v i t ya n dc a nf i t f o r t h ea n a l y s i s d e m a n d i i lt h ep r e f o r m u l a t i o nr e s e a r c h e st h ep h y s i c o c h e m i c a lp r o p e r t i e so fn i f e d i p i n ew e r e i n v e s t i g a t e d ，w h i c hb e n e f i tf o rd o s a g ef o r md e s i g n t h ep c o fn i f e d i p i n ew a s3 01 8 ， i tw a sb e t t e rt oa b s o r b d u et o n i f e d i p i n ew a si n s o l u b l ei n w a t e r ；w es h o u l di m p r o v es o l u b i l i t y o f n i f e d i p i n e s ow ep r e p a r e dn i f e d i p i n es o l i dd i s p e r s i o nf n ：s f l y , t h e no n t h eb a s i so f p h 锄a c e u t i c a lp r e f o r m u l a t i o ns t u d i e s ，s i n g l e f a c t o r t e s t sw e r ec a r r i e da n db a s eo nt h e t e s t sa b o u tt h ei n f l u e n c eo ff o r m u l a t i o na n dm a n u f a c t u r ep r o c e s so nt h er e l e a s eo f n i f e d i p i n e o p t i m a lf o r m u l a t i o nm o d i f i e dt or e l e a s ed r u go v e r14h w a so b t a i n e db y o r t h o g o n a ld e s i g nt e s t a tt h es a m et i m e ，w ei n v e s t i g a t e dt h ef o r m u l a t i o no f c o a t i n g a n dt h eo p t i m i z e dc o n s t i t u e n to ft h ec o a t i n gw a so b t a i n e d d r u gr e l e a s em e c h a n i s m l s m a i n l yb ye r o s i o nc o m b i n e dw i t hd i f f u s i o nf r o mp e o m a t r i x t h es t u d i e so fp h a r m a c o k i n e t i c so fn i f e d i p i n ec o n t r o l l e d - r e l e a s et a b l e t si nr a t s s h o w e dt h a tt h ep l a s m ac o n c e n t r a t i o nm a i n t a i n e df o ra b o u t12h 。c o m p a r e d w i t ht h e c o n v e n t i o n a lt a b l e t s ，n i f e d i p i n ec o n t r o l l e d r e l e a s et a b l e t sw e r ec h a r a c t e r i z e db yt h e t 懈e x t e n d e db ya b o u t4 h o u r sa n dm e a nr e s i d e n c et i m e ( m r t ) n o t a b l yp r o l o n g e d b