（微生物与生化药学专业论文）巴山重楼正丁醇提取部分的化学成分研究.pdf

目罩目求l i i illul ll lil l lli llliy 18 814 9 7摘要ia b s l r a c t i i第l 章文献综述11 1 概述11 2 甾体皂苷类化学成分11 2 1 薯蓣皂苷41 2 2 偏诺皂苷。41 2 3 原型皂苷51 2 4 其他皂苷51 3 重楼属植物中甾体皂苷的结构解析51 3 1 甾体皂苷苷元部分的核磁共振谱结构特征51 3 2 甾体皂苷糖部分的核磁共振谱图特征71 3 3 甾体皂苷结构解析的新方法一液质联用1 01 4 药理作用1 11 4 1 抗肿瘤作用1 21 4 2 免疫调节作用1 21 4 3 止血作用1 21 4 4 其他作用131 5 结语1 3第2 章巴山重楼正丁醇提取部分的化学成分研究1 42 1 实验方法。1 42 1 1 仪器与试剂1 42 1 2 提取分离。152 2 实验结果17讨论：1 5参考文献：2 6致谢3 0发表论文及参加课题一览表31附j 录3 2西南大学硕士学位论文摘要巴山重楼正丁醇提取部分的化学成分研究微生物与生化药学硕士研究生张志港指导老师邓君副教授捅要为寻找中药重楼的替代资源，本文对百合科( l i l i a c e a e ) 重楼属( p a r i sl ) 植物巴山重楼( 尸b a s h a n e n s 括w a n ge tt a n g ) 的正丁醇提取部分进行了化学成分研究，为巴山重楼的开发提供科学依据。将巴山重楼根茎的乙醇浸膏按极性大小依次分为石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶部分，其中的正丁醇提取部分依次用硅胶吸附柱色谱、硅胶分配柱色谱、反相硅胶柱色谱、s e p h a d e xl h 2 0 凝胶柱色谱、反相制备h p l c 等手段进行分离，从中纯化了5 种单体化合物；运用m s 、1 h - n m r 、c - n m r 、1 h i hc o s y 、h s q c 、和h m b c 等波谱技术对所得化合物进行结构鉴定，分别鉴定为p 一蜕皮素( 1 ) 、p i n n a t a s t e r o n e ( 2 ) 、偏诺皂苷元3 o - a l 一鼠李吡喃糖( 1 2 )【o 【- l 一阿拉伯呋喃糖( 1 以) 】p d 一葡萄吡喃糖苷( 3 ) 、薯蓣皂苷元3 o - a l 鼠李吡喃糖( 1 _ 2 ) 【a l 阿拉伯呋喃糖( 1 _ 4 ) 】p d 葡萄吡喃糖苷( 4 ) 和偏诺皂苷元300 【l 鼠李吡喃糖( 1 _ 4 ) a l 鼠李毗喃糖( 1 _ 4 ) 【0 【l 鼠李吡喃糖( 1 2 ) 】p d 葡萄吡喃糖苷( 5 ) ，其中3 种甾体皂苷都曾在重楼中分离得到，表明巴山重楼和重楼的化学成分相似，巴山重楼可能作为中药重楼的另一基源植物。关键词：百合科；巴山重楼；化学成分；蜕皮激素；甾体皂苷西南大学硕十学位论文a b s t r a c t曼寡曼蔓鼍皇皇曼曼量量置皇曼皇曼皇皇皇曼曼鼍皇曼曼! ni 皇曼曼鼍曼量鼍舅曼蔓量皇舅s t u d i qt h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so ft hqnbudieso nt h ece m i c a lc o n s t i t u e n t so ft h enb u o hu he x t r a c to fp a r i sb a s h a n e n s i sm i c r o b i a la n db i o c h e m i c a lp h a r m a c yp o s t g r a d u a t ez h a n gz h i g a n gt u t o rd e n gj u na bs t r a c tt os e a r c ha f t e rt h ea l t e r n a t i v er e s o u r c ef o rt h ec h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n er h i z o m ap a r i d i s ，t h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so fp a r i sb a s h a n e n s i s ，w h i c hb e l o n g st ot h es a m eg e n u sa sp a r i sp o l y p h y l l av a r c h e n e n s i sa n d 尸p o l y p h y l l av a r y u n n a n e n s i s ，t h et r a d i t i o n a lr e s o u r c eo fr h i z o m ap a r i d i s ，w e r es t u d i e d t h ee t h a n o le x t r a c to fr h i z o m eo fp b a s h a n e n s i sw a sd i v i d e da c c o r d i n gt op