（遗传学专业论文）红檵木的分子标记和玉米花粉发育过程中线粒体基因的转录规律.pdf

万犬学翻生适 沙 一蛇 生毕业不甘 才1 立有水伪 分子标君 mo l e c u l a r ma r k e r s o f l oe t a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m ab s t r a c t l o r o p e t a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m i s v e r y i n f r e q u e n c e i n r e s o u r c e o f t h e w o r l d , s o i t h a s t h e v e r y i m p o r t a n t s t a t u s i nb i o d i v e r s i t y . i t s r e s e a r c h e d o n p l a n t s t u d ym o s t l y l i m i t s i n p h y s i o l o g y a n d t i s s u e c u l t u r e , a n d i t i s n t mo l e c u l e n o w. de t a i l .;j，.1 c l a s s i f i c a t i o n i s n t d o n e t o l o r o p e t a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m . r e s u l t i n t h e c o n f u s i o n o f it s r e s o u r c e s m a n a g e m e n t . c o n t r a s t e d w i t h 2 l o r o p e t a l u m c h i n e n s e m a t e r i a l s , a l m o s t a l l o f l o r o p e t a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m m a t e r i a l s ( 1 4 ) t h a t c o u l d b e g a t h e r e d i n p a t r i a w e r e a n a l y z e d b y r a p d m e t h o d i n t h i s p a p e r . 5 5 r a n d o m p r i m e r s p r o d u c e d 6 3 2 s t e a d y e x p e n d b a n d s in t o t a l . t h e r e i n t o , 4 2 7 b a n d s w e r e p o l y m o r p h i c . c l e a r l y r e s o l v e d b a n d s w e r e s c o r e d f o r t h e i r p r e s e n c e o r a b s e n c e i n a b i n a r y d a t a m a t r i x . n e i s s i m i l a r i t y c o e f f i c i e n t s a n d g e n e t i c d i s t a n c e s w e r e c a l c u l a t e d b y n t s y s - p c s o f t w a r e , a n d p r i n c ip a l c o m p o n e n t s a n a l y s i s w a s c a l c u l a t e d b y s a s s o f t w a r e . t h e r e s u l t d e m o n s t r a t e d t h a t l o r o p e t a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m i s t h e v a r i e t y o f l o r o p e t a l u m c h i n e n s e o n m o l e c u l a r l e v e l a n d r e v e a l e d t h a t 1 4 l o r o p e t a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m m a t e r i a l s w e r e c l as s i f i e d i n 4 s u b g r o u p s . a n d a l s o e x p l o r e d i t s p a t h w a y o f e v o l u t i o n a n d g e n e s i s i n t h e p a p e r i n r a p d s t u d y w i t h 1 1 6 r a n d o m p r i m e r s ( 1 0 m e r ) , s c r e e n e d p r i m e r s t h a t h a d d i s t i n c t d i v e r s i t y a n d w h o s e p o l y m o r p h i c b a n d s w e r e s t e a d y , t h e h i g h e s t b r i g h t n e s s a n d h a d a b e y o n d 1 0 3 1 b p m o l e c u l a r w e i g h t i n e l e c t r o p h o r e s i s f i g u r e . t h e n , a d d e d a r a n d o m o l i g o n u c l e o t i d e a t t h e 3 - e n d o f t h e p r i m e r s . e r p a d m a r k e r s w e r e u s e d t o a n a l y z e 1 4 l o r o p e t a l u m c h i n e n s e v a r . r u b r u m a n d 2 l o r o p e t a l u m c h i n e n s e m a t e r i a l s . g o t t h e p r i m e r p a i d s .2 - g + s 2 - c a n d s 3 5 - a + s 3 5 - c t h a t c o u l d . p r o d u c e t h e b e s t e x p e n d r e s u l t r n刀 认李硬关 一 硕 夕 夕 之 里 . 