e s i d e s t h er e l a t i v eb i o a v a i l a b i l i t yw a s3 9 6 ，a n dt h er e l e a s eo fn i f e d p i n ei n v i t r o h a sag o o dc o r r e l a t i v i t yw i t ht h ea b s o r p t i o nf r a c t i o ni nv i v o s ow ec a l lp r e d i c tt h e a b s o r p t i o no fn i f e d i p i n ei nv i v ob yr e l e a s et e s ti 1 1v i t r o s t a b i l i t ys t u d i e so fp r e p a r a t i o nd e m o n s t r a t e dt h a tl i g h ta n dt e m p e r a t u r eh a dl i t t l e e f f e c to i ln i f e d i p i n et i m e c o n t r o l l e dr e l e a s et a b l e t b u tt h et a b l e t sa b s o r b e dt h e m o i s t u r ef r o mt h ea t m o s p h e r es i g n i f i c a n t l y s on i f e d i p i n et a b l e ts h o u l db es t o r ei n a i r t i 曲tc a s e k e yw o r d s ：n i f e d i p i n e ，s o l i dd i s p e r s i o n ，c o n t r o l l e d - r e l e a s et a b l e t ， t i m e - c o n t r o l l e dr e l e a s et a b l e t ，c o r r e l a t i v i t yb e t w e e ni nv i v oa n dv i t r o 独创性， i 明 本人声明所皂交的学f 一论文足本人舀：甘帅指导卜- 进 j ：的五圩究i 作平取得的 研究成果，除了文【 i 特 j | j 力f l 以标沌刷敛谢之处外，沦丈中彳：包含其他人l 绛发表 或撰。，；过的研究成果，也小包含为捩得叁盗盘堂或其他教育机构的学位或订e 托i 可使用过的材料。我叫工作的j 基对小研究所做的任何贡献均已红论丈l ， 作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解墨盗盘堂 有关保留、使用学位论文的舰定。 特授权叁盗盘鲎可以将学位论文的全爿j 或部分内容编入有关数抓库进行检 索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汀：编以供查阅和借阅。m 意学校 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权说明) 学论文作者签名：枷 签字同期：听7 年易月 j t1】 哥 彳气 ： 彩彳卜墟叩 第一章绪论 第一章绪论 1 1 时辰药理学与时辰给药系统的发展 生物体内各种不同的生理活动按一定的时间顺序呈现有规律的周期性变化， 这种变化的节律性被称为生物节律，以日为周期的则称为昼夜节律。人和其他生 物一样，存在着有规律地循环往复的周期性运动，即“生物节律性”，临床实践中 发现，昼夜不同时问机体对药物的感应性不同。古代人们把昼夜分为1 2 个时辰， 故昼夜节律亦称时辰节律。在一昼夜2 4h 中，人体的多种生理活动和生化过程都 呈节律变化。生物节律是生命活动的一种基本特征，如人体的正常体温以夜间最 低，下午最高；正常血压在一日的1 0 0 0 、1 8 ：0 0 有两个峰值，3 ：0 0 有一个 谷值；血浆中的生长激素水平也呈白昼低夜间高的节律性变化等【1 - 5 】。而药物的 效应受机体生理、生化等因素影响，生物节律也就必然会影响到药物的效应。