（食品科学专业论文）玉米肽的制备条件及其醒酒护肝机理研究.pdf

y重毒气一。，瞎、0，繁， 1 嬲粥f 磐必 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 保密如需保密，解密时间2 0 0 9 年1 2 月3 1 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发一 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 隔沙蔓，、时间：沙“年石月y 日 学位论文使用授权书 本人完全了解“华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定”，即学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇 编学位论文本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论 文的全部或部分内容 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书 学位论文作者签名：隔砂幺导师签名：( 5 冀 签名日期：知叼6 年i 月y 日 签名日期：矽。年( 月z 日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 0f，lilld正ri，。 华中农业大学2 0 0 6 届硕士论文 目录 目录】 摘要1 a b s t ra c t 4 缩略语表8 1 前言9 1 1 国内外对玉米活性肽的研究概况9 1 1 1 玉米肽的生物活性研究9 1 1 2 酶法改性玉米蛋白制备玉米肽的研究。1 0 1 2 国内外对天然醒酒物醒酒机理的研究1 0 1 2 1 胃肠吸收抑制剂。1 1 1 2 1 1 激活乙醇脱氢酶。1 1 1 2 1 2 延迟胃排空1 2 1 2 2 代谢增强剂1 2 1 3 国内外对天然产物的保肝作用研究。：1 3 1 4 本研究的目的及意义1 4 2 材料与方法。1 5 2 1 实验材料1 5 2 2 实验方法1 7 2 2 1 各组成成分的测定1 7 2 2 1 1 水分的测定1 7 2 2 1 2 粗脂肪含量的测定。1 7 2 2 1 3 粗蛋白含量的测定1 8 2 2 1 4 总糖含量的测定1 8 2 2 1 5 灰分含量的测定1 8 2 2 2 浓缩玉米蛋白的制备。1 8 2 2 3 玉米蛋白酶解试验1 8 2 2 3 1 中性蛋白酶酶解玉米蛋白试验：1 8 2 2 3 2 碱性蛋白酶酶解玉米蛋白试验1 8 2 2 4 水解度( d h ) 的测定。1 9 2 2 5 肽回收率计算1 9 玉米肽的制备条件及其醒酒护肝机理研究 2 2 6 玉米肽的制备。1 9 2 2 7 玉米肽的分离1 9 2 2 7 1 超滤分离1 9 2 2 7 2c p 葡聚糖凝胶色谱法分离2 0 2 2 7 3c p 葡聚糖凝胶配位色谱法分离2 0 2 2 7 4c p 的脱盐：2 0 2 2 8c pi i 的r p h p l c 分析2 0 2 2 9 玉米肽的氨基酸分析。2 0 2 2 1 0 o h 抑制率测定2 1 2 2 1 1 玉米肽对乙醇脱氢酶活性影响2 1 2 2 1 1 1 乙醇脱氢酶( a d h ) 活力的测定2 1 2 2 1 1 2a d h 活力计算法2 2 2 2 1 2 玉米肽对小鼠血清中乙醇浓度的影响2 2 2 2 1 2 1 中性及碱性蛋白酶酶解得不同水解度肽对小鼠血清中乙醇浓度的影 口l 句2 2 2 2 1 2 2 玉米肽醒酒量效关系试验2 2 2 2 - 1 2 3 血清中乙醇浓度的测定2 3 2 2 1 3c c p 对小鼠肝损伤的保护作用2 3 2 2 1 3 1c c p 对乙醇诱导小鼠肝损伤的保护作用一2 3 2 2 1 3 2c c p 对氨基半乳糖( d g a d 诱导肝损伤小鼠的保护作用2 3 2 2 1 4 各项生化指标的测定2 4 2 2 1 4 1 小鼠血清中丙二醛( m d a ) 的测定2 4 2 2 1 4 2 小鼠血清中谷丙转氨酶( 蝴) 的测定2 4 2 2 1 4 3 小鼠血清中谷草转氨酶( a s t ) 的测定2 4 2 2 1 4 4 小鼠血清中甘油三酯( t g ) 的测定2 4 2 2 1 4 5 小鼠血清中还原型谷胱甘肽( g s h ) 的测定。2 5 2 2 1 5 肝组织病理学检测2 5 2 2 1 6 玉米肽功能性质的测定。2 5 2 2 1 6 1 水溶解性质的测定：2 5 2 2 1 6 2 起泡能力及起泡稳定性的测定2 5 2 2 1 6 3 乳化性及乳化稳定性的测定_ 2 6 华中农业大学2 0 0 6 届硕士论文 2 2 1 6 4 黏度的测定2 6 2 2 1 7 玉米肽的脱苦研究2 6 2 2 1 7 1 苦味的评价方法2 6 2 2 1 7 2 活性炭脱苦法2 7 2 2 1 7 3 利用风味酶脱苦2 7 2 2 1 7 4 利用b 环状糊精脱苦2 7 2 2 1 8 玉米肽的应用2 7 3 结果与分析2 7 3 1 玉米粗肽( c c p ) 的制备。