补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究硕士论文.pdf

河南中医学院河南中医学院届硕士研究生学位论文届硕士研究生学位论文 补肾健脾补肾健脾固冲固冲方方对对未成年未成年雌性大鼠雌性大鼠子宫局部活性子宫局部活性 物质物质作用作用的实验研究的实验研究 中国中国郑州郑州 年年月月日日 研究生姓名：研究生姓名： 于喜乐 导导 师：师： 王希浩 主任医师 指导组成员：指导组成员： 王晓丽 助理研究员 梁瑞锋 实习研究员 学科、专业：学科、专业： 中医妇科学 所属院、所属院、部部： 第二临床医学院 硕士学位论文原创性声明硕士学位论文原创性声明 本人所呈交的硕士学位论文，是在导师王希浩教授（主任医师、研究员等）的指 导下，独立进行科学研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内容外， 论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明 的法律结果由本人承担。 特此声明。 论文作者（签名） ： 年 月 日 硕士硕士学位论文使用授权声明学位论文使用授权声明 本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关规定，同意学 校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅 或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本论文（注：保密论文在解密 后适用本授权声明） 。 特此声明。 论文作者（签名） ： 导师（签名） ： 年 月 日 年 月 日 目录目录 摘要1 英文摘要2 前言4 材料与方法5 1 实验材料5 2 实验方法6 结果8 理论探讨10 1 中医学对青春期功血的认识10 2 中药作用机理的现代研究12 3 西医学对青春期功血的认识13 4 实验动物的选择15 5 导师对本病的认识和学术思想探讨15 6 实验结果分析及作用机制探讨18 结论20 致谢21 参考文献22 附录 1 病理图片25 附录 2 文献综述29 摘要 1 摘摘 要要 目的目的：本课题意在通过实验研究，观察补肾健脾固冲中药对未成年雌性大鼠子 宫局部活性物质的影响，从子宫局部血管生成和舒缩角度探究补肾健脾固冲中药 治疗青春期功血的作用机理，从而为该病的治疗提供更深层次的科研思路和临床 治疗依据。 方法：方法：将未成年雌性 wistar 大鼠随机分为补肾健脾固冲方高、中、低剂量组， 宫血停组， 己烯雌酚组和空白对照组 6 组， 用酶免法检测大鼠子宫匀浆一氧化氮 （no） 的含量，放射免疫法检测大鼠子宫匀浆内皮素（et）的含量；并用免疫组化法观 察子宫局部血管内皮生长因子（vegf）和基质金属蛋白酶-9 （mmp-9）的表达情况。 结果：结果： （1）与空白对照组相比，低剂量组、己烯雌酚组、宫血停组大鼠子宫匀浆 no 含量均降低，低剂量组、己烯雌酚组差异有统计学意义（p0.05） 。 （2）与空白对照组相比，大鼠子宫匀浆 et 含量高剂量组升高显 著（p0.05） ，低剂量组、己烯雌酚组升高极显著（p0.05） 。 （3）与空白对照组相比，各组子宫内膜局部 vegf 的表达强度和表达面 积均有提高，表达强度即阳性区平均积分光密度，中剂量组、低剂量组、宫血停组、 己烯雌酚组升高极显著（p0.05） 。表达面积即阳 性面积率，与空白对照组比较，中剂量组差异显著（p0.05） ，低剂量组、己烯雌酚 组、宫血停组差异极显著（p0.05） 。（4）与空 白对照组相比，各组子宫内膜局部 mmp-9 的表达面积和表达强度均降低，表达强度， 中剂量组、低剂量组、宫血停组、己烯雌酚组降低显著（p0.05） ；表达面积，中剂量组差异显著（p0.05） ，己烯雌酚组、低剂量组、 宫血停组差异极显著（p0.05） 。 结论结论：补肾健脾固冲方能提高未成年大鼠子宫局部 et 的水平，增强子宫局部 血管收缩；同时降低子宫局部 no 的水平，减弱子宫局部血管舒张，进而促进子 宫局部血管舒缩功能协调而止血。补肾健脾固冲方能增强大鼠子宫局部 vegf 的 表达， 降低子宫局部 mmp-9 的表达， 促进血管生成和内膜修复而达到止血的目的。 实验表明该方能调节未成年雌性大鼠子宫局部活性物质的水平，促进子宫内膜血 管舒缩协调，上皮和血管再生，有效地改善子宫局部微环境，为临床运用补肾健 脾固冲法治疗青春期功血提供了实验依据。 