（中医内科学专业论文）柴胡龙牡汤对精神分裂症大鼠模型gfap影响的研究.pdf

- ：；一 ： 贵阳中医学院南士学位论文相关声明 y 13 7 15 4 i i ii ii i i j i ii l ll l ll l 原创性声明 本文声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表论文中撰写过的研究成果，也不包含为获得贵阳中医学院或其他 单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均 已在论文中作了明确说明。 作者：孙硅岔、 日期：二切f d 年上月2 d 日 关于学位论文使用授权说明 本文了解贵阳中医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文；学校可根据国家或贵州省有 关部门规定送交学位论文。 作者签名：孙尉喜师签名：李安蝴眺砌拜j 月咖日 r 目录 中文摘要1 英文摘要2 前言4日u蟊4 实验研究6 实验结果8 讨论1 5 总结与展望2 3 参考文献2 5 附录一综述2 6 附录二精神分裂症动物实验记录4 1 附录三中英文缩略表4 3 附录四致谢4 4 个人简历4 5 r 贵阳中医学院硕二l ：学位论文 中文摘要 目的：观察柴胡龙牡汤对精神分裂症大鼠模型刻板行为和前额叶区胶质纤维 酸性蛋白( g f a p ) 表达的影响，探讨精神分裂症发生的生物学因素以及柴胡 龙牡汤治疗精神分裂症的生物学机制。 方法：将4 4 只大鼠分为模型组( 1 2 只) 、柴胡龙牡汤组( 1 2 只) 、氯氮平组 ( 1 2 只) 、空白组( 8 只) 。空白组腹腔注射生理盐水2 m l 次，共2 1 天，剩 余三组均用氯胺酮( 6 0 m g k g ) 造模，共2 1 天。氯氮平组从第四天开始加用 氯氮平( 2 5 m g k g ) 灌胃，共1 8 天；柴胡龙牡汤组从第四天加用柴胡龙牡汤 ( 2 m l 次) 灌胃，共1 8 天。以大鼠刻板行为量表评分及g f a p 的阳性细胞 数作为观察指标。四组进行比较，观察刻板行为的改变和g f a p 阳性细胞数 的改变情况。 结果：刻板行为观察：氯胺酮组大鼠刻板行为较空白组明显增多，具有显著 性差异( p 0 0 1 ) ；氯氮平组大鼠刻板行为较氯胺酮组明显减少，具有显著 性差异( p 0 0 1 ) ；柴胡龙牡汤组大鼠刻板行为较氯胺酮组明显减少，具有 显著性差异( p 0 0 5 ) ；柴胡龙牡汤组大鼠刻板行为较氯氮平组增多，具有 显著性差异( p o 0 5 ) 。g f a p 阳性细胞数目观察：氯胺酮组大鼠g f a p 阳性 细胞数目较空白组明显增多，具有显著性差异( p 0 0 1 ) ；氯氮平组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯胺酮组明显减少，具有显著性差异( p 0 0 1 ) ；柴胡龙牡 汤组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯胺酮组明显减少，具有显著性差异( p 0 0 5 ) ；柴胡龙牡汤组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯氮平组增多，具有显著性 差异( p o 0 5 ) 。 结论：氯胺酮可引起大鼠前额叶g f a p 阳性细胞数目增多；柴胡龙牡汤和氯 氮平均可引起精神分裂症模型大鼠g f a p 阳性细胞数目的改变，说明精神分 裂症可导致g f a p 的改变；柴胡龙牡汤和氯氮平均可引起精神分裂症大鼠模 型刻板行为的改变，说明两种药物对精神分裂症均有疗效。 关键词：柴胡龙牡汤；氯氮平；精神分裂症；刻板行为；g f a p 贵阡f 中医学院硕：f ：学位论文 英文摘要 a b s t r a c t o b j e c t i v e ：t oo b s e r v et h ee f f e c to fc h a ih ul o n gm ud e c o c ti o no n s t e r e o t y p y ，a n de x p r e s s i o no fg f a p i np r e f r o n t a l ，c i n g u l a t eg y r u s r e g i o no fr a t sw i t hs c h i z o p h r e n i a ，d i s c u s s i o nt h eb i o l o g i c a lf a c t o r s o fs c h i z o p h r e n i aa n dt h eb i o l o g i c a lm e c h a n i s m so fs c h i z o p h r e n i cw i t h c h a ih ul o n gm ud e c o c ti o n 【m e t h o d s 】：4 4r a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p s ：k e t a m i n e g r o u