2 7 3 1 1 黄粉中玉米蛋白的提取2 7 3 1 2 玉米黄粉和浓缩玉米蛋白的组成比较2 8 3 1 3 浓缩玉米蛋白的酶解2 9 3 1 3 1 中性蛋白酶酶解效果2 9 3 1 3 2 碱性蛋白酶酶解效果3 0 3 2 玉米肽醒酒机理研究3 1 3 2 1 玉米肽对乙醇脱氢酶活性的影响3 1 3 2 1 1 中性蛋白酶酶解得不同水解度的肽对a d h 活性的影响3 1 3 2 1 2 碱性蛋白酶酶解得不同水解度的肽对a d h 活性的影响3 2 3 2 2 玉米肽对o h 抑制率测定。3 3 3 2 3 玉米肽对小鼠血清中乙醇浓度的影响3 4 3 2 3 1 中性、碱性蛋白酶酶解肽对小鼠血清中乙醇浓度的影响3 4 3 2 3 2 碱性蛋白酶中水解度c c p 醒酒量效关系试验3 6 3 3 玉米肽的分离纯化及活性研究3 6 3 3 1 超滤分离c c p 及抑制o h 能力比较3 6 3 3 2 葡聚糖凝胶色谱法分离c p 及活性比较3 7 3 3 2 1 葡聚糖凝胶柱分离c p 。3 7 3 3 2 2 用c u 葡聚糖凝胶配位色谱法分离c p 3 3 3 2 3c pi 、c pi i 、c a a 抑制o h 能力比较。3 8 3 3 2 3c p 的h p l c 分析。3 9 3 3 3c c p 、c p r 、c p 对a d h 激活率的影响。4 0 3 3 4c pi 、c pi i 和c a a 对a d h 活性的影响4 0 i i i 玉米肽的制各条件及其醒酒护肝机理研究 3 4 玉米蛋白及各玉米肽的氨基酸分析4 1 3 5 玉米肽的保肝作用研究4 3 3 5 1c c p 对乙醇诱导肝损伤小鼠的保护作用4 3 3 5 1 1 小鼠血清中各项生化指标的变化4 3 3 5 1 2 小鼠肝组织病理学观察。4 4 3 5 2c c p 对d g a l 诱导急性肝损伤小鼠的保护作用4 5 3 5 2 1 小鼠血清中各项生化指标的变化4 5 3 5 2 2 小鼠肝组织病理学检查4 6 3 6 玉米蛋白及其酶解肽功能性质比较5 2 3 6 1 玉米蛋白和玉米肽的水溶性5 2 3 6 2 玉米白和玉米肽的起泡性质5 3 3 6 3 玉米蛋白和玉米肽乳化能力及其乳化稳定性5 4 3 6 4 玉米蛋白和玉米肽的黏度5 6 3 7 玉米肽的脱苦研究。5 6 3 7 1 活性炭脱苦5 7 3 7 2 利用风味酶酶法脱苦5 9 3 7 3b 环状糊精掩盖脱苦6 1 3 8c p 的应用6 2 。 讨论6 ：； 4 1 制备醒酒活性肽用酶的筛选及水解条件的优化6 3 4 2 筛选高醒酒活性肽的体外实验研究。6 3 4 3 玉米肽醒酒保肝机理研究6 4 5 结论6 6 参考文献。6 8 1 致谢7 1 ； 附录( 硕士期间发表论文) 7 6 i v 华中农业大学2 0 0 6 届硕士论文 玉米肽的制备条件及其醒酒护肝机理研究 食品科学 2 0 0 6 届硕士研究生隋玉杰指导教师何慧副教授 摘要 为了利用植物蛋白资源，使湿法生产淀粉的副产物玉米黄粉增值，本文采 用正交试验研究了从黄粉中提取玉米蛋白及用中性蛋白酶( n u t r a s e ) 、碱性蛋白酶 ( a l c a l a s e ) 酶解玉米蛋白，制备玉米醒酒肽的条件；进一步采用超滤、配位色谱法、 r p h p l c 、氨基酸分析仪等手段对玉米肽进行了分离及成分分析。通过体外抗羟基 自由基试验、激活乙醇脱氢酶( a d h ) 活性试验及动物试验考察醒酒肽对小鼠血清 中乙醇浓度的影响，结合玉米肽对d 氨基半乳糖( d g a l ) 及乙醇诱导急性肝损伤 模型鼠的保护作用研究，初步探讨了玉米肽的醒酒保肝作用机制；比较了玉米肽和 玉米蛋白的功能性质，对玉米肽进行了脱苦研究，并用体外激活a d h 活性试验比 较了几种脱苦方法对玉米肽醒酒活性的影响。结果如下： 1 提取正交试验表明：以粗蛋白含量为5 6 9 7 玉米黄粉为原料，优化提取玉米蛋 白条件，其最佳条件为：提取液( 由0 1 m o i l n a o h 与9 5 乙醇配制) 碱醇比为 4 5 5 5 ( v v ) ，料液比1 ：1 5 ，提取时间2 h ，温度5 5 ；在最佳提取条件下，提 取物中粗蛋白含量提高到9 3 1 4 。 2 玉米肽醒酒作用机理研究 ( 1 ) 酶解正交试验表明：用中性蛋白酶酶解玉米蛋白，当料液比为1 ：2 5 ，酶底比 为1 5 ，酶解时间为2 h 时，酶解所得玉米肽对a d h 的激活率最高为3 5 7 5 ，对 o h 的抑制率为6 1 5 4 ，肽回收率为2 0 3 1 ：用碱性蛋白酶酶解玉米蛋白， 当料液比为1 ：2 5 ，酶底比为o 5 ，酶解时间为4 h 时，酶解所得玉米肽对a d h 的激活率为最高为2 7 2 6 。对o h 的抑制率为5 9 5 8 ，肽回收率可达8 2 0 6 。 前者虽有较高的a d h 激活率，但其肽回收率过低。 ( 2 ) 动物试验表明：灌胃中性蛋白酶低水解度肽( 2 h 、酶底比0 5 、料液比1 ：2 5 ) 能使小鼠血醇浓度降低5 4 0 6 ( 极显著降低，p 0 0 0 1 ) ，但该肽的回收率过 低( 1 9 9 7 ) ；灌胃碱性蛋白酶中水解度肽( 4 h 、酶底比o 5 、料液比1 ：2 0 ) 的醒酒活性高，并存在剂量效应关系，当灌胃剂量为8 0 0m g k g b w 时，小鼠血 醇浓度降低了6 2 8 0 ( 极显著降低，p 0 0 0 1 ) ，且该粗肽的回收率高( 8 2 0 1 ) ； 碱性蛋白酶的中水解度肽具有开发价值。 玉米肽的制各条件及其醒酒护肝机理研究 ( 3 ) 动物试验与体外试验结果基本吻合，即中性蛋白酶低水解度肽和碱性蛋白酶中 水解度肽醒酒效果好，说明并非水解度越高，醒酒活性越好；同时也说明用体 外激活a d h 活性试验和抑制o h 试验，筛选高醒酒活性玉米肽是便捷可行的 方法。 ( 4 ) 以对a d h 的激活率和对* o h 抑制率为活性跟踪指标，将碱性蛋白酶酶解玉米 粗肽( c r u d ec o mp e p t i d e s ，c c p ) 过分子量为6 0 0 0 u 的超滤膜，得到高活性玉 米肽( e o mp e p t i d e s ，c p ) ，c p 对o h 抑制率高于c c p ，前者为7 6 9 6 ，后者 为5 0 5 0 ；而c c p 对a d h 的激活率高于c p ，前者为3 0 6 9 ，后者为2 6 1 8 ： 采用c u 2 + - s e p h a d c x g 2 5 配位色谱法分离c p ，得c pi 、c pi i 和c a a 。三者中 以c pi i 对o h 抑制率及对a d h 的激活率最高，分别为6 1 9 1 和2 8 8 5 。 ( 5 ) 氨基酸分析结果显示：玉米肽中丙氨酸、亮氨酸含量高，尤其是亮氨酸含量； c p 、c pi 、c p i i 具有高f 值。 ( 6 ) 本文实验结果提示：玉米肽的醒酒作用机制之一是通过激活胃a d h ，加强乙 醇在胃肠道的首过代谢，有胃肠吸收抑制剂的作用：其醒酒作用机制之二是通 过激活肝脏a d h ，增强乙醇的代谢，即有代谢增强剂的作用；其醒酒作用机制 之三是可通过提高丙氨酸、亮氨酸的浓度，产生稳定的辅酶( n a d + ) ，抑制血 液中乙醇浓度的升高。 3 碱性蛋白酶酶解c c p 对小鼠化学性肝损伤的保护作用 ( 1 ) c c p 对d g a l 引起的小鼠急性肝损伤有保护作用，且呈剂量效应关系。与 d g a l 肝损伤模型组小鼠比较，当c c p 灌胃剂量为8 0 0 m g k g b w 时，能极显著 ( p 0 0 1 ) 降低小鼠血清中谷丙转氨酶( a l t ) 、谷草转氨酶( a s t ) 活性和 甘油三酯( t g ) 含量，同时也能极显著( p o 0 1 ) 地抑制还原型谷胱甘肽( g s h ) 含量的下降：病理学观察也显示出明显的剂量效应关系，高剂量给肽组小 鼠肝细胞病变明显好转或恢复。 ( 2 ) c c p 对乙醇引起的小鼠急性肝损伤有保护作用，生化指标呈剂量效应关系。 与小鼠乙醇肝损伤模型组比较，灌胃c c p2 0 0 m g k g b w 、4 0 0 m g k g b w 、 8 0 0 m g k g b w 时，均能极显著地抑制小鼠血清中g s h 含量的下降；灌胃 c c p 8 0 0 m g k g b w 时，可极显著降低t g 的含量、显著抑制m d a 的产生；肝组 织病理学观察显示，高剂量给肽组小鼠肝细胞与正常组小鼠肝细胞基本相同； 但从组织形态学来说，该模型组鼠肝损伤程度及脂肪变性程度均不及d g a l 模 型组明显，这与乙醇的毒性不及d g a l 有关。 ( 3 ) 本文实验结果提示：玉米肽的保肝机制之一是其具有良好的抑制自由基的能力： 保肝机制之二是其能激活a d h 的酶活，增强乙醇的胃肠首过代谢：从而减轻 2 华中农业大学2 0 0 6 届硕士论文 自由基、高浓度乙醇对肝脏造成的损伤；保肝机制之三是具有高f 值，可以纠 正急性肝损伤模型鼠血浆及脑中的氨基酸病态模式。 4 碱性蛋白酶酶解c c p 的应用研究 ( 1 ) 和玉米蛋白相比，玉米肽的溶解度大大提高，尤其是在等电点，在不同p h 值 下溶解度均在9 0 以上；起泡性和乳化性都得到很大程度的提高；黏度降低， 流动性好。 ( 2 ) 分别利用活性炭、风味酶和b 环状糊精三种方法对玉米肽进行脱苦，并考察了 脱苦对醒酒活性的影响，三种脱苦方法各有利弊，应用于具体的食品中时要综 合考虑。 ( 3 ) 制作了两款风味不同的醒酒保肝活性肽饮料，即玉米原味饮料和嗜好型咖啡味 饮料，均适于用作宴席上饮酒前的茶点。 