关键词：关键词：青春期功血；子宫局部活性物质；补肾健脾固冲方；实验研究 补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究 2 experimental study of bushenjianpiguchong prescription on the minor female ratsuterine local active substances yu xile(gynecology of traditional chinese medicine) directed by wang xihao abstract purpose: the experimental study was designed to observe the levels change on which chinese medicine of bushenjianpiguchong on the minor female rats uterine local active substances ,explore the function mechanism of traditional chinese medicine treatment of juvenile uterine bleeding from local angiogenesis and easy shrinks, and provide deeper view of research and clinical treatment basic for the treatment of the disease. methods: young female wistar rats were randomly divided into six groups, high, medium and low dose group of bushenjianpiguchong prescription, gongxueting group, diethylstilbestrol group,blank control group. using elisa determination the content of uterine nitric oxide (no),and using radioimmunoassay determination the content of uterine endothelin (et) , using immunohistochemical determination the content of uterine local vascular endothelial growtha fctor (vegf) and matrix metalloproteinase-9 ( mmp9). results: (1) compared with the blank control group, the rats in low-dose group, diethylstilbestrol group, gongxueting group can decrease the content of no, in which low-dose group, diethylstilbestrol group the difference was statistically significant (p0.05). (2) compared with the blank control group, traditional chinese medicine high, low-dose groups and diethylstilbestrol group can obviously improve juvenile rats et level, the difference of which was statistically significant(p0.05),and low-dose groups and diethylstilbestrol groupare even more significant(p0.05). (3) compared with the blank control group, the vegf expression intensity of all groups are improved , the