药 代动力学与机体昼夜节律变化有关，体内激素的分泌、酶的活性，以及血浆蛋白 的含量都呈昼夜节律而出现高峰与低谷的变化，因此机体对药物的吸收、生物利 用度、血药浓度、代谢和排泄等也呈昼夜节律性改变。机体的昼夜节律变化不仅 表现在药物的效应方面，还表现在药物的毒性方面，机体对不同的药物具有不同 的高敏和低敏时间。人体的某些病理现象也呈昼夜节律性变化，因此掌握疾病的 昼夜节律性特点，适时选择用药，就能提高人体的抗病因素，减少疾病的发生， 充分体现了时辰用药比传统用药的优越性。基于此，临床应该依据对药物的反应 节律等因素来确定临床最佳的给药时问、剂量，确定最佳的剂型，能使某些药物 疗效上发生改变，降低药物的不良反应，以达到药物发挥最佳疗效，目前在国内 外医药界对此问题已引起重视和关注。 随着人们对人体生理活动节律性变化的认识逐步加深，时辰药理学也逐步发 展起来。时辰药理学是研究药理作用节律问题的一门边缘学科，它依据生物学的 时间特性，研究机体的昼夜节律对药物作用的影响，以及药物对机体昼夜节律的 影响，研究药物作用的时间函数规律，同一药物，同等剂量会因给药时间不同作 用不同。“生物钟”使人体的各种生理活动不以人意志为转移地保持严格的节律 性，传统的用药方案是将全天的剂量等量地分成几次服用，这种均分法是建立在 人体生理功能、病理变化以及药物作用在一昼夜内是恒定不变的基础上的，而时 辰药理学则根据机体的节律性变化来确定最佳的用药时间与剂量。显然，传统的 第一章绪论 给药方案存在着严重的缺点与不足，所以传统的均分给药方案被时辰疗法所替代 是必然趋势。时辰药理学研究证明，某些药物在一天中有最佳用药时间，择时用 药可发挥最佳疗效，因为择时用药顺应了人体生物节律的变化，可充分调动人体 积极的抗病因素，增强药物疗效，避免或减少不良反应的产生，还可诱导紊乱的 人体节律恢复正常，有利于疾病的治疗。 基于生物钟学、时辰生理学的发展以及全球市场的限制，时辰给药系统得到 了迅速的发展。传统的给药途径已经过于陈旧，要解决给药系统发展的瓶颈问题， 时辰给药系统无疑是一种最合适的方法，故新的给药体统时辰给药系统应运 而生。基于这种给药系统，疾病将得到更好的治疗，药物的副作用将降低到最低 水平。例如：如果疾病的症状发生在白天，当然传统的给药途径就可以用于疾病 的治疗，若发生在夜间或凌晨，那么传统的给药途径就不能很好的达到治疗作用。 据报道有很多疾病都具有生物节律性，如哮喘、癌症、糖尿病、关节炎、神经性 疾病、血浆胆固醇过高以及高血压等。传统的均分给药方法不能达到理想的治疗 效果。故时辰给药系统在这些领域得到了快速的发展，并被广泛应用于胃溃疡、 哮喘以及心血脑管疾病。已被f d a 批准的药物有：u n i p h y 8 ：p e p c i d 8 ；z o c o r 8 ； c o v e r a h s 8 ；v e r e l a n “p m ；c a r d i z e m 8l a ；i n n o p r a n 8x l ；均为依据人体的生物节律 性变化来治疗疾病的。由此我们可以看到理想的时辰给药系统有如下优势：( 1 ) 在使用剂量内无毒；( 2 ) 具有生物反馈体系：( 3 ) 具有生物相容性及生物降解性； ( 4 ) 具有制备工艺简单，经济的特点；( 5 ) 易于服用；( 6 ) 具有靶向性。 1 2 高血压疾病的介绍 高血压病是严重危害人类健康的常见病、多发病，是心脑血管病主要的独立 危险因素之一，是以体循环动脉压升高为主要特点的临床综合征，是多种心脑血 管疾病的重要病因和危险因素，是心血管疾病死亡的主要原因之一。流行病学资 料显示，我国1 9 5 9 年、1 9 7 9 年、1 9 9 1 年3 次成人血压普查，高血压患病率分别 为5 1 1 7 7 3 1 1 8 8 ，呈逐年上升趋势，人的血压在2 4 h 中起伏不定呈“两峰一 谷”状态波动，峰值在1 0 ：0 0 时和1 8 ：0 0 时，谷值在2 ：0 0 3 ：0 0 时，这个时 段被称为高血压患者的潜在危险期。即夜问较低，清晨起床活动后血压迅速升高， 形成清晨血压高峰，1 6 ：o o 1 8 ：o o 形成第2 个血压高峰，心脑血管事件( 脑卒 中、心肌梗死、猝死) 均好发于清晨。抗高血压药般降血压药作用在服药后 3 0 r a i n 出现，2 - 3 h 达到高峰，故高血压患者应将服药时问改为上午7 ：0 0 时，下 午1 4 ：0 0 时，使药物的达峰时问正好与血压波动的两个峰值同步，产生较好的 降压作用。