关键词：玉米肽、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、乙醇脱氢酶、羟基自由基、醒酒、保 肝、应用 3 玉米肽的制备条件及其醒酒护肝机理研究 s t u d y o n p r e p a r a t i o n ，a n t i a l c o h o l i s ma n d h e p a t i c - p r o t e c t i o nm e c h a n i s m o fc o r np e p t i d e s i no r d e rt ou s ep l a n tp r o t e i nr e s o u r c e sa n di n c r e a s et h ea d d i t i o nv a l u eo fc o r ng l u t e nm e a l ( c g m ) ，w h i c hi sb y p r o d u c t o fs t a r c h p r o d u c eb yw e t m i l l i n gp r o c e s s ，t h e o r t h o g o n a l i t ye x p e r i m e n t sw e r ed e s i g n e dt od i s c o v e ro p t i m u mc o n d i t i o n so fe x t r a c t i n g c o lp r o t e i nf r o mc g m ， a n dt od i s c o v e rt h e o p t i m u mc o n d i t i o n so fp r e p a r i n g a n t i a l c o h o l i s mc o r l lp e p t i d e sh y d r o l y z e db yn e u t r a s ea n da l c a l a s e c r u d ec o mp e p t i d e s ( c c p ) w e r eg r a d u a l l ys e p a r a t e db yu l t r a f i l t r a t i o n ，l i g a n dc h r o m a t o g r a p h y ，r p - h p l c f i n a l l y ，t h e i rc o m p o n e n t sw e r ea n a l y s e db ya m i n oa c i da n a l y z e r t h ea n t i a l c o h o l i s m a n da n t i h e p a t i c - t o x i c i t ym e c h a n i s mo fc o r n p e p t i d e sw a ss t u d i e dt h r o u g h s o m e e x p e r i m e n t sa sf o l l o w s ：i n h i b i t i n gh y d r o x y lr a d i c a l ( o h ) a c t i v i t y ，a c t i v a t i n ga l c o h o l d e h y d r o g e n a s e ( a d h ) a c t i v i t yi nv i t r o ，e f f e c t so fc c p o ne t h a n o lc o n c e n t r a t i o ni nm i c e b l o o ds e r u mi nv i v o ，a n dt h ep r o t e c t i o na g a i n s ta c u t el i v e r d a m a g eo fm i c es u f f e r i n gf r o m d - g a l a c t o s a m i n e ( d g a l ) a n da l c o h 0 1 f u n c t i o nc h a r a c t e r so fc o mp e p t i d ew e r ec o m p a r e d t ot h a to fc o mp r o t e i n t oi m p r o v et h ef l a v o ro fc o r np e p t i d e s ，d e b i t t e rw a ss t u d i e d s i m u l t a n e i t yt h ea c t i v i t i e so fc o r np e p t i d e sa c t i v a t i o na d hw e r ed e t e r m i n e d t h em a i n r e s u l t sa r es h o w na sf o l l o w s ： 1 t h er e s u l t so fo r t h o g o n a l i t ye x p e r i m e n ts h o w e dt h a tt h eo p t i m u mc o n d i t i o no f e x t r a c t i n gp r o t e i nf r o mc g m w i t h5 6 9 7 c r u d ep r o