difference of which was statistically significant except high dose group (p0.05); compared with the blank control group, the vegf expression area of medium-dose group was significant statistically (p 0.05), diethylstilbestrol group , low-dose group, and gongxueting group are even more significant(p0.01).(4) compared with the blank control group, the mmp9 expression intensity of all groups are decreased except high-dose group, the difference of which was even more significant(p0.05);all groups tended to drease in mmp 英文摘要 3 9 expression area , which in low-dose group, medium-dose group,diethylstilbestrol group, gongxueting group were significant statistically with the blank control group (p 0.05) . conclusion: the traditional chinese medicine can significantly improve the uterine local et level, enhance the uterus local vasoconstriction. also reduce the level of local no uterus, abate uterine local vasodilation, and promote the uterus local aso-motor function coordination and hemostatic. can strengthen the spleen solid uterine local vegf expression, lower uterine local mmp - 9 expression, promote angiogenesis and lining repair and achieve the purpose of bleeding. the study shows that bushenjianpiguchong precription can adjust underage female rat uterine local active substances, promote the level of endometrial aso-motor coordination, epithelial and vascular regeneration, effectively improve the uterus local microenvironment, which provide an experimental basis for the clinical application of bushenjiapiguchong precription treating juvenile uterine bleeding. key words: juvenile uterine bleeding; uterine local active substances; experimental study; bushenjianpiguchong precription 补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究 4 前前 言言 青春期功血是妇科生殖内分泌领域的常见疾病，亦是疑难重症，依据其临床 表现属于中医学“崩漏”范畴。本病多来势迅猛，易造成失血性贫血，且缠绵难 愈，给青春期女性身心带来很大痛苦，因此关于青春期功血的治疗一直是医学界 所关注的课题，探讨防治本病的有效方法，有着重要的现实意义。 