o l a r i t yi n t op e t r o l e u me t h e re x t r a c t , e t h y la c e t a t ee x t r a c t , n b u o he x t r a c ta n dw a t e rs o l u b l ee x t r a c t t h e - b u o he x t r a c to f b a s h a n e n s i sw a sa p p l i e dt os i l i c ag e lc o l u m n ，r e v e r s ep h a s es i l i c ag e lc o l u m n , s e p h a d e xl h 2 0c o l u m na n dp r c r p - h p l ci nt u r nt og i v ef i v ep u r ec o m p o u n d s o nt h eb a s i so f c h e m i c a lr e a c t i o na nd a t aa n a l y s i so ft h e i rs p e c t r a ld a t ao fm s ，1 h - n m r , 1 3 c - n m r , 1 h - 1 hc o s y ，h s q ca n dh m b c ，t h es t r u c t u r e so ft h ef i v ec o m p o u n d sw e r ee l u c i d a t e da sl b - e c d y s o n e( 1 ) ，p i n n a t a s t e r o n e( 2 ) ，p e n n o g e n i n - 3 一o 一0 【- l r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 - - - - 2 ) i xla r a b i n of u r a n o s y l ( 1 - - - , 4 ) - p d - g l y c o p y r a n o s i d e( 3 ) ，d i o s g e n i n 3o 仅- l r h a n m o p y r a n o s y l( 1 2 ) 一 0 【一l - a r a b i n o f u r a n o s y l ( 1 - - - 4 ) 1 3dg l y c o p y r a n o s i d e( 4 ) ，p e n n o g e n i n 3o0 【一l r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 - - - , 4 ) - a l - r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 - - 4 ) - 沁- l - r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 - - - , 2 ) - p d e o yc o p y r a n o s i d e ( 5 ) t h el a s tt h r e es t e r o i ds a p o n i n sh a v eb e e nr e p o r t e de x i s t i n gi nt h ec h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n er h i z o m ap a r i d i s t h es i m i l a r i t yo ft h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so fp b a s h a n e n s i sa n dr h i z o m ap a r i d i ss u g g e s t st h a tp b a s h a n e n s i sm a yb ea l la l t e r n a t i v er e s o u r c eo fr b i z o m ap a r i d i s k e yw o r d s ：l i l i a c e a e ；p a r sb a s h a n e n s i s ；c h e m i c a lc o n s t i t u e n t s ；e c d y s t e r o i d s ；s t e r o i d a ls a p o n l i l si i西南大学硕士学位论文第1 章文献综述皇曼曼舅舅曼曼i i i一一i i i 鼍皇曼鼍舅曼鼍曼鲁曼曼曼蔓曼曼曼寡曼鼍寰曼曼曼曼舅曼曼曼曼量曼鼍曼第1 章文献综述重楼属植物的甾体皂苷及其核磁共振谱特征与药理活性1 1 概述重楼属( p a r i sl ) 隶属于百合科( l i l i a c e a e ) ，在全世界共有2 4 种，主要分布于亚欧大陆的热带和温带地区，我国有1 9 个种，主要分布于云南、四川、广西等地【l 】。