t e i nw e r ea sf o l l o w s ：t h er a t i oo f 0 1 m o 心a o ha n d9 5 a l c o h o l = 4 5 ：5 5 ( v v ) ，r a t i oo fm a t e r i a la n dw a t e r = l ：1 5 ， e x t r a t i n gt i m e = 2 h ，t e m p e r a t u r e = 5 5 f i n a l l y ，t h ec o n t e n to f c r u d ep r o t e i nc a ni n c r e a s et o 9 3 1 4 2 t h em e c h a n i s mo fa n f i a l c o h o l i s mo fc o mp e p t i d e s ( 1 ) t h er e s u l t so fo r t h o g o n a l i t ye x p e r i m e n t c o mp e p t i d e sh y d r o l y z e db yn e u t r a s e ：w h e nr a t i oo fm a t e r i a la n dw a t e r = l ：2 5 ， 【e 】【s 】= 1 5 ，t h eh y d r o l y z i n gt i m e = 2 h ，t h eh i g h e s tr a t i oo f ，a c t i v a t i o na d h a c t i v i t i e s c a l lr e a c hb y3 5 7 5 ，t h er a t i oo fi n h i b i t o r ya c t i v i t i e so n o hc a l lr e a c h6 1 5 4 ，b u t t h er a t eo fr e c o v e r yo fp e p t i d e sw a s2 0 3 1 c o r np e p t i d eh y d r o l y z e db ya l c a l a s e ：a tt h er a t i oo fm a t e r i a la n dw a t e r = l ：2 5 ， 【e 】【s 】= 0 5 ，t h eh y d r o l y z i n gt i m e = 4 h , t h eh i g h e s tr a t i oo fa c t i v a t i o na d h a c t i v i t i e s c a nr e a c hb y2 7 2 6 ，t h er a t i oo fi n h i b i t o r ya c t i v i t i e so n o hc a l lr e a c h5 9 5 8 ，a n d 4 华中农业大学2 0 0 6 届硕士论文 t h er a t eo f r e c o v e r yo fp e p t i d e sw a s 8 2 0 6 a l t h o u g ht h ef o r m e rs h o w sah i g h e rr a t i oo fa c t i v a t i o na d ha c t i v i t i e s ，t h er a t eo f r e c o v e r yo fp e p t i d e sw a s t o ol o w ( 2 ) t h ea n i m a le x p e r i m e n ti nv i v os h o w st h a t ： l o wd e g r e eo fh y d r o l y s i s ( d h ) p e p t i d e sb yn e u t r a s e ( 2 h ，【e 】【s 】= 0 5 ，r a t i oo f m a t e r i a la n dw a t e r = l ：2 5 ) c a nr e d u c ea l c o h o lc o n c e n t r a t i o ni nm i c eb l o o ds e r u mb y 5 4 0 6 ( s t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ，p 0 0 0 1 ) ，b u tt h er a t eo fr e c o v e r yo fp e p t i d e sw a s l o wj u s t1 9 9 7 m i d d l ed h p e p t i d e sb ya l c a l a s e ( 4 h ，【e 】【s 】= 0 5 ，r a t i oo f m a t e r i a la n dw a t e r = l ：2 0 ) c a nd e c r e a s ea l c o h o lc o n c e n t r a t i o ni