p ，c h a i h uj i al o n gg um ulid e c o c ti o ng r o u p ，s a li n ec o n t r o l g r o u p ，a n dc l o z a p i n eg r o u p i n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no f s a l i n e 2 m l t i m e s ，2 1d a y s ，r e m a i n i n gt h r e eg r o u p sa r em a d e w i t hk e t a m i n e6 0 m g m o l d k g ，2 1d a y s ，w e s t e r nm e d i c i n et h e r a p yd a yf r o mc l o z a p i n ew a s s e r v e dw i t hg a s t r i cl a v a g e2 5 m g k g ，1 8d a y s ，t h ec h a ih uj i al o n gg u m ulid e c o c t i o nf r o mt h ef o u r t hd a ya n ds e r v ew i t h t h ec h a ih uj i a l o n gg um ul id e c o c t i o ng r o u p2 m l ，1 8d a y s ，t h ec h a ih uj i al o n gg u m ul id e c o c t i o nf o rs c h i z o p h r e n i ar a t si n t e r v e n e ，b l a n ka n dc l o z a p i n e w a sc o n t r o l l e db yr a t s ，a ss t e r e o t y p ya n d g f a ps c o r ea so b s e r v i n g i n d e x e s t h et w od r u g sb e f o r ea n da f t e rt h ei n t e r v e n t i o no ft h ed a t a w e r ea n a l y z e d 【r e s u l t 】：1b e h a v i o ro b s e r v a t i o ns h o w st h a t ，k e t a m i n er a t s ，t h e s t e r e o t y p yc h a n g em o r et h a nb l a n kg r o u p ，h a s i n c r e a s e do b v i o u s l y s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p o 0 1 ) ，c l o z a p i n er a t s ，t h es t e r e o t y p y c h a n g e i s o b v i o u s l y r e d u c e dk e t a m i n e g r o u p ，w i t hs i g n i f i c a n t d if f e r e n c e ( p 0 0 1 ) ，c h a ih ul o n gm ut a n gd e c o c ti o nr a t s ，t h e s t e r e o t y p yc h a n g ei so b v i o u s l yr e d u c e dk e t a m i n eg r o u p ，s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p 0 0 5 ) c h a ih ul o n gm ut a n gd e c o c t i o nr a t s ，t h e s t e r e o t y p yc h a n g ei so b v i o u s l yr e d u c e dc l o z a p i n e g r o u p ，s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e ( p o 0 5 ) g f a pp o s i t i v ec e l ln u m b e r ：k e t a m i n er a t sg f a p p o s i t i v ec e l ln u m b e ri sm o r et h a nb l a n kg r o u pw e r es i g n i f i c a n t l y 2 贵阳中医学院硕，l ：学位论文 i n c r e a s e d ，o b v i o u sd i f f e r e n c e ( p o 0 1 ) 。