本属植物有多种都做药用，如滇重楼( pp o l y p h y l l as m i t hv a t y u n n a n e n s i s ( f r a n c h )h a n d m a z z ) 、七叶一枝花( pp o l y p h y l l as m i mv a t c h e n e n s i s ( f r a n c h ) h a r a ) 、金线重楼( p d e l a v a y if r a n c h ) 、多叶重楼( pp o l y p h y l l av a r p o l y p h y l l a ) 、狭叶重楼( pp o l y p h y l l av a t s t e n o p h y l l af r a n c h ) 、长药隔重楼( pp o l y p h y l l av a r p s e u d o t h i b e t i c ah l i ) 、毛重楼( pp u b e s c e n s ( h a n d 一m a z z ) w a n ge tt a n g ) 、球药隔重楼( p f a r g e s i if r a n e h ) 、北重楼( p v e r t i c i l l a t am b i e b ) 等，其中滇重楼和七叶一枝花被2 0 1 0 版中国药典作为中药重楼的基源植物而收载【2 】。目前对重楼属植物的化学成分及其药理活性都已有了较深入的研究。现己从该属植物中分离鉴定的化学成分主要有c 2 7 甾体皂苷和c 2 l 孕甾烷苷、黄酮苷、甾醇及其苷、p 蜕皮素等，其中甾体皂苷类化合物为主要化学成分【1 1 。因文献报道重楼属植物的药理作用与甾体皂苷成分密切相关，故本文将对重楼属植物的甾体皂苷类化合物及其核磁共振谱特征和药理活性研究进展进行了综述。1 2 甾体皂苷类化学成分甾体皂苷广泛存在于重楼属植物中，且被认为是主要的活性成分，目前国内外学者已从该属植物中分离得到5 0 多个甾体皂苷成分，其中的苷元主要有异螺甾烷醇类的薯蓣皂苷元( d i o s g e n i n ) 、偏诺皂苷元( p e n n o g e n i n ) 、2 4 a 一羟基偏诺皂苷元、2 7 羟基偏诺皂苷元、2 3 ，2 7 二羟基偏诺皂苷元、纽替皂苷元( n u a t i g e n n i n ) 、2 5 s 异纽替皂苷元( i s o n u a t i g e n n i n ) 、呋甾烷类的原型皂苷元( p r o t o - t y p es a p o n i n ) 以及c 2 1 甾体类皂苷元等2 5 种苷元，它们的结构见图1 1 。皂苷的糖链主要连接在苷元的c 3 位，糖链部分有单糖、双糖、三糖或四糖，且三糖和四糖苷的糖链均分支，而糖的种类主要由b d 葡萄吡喃糖、0 【一l 鼠李吡喃糖、a ，l 阿拉伯呋喃糖三种糖组成。此外，糖链也有连接在苷元的c 1 位的，在呋甾烷类皂苷中还可见苷元的c 2 6 位连接葡萄糖。a 薯蓣皂苷元b偏诺皂苷元r lr 2c 原型皂苷元ihd 原型皂苷元i io he 原型皂苷元hf 原型皂苷元o hr lr 2ho hhh兀o hho ho ho c h 3o c h 3j 。lr 3c h 3c h 2 0 hc h 2 0 hj 纽替皂苷元k 异纽替皂苷元l 孕甾一5 ，1 6 - - - - 烯一3 一醇一2 0 - mm ( 2 3 s ，2 5 s ) - 3 b ，2 3 ，2 7 一t r i h y d r o x y l s p i r o s t 一5 一e n2j i oinc h a c o t r i s y l ( h o m o a r o c h o l e s t 一5 一e n e ) 0 ( 2 3 s ，2 4 s ) 一螺甾烷醇一5 ，2 5 一二烯一1 p ，3 p ，2 3 ，2 4 一四醇协o hp 3 1 3 ，5 a ，s 1 3 一三羟基一7 ( 8 ) 塥一异螺甾烷醇o r 。re h o l e s t - 5 - - o n e - 1 6 , 2 2 - d i o n e1 1 啊q 薯蓣皂苷元q 3hse h o l e s t a - 5 ，1 7 ( 2 0 ) - d i e n e - 1 6 ，= 2 2 d i o n ehr 2hho ht ( 2 5 r ) - 5 ，2 0 ( 2 2 ) - d i e n e - f u r o s t - 3 1 3 ，2 6 一d i o lu ( 2 3 s ，2 4 s ，2 5 s ) - s p i r o s t - 5 一e n e - 1 1 3 3 1 3 , 2 1 , 2 3 , 2 4 - p e n t o l图1 1 重楼属植物甾体皂苷元的结构f i g 1 1s t r u c t u r e so fa g l y c o n e so fs t e r o i ds a p o n i n si np l a n t so f p a r i s l3u两南大学硕七学位论文第1 章文献综述1 2 1 薯蓣皂苷薯蓣皂苷为重楼甾体皂苷的主要形式之一，是由薯蓣皂苷元在3 位与糖链形成苷键而成。重楼属植物中的薯蓣皂苷见表1 1 。