轻度高血压患者切忌晚上临唾前服药，中重度患者晚问临睡前的用药 2 第一章绪论 量也只能服白天剂量的1 2 ，夜间谷值来临，服常用量可致动脉供血不足易形成 脑血栓【7 2 0 】。目前众多的抗高血压制剂对于高血压的治疗并不能很好的顺应高血 压疾病的时辰节律性变化，制研一种依据人体血压节律性变化的制剂，发挥更好 的治疗作用势在必行。 1 3 硝苯地平的介绍 硝苯地平是钙离子拮抗剂中具有代表性的药物，由德国拜尔公司在7 0 年代 首次开发上市。经多年的临床应用和深入研究，硝苯地平已成为目前临床上治疗 高血压和心绞痛的首选药物之一。 n 0 2 r r 2 r i = c o o c h 3r 2 。c h 3 图：1 1 硝苯地平化学结构式 f i g 1 1 c h e m i c a ls t r u c t u r eo fn i f e d i p i n e 硝苯地平的主要理化性质： ( 1 ) 具有很强的光敏性：硝苯地平易光解，分子内产生歧化反应生成硝基或亚 硝基苯吡啶衍生物2 1 也】。 ( 2 ) 溶解性：硝苯地平易溶于丙酮和二氯甲烷，微溶于甲醇、乙醇和乙酸，不 溶于水【2 3 】。由于其不溶于水，故硝苯地平口服后具有较低的生物利用度。 硝苯地平药理作用： 钙离子拮抗剂，其选择性地抑制钙离子通过心肌细胞膜和血管平滑肌细胞 膜，但不影响血浆中钙离子的浓度。主要治疗作用为：( i ) 治疗心绞痛治疗机 理为：舒张冠状动脉抑制冠状动脉痉挛：降低心肌耗氧量主要是通过降低动脉压 力：扩张外周血管降低外周阻力，从而降低了心肌的耗氧量，缓解了心绞痛。( i i ) 治疗高血压治疗机理为：扩张外周血管近而降低外周阻力，从而减小了由于血 管平滑肌紧张收缩而引起的高血型2 4 1 。 硝苯地平主要的药代动力学 采用非隔室分析软件w i n n o n l i n 软件计算e l 服1 0 m ga d a l a t 后的药动学参数 c 。n 觚为1 4 3 1 2 a ：5 3 4 8 n g m l ； a u c 为2 9 3 7 7 - 4 - 11 5 6 2 n g h m l ；t i 2 为 3 0 8 + 1 6 1 h 。 硝苯地平的代谢产物为水溶性，其主要的代谢产物6 0 - 8 0 是通 第一章绪论 过尿液排出的，仅有少量的原型药物通过尿液排出，剩余的代谢产物通过粪便排 出，硝苯地平的药物代谢不会受到肾功能的影响【2 4 1 。 但8 0 年代以来，经医疗实践证实：硝苯地平普通制剂反射性引起心率加快， 激活交感神经系统，不利于一i i , 肌缺血和一1 1 , 力衰竭的控制，而长效钙拮抗剂对缺血 与衰竭的心肌没有这些不良作用，使用更为安全。因此，硝苯地平普通制剂在国 际上已被逐步淘汰，取而代之的是硝苯地平的长效缓、控释制剂产品。这类新制 剂采用了先进的控制药物释放速率的制剂工艺，在体内药物缓慢地释放，血药浓 度维护平衡，峰谷现象减小，副作用轻，药效显著延长，每日仅服一次，故患者 服药的顺应性提高。由于新制剂既保留了硝苯地平优良的钙拮抗剂药效学性能， 又明显改善了其药代动力学特点，所以近年来为国际医疗界所推崇。 ( 1 ) 硝苯地平缓释制剂的开发现状 自8 0 年代末以来，天津药物研究所、中国药科大学、中国医院药研究开发 中心和上海医工院等分别单独或与企业联合进行了硝苯地平缓释制剂的研制，此 外山东、广东、浙江和武汉等地也参与其列。由于受到技术、条件和药用辅料等 的制约，研制步伐相对缓慢。首先开发的是硝苯地平1 2h 缓释片剂，目前上市的 商品有“圣通平”、“得高宁”、“倪福达”等。与硝苯地平普通制剂相比，这类药品 的药代动力性能有了改善，其半衰期( t v 2 ) 相对延长，血药浓度平稳性相对提高， 峰谷现象有所减少，每日服药次数由3 次减为2 次。 目前，国际医学界对高血压的药物治疗主张采用长效降压药物，即1 日只需 服1 次的药物，以此在达到平稳降压，减少压波动性，有效控制2 4 h 血压。选择 降压疗效能维持在2 4h 的长效药物被列入世界卫生组织和国际高血压联盟新修 订的高血压治疗指南的用药原则。在我国各大医院采用长效降压药物呈现强劲趋 势。就钙拮抗剂而言，由于我国的长效钙拮抗剂的研制工作，特别是市场开发工 作严重滞后，以至被进口的“络活喜”、“拜心通”和“依波定”等抢占了医疗市场。 国内文献对硝苯地平2 4h 缓释片剂的研究虽有所报导，但均需局限于特定的范 围。