青春期功血主要是机体内部和外界诸多因素影响下丘脑-垂体-卵巢(h-p-o) 轴的调节作用，从而导致内分泌失调所致。近年来越来越多的学者发现除了激素 水平的异常之外，青春期功血的发生，还与子宫局部微环境的改变密切相关，包 括子宫内膜微环境（子宫内膜脱落、子宫血管舒缩、子宫内膜重建及性激素受体 等）、子宫内膜细胞的凋亡等方面。目前西医多采用性激素止血，促排卵，人工 周期等方法，但临床疗效还不够满意，易反复，副作用大。导师在中医学理论的 指导下，结合现代医学研究及自己多年的临床实践认为，青春期功血病本在肾， 病位在冲任、胞宫，表现为胞宫藏泻失度，治疗关键在于促使肾中精气充盛，天 癸成熟。治疗从补肾入手，以补肾健脾、固冲止血为主要治则，取得了良好的疗 效。但实验研究较少，缺乏深层次的机理探讨。 本课题以未成年雌性大鼠为研究对象，借助先进的实验技术手段，在前 期研究的基础上， 通过观察大鼠子宫局部活性物质一氧化氮(no)、 内皮素 （et） 、 血管内皮生长因子（vegf）和基质金属蛋白酶-9（mmp-9）的变化，从不同角 度探讨补肾健脾固冲方的止血作用机制，阐明该方治疗青春期功血的作用机理， 为中医药治疗青春期功血提供更为开阔的科研思路和临床治疗依据。 材料与方法 5 补肾健脾补肾健脾固冲固冲方对子宫局部活性物质的影响方对子宫局部活性物质的影响 材料与方法材料与方法 1 实验材料实验材料 1.1 实验动物 wistar 未成年雌性大鼠，21 日龄，spf 级，体重 4060g，90 只。由河南省实 验动物中心提供，合格证号：scxk(豫)2005-0001。适应性饲养 3 天后，开始实验。 实验过程中常规饲养。 1.2 饲料 一级大鼠标准全营养饲料，由河南省实验动物中心提供，规格：40kg/袋。 1.3 实验用药 补肾健脾固冲方（按临床剂量 20 倍取材） ：党参、炒白术、生白芍、荆芥炭各 300g，生山药、旱莲草、仙鹤草各 600g，山萸肉、川断、阿胶（烊化）各 240g，生地、 鸡内金各 180g，熟地 420g,所得制剂生药浓度约 1.5g/ml，高温消毒后置于 4冰箱 保存备用，由河南省中医药研究院制剂室提供，使用时配成适当浓度。 宫血停颗粒 10g/袋 20g/次 3 次/日 哈药集团中药三厂生产， 批准文号：国药 准字 z23022074，批号：091017。 己烯雌酚片 0.5mg/片，0.5mg /次 1 次/日 合肥久联制药有限公司生产，批准 文号：国药准字 h34021250，批号：20090124。 1.4 主要实验试剂 一氧化氮（no）elisa 试剂盒 上海西唐生物科技有限公司，批号：20100228 内皮素（et）放免试剂盒 北京北方生物技术研究所提供，批号：20100228 血管内皮生长因子（vegf）试剂盒 兔多克隆免疫组化试剂盒：由美国 santa cruz 公司提供 基质金属蛋白酶-9（mmp-9） 兔多克隆免疫组化试剂盒：由美国 santa cruz 公司提供 1.5 主要实验器材 智能放免r测量仪 上海原子核研究所日环仪器厂 大容量低速冷冻离心机 上海中科生物医学有限公司 电子秤 eb-2800m libror 分析天平 libror l-160dtp ja 石蜡切片机 typ1212 德国 摊片烤片机 hg3003-3 南京电器三厂 补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究 6 光学显微镜 olympus biosens digital imaging system v1.6 分析系统 上海山富科学仪器有限公司 lecia 显微照像系统 德国 其他材料：250ml 烧杯、10ml 一次性注射器、试管架、载玻片、盖玻片、一次 性橡胶手套、大鼠灌胃器、不锈钢普通手术剪、组织剪、止血钳、直镊，匀浆器 等。 2 2 实验方法实验方法 2.1 动物分组 适应性喂养 3 天后，将 90 只未成年雌性大鼠随机分为 6 组：即空白对照组、 己烯雌酚组、宫血停组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组，每组 15 只。 2.2 给药剂量与方法 2.2.1 空白对照组：给予去离子水灌胃，20ml/kg，1 次/天，连续 30 天。 2.2.2 己烯雌酚组：给予己烯雌酚混悬液灌胃，按临床剂量的 6.7 倍制成，剂量 0.067mg/kg，给药体积 20ml/kg，1 次/天，连续 30 天。 