表1 1 重楼属植物中薯蓣皂苷t a b l e1 1d i o s g e n i ns a p o n i n si np l a n t so fp a r i sl c o m p o u n d名称糖链来源文献l重楼皂苷i3 - o - r h a ( 1 - - * 2 ) i a r a ( 1 - - - 4 ) - g l cp p o l y p h y l l a【3 12重楼皂苷i i3 - o - r h a ( 1 - - - , 2 ) r h a ( 1 - 4 ) - r h a ( 1 - - , 4 ) - g l cpp o l y p h y l l a【3 】3重楼皂苷m3 - o - r h a ( 1 - - - , 2 ) r h a ( 1 - - - , 4 ) - g l cpp o l y p h y l l a【3 】43 - o - a r a ( 1 - - , 4 ) - g l ep p o l y p h y l l a【4 】53 d - d 哦1 3 ) - g l cpp o l y p h y l l a【5 】6重楼皂苷i v3 - o - r h a ( 1 - - , 3 ) a r a ( 1 4 ) - g l cp p o l y p h y l l a【5 】73 d - r h a ( 1 吨) - r h a ( 1 4 h r h a ( 1 3 ) 】- g l cpp o l y p h y l l a【5 】83 - o - r h a ( 1 - - * 4 ) - r h a ( 1 - - - , 3 ) - 瞄“l 一2 ) 1 - r i mp p o l y p h y l l a【5 】9重楼皂苷v3 - o - r h a ( 1 - - , 2 ) - g l cpp o l y p h y l l a1 6 11 0纤细薯蓣皂苷3 - o - g l c ( 1 - - , 3 ) r h a ( 1 - - , 2 ) 一g l c户a x a s阴1 1重楼皂苷c3 - o - r h a ( 1 - - , 2 ) a r a ( 1 - - , 3 ) - g l ep p o l y p h y l l a【8 11 23 - o - g l c，p o l y p h y l l a【l 】11 33 - o - r h a ( 1 - , 4 ) - g l c尸p o l y p h y l l a【l 】1 43 - o - r h a ( 1 - - - 珥) a r a ( 1 - - * 3 ) - g l e尸p o l y p h y l l a【l 】1 53 。- g l c ( 1 - - * 3 ) - r h a ( 1 - - * 4 ) a r a ( 1 - - 3 ) 9 1 cp p o l y p h y l l a【l 】1 63 d - g l c ( 1 3 ) - r h a ( 1 - - - , 4 ) r h a ( 1 3 ) 】- g l c尸p o l y p h y l l a【l 】g | c 爷d - g l ck h a 嘲t - l - r h aa r a 卸t - l - a r a1 2 2 偏诺皂苷表1 2 重楼属植物中偏诺皂苷t a b l e1 2p e n n o g e n i ns a p o n i n si np l a n t so f p a r i sl c o m p o u n d名称糖链来源文献1 7重楼皂苷v i i3 - o - r h a ( 1 - - , 2 ) r h a ( 1 - - - , 4 ) - r h a ( 1 - - - * 4 ) - g l c尸- v e r t i c i l l a t a【9 】1 8重楼皂苷h3 d - a 顽l 一4 ) 【r h a ( 1 2 ) 】- g l c只p o l y p h y l l a【4 】1 93 - o - a r a ( 1 - - - , 4 ) - g l cpp o l y p h y l l a1 4 】加3 0 r h a ( 1 2 ) 【r h “l + 4 ) 1 - g i cpq u a d r i f o r i s 1 0 12 l重楼皂苷3 - o - r h a ( 1 - - - * 2 ) - g l cpp o l y p h y l l a【6 】2 23 - o - g l e ( 1 - - - , 3 ) r h a ( 1 - - - , 2 ) - g l c尸a x 缸l i s【刀2 33 o r h a ( 1 珥) f t l 1 珥) - 酉cp p o l y p h y l l a【1 l 】2 43 d - r h a ( 1 2 ) 【x y l ( 1 5 ) a 呱1 4 ) 】- g l cpp o ! y p h y l l a【1 2 】2 53 - o - g l c尸p o l y p h y l l a【l 】_ - _ l _ - _ _ _ 一ii - - _ _ - - _ - - _ _ - - _ _ _ i - l - _ - _ - _ - 一g l 萨p m g l c 脚- l - r l ma 1 a 铷- l - m4西南大学硕士学位论文第1 章文献综述偏诺皂苷为重楼甾体皂苷的另一主要形式，偏诺皂苷元与薯蓣皂苷元的主要区别仅在1 7 位多了一个羟基，其苷也是由苷元在3 位与糖链形成苷键，重楼属植物中的偏诺皂苷见表1 2 。