按照新药申报要求而进行系统研究的则首推中国医药研究开发中心和浙江泰 利森药业有限公司合作开发的硝苯地平2 4h 缓释片，其人体药代动力学性能经 中国药科大学等单位严密测试，结果证明与德国拜尔公司的拜心通g l t 3 0 呈生 物等效。国家药品监督管理局于1 9 9 9 年2 月颁发了新药证书和生产批件，由浙 江泰利森药业有限公司独家生产，商品名为“纳欣同”上市，从而结束了我国不能 生产长效硝苯地平制剂的历史。除“纳欣同”外，上海中国药物制剂工程研究中心 也正在研制硝苯地平的长效制剂。 ( 2 ) 国产硝苯地平缓释制剂的研究进展 自8 0 年代末以来，国内对硝苯地平缓释制剂的研究取得了一定的进展，制 4 第一章绪论 备工艺在9 0 年代初期已列入研究的硝苯地平缓释制剂的工艺类型有：缓释包衣 小丸、亲水凝胶骨架片、胃内粘附片和溶蚀性分散法制备了硝苯地平的固体分散 体，加入阻滞剂制成了1 天1 次的长效缓释片。 ( 3 ) 硝苯地平制剂的发展趋势 近年来，随着血压变异性( b p v ) 研究的日趋增多，b p v 已作为有别于血 压的一项独立的反映心血管活动的重要指标。无论何种血压，2 4hb p v 的大小 显著而独立地与高血压靶器官损害( t o d ) 有关，b p v 越大，t o d 越显著，故 临床上治疗高血压，在应用钙离子拮抗剂降压治疗时，如何能有效地降低b p v ， 减轻t o d ，故选用高血压制剂应考虑以下几个方面的因素：( 1 ) 选择起效平稳 的长效降压药，一次给药降压作用维持在1 2h 以上。( 2 ) 根据高血压患者昼夜 节律变化的特征，在不同的时间段，选用长、短小药物联合使用，避免单独使用 短效降压药，再降低血压的同时，力求降低b p v 的幅度。 1 4 课题的提出 由上述发展趋势看来，传统的以零级速率、一级速率释药的缓控释制剂只重 视维持恒定血药浓度的恒速释药。从理想的治疗意义来看，并不是最好的选择， 因此，我们尚需加强时问控制释药系统的基础研究，进一步探明工艺，选择合适 的辅料，将时间控制释药系统发展到更高层次，以满足临床用药的需要。故药物 的释放方式符合人体昼夜节律变化的口服时间控制释药系统近年来引起人们的 关注。口服时间控制释药系统是以时辰药物治疗学为指导，时辰药理学原理为设 计依据，根据人体生物节律变化特点，利用相关技术和辅料调节制剂的释药行为， 按照生理和治疗需要而定时、定量的释放药物一种新型给药体系。 制成这种释药系统的关键是控制释药时间( 释药时滞) ，使药物在预定的时间 开始释放并能迅速起效。按照所用制备技术与辅料的不同，可将口服时间控制制 剂分为以下几种：利用渗透泵控制药物释放时间；利用水凝胶溶胀控制药物释放 时问；利用包衣层控制药物释放时问。利用包衣层控制药物释放时问包括三方面： 利用衣膜的膨胀或溶蚀控制药物释放时间，由衣膜的破裂控制药物释放时间；由 衣膜的p h 敏感性控制药物释放时f n - j 2 5 3 6 j 。 故在本文中，克服了硝苯地平传统给药系统的缺陷，发展制备了硝苯地平择 时给药系统，即顺应了高血压病人血压的节律性变化，使药物更好的满足临床的 治疗要求。由于高血压疾病在夜间2 2 ：0 0 3 ：0 0 之间血压时下降的过程，并存 在一个波谷，故将硝苯地平择时释放制剂设计成晚间2 2 ：0 0 服用，延时5 6 小 时开始释放的制剂，并且为了更好的维持血药浓度的平稳，将硝苯地平含药片设 第一章绪论 计成控释释放的片，即释放动力学呈零级释放。 综上所述，为了使高血压患者血压的生物节律性变化，并维持平稳的血药浓 度，提高患者的顺应性，本文设计了日服一次的硝苯地平择时释放控释骨架片， 通过系统的研究，成功地研制出设计合理、性质稳定、吸收良好，适于工业生产， 同时具有可观的社会效益和经济效益的制剂新产品。 6 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 2 1 材料和仪器 2 1 1 主要药品及试剂 硝苯地平( 药用) 尼莫地平( 药用) 聚氧乙烯( 药用) 甘露醇( 药用) 羟丙基甲基纤维素( 药用) 硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠( 药用) e d t a ( 分析纯) 磷酸二氢钾( 分析纯) 甲醇( 色谱纯) 乙腈( 分析纯) 无水乙醇( 分析纯) 2 1 2 实验仪器 2 4 5 0 紫外可见分光光度计 l a