c l o z a p i n er a t sg f a pp o s i t i v e c e l ln u m b e rc o m p a r ew i t h k e t a m i n eg r o u ps i g n i f i c a n t l yi s r e d u c e d ， w i t hs i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p o 0 1 ) ，c h a ih ul o n gm ut a n gd e c o c t i o n r a t sg f a pp o s i t i v ec e l ln u m b e r c o m p a r ew i t h k e t a m i n eg r o u p s i g n i f i c a n t l yr e d u c e d ，s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p 0 0 5 ) c h a ih u i o n gm ut a n gd e c o c t i o nr a t sg f a pp o s i t i v ec e l tn u m b e rc o m p a r e w i t h ， c l o z a p i n eg r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ( p 0 0 5 ) c o n c l u s i o n ：k e t a m i n ec a nc a u s er a t sp r e f r o n t a lg f a pp o s i t i v ec e l l p o p u l a ti o n s ，t h ec h a ih ul o n g 舢d e c o c t i o na n dc h l o r i n ec a nc a u s e s c h i z o p h r e n i am o d e ir a t sg f a pp o s i t i v ec h a n g e ，t h en u m b e ro fc e l l s t h a tg f a piss c h iz o p h r e n i ap o s s i b l ef a c t o r s ，t h ec h a ih ul o n gm u d e c o c t i o na n dc h l o r i n ec a nc a u s es c h i z o p h r e n i ar a tm o d e ls t e r e o t y p y c h a n g e ，t w ok i n d s o fm e d i c i n eh a v ee f f e c to fs c h i z o p h r e n i a k e yw o r d ：c h a ih ul o n gm u ，d e c o c t i o n ：c t o z a p i n e ；s c h i z o p h r e n i a ： s t e r e o t y p y ；g f a p 贵阳中医学院顾。i j 学位论文 刖舌 精神分裂症是一大危害人类健康的疾病，并且是临床上比较多见的精神 疾病，以影响脑神经高级思维功能病变，以及思维和知觉扭曲、情感不恰当 或迟钝为总体特点【i j ，其患病率在世界各地约为0 5 1 ，多起病于中青 年，一般无意识障碍以及明显的智能障碍，病程多数迁延。精神分裂症患者 的症状多见于：思维紊乱、错觉、幻觉以及紧张状的行为心3 。抗精神病药物， 的治疗反应对部分患者不太理想，病情多持续发展，最终衰退为精神残疾 一 口1 。大多数学者认为，精神分裂症是因遗传因素以及环境因素共同作用的结 果。尽管遗传模型尚不明，但遗传因素在精神分裂症发生中的因素是十分重 要的，本病遗传度高于8 0 限研。环境因素包括母孕期的病毒感染、母孕期 和围产期合并症及社会心理压力。根据多项资料显示，精神分裂症可伴侧脑 室扩大，尤其是颞叶以及额叶，显示该疾病发生于早期和病程无关。这些变 化是否起由于遗传控制的脑发育不对称，或者与母孕期和围产期感染等合并 症有关，尚待进一步证实。根据报告，精神分裂症患者经治疗后临床缓解或 基本缓解的患者出院后1 年以上的随访观察显示复发率高达2 0 7 0 ；7 r 不用药物治疗维持的患者在4 6 月复发率为4 0 印，用药物治疗进行维 持的患者复发率为5 ，间断服药、半停药的患者复发率是1 5 嫡1 。精神分 裂症不仅严重影响了患者及其家属的工作和生活，同时也带来沉重的社会和 经济负担。近年来，随着社会竞争的加剧及其他因素的影响，发病率越来越 高。目前精神疾病在我国疾病总负担中排名首位，约占疾病总负担的2 0 。 其中精神分裂症约占我厘住院精神病人的5 0 左右。患病率居各类糖神疾瘕 ( 不包括神经症) 。首位。中医中药对精神分裂症治疗疗效明显，特别是对首 发精神分裂症治疗更为突出，并且价格便宜，副作用少，深受老百姓的欢迎。 根据患者不同的临床表现将精神分裂症分成偏执型精神分裂症、紧张型 精神分裂症、青春型精神分裂症和未分化型精神分裂症等。