2.2.3 宫血停组：给予宫血停混悬液灌胃，按临床剂量的 6.7 倍制成，剂量 8g/kg, 给药体积 20ml/kg，1 次/天，连续 30 天。 2.2.4 中药高剂量组：给予补肾健脾固冲方浸膏稀释液灌胃，用量相当于临床剂 量的 6.7 倍，剂量 30g/kg（以生药量计） ，给药体积 20ml/kg，1 次/天，连续 30 天。 2.2.5 中药中剂量组：给予补肾健脾固冲方浸膏稀释液灌胃，用量相当于临床剂 量的 3.35 倍，剂量 15g/kg（以生药量计） ，给药体积 20ml/kg，1 次/天，连续 30 天。 2.2.6 中药低剂量组：给予补肾健脾固冲方浸膏稀释液灌胃，用量相当于临床剂 量的 1.68 倍，剂量 7.5g/kg（以生药量计） ，给药体积 20ml/kg，1 次/天，连续 30 天。 2.3 标本的采集与处理方法 连续灌胃给药 30 天后，分别于大鼠动情期处死动物。选用 10%水合氯醛经腹 腔注射麻醉，剂量 0.3ml/100g。麻醉满意后，取一侧子宫，分离周围脂肪组织， 固定于 10%多聚甲醛溶液内，备用，he 染色，免疫组化法检测子宫局部 vegf、 mmp-9 的表达情况。另一侧子宫用生理盐水冲洗，吸干，放入匀浆器中，加入冰 生理盐水做匀浆介质，冰浴中进行匀浆，匀完后冰生理盐水加至 3ml 冲洗。匀浆 液 1000 转/分离心 5 分钟，取上澄清液，-20保存备用，子宫匀浆液进行 no、 et 检测。因部分动物死亡，故各组测试样品数量不同。 2.4 子宫匀浆 no 的测定 材料与方法 7 取匀浆上澄清液 0.5ml,采用硝酸还原酶法按照试剂盒说明书测定并计算 no 含 量。用酶标仪测定各管吸光度。 2.5 子宫匀浆 et 的测定 取匀浆上澄清液 0.5ml，采用放射免疫法按照试剂盒说明书测定 et 的含量。 2.6 子宫局部 vegf 和 mmp-9 的测定 取大鼠的一侧子宫组织，固定于 10的多聚甲醛溶液中 48 小时后取出，各级酒 精脱水，石蜡包埋，切片，免疫组化法制片、光镜下镜检并拍照，细胞核被染成棕黄 色定为阳性结果。用 biosens digital imaging system v1.6 图像分析软件进行图像 分析,分析指标选取阳性面积率、阳性区平均积分光密度。观察 vegf 和 mmp-9 在子宫 局部的表达情况。因动物死亡及部分标本组织处理不当，故各组测试样品数量不同。 2.7 免疫组化染色步骤 (1)石蜡切片脱蜡和水化后，用 pbs（ph7.4）冲洗 3 次，每次 3 分钟。 (2)根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复（见注） 。 (3)每张切片加 1 滴过氧化酶阻断溶液， 以阻断内源性过氧化物酶的活性， 室温下 孵育 10 分钟。 (4)pbs（ph7.4）冲洗 3 次，每次 3 分钟。 (5)甩去 pbs 液，每张切片加 1 滴非免疫性动物血清，室温下孵育 10 分钟。 (6)甩去血清，每张切片加 1 滴第一抗体，4冰箱过夜。 (7)pbs 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 (8)甩去 pbs 液，每张切片加 1 滴生物素标记的二抗，室温下孵育 30 分钟。 (9)pbs 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 (10)甩去 pbs 液，每张切片加 1 滴链亲和素过氧化物酶，室温下孵育 30 分钟。 (11)pbs 冲洗 3 次，每次 3 分钟。 (12)甩去 pbs 液，每张切片加 2 滴新鲜配制的 dab 溶液，显微镜下观察 310 分 钟。 (13)自来水冲洗，苏木素复染。 (14)切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 注：常规切片脱蜡水化后浸泡于蒸馏水中，取 500ml 柠檬酸缓冲液微波加热至沸 腾，将需修复的玻片放入其中，中档微波继续处理 10-20 分钟，取出容器冷却至室温， 取出玻片，放入 pbs（ph7.4）冲洗 2 次，即可。 3 统计学处理统计学处理 所有数据均采用 spss13.0 软件进行统计处理。多组间数据采用单因素方差分 析进行比较，结果以均数 标准差(xs) 表示。 