b a l l i e n 高效液相色谱仪 k q 2 5 0 型超声波清洗器 s h b i i i 循环水式多用真空泵 电热鼓风干燥箱 电子天平 2 2 体外分析方法的建立 ( 天津泰安药业有限公司) ( 天津大学赠品) ( 清华大学赠品) ( s i g m ac o r p o r a t i o n ) ( 4 k m ，1 0 0 0 0 0 ，德国j r s ) ( 北京风礼精求有限公司) ( 天津市博迪化工有限公司) ( 天津大学科威公司) ( 天津大学科威公司) ( 天津大学科威公司) ( 天津元立化工有限公司) ( s h i m a d z uc o r p o r a t i o n ) ( 天津兰博公司) ( 昆山市超声仪器有限公司) ( 郑州长城科工贸有限公司) ( 天津市实验仪器有限公司) ( s h i m a d z uc o r p o r a t i o n ) 参照中国药典2 0 0 5 版二部对硝苯地平原料及片剂体外分析方法的规定，本 文选用了紫外分光光度法作为硝苯地平的体外分析方法。 7 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 2 2 1 硝苯地平在不同溶液中的最大吸收波长 分别用蒸馏水、0 1 m 盐酸、磷酸盐缓冲液( 6 8 ) 、0 5 ( g m l ) 的十二烷基 硫酸钠溶液、甲醇和乙醇配置硝苯地平溶液，在2 0 0 n m - - 4 0 0 n m 波长范围内进行 紫外扫描，以确定测定波长。硝苯地平的紫外扫描图谱见f i 9 2 - l ，6 ，结果见t a b 2 1 。 表2 1 硝苯地平在不同溶剂中的最大吸收波长 t a b 2 - 1 m a x i m u ma b s o r p t i o nw a v e l e n g t h si nd i f f e r e n ts o l v e n t s 图2 1 甲醇中u v 吸收光谱图 f i g 2 1 u va b s o r p t i o ni nm e t h a n o l 8 图2 2 乙醇中的u v 吸收光谱图 f i g 2 - 2 u va b s o r p t i o ni ne t h a n o l 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 n 2 3 水中的u v 吸收光谱图图2 - 4p b s ( 6 8 ) 中的u v 吸收光谱图 f i g 2 3 u va b s o r p t i o ni nh 2 0 f i g 2 4 u va b s o r p t i o ni np b s ( 6 8 ) 图2 50 5 s l s 溶液中的u v 吸收光谱图图2 60 1 m 盐酸中的u v 吸收光谱图 f i g 2 5 u va b s o r p t i o ni n0 5 ( g m e ) s l s f i g 2 - 6 u va b s o r p t i o ni no 1m h c i 9 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 2 2 2 标准曲线的制备 精密称取硝苯地平1 0m g ，置于1 0i n l 容量瓶中，加少量甲醇超声使溶解， 加入浓度为0 5 ( g m l ) 的s l s 溶液稀释至刻度，摇匀，作为标准储备液，分 别精密量取标准储备液5 0 止、7 0 此、1 0 0 此、1 2 5 止、1 4 0 止置1 0m l 容量瓶 中，加入0 5 ( e d m l ) 的s l s 溶液稀释至刻度，摇匀，在2 3 8n m 处测定吸收度， 结果见t a b 2 2 。以质量浓度c 对吸光度a 做线性回归，得回归方程为： a = 0 0 5 7 3c ( i t r d m l ) 一0 0 2 0 7r = o 9 9 9 7 ，可见在5i t g m l - 1 4i t e d m l 浓度范围内， 硝苯地平的0 5 s l s 溶液的浓度与吸光度线性关系良好。 