偏执型以妄想为 主要临床表现，伴有幻觉以及知觉障碍口1 ；紧张型精神分裂症临床以明显的 精神运动紊乱为主要表现，可在运动过度、木僵或自然性顺从以及违拗两个 极端之间交替，其拘束性态度以及姿势可维持很长时间口1 。青春型多青年期 起病，其临床表现以思维、情感和行为的不协调为主，如明显的情感不协调 4 贵阳中医学院硕士学位论文 或思维破裂。精神分裂症的临床表现在不同类型、不同阶段有很大差别，均 具有特征性的感知、情感、思维、意志和行为的不协调以及脱离现实环境的 特点。根据精神分裂症的临床症状的不同可将其分为阳性症状以及阴性症状 两类。在急性期，以幻觉、妄想为主的行为紊乱的这类临床症状称为阳性症 状，是患者对正常的生理功能的夸大或歪曲。生物学基础为多巴胺( d a ：) 功 能亢进。在慢性阶段，以思维贫乏、情感淡漠、意志缺乏及孤僻内向为主盼 症状称为阴性症状，是患者正常生理功能的低下和损害。精神分裂症属于中 医癫狂证的范畴，精神分裂症的发病机理按祖国医学理论认为，属阴阳失调， 痰迷心窍所致，重阳则狂、重阴则癫。中医辨证中常常把它分为癫病和狂病 两型。癫病中医证型以痰气郁结证、肝郁气滞证及心脾两虚证最为多见；狂 病中医分型以痰火内扰证，阴虚火旺证、痰结血瘀证最为多见，病变早期以 痰气郁结证和痰火上扰证为主，久病以心脾两虚证和气滞血瘀证为主。因比 在辨证论治过程中早期病性以实证为主，应以疏肝理气、化痰泻火、活血化 瘀为主、晚期则当补益心脾、补肾温脾。、行气活血方能获得疗效满意，同时 由于病机动态演变，应注重病情的变化，灵活随证加减脚1 。 课题采用公认的精神分裂症大鼠动物病理模型，用柴胡加龙骨牡蛎汤对 精神分裂症动物模型进行干预，观察中药对模型大鼠在行为学、前额叶区星 形胶质纤维酸性蛋白g f a p 表达等方面的影噼。探讨柴胡加龙骨牡蛎汤防治 精神分裂症的作用效果，为中医药治疗精神分裂症理论的研究拓宽思路与方 法。 贵阳中医学院硕 ：学位论文 实验研究 1 实验动物 清洁级s d 大鼠4 4 只，雌雄各半，体重2 0 0 _ + 2 0 9 ( 由贵阳医学院动物 中心提供) ，实验前用标准鼠食饲养l 周。 2 实验药品 盐酸氯胺酮注射液，江苏恒瑞医药公司，1 0 0m g 2m l ，批号：k h 0 7 1 0 0 4 。 氯氮平片，江苏瑞年前进制药有限公司，2 5m g x1 0 0 片，批准文号：国药 准字h 3 2 0 2 2 2 6 8 ，批号：0 8 1 1 1 4 1 。 柴胡龙牡汤：柴胡1 2 9 、龙骨i 黄芩、生姜、人参、半夏、桂枝( 去皮) r 、 茯苓各4 5 9 、大黄6 9 、牡蛎4 5 9 、大枣6 枚。上药十一味，除大黄外，以水 8 0 0 毫升，煮取4 0 0 毫升，再纳大黄，更煮一二沸，去滓。滤取合并两次药汁， 浓缩至2 5 0 m l ，每毫升含生药0 3 1 8 9 。由贵阳中医学院第一附属医院提供二 3 评估指标： 3 1 刻板行为：是指一种不自主的、重复不变的、无明显目的的行为方式。 刻板行为的评定方法采用s a m sd o d d 的刻板行为评分标准m ：0 分，静止不 动，几乎或根本没有活动；1 分，正常活动，偶尔有向前的运动；2 分，活 动伴随反复的向前探索；3 分，连续的向前探索；4 分，重复的抬头、摇头 或旋转；5 分，快速的摇头、转圈或头的背腹运动( 通常大鼠静止不动) 。 3 2g f a p * 每张切片在4 0 0 倍率下观察大脑前额叶，5 0 个视野记数阳性细 胞，取平蚜值作为待检区阻性纽胞数。 垂实验过程一- 4 1 实验方案： 空白组腹腔注射生理盐水2 m l 次，共2 l 天；其余三组均用氯胺酮 ( 6 0 m g k g ) 造模，持续2 i 天j 氯氮平组从第四天加氯氮平( 2 5 m g k g ) 灌胃， 持续1 8 天；柴胡龙牡汤组从第四天加柴胡龙牡汤( 2 m l 次) 灌胃，持续1 8 天，其间大鼠自由饮水进食。第2 2 天，取脑组织进行病理学检查。 4 2 刻板行为评分 将实验动物放置于观察箱，通过对氯胺酮模型大鼠进行 6 贵阳中医学院硕士学位论文 观察，发现在3 0 分钟时刻板行为表现最明显，所以本研究取3 0 分钟时的刻 板行为评分作为疗效评价标准。 4 3 脑组织固定 ( 1 ) 用1 0 水合氯醛0 0 2 m l g 进行麻醉。 ( 2 ) 打开其胸腔，暴露心脏，将针头刺入左心室，直达主动脉弓，并用动脉 夹固定，迅速剪破右心房j 同时推入生理盐水3 0 0 r o t ，直至肝脏的颜色由红 色变为白色。 ( 3 ) 换用4 多聚甲醛( p a ) 3 0 0 m l 灌注，灌注速度先快后慢，直至大鼠肢体僵 r 硬。 ( 4 ) 将鼠脑组织完整取出，置于中性福尔马林中固定， 4 4 脑组织切片制作： 4 4 1 切片定位：大鼠脑组织的前额叶。沿冠状面连续切片 4 4 26 f a p 免疫组化标记步骤如下，i ( 1 ) 石蜡切片脱蜡至水。 ( 2 ) 3 t t ：0 2 室温孵育5 1 0 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 ( 3 ) 蒸馏水，p b s 浸泡5 分钟x 2 ( 4 ) 滴加l ：8 0 稀释的一抗( c e a p ) 3 7 c 孵育卜2 小时或4 过夜。 ( 5 ) p b s 冲洗，5 分钟x 3 次。 ( 6 ) 滴加适量生物素标记二抗工作液，3 7 孵育1 0 - 3 0 分钟。 ( 7 ) p b s 冲洗，5 分钟x 3 次。 ( 8 ) 滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液，于3 7 孵 育1 0 - 3 0 分钟。 ( 9 ) p b s 冲洗，5 分钟x 3 次。 ( 1 0 ) 显色剂显色3 - 1 5 分钟( d a b ) ( 1 i ) 自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。 4 5 显微镜下观察细胞 每张切片在4 0 0 倍率下观察大脑前额叶，5 0 个视野记数阳性细胞，取 平均值作为待检区阳性细胞数。 4 6 数据分析 7 贵阳中医学院硕i ：学位论文 所有数据用均数标准差( 叉s ) 表示，比较采用a n o v n 分析，组间比 较用t 检验。全部资料的统计分析均采用s p s s l1 5 分析应用软件在计算机 上分析处理。 结果 l 一般情况； 在实验过程中由于气候较冷原因，氯胺酮组、柴胡龙牡汤组大鼠各死亡 1 只，氯氮平组大鼠死亡2 只。空白组大鼠精神状态好，毛发顺，食欲佳， 活动正常。氯胺酮组大鼠精神状态差：食欲欠佳，毛发欠光泽，无肛周污染。， 氯氮平组大鼠精神状态较好，毛发顺，饮食、活动略少。柴胡龙牡汤组大鼠 精神状态好j 毛发顺，食欲佳，肛周无污染。 2 刻板行为比较： 2 1 四组进行刻板行为的均数比较j 先做方差齐性检验j 结果方差是齐性的o 再做方差分析，结果四组之间有差异见表1 表1四组大鼠刻板行为方差分析 离均筹平方和自由度均筹fp 刻板行为评分组间2 9 0 8 2 3 组内1 3 l i3 5 总变异3 0 3 9 3 3 8 9 6 9 42 6 6 2 9 3 0 o1 o 0 3 6 2 2 将四组大鼠刻板行为进行t 检验；氯胺酮组大鼠刻板行为较空白组明显 增多，具有显著性差异( p o o l k 氯氮平组大鼠刻板行为较氯胺酮组明显减 少，具有显著性差异( p 0 0 1 ) ；柴胡龙牡汤组大鼠刻板行为较氯胺酮组明显 减少，具有显著性差异( p o o s ) ；柴胡龙牡汤组大鼠刻板行为较氯氮平组增 多，具有显著性差异( p 0 0 5 ) 。见表2 、图l 。 贵阳中医学院硕十学位论文 表2 四组大鼠刻板行为比较( x 士s d ) 注：术p 0 0 5 ，宰木p 0 0 1 ：氯胺酮组v s 柴胡龙牡汤组，t = 3 3 2 9 ，氯胺酮组v s 氯氮平组，t = 8 3 1 9 ，氯胺 酮组v s 空白对照组，t = 3 0 0 9 1 ，柴胡龙牡汤组v s 氯氮平组，t = 3 2 0 2 ，0 柴胡龙牡 汤组v s 空白对照组，t = 2 6 1 7 6 ，氯氮平组v s 空白对照组，t = 2 7 5 4 6 3 ( ；f a p 阳性细胞数目比较： 图1 3 1 四组进行g f a p 阳性细胞数目的均数比较，先做方差齐性检验，结果方 差是齐性的。再做方差分析，结果四组之问有差异见表3 9 贵阳中医学院硕士学位论文 表3 四组大鼠g f a p 方差分析 离均差平方和自由度均差 fp 3 2 将四组大鼠刻板行为进行t 检验，氯胺酮组大鼠g f a p 阳性细胞数目较 空白组明显增多，具有显著性差异( p 0 0 1 ) ；氯氮平组大鼠g f a p 阳性细胞 数目较氯胺酮组明显减少，具有显著性差异( p 0 0 1 ) ；柴胡龙牡汤组大鼠 g f a p 阳性细胞数目较氯胺酮组明显减少，具有显著性差异( p o 0 5 ) ；柴胡 龙牡汤组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯氮平组增多，具有显著性差异 ( p o 0 5 ) 。见表4 、图2 表4 四组大鼠g f a p 阳性细胞数目( x 士s d ) 注：木p 0 0 5 ，料p 0 0 1 ：氯胺酮组v s 柴胡龙牡汤组，t = 4 3 2 8 ，氯胺酮组v s 氯氮平组，t = 1 5 3 7 9 ，氯 胺酮组v s 空白对照组，t = 1 4 1 1 4 ，柴胡龙牡汤组v s 氯氮平组，t = 4 3 6 3 ，o 柴胡龙 牡汤组v s 空白对照组，t = 1 1 9 5 8 ，氯氮平组v s 空白对照组，t = 9 9 6 0 l o 贵阳中医学院硕十学位论文 图2 a 氯胺酮模型组g f j 6 i p 阳性细胞表达( 4 0 0 x ) b 柴胡龙牡汤组g f a p 障1 性细胞表达( 4 0 0 ) 1 2 c 氯氮平组g f a p 阳性细胞表达( 4 0 0 ) d 空白对照组g f a p 阳性细胞表达( 4 0 0 ) 贵阳中医学院硕士学位论文 贵阳中医学院硕： ：学位论文 - 讨1 2 1 精神分裂症造模 氯胺酮是目前公认的、成熟的一种造模方法。氯胺酮是非竞争性n 一甲 基一天门冬氨酸( n m d a ) 受体拮抗剂，主要于n m d a 受体活化状态下结合于受 体门控通道的苯环己哌啶( p c p ) 位点，是临床上较常用的一种麻醉药。