补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究 8 结结 果果 表 1 各组大鼠子宫匀浆 no 水平比较(xs) 组别 动物数 剂量 no 含量 （只） （g/kg） （mol/gprot） 空白对照组 12 3.020.47 己烯雌酚组 12 0.000067 2.390.60* 宫血停组 12 8.0 2.620.85 高剂量组 12 30.0 3.500.58 中剂量组 13 15.0 3.520.67 低剂量组 13 7.5 2.360.59* 注:与空白对照组比较， *p0.05。 由上表可知，与空白对照组相比，低剂量组、己烯雌酚组大鼠子宫匀浆 no 含 量显著降低（p0.05） ，差异有统计学意义；宫血停组虽然没有统计学意义，但 有降低的趋势。 表 2 各组大鼠子宫匀浆 et 水平比较(xs) 组别 动物数 剂量 et 含量 （只） （g/kg） (pg/ml) 空白对照组 12 5.92 0.46 己烯雌酚组 12 0.000067 6.470.48* 宫血停组 12 8.0 6.220.65 高剂量组 12 30.0 6.300.38* 中剂量组 13 15.0 6.220.34 低剂量组 13 7.5 6.500.34* 注:与空白对照组比较， *p0.05，*p0.01。 由上表可知，与空白对照组相比，各给药组大鼠子宫匀浆 et 含量均升高， 高剂量组升高显著（p0.05） ，低剂量组、己烯雌酚组升高极显著（p0.01） ，其 余组虽然没有统计学意义，但有升高的趋势。 表3 各组大鼠子宫局部vegf表达比较(xs) 组别 动物数 剂量 阳性区平均积分光密度 阳性面积率 （只） （g/kg） (%) 空白对照组 10 123.897.25 40.357.60 己烯雌酚组 11 0.000067 140.218.18* 60.454.87* 宫血停组 11 8.0 135.585.48* 55.598.52* 高剂量组 10 30.0 129.415.09 43.165.60 中剂量组 11 15.0 135.095.78* 48.349.97* 低剂量组 11 7.5 138.884.84* 58.359.48* 结果 9 注:与空白对照组比较， *p0.05；*p0.01 由上表可知，与空白对照组相比，各组子宫内膜局部 vegf 的表达强度和表 达面积均有提高，表达强度即阳性区平均积分光密度，中剂量组、低剂量组、宫 血停组、己烯雌酚组显著升高（p0.01） ，高剂量组虽然没有统计学意义，但有 提高的趋势。表达面积即阳性面积率，与空白对照组相比，中剂量组提高显著 （p0.05） ，低剂量组、己烯雌酚组、宫血停组提高极为显著（p0.01）,高剂量 组虽然没有统计学意义，但有提高的趋势。 表 4 各组大鼠子宫局部 mmp-9 表达比较(xs) 组别 动物数 剂量 阳性区平均积分光密度 阳性面积率 （只） （g/kg） (%) 空白对照组 10 148.1510.25 61.4914.36 己烯雌酚组 11 0.000067 111.646.25* 43.4114.35* 宫血停组 11 8.0 130.596.69* 44.526.50* 高剂量组 10 30.0 144.487.65 51.6213.47 中剂量组 11 15.0 131.495.95* 48.7114.02* 低剂量组 11 7.5 112.324.74* 40.679.69* 注:与空白对照组比较， *p0.05，*p0.01；与宫血停组比较，p0.01 由上表可知，与空白对照组相比，各组子宫内膜局部 mmp-9 的表达面积和 表达强度均降低，表达强度即阳性区平均积分光密度，中剂量组、低剂量组、宫 血停组、己烯雌酚组显著降低（p0.01） ，高剂量组虽然没有统计学意义，但有 降低的趋势；与宫血停组相比，低剂量组降低显著（p0.01） ，差异有统计学意 义。表达面积即阳性面积率，中剂量组差异显著（p0.05） ，己烯雌酚组、低剂 量组、宫血停组差异极显著（p0.01） ，高剂量组虽然没有统计学意义，但有降 低的趋势。 补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究 10 理论探讨理论探讨 1 中中医学对医学对青春期功血青春期功血的认识的认识 青春期功血属于中医学“崩漏”范畴，又称“室女血崩” 。 历代医家有 关本病的病因病机及治疗论述颇多。 素问阴阳别论曰:“阴虚阳搏谓之 崩” ，明确崩漏的发病机理为阴虚阳亢，为后世医家研究崩漏奠定了理论基 础。 1.1 有关病因病机的认识 崩漏的病因病机较为复杂， 丹溪心法中云“崩下由脏腑损伤，冲任二 脉气血俱虚故也” 。 