nm i c eb l o o ds e r u me f f e c t i v e l yi na d o s e d e p e n d e n tm a n n e r t h er a t eo fr e c o v e r yo fp e p t i d e sw a s8 2 0 1 a tt h ed o s eo f 8 0 0m g 肚g b w ，a l c o h o lc o n c e n t r a t i o ni nm i c eb l o o ds e r u mc a nr e d u c eb y6 2 8 0 ( s t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ，p 0 0 0 1 ) c o m p a r a t i v e l y ，t h em i d d l ed hc o mp e p t i d e sb ya l c a l a s ew e r ea n t i a l c o h o l i s mf o o d w i t hi n d u s t r yp r o d u c t i o nv a l u e ( 3 ) t h er e s u l t so fe x p e r i m e n t si nr i v ea n dv i t r ow e r ea l m o s tc o n s i s t e n t l o wd h p e p t i d e sb yn e u t r a s ea n dm i d d l ed hp e p t i d e sb y a l c a l a s eb o t hs h o w e da g o o de f f e c t ， w h i c hs u g g e s t e dt h a ti ti sn o tp o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e nd ha n dt h ea n t i a l c o h o l i s m e f f e c t t h et e s t so fi n h i b i t i n g 。o ha n da c t i v a t i n ga d hi nv i t r ow e r ec r e d i ta n d c o n v e n i e n tm e t h o d st h a tw e r eu s e ds c r e e n i n gc o r np e p t i d e sw i t hh i g ha n t i a l c o h o l i s m a c t i v i t y ( 4 ) c c ph y d r o l y z e db ya l c a l a s ew a ss e p a r a t e di n t oc o i np e p t i d e s ( c p ) f r a c t i o na n d c o mp r o t e i n s ( c p r ) f r a c t i o nu s i n ga6 0 0 0 uu l t r a f i l t r a t em e m b r a n e t h er a t i oo f i n h i b i t i n g o ho fc pw a s7 6 9 6 ，h i g h e r t h a nt h a to fc c p ，w h i c hw a s5 0 5 0 h o w e v e r ，t h er a t i oo fa c t i v a t i n ga d ho fc c pw a sh i g h e rt h a nt h a to fc p ，o n ew a s 3 0 6 9 ，a n dt h eo t h e rw a s2 6 1 8 s e p a r a t i n gc pw i t hc u z * - s e p h a d e x g 2 5l i g a n d c h r o m a t o g r a p h yf u r t h e r ，t h r e ef r a c t i o n sc 觚b eo b t a i n e d ，c pi ，c pi i ，c a a a m o n g t h e m ，c pi is h o w e dt h eh j 【g h e s tr a t i o o fi n h i b i t i n g o ha n dt h eh i g h e s tr a t i oo f a c t i v a t i n ga d h ，w h i c hw e r e6 1 9 1 a n d2 8 8 5 r e s p e c t i v e l y ( 5 ) t h er e s u l to fa m i n oa c i da n a l y s i ss h o w e dt h a tt h e r ew o r eh