氯胺 酮、苯环己哌啶是n m d a 受体拮抗剂，苯环己哌啶可导致大鼠运动增加、嗅 探、后退、旋转。反复使用苯环己哌啶，动物不对苯环己哌啶形成耐受，出 现刻板行为增敏现象，导致异常刻板行为程度逐渐加重，持续的时间延长， 从使用药物开始到出现刻板行为的潜伏时间在逐渐缩短n 们。给予啮齿类动物 n m d a 受体拮抗剂m k - 8 0 1 、氯胺酮等快速阻断n m d a 受体，导致的行为表现是 自发活动增多，刻板行为、共济失调以及社会功能低下等。t r u j i l l o 等1 研究显示，在反复注射氯胺酮后可引起大鼠活动增多和行为敏感性增强。当 首次注射大剂量的氯胺酮时，大鼠的表现主要是共济失调现象，同时掩盖了 氯胺酮的刺激作用，当反复注射一段时白j 后，大鼠则对这种共济失调现象产 生了一定的耐受。氯胺酮作用机制比较复杂，涉及了n m d a 受体、阿片类受体、 单胺类受体、毒蕈碱受体以及电压依赖性钙通道受体等，同时具有中枢抑制、 中枢兴奋、镇痛、麻醉、抗焦虑以及致幻等作用。氯胺酮在1 0 0 2 0 0 m g 剂量 时可使滥用者产生情绪上的快感、精神病样症状。给予患有精神分裂症的患 者氯胺酮后，其精神症状加重。给予健康人氯胺酮后能导致其行为异常，与 精神分裂有一些相似之处。有学者认为，氯胺酮的作用是直接阻断了边缘区 y 一氨基丁酸( g a 队) 能神经n m d a 通道，从而引起代谢活性增加及额区及边 缘区兴奋，同时也在感觉区阻断n m d a 通路和谷氨酰胺一q 一氨基羟甲基恶唑 丙酸( g l u a m p a ) 活性增加，产生一种知觉过程的干扰。对应的间接作用是： 边缘区和额叶的兴奋状态，引起前期熟悉模式的再激活和改变在丘脑一皮层 的联结的胆碱能的代谢，从而引起感觉扭曲及幻觉n 羽。动物实验研究显示： 氯胺酮可导致老年大鼠海马n m d a 受体亚基n r 2 b m r n a 表达降低n 引，使大鼠海 马n r 2 a 及n r 2 b 蛋白表达水平显著下调n 钔。国外也有很多应用氯胺酮制造精 神分裂症模型的研究n5 地1 7 j 引。近年来，关于自由基介导的中枢神经系统功能 缺陷在精神分裂症病理生理中的作用也引起了精神病学界的广泛关注。精神 1 5 贵阳中医学院硕：i ：学位论文 分裂症患者脑内的自由基产生过多，而生理性的清除机制却在减弱，导致神 经毒性增强，或许在该病发生中起一定的作用。大脑容易被自由基损伤：首 先，它有丰富的多不饱和脂肪酸；其次，在大脑内抗氧化物酶含量低。另外， 脑组织中含有铁，而铁离子可引起自由基的产生。因此，脑组织对自由基损 伤缺乏足够的抗氧化保护作用。当氧化系统及抗氧化系统失衡时，氧化应激 就可能发生，进而引起细胞损伤。海马组织中富含多不饱和脂肪酸，较易受 到自由基的攻击而损伤。研究表明，在精神分裂症患者血中存在抗氧化物质 和脂质过氧化物水平的异常，推测精神分裂症患者的脑内自由基产生过多， 相反清除机制却在减弱，引起脂质过氧化反应增多，神经毒性增强。精神分 裂症的发病机制和氧化应激紧密相关，患者的阳性症状和s o d 的活性有关， 阴性症状和g s h - p x 的水平相关联。本文所观察的刻板行为是目前较公认的 精神分裂症动物模型的特征，也是精神分裂症的阳性症状的表现。本实验采 用腹腔注射氯胺酮的方法，行为学观察显示：空白组大鼠腹腔注射生理盐水 后无明显异常反应，氯胺酮模型组腹腔注射氯胺酮后，大约5 1 0m i n 左右， 表现为运动增加、摇头、转圈、直立次数增多、嗅触行为增多，显示氯胺酮 组大鼠刻板行为较空白组明显增多，本实验采用氯胺酮造精神分裂症模型获 得成功。 2 氯氮平( c l o z a p i n e ) 氯氮平是非典型抗精神病药物的代表。本实验氯氮平组大鼠刻板行为较 氯胺酮组明显减少，氯氮平组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯胺酮组明显减少。 氯氮平在过去和目前都是我国精神科最常用的抗精神病药物之一，对阳性症 状、阴性症状、某些特定的认知缺陷及自杀行为更有效。能有效治疗经典抗 精神病药物所引起的迟发性运动障碍及迟发性肌强直。在心理社会及功能后 果方面疗效优于经典的抗精神病药物。据调查发现在我国有4 0 的精神分裂 症病人接受氯氮平治疗，而在国外氯氮平主要用于治疗难治性精神分裂症患 者。目前，氯氮平是公认的治疗难治性分裂症的最佳药物和金标准。但是关 于氯氮平的作用机制和特点仍有较大争议。从分子生物学的水平来看，氯氮 平和多种受体有亲和力，包括d 1 、d 2 、d 4 受体，5 一h t 2 a 、5 - h t 2 c 、5 - h t 3 、 5 一h t 6 受体、胆碱能( m 1 m 5 ) 、h l 及a1 受体等。有人认为氯氮平的关键可 1 6 贵阳中医学院硕士学位论文 能是对d ：受体突触后中度阻断，也可能是通过更加有效的d 。d 。或5 一h t 2 a d 。 比值。也有人认为可能和氯氮平是5 - h t i a 受体部分激动剂有关。还有研究 表明氯氮平对氯胺酮高活动性的抑制和其本身对自主活动的抑制相比更具 有选择性。