1 。2 3 原型皂苷原型皂苷是由呋甾烷型的原型皂苷元在c 3 和c 2 6 分别连接糖链和葡萄糖而成，根据苷元结构特点主要分为四类，它们的主要区别在于1 7 位和2 0 位的取代基不同。重楼属植物中的原型皂苷见表1 3 。表1 3 重楼属植物中原型皂苷t a b l e1 3p r o t o - t y p es a p o n i n si np l a n t so fp a r i sl 1 2 4 其他皂苷除以上几种皂苷外，从重楼属植物中还分离鉴定了其他甾体皂苷，如：2 4 a 羟基偏诺皂苷、2 7 羟基偏诺皂苷、2 3 ，2 7 二羟基偏诺皂苷、纽替皂苷、2 5 s 异纽替皂苷元以及c 2 i 甾体类皂苷等。重楼属植物中的其他皂苷见表1 4 。1 3 重楼属植物中甾体皂苷的结构解析1 3 1 甾体皂苷苷元部分的核磁共振谱结构特征在1 h - n m r 谱中，重楼皂苷元的1 8 、1 9 、2 1 、2 7 位四个甲基氢和1 6 、2 6 位上的氢，具有特征化学位移值。一般四个甲基氢处于高场，1 8 、1 9 位甲基氢均为单峰，且1 8 位氢的化学位移值常比1 9 位小，2 1 、2 7 位甲基氢均为双峰，且2 7 位的化学位移值5西南大学硕士学位论文第1 章文献综述i常比2 1 位小，1 6 位和2 6 位上的氢为连氧碳上的质子，处于较低场，较易辨认，而环上的质子化学位移值相近，重叠严重，较难识别。表1 4 重楼属植物中其他皂苷t a b l ei 4o t h e r - t y p es a p o n i n si np l a n t so fp a r i sl g i c = 争d - g l c 黼- l - t h aa m z a - l - a r ax y l = 争d - x y la g r a w a l 等 3 0 , 3 u e l 较总结了许多甾体皂苷及其苷元的1 h - n m r 数据，发现2 5 r 和2 5 s 异构体可通过2 6 位和2 7 位的化学位移值进行判断。在f 环无取代的螺甾烷类皂苷中，当构型为2 5 r 型时，2 6 位质子的化学位移范围在弱3 - 3 6p p m 内，且此碳上的两个质子的化学位移值之差小于o 1p p m ，2 7 位m e 质子的化学位移值范围在加7 1 o 8 3p p m 内；当构型为2 5 s 型时，2 6 位质子的化学位移范围在弱似0p p m 内，且此碳上的两个质子的化学位移值之差在o 6 3 加7 9p p m 范围内，2 7 位m e 质子的化学位移值范围在和9 5 1 1 3p p m 内。在呋甾烷类皂苷中，2 6 位质子的化学位移值之差小于0 4 8p p m时可推断该构型为2 5 r ，而化学位移值之差大于0 5 7p p m 时可推断该构型为2 5 s 。6西南大学硕士学位论文第1 章文献综述在乃c - n m r 中，甾体皂苷元的2 7 个碳信号可得到很好的辨认。a g r a w a l 等【3 2 】发现c 2 2 位的化学位移值对于确定甾体皂苷的母体骨架至关重要。苷元为1 6 羟基胆甾烷，& 2 2在3 5 p p m 左右；苷元为1 6 ，2 2 一二羟基胆甾烷，t ；c - 2 2 在7 2 p p m 左右；苷元为呋甾烷，& 抛在9 0 p p m 左右；苷元为螺甾烷，t s c - 2 2 在1 0 9 p p m 左右；苷元为2 2 羟基呋甾烷，6 c - 2 2 在11 0 p p m 左右；苷元为2 2 - 甲氧基呋甾烷，t c - 2 2 在l1 2 p p m 左右；苷元为呋螺甾烷，茈也在1 1 9 p p m 左右；苷元为1 6 - 羟基胆甾烷2 2 酮，巧c - 2 2 在2 1 6 p p m 左右；故可通过c 2 2 位的化学位移值可推断甾体皂苷元的类型。重楼属植物中螺甾烷类皂苷和呋甾烷类皂苷的碳谱数据见表1 5 和1 6 。1 3 2 甾体皂苷糖部分的核磁共振谱图特征重楼皂苷的糖链主要连接在苷元的3 位羟基上，糖链部分有单糖、双糖、三糖或四糖，且三糖苷和四糖苷的糖链均呈支链形式。糖的种类主要有d d 葡萄吡喃糖、a l 阿拉伯呋喃糖和a l 鼠李吡喃糖三种糖。v a nd e rv e e n 等1 37 j 研究了糖的1 h - n m r ，指出己醛吡喃糖的端基氢处于较低场甜3 - 5 7p p m ，糖上其他位置上的氢信号处于挖9 4 3p p m 范围内。端基氢的化学位移还和立体结构有关，当为平伏键时，化学位移在粥7 5 7p p m ，当为直立键时，化学位移在幽3 5 0p p m 范围内。此外，对于呈4 c l 构象的吡喃糖，且2 位有一直立质子时，若端基质子的耦合常数为每8h z ，说明端基质子也为直立键，可确认d 型糖的构型为b ，l 型糖的构型为0 【，若耦合常数为2 4h z ，则说明端基质子为平伏键，d 型糖的构型为a ，l 型糖的构型为b u j 。在1 3 c - n m r 中，糖的甲基碳的信号在氏1 8p p m 左右，c h 2 0 h 在茈6 2p p m 左右，c h o h 在6 c 6 8 - 8 5p p m 左右，端基碳则在光9 5 1 0 5p p m 左右，b d 和0 【l 型苷键的端基碳化学位移值通常大于炙1 0 0p p m 。