表2 2 不同浓度的硝苯地平在0 5 ( g m l ) s l s 溶液中的吸光度( n = 5 ) t a b 2 2a b s o r b a n c ev a l u eo fn f pi n0 5 s l sa n dc o n c e n t r a t i o n s ( n = 5 ) a0 2 6 0 90 3 8 4 40 5 5 90 6 9 310 7 8 0 2 2 2 3 溶液稳定性实验 硝苯地平在0 5 ( g m l ) s l s 溶液中的稳定性考察实验结果见t a b 2 - 3 。 表2 - 3 硝苯地平在质量分数为0 5 ( r d m l ) 0 勺s l s 溶液中的稳定性 t a b 2 3s t a b l i t yo fn f pi n0 5 ( e g m l ) s l ss o l v e n t 2 2 4 紫外分光光度法的确证 2 2 4 1 方法回收率的测定 精密称取硝苯地平8m g ，1 0m g ，1 2m g 各3 份，按比例加入辅料，并按“片 剂释放度的测定”方法项下操作，测定吸光度，根据标准曲线计算检出量，求算 出平均回收率1 0 0 1 ，相对标准偏差为0 1 2 。结果见t a b 2 4 。 1 0 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 表2 4 硝苯地平u v 方法的回收率测定 t a b 2 - 4a n a l y t i c a lr e c o v e r yo fn f p b yu v 垒垒垒盟f 磐9 2垦呈里q ! 曼型( 丝)丛曼塑圭兰里垦：墨：旦f 墅1 81 0 0 0 09 9 9 60 0 60 0 6 9 9 8 9 9 9 8 9 1 0 1 0 0 0 01 0 0 0 000 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 2 1 0 0 0 01 0 0 3 30 2 90 2 9 1 0 0 5 0 1 0 0 5 0 m e a n 1 0 0 10 1 20 1 2 2 242 精密度的测定 精密度结果见t a b 2 5 。 表2 5 硝苯地平u v 方法精密度 t a b 2 5p r e c i s i o nf o rn f p b yu v i n t r a d a yi n t e r - d a y ! i 里宝鱼2垒垒! 竺! 垒兰翌竺z! i 坐星! 垒垒z 2垒垒! 竺垒宝望呈z 10 6 1 9 01 0 6 1 9 0 20 6 1 7 52 0 5 9 5 9 30 6 1 5 73 0 6 1 5 2 40 6 1 4 64 0 5 9 5 0 5 0 6 1 3 3 5 0 6 0 2 8 6 0 6 1 3 0 m e a n0 615 5m g a l l0 6 0 5 6 m e a n 士s d0 6 1 5 5 士0 0 0 2m e a n 士s d0 6 0 5 6 士0 0 11 r s d ( ) 0 3 9r s df 11 8 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 2 3 体内分析方法的建立 2 3 1 色谱条件 色谱柱：h y p e r s i lc 1 8 柱； 流动相：乙腈：水( 5 0 ：5 0 ) ： 流速：1 0 m l m i n ： 柱温：室温； 内标物：尼莫地平。 2 3 2 储备液的配制 标准储备液：精密称取硝苯地平对照品1 0m g ，置于1 0m l 容量瓶中，用乙 腈溶解，定容，配制成l m g m l 的储备液，用乙腈将储备液分别稀释成o 0 2 ，0 1 0 ， 0 2 0 ，0 4 0 ，o 8 0 ，2 0 ，4 0 g m l 梯度浓度的溶液，作为标准储备液，备用。 内标储备液：精密称取尼莫地平对照品，用乙腈配制成2 0p g m l 的溶液， 备用。 2 3 3 血浆样品的处理 取服药后的大鼠血样0 4m l ，置于含0 0 5m l 浓度为0 5 ( g m l ) e d t a 溶 液的离心管中，在4 0 0 0r p m 条件下离心1 0m i n ，分离上层淡黄色液体，得到血 浆样品。精密量取血浆1 5 0g l ，置于1 5m l 离心管中，分别加入3 0 0p l 乙腈， 2 0p g m l 内标液1 5 0p l ，涡旋震荡1 0m i n ，4 0 0 0r p m 离心1 0m i n ，取上清液用 0 2 2p r n 微孔滤膜过滤，取样2 0 此注入液相色谱仪作h p l c 分析，记录色谱图 及峰面积，根据标准曲线计算大鼠体内血药浓度。 