i g hc o n t e n t sa l a n i n ea n d l e u c i n ei nc o m p e p t i d e s ，e s p e c i a l l yl e u c i n e c p ，c pi ，c p 1 1w e r ew i t hh i g hfv a l u e ( 6 ) t h e r ea r et h r e ek i n d so fp o s s i b l em e c h a n i s m sa b o u ta n t i a l c o h o l i s mo fc o r np e p t i d e s f i r s t l y ，c o r np e p t i d ec a ne n h a n c ea l c o h o lf i r s tp a s sm e t a b o l i s mi n t h es t o m a c hb y 5 玉米肽的制各条件及其醒酒护肝机理研究 a c t i v a t i n ga d hi nt h es t o m a c h ，a n di ta c t sa si n h i b i t o rp r e v e n t i n ga l c o h o ld i g e s ti n s t o m a c ha n di n t e r s t i n e s s e c o n d l y ，c o mp e p t i d ec a na c c e l e r a t ea l c o h o lm e t a b o l i s mb y a c t i v a t i n ga d h i nl i v e r , a n di ta c t sa sm e t a b o l i s mi n t e n s i f i e r t h i r d l y ，0 0 1 1 1p e p t i d e s m a yh a v ee f f e c to nr e d u c t i o ne t h a n o ll e v e ri nb l o o db yt h em e t a b o l i s ma l a n i n ea n d l e u c i n ef r o mt o m p e p t i d e st op r o v i d et h ep o t e n t i a ls u p p l yo fn a d + 3 t h e h e p a t i c - p r o t e c t i v e e f f e c t so fc c ph y d r o l y z e d b y a l c a l a s e a g a i n s t t o x i c c h e m i c a l s i n d u c e da c u t el i v e ri n j u r yi nm i c e ( 1 ) c c pc a np r e v e n tl i v e rd a m a g ei n d u c e db yd g a li nad o s e d e p e n d e n tm a n n e r a tt h e d o s eo f8 0 0m g c c p k g 。b w ，t h el e v e lo fg l u t a t h i o n e ( g s h ) i n c r e a s e ，t h ea c t i v i t i e so f a l a n i n ea m i n o t r a n s f e r a s e( a l t )， a s p a r t l i c a m i n o t r a n s f e r a s e( a s t )a n d t r i a c y l g l y c e r o l s ( t g ) l e v e lr e d u c t i o ni nm i c eb l o o ds e r u mw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p o 0 1 ) ，c o m p a r e dt ot h a to fp o s i t i v ec o n t r o lg r o u p s t h es a m ep o s i t i v ec o r r e l a t i o n b e t w e e nd o s ea n de f f e c t sw a so b s e r v e di n t h el i v e r h i s t o l o g i c a ls a m p l e s t h e h e p a t o c y t ep a t h o l o g i c a lc h a n g e sw e r ei m p r o v e da n dr e p a i r e do b v i o u s l ya tt h ed o s eo f 8 0 0m g c c