当成苷后，端基碳的化学位移值可降至琵9 8p p m ，a d 和p l 型苷键的端基碳化学位移值小于琵1 0 0p p m ，故可根据良9 5 1 0 5p p m 区域中的碳信号个数和位移值来推断苷中含有的糖的个数和苷键构型【3 8 】。此外，u s u i 等【3 9 】研究发现，糖成苷后苷化位移和甲基化后产生的变化一样。t o r i 掣4 0 】指出，羟基苷化使0 【c向低场移约+ 8 3p p m ，p c 向高场移约1 8p p m ，丫c 移动约为+ 0 7p p m ，故通过与糖的甲基苷的碳的化学位移比较，应用苷化位移规律可判断苷键的位置，推知糖糖的连接位置。甾体皂苷中糖的碳谱数据见表1 7 。豆蚕要至星e 巨匿苤匿至歪e 兰要e 三量至至至量11奠龟一n印annnn一寸甘寸昏=22 = = 2 = = = =2=罱蜀葛葛昏呻寸a昏州nnh卜卜oon一一暑暑s譬薯兽苗譬譬譬譬兽谗暑譬$葛8峥幢_峥口aho_ nn寸寸h_o叶凸a昌是罱罱昌暑品暑昌是罱昌意昌昌罱叠爱蛊畿誊甍一一够簟nn小n叶nnh。n寸aa罱霜& 品是高罱高食高蜀罱高罱器盘罱意爱裔铃嗨qqq卜哼t叶n寸一一_叶hnh一夏鬲窝嗣譬磊寓锚钭簧瓮嗣鬲譬簧篙罱盘窝斟薯nn哆簟n一一nn寸non寸n口h”8 g g 88s82 2 2 2g窨8 82 2受宝受d璺99哆峋99卜n寸nn寸h卜口innn一：2 ：22 ：2 ：2 ：2 = 22 2 2岛a西西aaa套2西昏9o9n9曩an寸nn寸昏oan”h等等掣掣掣；导导寻导荨荨荨荨荨；窖荨导喜害寸冀叠殳啦寸nooonn寸叶n寸h叶n2金22 2宝2昌高昌罱2 垒宝宝垒变变垒璺2 jn谚龟nnnhh一一一_a一一_甘”n=要竺=兰2= =2 = 2=2竺=叠eq龟寸一卜n哆h_ooh昏甘h一noog岔譬譬gggg宝宝宝宝宝累星器宝宝宝宝客累_一喧_一直口口no一一西。一h寸_；苫；磊昌宝宝宝宝& 宝宝宝窝客糸宝客更鲁1州够卜够n备o西叶_一一口h嗣裔搿科罱譬罱斜罱窝簧鬣譬罱鬲譬瓮=罱禽=i卜h一州心口_oonn一寸_一昌器寮窝罱器器器器器器器鬟禽器g斟矗器舞舞舞叼唆99峨吐叶h哆hha一一a。n一”导导；导导导导导等导零荨导导荨辱辱辱辱辱孽负奠寸寸昏oah_一一_一一n- n寸”n盆窘导导昌导昌裔斜譬譬譬斜裔窝譬g裔鬣譬斜譬一一嗡哆。_oi n”i noo西l n一ooa罱罱高式罱罱式蜀式蜀罱式昌式昌呙罱罱高罱蜀呙一一卜哆一一一口hoo_a一_一i n_一高蛊罱高高罱罱高高高高高高罱高罱高高高高高nn够眵寸n甘no一一。一”n寸n寮昌昌昌寮暑寮昌宾昌昌昌宾寮昌袁爱爱袁爱爱袁h卜寸n卜卜oooo口nnh”寸n盘=；窝斜鬲罱鬲鬲罱鬲罱鬲罱斜斜罱鬲譬斜锚窝鬣nn9眵一noo西o- n_寸寸_寸嗣窝罱譬锚窝譬盆罱斟高钭裔譬锚嗣钭豁嗣裔囊昀眵nn蝈哆”寸叼一寸西一一o罱式岗岗罱高式胬蜀岗岛罱罱罱蜀罱式式罱胬高式昀蝗n节毋够龟n气节n备婚”昏_口_o导导；导导导；导导导导导导掣喜辱喜q9叼魍9n卜lnn哆”on昏h昏i onh罱器器窘容器荨禽罱罱蛊罱篙窘篙罱罱辱罱囊季蓉h一“眵nn卜心寸h一一叶甘non一2拳是器譬譬譬罄篙瓮誊瓮譬篁是衾盅兽寒暮一hh卜no”口nhnon_小n叶i n一昌昌是2 是暑= 昌昌是昌昌是昌昌瓮高搿暑意囊爱”吡o9n一。奠。一寸l n- nnnn岛a_i n瓮高器篇衾衾客譬篇篇篇衾衾=譬盆2衾衾衾衾藿蚁卜n u心n un n u寸n un n u n un 1 )o n u西一u一u卜一u心一un u寸一un u一一u= uo ua u_ )卜u心un u寸un un uu口ilt、o口暑ou11幻售j0罄互qcisilluo暑们pioi尝9d辛口go|idsioj_b葛pl爵售ods匣芝卜卜u：nid一言卜骧簌磐替譬忙碑称堡l攀岳霉覃噬颦删一懈矧蛞藿权徭一捺钗智芒扑+匿扑控菠。口髯浣乐镑景一n 一一甘卜一。n 卜n n nn 一n卜n n甘n n 一一一口n 口一n 口一i 寸一n 寸on i r ”寸no n nn n 寸卜西nn 一n一卜n寸o ”一n寸h n一n 一一卜n -”卜一一”卜寸n no no n卜”o nn 一卜”t ，一n a 一心一口n 并一寸o nn”o n叶n 寸一心n小o nn 卜n口a 寸o n卜一n寸一一一一寸一一甘一o n 卜寸n na 卜一a 卜nn o 一卜n 一心n 寸_n 直一卜母一”n 寸一n 。一一卜n寸o ”寸n t ro no 1 卜n酋a 寸卜o n卜一nn 一一一一a 一_ i卜卜一n n 卜卜n nt r nn a nn n n甘喀一寸寸毒，卜a 一甘寸一n 寸口n 卜一nn 乱n母o n卜一寸n_ 一nt ，卜n寸o nn 一nn n n一n _一n 一一n 卜一n ”卜n 寸n一n小田n寸，一_ _ |”o _婚n 甘n a _n 卜一o 昏n o 口o “n一n ni n 寸一 no 一n一卜nn o nn 一nn 一n西一一_一心n 一”卜一n ”卜n 寸n寸n一卜n卜o 一一n 口一o 寸甘a n 心一a 一口一一”n n田母n卜o 寸o o 寸一一nn 卜n寸o ”卜_ n寸一n昏一n 一o|，一o a n一卜一o n卜na o 寸一仓no 卜一o ni 卜n盘o 寸一na 卜卜o o no 卜nn 一寸_o a no 卜n o n”卜no 寸_o a n一卜一o