2 3 4 色谱分析方法的专属性 1 2 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 t r ，j 懵哺- _ f _ 4 舶叫f b a b a c o n t r o lp l a s m a ，b p l a s m as a m p l eo b t a i n e df r o mar a td o s e dw i t hn f p p e a k s ：1 n f p ； 2 i n t e r n a ls t a n d a r d 图2 7 大鼠空白血浆及给药后实测硝苯地平h p l c 图 f i g 2 - 7h p l cc h r o m a t o g r a m so fc o n t r o lp l a s m aa n dn f p i nr a tp l a s m a 空白血浆及给药后血浆样品色谱图分别见f i g 2 7a 、b 。即按上述色谱条件 进行色谱分析，硝苯地平及内标尼莫地平与血浆中的内源性物质分离良好，保留 时问分别为7 3 及1 2 0 4 m i n ，峰形尖锐。 2 3 5 标准曲线的制备 精密量取空白老鼠血浆1 5 0 皿分别置于1 5m l 尖底离心管中， 精密加入 0 0 2 ，o 1 0 ，0 2 0 ，0 4 0 ，o 8 0 ，2 0 ，4 0i t e d m l 梯度浓度标准储备液1 5 0 止，分 别加入内标储备液及乙腈各1 5 0 0 l ，按照血样处理方法项下操作，记录色谱图和 峰面积。以n f p 的浓度对其峰面积与内标物峰面积的比值进行线性回归，得标 准方程，在0 0 0 5 - 1 0p g m l 浓度范同内线性良好。具体数据见t a b 2 - 6 。 表2 - 6h p l c 方法测定的n f p 与内标物的峰面积比 t a b 2 6p e a k a r e ar a t i oo fn f pt oi n t e r n a ls t a n d a r di np l a s m ab yh p l c c ( u g m l ) 0 0 0 5 0 0 2 50 0 5 00 10 00 2 0 00 5 0 01 0 n f p n i p0 0 0 2 4 80 0 0 4 6 00 0 0 6 7 90 0 1 0 8 40 0 1 8 4 00 0 4 1 4 00 0 8 1 0 7 以浓度c ( i t e d m l ) 对相应的峰面积比( x ) 进行线性回归，得标准方程为： c = 8 e 0 5 x + o 0 0 2 6 r 2 = 0 9 9 9 9 详见f 培2 8 。 1 3 第二章硝苯地平体内外分析方法的建立 可见，在0 0 0 5 - 1 0p g m l 的浓度范围内，硝苯地平与内标物的峰面积比与 其浓度呈良好的线性关系。 c ( u g r a l ) 图2 - 8h p l c 法测定血浆中硝苯地平标准曲线 f i g 2 - 8t h es t a n d a r dc u r v eo fn f p i np l a s m ab yh p l c 2 3 6 分析方法的确证 2 361 精密度的测定 精密量取空白大鼠血浆1 5 0 此分别置于1 5i n l 的离心管中，精密加入0 1 ， 0 8 ，2 0 “g m l 的标准储备液1 5 0p l ，乙腈1 5 0 灿，内标储备液1 5 0 此，配制 成高、中、低三个浓度的血浆样品，按血样的处理方法项下操作，记录色谱图和 峰面积。根据标准曲线和n f p 与内标比值计算出浓度，于同一天内每个浓度测 定5 次，计算出日内相对标准偏差为8 7 ，每天测定一次，连续测定5 天，求 算出日间相对标准偏差为8 8 6 ，结果见t a b 2 7 。 2 3 6 2 方法回收率的测定 精密量取大鼠空白血浆1 5 0p l 分别置于1 5i n l 的离心管中，精密) j n k0 1 ， 0 8 ，2 0p g m l 的标准储备液1 5 0 止，乙腈1 5 0 止，内标储备液1 5 0 止，配制 成高、中、低三个浓度的血浆样品，按血样处理方法项下操作，记录色谱图和峰 面积，n f p 与内标比值，根据血浆标准曲线方程，计算方法回收率为9 9 5 4 ， 相对标准偏差为8 。结果见t a b 2