5 - h t 2 a 受体的拮抗剂如酮色林、利坦色林、m 1 0 0 9 0 7 ( 一种选择 性很强的5 - h t 2 a 受体拮抗剂) 等也表现出和氯氮平相似的选择性抑制作用 n 9 1 。氯氮平对5 - h t 2 a 受体的拮抗作用或许是其选择性抑制氯胺酮高活动性 的机制之一。低剂量时氯氮平对地卓西平马来酸盐( m k - 8 0 1 ) 高活动性的短时 程抑制作用，并不能完全排除药物代谢的原因，但更可能是由于氯氮平多靶 点的整合作用，其明确的药理机制尚需进一步研究。近来有假说认为或许与 分裂症的n m d a 受体功能低下有关。氯氮平能减低由氯胺酮引起的皮质代 谢活动增强，逆转p c p 引起的社会退缩症状，阻碍n m d a 受体拮抗剂导致的 后扣带回、网状结构神经元退变，具有神经保护作用乜。 3 胶质纤维酸性蛋白 雯 胶质纤维酸性蛋白( g l i a lf i b r i l l a r ya c i dp r o t e i n ，g f a p ) 是星形胶 质细胞内细胞骨架的主要成分，是中枢神经系统主要的神经胶质细胞，是脑 间质纤维的主要亚单位，是星形胶质细胞的一种标志蛋白。其数量最多，功 能也最复杂。在正常的情况下，中枢神经系统内神经元和其突起间的空隙几 乎都由星形胶质细胞填塞，充满在整个细胞质空间内，起到结构的支持作用； 它们的薄片状突起包裹神经元、突触群，避免彼此间的影响以及干扰，有隔 离、绝缘作用。星形胶质细胞间的腔隙迂回曲折，内部含有组织液，神经元 借此和血管、脑脊液进行物质交换。和外侧的细胞膜及内侧的核膜存在一定 的结构联系，几乎参与了细胞内一切重要的生命活动。g f a p 是星形胶质细 胞的特征性蛋白，也是反映星形胶质细胞活化状态的重要物质瞳2 2 3 i 。 星形胶质细胞的胞质中含有大量的微细交错的原纤维，原纤维的超微结 构是一种胶原丝，主要是作为细胞骨架维持细胞的正常形态，对细胞突的各 种运动也产生影响。不同纤丝的构成蛋白各不同，组织特异性也各异。g f a p 是一种具有高度特异性的中间丝蛋白，存在于高等脊椎动物的中枢神经系统 内发育成熟的星形胶质细胞之中。近年来关于g f a p 的大量研究成果揭示出 了，星形胶质细胞中间的丝蛋白尤其是g f a p 在维持星形细胞正常的功能状 1 7 贵阳中医学院硕二i 二学位论文 态方面起到了核心作用，如缺少这些细胞骨架蛋白致使星形细胞在某些程度 上失去了对中枢神经损伤的正常应激反应。g f a p 被认为在保持星形细胞正 常形态及稳定的功能性活动方面发挥着重要的作用。大量的实验研究也证明 了，无论是因外伤、疾病、遗传性障碍或者化学损害所导致的中枢神经系统 损伤都能激活星形胶质细胞。具体表现为星形细胞增生肥大及胶质化，星形 细胞胶质化的特征性反应之一即g f a p 合成增加迅速。目前认为，脑损伤中 星形胶质细胞增生肥大对神经元有双向作用。其一，通过改善血脑屏障的功 能、维持脑组织内环境稳定、调节一系列酶的活性、产生众多的神经生长因 子等，处于激化状态下的星形胶质细胞进而起到保护、清除、修复脑组织的 作用。其二，活化的星形胶质细胞可以产生大量的n o 、胶质性磷酯酶a 2 、 巨噬细胞炎性蛋白等因子，参与神经元的变性和死亡的过程。一般认为，适 度增多时其保护修复作用占优势，但明显增多时损害作用占优势乜 矧。本实 验中，星形胶质细胞表达较明显，其作用应是双向的，既参与脑损害的保护 修复作用又参与脑损害启动、加重过程。故本研究应用免疫组织化学方法观 察了精神分裂症大鼠模型g f a p 的表达。本实验结果，氯胺酮模型组大鼠脑 组织病理切片显示g f a p 染色阳性反应增强，表现为阳性细胞数目增多，空 白组只有少量表达，氯氮平组g f a p 较氯胺酮组少，较空白组多。许多精神 疾病如：脑外伤、神经症、酒精中毒、心理应激等都与g f a p 有关。( 1 ) g f a p 在中枢神经系统( c n s ) 受到损伤后及躯体刺激后被激活，发生肥大、增生， 最终形成胶质疤，其标志物g f a p 大量增多1 。( 2 ) 脑缺血损伤后星形胶质细 胞反应性增生肥大是常见反应之一n 矾嘲。国内呻3 学者发现，在穹隆海马伞损 伤痴呆模型中，海马c a i 区及齿状回分子层g f a p 阳性细胞数目均增多且面 积增大。老年痴呆患者脑内的老年斑周围的g f a p 阳性细胞的体积增大且数 目增多，这些反应性星形胶质细胞参与其的发生和发展，并且加重老年痴呆 的病理改变，促使病程的发展“3 羽。( 3 ) 偏侧帕金森综合症( p d ) 猴模型卜甲 基4 一苯基1 ，2 ，3 ，6 一四氢吡啶( m p t p ) 毁损侧黑质及纹状体g f a p 的表达增 加，推测星形胶质细胞或许在黑质及纹状体神经元变性和死亡过程中起一定 的作用口副。( 4 ) k a w a h a r a 等m 1 认为，脑梗塞范围和星形细胞的活性有关，后 者起着相对持久的神经保护作用。这表明脑梗塞的方式或程度不相同，导致 贵阳中医学院硕士学位论文 脑胶质反应也不相同，因此g f a p 表达增多出现的时间就不同。( 5 ) 哌替啶不 同给药时程对大鼠齿状回星形胶质细胞和其g f a p 表达的影响也不尽相同， 其作用机制也可能不同。