n崎卜no 寸一o a nn 卜n o n”卜nn g 世议卜n 1 )母n u”n u寸n un n un n l )一n uo u饥一u一u卜一uo u”一u寸一un un ui i uo u乱uu卜u口un u寸un un uupi暑odl_10u1盘k毒-o盟磊一q絮轻磐翟g椎删称鲣孤誉导霉覃噬鞋删i-嵌心id i q 母卜n n 一心一田n n n一h 一卜卜o 一一n n 啦寸l - ”一一卜一n nn n ”n n一卜n一一i ，n o 寸一寸nn 寸n o ni n n一n卜寸一一n n 一心一心n n 一一n _ 卜卜一一一心一心一幛寸_ n o 卜一n nn n n 一n一卜nl - 一寸n o 叶一寸nn 甘n o n州一n一n卜寸n n n 一卜一一”n卜一n _ 卜一_ 一 n 垮寸_ ”一一卜一n nn n 崎一n_ 卜n_ 一寸o 寸一寸hn 甘n o n一n n套一n卜寸n n 卜_西o o卜o nn a n西一nn 研。一直寸一n n 寸n a 一r 卜_卜n ni - _ 寸n nn 甘一，寸一卜n a no 卜n寸t ，寸o n nrhno n n _n 卜一婚心o nn 就na 一nn a o 刊_ ”一一n 寸n 一n 崎_ 1 n 崎寸一寸一na 寸n o 寸卜西na o na 卜n田n 寸a 卜n”寸口o n _n 一曲啦口田o nn 直h西一n一小。一一n _一一甘a 一t r 一”n 卜一一n n寸田”o 一寸a nh 一hn 卜nro 寸卜n 卜一一n 卜一a 啦峪o nh a n一nn 乱。一a 寸一n n rn 一口一n 口o 口一no n n一寸a nn n n一nn n 寸o 一寸一寸o n 一寸叶一一一_卜_ 田昏n | r o n o 卜心一一_n n 一一n寸心_o 卜一”n 崎n ”一nn ”一一叶一o 叶n 寸ha 一甘”o ”一n no 一no n n o t | 母n m 9n o r田n n心卜口i n 一一卜寸一a n n寸西-崎口一t r n 口卜一一n n口峪no 一n o 寸一一no 卜nn o ”n _ nn n n崎一n 一西口一a 崎o 婚n na h 一口8 一一，”一o n ，t | a _寸口一o c 9r 一n n n 口”o 小na 盘n一一一一h n寸o n一n甘n n昌_一寸n寸o 卜a n n n一n na o 一一一n 一口nt ，a 1 口_卜n r 9o 一n n n”口”西na nh 一nl - 卜n寸o ”一一nn 一n一n 一心西n 一n 寸一心卜no 寸峪a n 一n 寸一口卜卜no t r ”西n 一n 寸一口- 卜no 寸o 一r 一_ a n一卜一o n甘卜nn 寸一夺n卜卜卜n o nn 卜n唧_ =n n瓮一o ni 客n 卜卜n卜”卜a n，n n田n 一n 寸寸卜崎一n寸o 一寸一寸a n心卜叶o 一竹卜n口o 寸_ i”o 寸n 卜n o n卜no t r n o t r甘卜一o ni r 卜n奶奶寸叶藿议卜n u心n un n u甘n un n un n un uo ua u一u卜一u口一un u寸一un un u= uo u昏uu卜u口u”ui ，un un uu们芒：o拿皇o) 口o j c 一_ c o qv，i盘k毒-o卫ii时一ij一二一coq时勺一)jq_oq_。q11日_口一a10j时_日勺rei_qoq匠荟zufin hd o 时蝼v氅簌密毯s椎呻粼媸i骘七b察覃噬掣删9一懈矧好藿杈籽一躲钗窄g舻+匿扑k证巨西南大学硕士学位论文第1 章文献综述1 3 3 甾体皂苷结构解析的新方法液质联用质谱对于甾体皂苷元的结构测定很有意义，其裂解方式很典型。苷元对电子撞击最敏感的部位是螺缩酮部分，苷元质谱中均出现很强的m e1 3 9 的基峰，中等强度的r n e1 1 5 的碎片峰及弱的m e1 2 6 离子峰。它们均来自螺甾烷侧链。当f 环有羟基取代时，苷元这三个碎片均发生质量变化，增加1 6 ，分别为m e1 5 5 、1 3 1 和1 4 2 ；若为2 5 ( 2 7 )的苷元，则质量数减少2 ，分别为m e1 3 7 、1 1 3 和1 2 4 t 。表1 7 甾体皂苷中糖部分的碳谱数据t a b l e1 71 3 c - n m rs p e c t r a ld a t af o rs u g a rm o i t yo fs t e r o i ds a p o n i n s刘海等1 4 1 l 利用h p l c e s i m s 技术检测了重楼属1 3 个种的甾体皂苷，通过与标准物的保留时间和质谱图进行比较，同时确定了1 1 种甾体皂苷，检测限低于4 0n e , r r l l ，这为重楼属植物的质量评价提供了一种新的方法。满淑丽等心1 利用甾体皂苷在电喷雾正离子和负离子模式下的电离特点不同，结合应用两种离子模式，阐明了该类化合物在电1 0西南大学硕士学位论文第1 章文献综述皇曼舅皇曼曼! 曼曼量曼皇葛i ；i 舅曼孽曼皇曼皇量鼍曼皇皇皇量曼曼曼曼曼曼曼量皇量曼舅置皇曼鲁皇曼皇皇寰皇曼皇曼曼皇詈曼曼皇曼曼皇量曼曼曼舅曼曼曼皇曼量皇曼皇曼曼曼量喷雾多级串联质谱中的碎裂规律，进而应用此规律确定了2 3 神甾体皂苷，其中4 对为异构体，5 种为新化合物，这为快速、准确鉴定甾体皂苷、甚至是痕量甾体皂苷的结构提供了一种新的手段。