妇人秘典提出“经行时多有交感”可诱发本病； 女科 撮要论经漏不止乃因“脾胃虚损，不能摄血归源” 。 妇科玉尺中主张火 热，虚寒，劳伤，气陷，血瘀和虚弱六种病因。总结现代医家对病因病机的认 识概括如下： 肾虚 中医认为“经本于肾”,傅青主女科曰“经水出诸肾”，月经病 与肾关系密切。肾为先天之本，主藏精，封藏之本，为天癸之源，冲任之本， 内寓元阴元阳，与胞宫相系。肾气虚，冲任不固，不能制约经血，乃成崩漏。 本病根源在于肾，其病机在于青春期少女肾气初泌，盛而未充，易致肾之阴阳 失衡，冲任失司，不能制约经血。 东垣十书兰室秘藏云:“妇人血崩，是 肾水阴虚不能镇守胞络相火，故血走而崩也” 。 指出肾阴虚所致崩漏多素体阴 虚内热，冲任不固而致。此乃“阴虚阳搏谓之崩”。肾阳虚所致崩漏多素体肾 气不足，或肾阳亏损，命门火衰，封藏不固，冲任失约而致。 脾虚 唐容川血证论指出:“古名崩中，谓血乃中州脾土所统摄，脾不 统血，是以崩漏，固曰崩中。 ”脾为后天之本，气血生化之源，主统血。素体中 气不足，或饮食劳倦损伤脾气，气虚下陷，统摄无权，冲任不固，遂成崩漏。 血瘀 经期感受寒、热、湿邪，瘀血内阻，或肝郁气滞，血行不畅，或寒 凝血瘀，瘀血阻滞冲任胞宫，新血不得归经，导致本病的发生。大病、久病后， 脏腑气血不足气阴两虚亦易使瘀血内停，瘀阻冲任而发病。 临证指南医案崩 漏总结为： “原其致病之由，有因冲任不能摄血者，有因肝不藏血者，有因脾 不统血者，有因热在下焦、迫血妄行者，有因元气大虚，不能收敛其血者，又 有瘀血内阻，新血不能归经而下者。 傅青主女科又提出“闪跌血崩”一说， 认为此证“乃瘀血作祟” 。 瘀阻胞宫，损伤冲任，不能制约经血，则经血非时 而下，发为崩漏。 血热 患者素体阴虚，或久病、失血伤阴，阴虚水亏，心肝失养，虚火内 理论探讨 11 炽，扰动血海；性情抑郁，郁久化火，或素体阳盛，或服辛辣助阳之品，火热 伏于冲任，扰动血海，迫血妄行，冲任不固，遂致崩漏。血崩则阴愈亏，冲任 更伤，以致崩漏反复难愈。万氏女科中云:“妇人崩中之病皆因气虚不能收 敛其血；如以积热在里，迫血妄行，故令经血暴下而成崩中，崩从不止遂成漏 下。 ”指出热扰胞宫、冲任，冲任失固，不能制约经血，而致崩漏。 总之，崩漏多由肝脾肾三脏功能失调，伤及冲任，冲任不固；或热邪内扰，迫 血妄行；或瘀血阻滞，血不归经而致经血非时而下。 1.2 辨证分期治疗 在辨证方面， 妇人大全良方明确提出“凡血崩之疾，亦有阴阳冷热之 不同，不可一概用药”的辨证论治思想； 女科经纶归纳前人思想并形成了 较全面的认识： “凡病先明虚实寒热，如崩漏证，有虚有实，有寒有热。虚者 主乎血虚气虚，阴虚阳虚。实者主乎污瘀恶血，痰涎郁滞。虚则为寒为冷， 实则为火为热。此证之不可不先辨者也”1。在治疗方面，主张应在“急则治 其标，缓则治其本”的法则指导下治疗崩漏。 1.2.1 辨证治疗 肾虚 刘慧丽等 2根据青春期少女以肾虚为主的特点,治以补肾为主,兼 顾气血,方用左归丸和右归丸加减： 熟地 10g,桑寄生 20g,菟丝子 10g,女贞子 10g, 杜仲 10g，川断 10g，山萸肉 10g，生牡蛎 30g，月经周期前 1 周，加当归、 益母草等活血药物。席兴华3治疗崩漏，肾阴虚证以滋阴补肾、止血固冲，药 用：女贞子、旱莲草、生地黄、桑寄生、补骨脂、续断、山药、青蒿、知母 等。肾阳虚证以温肾固冲、止血调经。药用：熟地黄、川续断、紫河车、鹿 角胶、附子、巴戟天、肉苁蓉、淫羊藿、海螵蛸、仙鹤草、山茱萸、生龙骨、 生牡蛎、艾叶炭。 脾虚 徐峰4用固冲汤治疗脾肾不足，冲脉不固型崩漏，以益气摄血，固涩 安冲为法，药用：炒白术、党参、黄芪、甘草、桑寄生、海螵蛸、山药、补骨脂、 茜草。高学娟5等用参芪止崩汤治疗气虚夹瘀型崩漏，以健脾益气、活血化瘀为 法，药用：黄芪 50g，党参 20g，当归 10g，川芎 9g，炒蒲黄 15g，五灵脂 15g， 生三七粉 3g，益母草 20g，乌贼骨 12g，诃子 15g。 血瘀 千金方 ： “瘀血占据血室，而致血不归经。 ”活血化瘀法即去苑 陈荃，祛瘀生新。使气血恢复正常的生理功能，使血循经而行。刘进才6等用 化瘀止血汤治疗血瘀型崩漏，以活血化瘀止血为法，药用：蒲黄、五灵脂、 香附各 10g，茜草 6g，阿胶、海螵蛸各 15g。吴国水7等用自拟的化瘀止血汤 治疗血瘀型崩漏，药用：川芎、益母草、仙鹤草、蒲黄、五灵脂、血竭、莪 术红花、鸡血藤等。 