反应性星形胶质细胞的神经保护作用或许是有限 的，随着毒性的增加，星形胶质细胞对哌替啶的神经毒性作出的适应性改变 的能力亦会受到抑制，细胞的活性下降口勃。( 6 ) 急性酒精中毒合并创伤性脑 损伤( t b i ) 后兴奋性氨基酸，特别是谷氨酸大量释放也已得到许多实验证实。 谷氨酸可激活n m d a 受体导致c a 大量内流，c a 超载引起继发性脑损伤。而酒 精也是公认的n m d a 受体非选择性拮抗剂汹1 。急性酒精中毒合并中度创伤性 脑损伤组和单纯的中度创伤性脑损伤组相比，在6 h 和2 4 h 可减少g f a p 的表 达，抑制星形胶质细胞的激活，进而减少炎症的发生，随着酒精的逐渐代谢， 在4 8 h 其不再具有显著的抑制作用。中性红染色结果也显示出前者神经元损 伤程度较后者相对较轻，即提示急性酒精中毒可通过抑制星形胶质细胞的激 活而减少中度创伤性脑损伤的炎症反应。( 7 ) 赵大卫等刀研究发现在慢性缺 血痴呆大鼠中，g f a p 免疫阳性神经元数目增多、面积增大。以上所述疾病 如：脑缺血损伤、帕金森综合症、酒精中毒、缺血性痴呆等，在它们的病程 过程中都可出现精神症状，因此提示精神分裂症可能与g f a p 有关，但是g f a p 是否可以作为精神分裂症的测定指标目前国内尚未报道。 本实验结果显示氯胺酮组大鼠g f a p 阳性细胞数目较空白组明显增多笃 具有显著性差异：氯氮平组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯胺酮组明显减少， 具有显著性差异；柴胡龙牡汤组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯胺酮组明显减 少，具有显著性差异；柴胡龙牡汤组大鼠g f a p 阳性细胞数目较氯氮平组增 多，具有显著性差异。 4 柴胡龙牡汤 本方出自伤寒论一太阳病篇第1 0 7 条，原文日：“伤寒八九日，下之， 胸满烦惊，小便不利， 。方由柴胡、半夏、黄芩、桂枝、人参、茯苓、 龙骨、大黄、牡蛎、生姜、大枣、铅丹等十二味药物组成，全方具有疏利肝 胆、调和气血及镇惊安神之功效。用于精神分裂症的治疗，可谓恰合其病机， 现代临床也证实了本方对于精神分裂症的治疗具有显著的疗效。本方的应用 范围经过历代医家不断的临床实践，已大为的扩大了，广泛的运用于临床各 1 9 贵阳中医学院硕j 二学位论文 科疾病的治疗。徐灵胎在方后按日：“此方能下肝胆之惊痰，则不惟“治癫 痫必效嘞1 。 柴胡龙牡汤证以情志、精神症状最为突出，在神经系统疾病中诸病的主 要病机为胆枢不运、痰浊扰心。胸胁为肝经分野，七情内伤，肝气郁结，因 此胸胁苦满；气滞津凝、气郁化火，生痰蕴热，郁火痰热，上扰于心，可见 心烦；痰热上蒙清窍则引起眩晕；肝失疏泄，则影响脾胃，故不欲饮食；肝 气郁久化火故口苦。柴胡龙牡汤证在病因方面则以精神刺激为第一，由争吵 以及惊吓引起居第二，忧郁引发为第四，还有疾病后遗、悲伤等。可以看出， 其以七情内伤为主。柴胡龙牡汤治疗疾病也有明确的西医病名，神经系统疾 病则以癫痫为主，精神疾病则以精神分裂症、抑郁症等为主。中医病名则以 癫狂、惊悸、抑郁、失眠等为主：可见，柴胡龙牡汤主要用于神志系统疾病。 多为病程长者，结合病因来看，精神刺激引发的疾病，病程偏长，多呈长期 反复发作，不易速愈。该方证相对于小柴胡汤证则偏于邪实，相对于大柴胡 汤证则偏于正虚，这与方中参、桂、芩、黄并用，补泻温清兼施的组方特点 是统一的。方证的共同病机为胆枢不运。日本人也广泛应用于治疗癫狂等精 神神经系统疾病而且取得了显著的疗效。 方中柴胡性昧苦平，入肝胆经，能透泻少阳之邪而从外解，并可疏泄气 机郁滞；黄芩苦寒，清泄少阳之郁热；柴胡配黄芩，气郁能达，邪郁能透， 火郁能发，且柴胡之升散得黄芩之降泄，则无升阳劫阴之弊，两者共治邪陷 少阳。茯苓可发散水气，配伍桂枝，外可解表兼畅卫气，一内可温阳化气以治 疗小便不利、一身尽重。半夏、生姜温散水饮，半夏也能降逆化痰，通阴和 阳，生姜可助桂枝和茯苓发散水气，以除肌腠水湿，加大黄效仿承气法，通 里泄热，以安心神而止谵语。佐以人参和大枣益气扶正。龙骨、铅丹、牡蛎 重镇安神，祛痰镇惊，可治惊惕不安汹1 。 柴胡龙牡汤是用小柴胡汤去甘草，以调和肝胆，加用桂枝抑制上冲之气， 龙、牡是摄纳浮阳要药，且龙、牡得半夏和所加的茯苓，能豁肝胆之惊痰； 又可导以大黄，则痰滞更得下行。去铅丹不用，是恐久服而中铅毒，且疗效 不减，总的方义是和解肝胆，协调上下，使滞塞之机得到畅通，横肆之势得 柔h 0 1 。柴胡龙牡汤是以小柴胡汤去甘草调解少阳，加龙骨、牡蛎、铅丹等质 贵阳中医学院硕： ：学位论文 重性沉的药物，镇惊安神。加以桂枝以通脉络，用茯苓利小便、安神，加大 黄泻邪热。现代药理研究，本方对神经系统也有较明显的作用。方中龙骨、 牡蛎可抑制中枢神经、安定，铅丹可杀菌、抑制粘液分泌。方中的小柴胡汤 对神经系统亦有镇静的作用，加入龙、牡、铅丹，这一作用可加强，因此本 方的治疗作用侧重于神经系统的疾病。 施今墨对药：柴胡苦平，疏肝解郁，和解退热，升举阳气；黄芩苦 寒，清热泻火，柴胡又长于开郁，黄芩又善于泻热，两药相配伍，既可疏调 肝胆之气机，又能清泄内蕴之邪热，方中柴胡重用为四两，其疏肝解郁的作 用更强h u ，攀登实验表明柴胡粗甙有和眠尔通相似的镇静作