表1 7 甾体皂苷中糖部分的碳谱数据( 续)t a b l e1 71 3 c - n m rs p e c t r a ld a t af o rs u g a rm o i e t yo fs t e r o i ds a p o n i n s ( c o n t i n u e d )p o s i t i o n41 911 83 73 2s 85 91 02 24 05 2s 63 - g l cg - 2 - r h ag - a - a r ag - 3 - g l c1 0 3 0 5 77 6 57 7 67 7 26 3 4t 0 9 88 3 27 8 88 7 66 2 21 0 3 o7 5 77 6 47 7 67 7 26 3 11 0 9 88 3 27 8 98 7 66 2 21 0 0 21 0 0 71 0 0 01 0 0 2 21 0 0 21 0 0 21 0 0 09 9 71 0 0 31 0 0 3l o o 27 9 17 8 27 7 87 7 47 7 47 7 4 7 07 7 27 7 47 6 97 7 47 7 47 8 17 7 37 7 77 7 77 7 ，78 9 38 9 08 9 88 9 68 9 57 6 77 7 27 6 37 7 17 7 17 7 ，l6 9 56 9 27 0 06 9 46 9 97 7 07 7 87 6 37 6 77 6 87 6 87 8 37 7 97 8 17 7 77 8 06 2 56 3 16 2 56 1 46 1 56 1 ，46 2 ，46 2 16 2 96 2 46 2 71 0 1 91 0 2 51 0 1 91 0 1 91 0 1 91 0 1 91 0 2 01 0 1 81 0 2 51 0 2 01 0 2 47 2 57 3 47 2 57 2 57 2 57 2 57 2 87 2 37 2 87 2 57 3 07 2 87 3 07 2 17 2 87 2 87 2 87 2 77 2 37 3 17 2 77 2 07 4 27 4 77 3 87 4 27 4 27 4 27 3 97 3 57 4 57 4 37 4 26 9 57 0 16 9 66 9 56 9 56 9 56 9 56 9 27 0 06 9 56 9 81 8 71 9 21 8 41 8 71 8 71 8 71 8 61 8 41 8 71 8 71 8 91 0 9 611 0 21 0 9 51 0 9 71 0 9 71 0 9 68 2 78 3 38 2 78 2 78 2 78 2 77 7 97 8 57 8 47 8 07 7 97 7 98 6 78 7 28 6 18 6 78 6 88 6 76 1 46 2 o6 1 1 26 2 56 2 56 2 51 0 4 57 4 87 8 57 1 47 8 56 2 9 3 5 】 3 5 】【3 3 】【3 4 】【1 6 【3 6 】【2 7 】【1 5 】忉1 0 4 97 5 - 37 9 07 1 97 8 26 2 7 1 9 】1 0 4 47 5 o7 8 57 1 57 8 86 2 4【3 6 】1 0 4 77 5 17 8 o7 1 77 8 66 3 1【1 9 】1 4 药理作用重楼具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效，用于疔疮痈肿、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑伤痛、惊风抽搐等症，是云南白药、宫血宁胶囊、季德胜蛇药片的重要组成药物。近年来药理研究表明重楼属植物具有抗肿瘤、免疫调节、止血、抗生育、抑菌、治疗心血管和胃肠道疾病等作用，其中主要有效成分为甾体皂苷。1 1j52l9l 呵榔舭舢烈m。2，4，6。2，4，6，2，4，。234 ，。嫦两南大学硕十学位论文第1 章文献综述1 4 1 抗肿瘤作用药理研究表明，甾体皂苷是重楼抗肿瘤的主要活性成分。石小枫等f 4 3 】通过灌服和腹腔注射两种方式研究重楼总皂苷对h 2 2 瘤细胞的作用，结果显示重楼总皂苷在体内能抑制h 2 2 瘤细胞的d n a 、r n a 的生物合成，且在体内还能干扰荷瘤小鼠脾组织d n a 、r n a 的生物合成。朱丽丽等m 】以s g c 7 9 0 1 人低分化胃腺癌细胞为研究对象，在体外采用四甲基氮唑盐( m t r ) 法观察重楼皂苷对细胞生长的抑制作用，结果显示重楼皂苷作用2 4h 后能增加该细胞内【c a l ，从而诱导s g c 7 9 0 1 细胞凋亡而抑制细胞增殖。颜璐璐等1 4 5 j 以小鼠肺腺癌细胞株l a 7 9 5 及其宿主近交系t 7 3 9 荷瘤小鼠为实验对象研究滇重楼总皂苷、滇重楼皂苷i 和薯蓣皂苷元的抗肺癌活性，实验结果显示滇重楼总皂苷在体内外皆有强的抗肺癌作用。此外，颜璐璐等【4 6 】报道，从滇重楼中分离纯化得到的6 种皂苷对1 0 种不同类型的肿瘤细胞株都有抑制作用，比较研究化合物的细胞毒活性的构效关系，结果显示，滇重楼皂苷对各种肿瘤细胞株的抑制强弱依次为小鼠肺腺癌细胞株l a 7 9 5 、人肺癌细胞株a 5 4 9 、人宫颈癌细胞h e l a 、人结肠癌细胞株c a c o 2 、人急性髓性白