补肾健脾固冲方对未成年雌性大鼠子宫局部活性物质作用的实验研究 12 血热 孟超英等 8以清热化瘀法治疗血热夹瘀型崩漏，用清热化瘀止血 汤，药用：丹皮、生地黄、地榆、焦栀子、茜草、龟甲、鳖甲、阿胶、黄芩、 地骨皮。李艳菊9认为血热为主者，宜凉血止血法，虚热者治宜滋阴清热，固 冲止血；方用滋阴止血汤(自拟方)：生地炭 20g、白芍炭 15g、女贞子 15g、 旱莲草 30g、山萸肉 15g、阿胶 20g(烊化服)；实热者治宜清热凉血，固冲止 血。方用清热固经汤(自拟方)：生地炭 24g、黑栀子 12g、黑条芩 12g,生地榆 30g,藕节 30g、旱莲草 30g、仙鹤草 30g、生甘草 3g。 1.2.2 分期治疗 叶氏女科证治秘方指出“此证初起，宜先止血，以塞其流，急则治其 标也” ； “崩漏初止，又宜清热，以清其源。崩漏既止，里热已除，更宜 补气血，以端其本” ，主张应在“急则治其标，缓则治其本”的法则指导下治 疗崩漏。明方约之在丹溪心法附余提出分期治疗崩漏的方法，即“治 崩次第，初用止血，以塞其流；中用清热凉血，以澄其源；末用补血，以还 其旧” 。经后世医家完善后成为治疗崩漏的“塞流” 、 “澄源” 、 “复旧”三法， 至今仍为临床医家治疗崩漏遵循的大法。 塞流 即止血，多用升提固涩之品。在出血期，特别是暴崩之际，急当 止血，防止血竭气脱，止血是治疗本病的当务之急。塞流所选的药物一般多 炒黑成炭。要遵照止血不留瘀的原则，少佐活血之品，或选一些既止血又活 血的药物，如益母草，茜草炭，三七等。同时气为血帅，血为气母，二者相 互滋生，相互依存，失血过多，必致气虚，气虚下陷摄血无权，又导致新的 出血，故止血同时必须重视补气，法以固气摄血、收敛止血。 澄源 出血减少时，可根据不同的病因病机辨证论治。求因治本，正本 清源，亦是治疗崩漏的重要阶段。崩漏的病位主要在冲任胞宫，与肝脾肾三 脏密切相关，尤以肾为本。崩漏的澄源，实际是澄清肝脾肾之源，辨证施治， 正本求源，使崩漏得到根本上的治疗。 复旧 即调理善后。多治以补肾、调肝、扶脾，崩漏以月经周期、经期、 经量的严重紊乱为临床特点，因此，血止后恢复正常的月经周期和巩固疗效， 防止复发是治疗的关键环节。肾为月经之本，肝藏血，主疏泄，调节血海的 蓄溢满盈，肝气条达，保证了血海按时满盈，月经定期来潮。脾为气血生化 之源，主统血，与经血的生成和固摄关系密切。只有肾、肝、脾三脏与冲任 二脉及胞宫的相互协调，才能有正常的月经周期。 2 中药作用机理的中药作用机理的现代现代研究研究 2.1 中药对凝血及子宫收缩的作用 部分中药有促进凝血及加强子宫收缩的作用。郝娜等10对固肾止漏胶囊 理论探讨 13 治疗崩漏的作用机理研究，发现中药能明显缩短小鼠出凝血时间，含药血清 可使大鼠离体子宫收缩频率明显增加。推断所用中药对子宫平滑肌有增加收 缩的作用。赵振虎等11实验研究发现，宫血宁有缩宫止血等功效。止血机理 是促进子宫平滑肌收缩。许海12研究发现妇科止血合剂能缩短出、凝血时间， 缩短血浆复钙时间；增加子宫收缩的频率、幅度以及持续时间，从而促进凝 血，增强子宫收缩，达到止血的目的。赵宏利13发现益气止血宁对子宫平滑 肌收缩力有加强作用。综上可知，中药可以促进过厚的子宫内膜迅速同步剥 脱，提高子宫平滑肌张力而加强局部血管的压力，减少子宫出血，进而止血。 2.2 中药对雌激素、孕激素及其受体的影响 王慧颖14研究表明宫血饮能降低功血患者子宫内膜雌孕激素受体，但对 e2水平影响不大。内膜雌孕激素受体水平增高，即发生功血，同时有凋亡不 足的表现，提示 bcl-2 的表达增强从而抑制内膜细胞凋亡。可调节雌孕激素受 体水平，推测其可能通过调节雌孕激素受体水平而间接影响到相关凋亡基因 的表达促进子宫内膜腺上皮细胞的凋亡。 2.3 中药对子宫内膜血管生成及修复的作用 张树成等15研究表明补肾调经中药对子宫组织的血管生成有明显增强作 用。所用中药由川续断、巴戟天、桑寄生、女贞子、补骨脂等药物组成。补 肾生血中药由生地、山萸肉、龟板胶、熟地等中药组成。实验发现两种中药 对肾虚证动物的子宫组织的血管生成有明确促进的作用。付氏等16通过动物 实验证明具有益气化瘀作用的环血宁汤对置 cuiud 家兔子宫内膜损伤有一定 的修复作用，提示环血宁可能通过促进子宫内膜的修复而起到治疗置 iud 后 子宫异常出血的作用。 3 西西医学对医学对青春期功血青春期功血的认识的认识 功血的发生发展是一个复杂的过程。青春期功血的发病机制，除了与性 腺轴功能失调、子宫内膜无周期性变化、前列腺素分泌及功能失调有密切关系 外，子宫局部微环境的改变也有着不可忽视的作用17。 3