毕业 忿戈j $ f lw 水 伪分了 w id a n d w e r e t h e e x t e n d e d p r i m e r s o f s 2 a n d s 3 5 i n t h e p a p e r . t h e r e s u lt o f e x t e n d e d p r i m e r s c o n t a i n e d t h e s a m e p o l y m o 甲 h i c b a n d s as t h e b asi c r a n d o m p r im e r s . t h e p o ly m o r p h i c b a n d s w e r e s 2 15 0 0 , s 2 1o , i a n d s 3 5 3 u o o , s 3 5 , o , s 3 5 s b o . a n a l y s i s t o t h e d i v e r s i t y b a n d s s h o w e d s 2 ,s o o m a y b e w e r e r e la t i o n t o t h e g e n e s t h a t c o n t r o l l e a f c o l o r . k e y a n a l y s i s ; wo r d st a l u m c h i n e n s e v a r r u b r u m ; r a p d ; g e n e t i c d i s t a n c e ; c l u s t e r erp ad a 万大4 w 1 - 翻 ) 公 全毕瞪i g 戈 1ft甫水 ! x 1 分厂 标心 讨论 一 r a p d常见问题的探讨 r a p d标记技术在各个领域应用如此广泛，就难免在实验过程中出现形形色 色的疑难问题，在我们的实验中也是如此。结合前人的经验，我们在实验过程中 对这些问题进行了分析，并对如何处理这些问题进行了思考和实践。 1 .扩增偏差或无扩增 a .在部分或全部管中缺少一个组分，重复少量几个反应以 确定所有 p c r组 分是否都己经加入; b 可能是由于在样品d n a多次冻融过程中降解，稀释新的d n a样品溶液 c .引物母液失效，重新配制母液，使用不同的引物或提高引物浓度; d .在 p c r程序中的第二部分延长退火时间，或降低升温转换步骤之间的速 率; e 提高协个反应中的t a q d n a聚合酶的 浓度; f .补加新的组分，该灭菌的都高温灭菌。 2 .扩增结果差，条带模糊或难以辨认 更换t a q d n a聚合酶缓冲液; b .检查引物，如使用另外一个引物; c .检查t a q d n a聚合酶的 活性， 与不同 批量的 酶作比 较; d .改变样品d n a的量或浓度。 3 .产物弥散分布 降低d n a模板的浓度; b .降 低t a q d n a聚合酶的 浓 度; c .减少凝胶上样量; d .可能是由 于循环数过多的结果， 减少循环数; e .确认是否使用正确的缓冲液而不是水制备凝胶; 在较低的电压下电泳。 浦万大学r k公列乡 之 全毕业 b .凝胶脱色时间延长; c . p c r反应中d n a含量或t a q d n a聚合酶过多。 由于 r a p d经常出现以上的问题，所以实验过程中的标准化也就变得十分重 要。这种标准化要求在实验中首先摸索出r a p d反应体系中各组分的适宜浓度， 在整个实验中应务必使前后各次反应的各组分的来源和浓度保持一致;尽可能使 用同一台p c r仪，仪器的参数设置应前后一致:凝胶电泳的类型及统计数据的标 准应前后一致。只有在保证了这样的标准化在之后才能使r a p d稳定顺利。 二。供试材料的分类 本研究结果显示红橙木不同材料间的 遗传距离在。 .0 2 9 - 0 . 3 9 9 间， 而与租木的 遗传距离都在 0 .4 2以上，大多在 0 .4 5左右。我们假定以遗传距离 0 .4 0为划分标 准，结合生理上的结论，我们可以 认为红樱木为格木的一个变种，1 4个不同来源 的红租木材料再细分为 4个亚类。其中第四亚类的 1 1个材料间的遗传距离在 0 . 0 3 - 0 . 1 0之间，说明彼此间的亲缘关系十分密切，这些红概木材料很可能是来源 于同一株系，相互之间仅存在着微小的个体差异。 对供试材料的形态特征与聚类 结果对比分析，发现聚类结果与各材料叶片间的形态特征非常吻合。1 4个红租木 材料的叶色为红色，租木叶片为绿色，从形态和分子水平都可以明显地将红租木 和楹木分成两类。在 4大亚类红租木中，第一、二和三亚类有别于第四亚类的形 态特征在于叶色偏紫，而第四亚类的叶色偏红，为红储色。第一亚类与第二、三 亚类红楹木的叶色虽然都偏紫，但也存在较大的差异，第一亚类的叶色为紫色， 第二、三亚类的叶色较第一亚类偏红，为紫红色，并且第一亚类存在着一个与其 它类型红槛木差别很大的形态特征，就是其叶形为菱形，其它类型红楹木叶形都 尼 了 万式李r .frd f 全华业居 立溜 从种 分厂断心 偏圆形。第二亚类与第三亚类是各类之间遗传距离最近的 ( 根据表 5计算得到) ， 从二者的形态上也能够得到相似的结论，但它们之间也有一定差异，第二亚类的 叶形是卵圆形，第三亚类的叶形与大部分红樱木相似，为椭圆形。结合这些形态 特征和我们得到的聚类结果，进一步说明了 r a p d标记技术是寻找种类差异和多 态性研究的有效手段。 一直以来，研究人员都只是从生理水平上认为红租木是撒木的变种，没有在 分子水平得到证据，我们的工作首次在分子水平证明了红租木是楹木的变种。而 且根据形态学和分子手段划分红槛木为 4大亚类将有利于红楹木资源的管理，为 合理地开发红祖木资源提供了依据。 三.进化途径和起源的探讨 根据我们和前人的研究观点，红租木是租木的变种，那么就是说红槛木是由 撒木逐渐变异而来的，由供试红祖木的四个亚类与撒木的遗传距离就可以推测出 红租木的进化途径。根据表 5计算得到，第一亚类红格木 ( 5号)与租木的平均 遗传距离是0 .4 8 9 0 ，第二亚类红租木 ( 1 2 号)与租木的平均遗传距离是0 .4 5 3 9 , 第三亚类 ( 1 1 号)与根木的平均遗传距离是 0 .4 4 7 4 ，第四亚类 ( 其它)与撒木的 平均遗传距离是 0 . 4 4 8 8 。因此可以 推测，红棍木的进化途径可能是从租木首先到 第三亚类红租木，经过第四、第二亚类，最后进化到第一亚类红概木。 从遗传距离 ( 表 5 )中不难发现，第一亚类红撒木与两个不同来源的祖木原 种的遗传距离不同，其它各类红粗木大都如此，第一亚类与 1 6号租木的遗传距 离大于与 1 5号租木的遗传距离，所以可以认为第一亚类红槛木更加可能主要由 湖南桑植的槛木原种进化而来，第三亚类红槛木与第一类情况相同。第四亚类红 槛木则相反，这一亚类的全部红槛木材料都是与 巧 号棍木的遗传距离大于与 1 6 号椒木的遗传距离，同样可以认为这类红租木更加可能主要由湖南浏阳的租木原 种进化而来。第二亚类红楹木与 1 5 . 1 6号的遗传距离相同，这说明在红榴木的 进化过程中不是由一个租木原种单独进化而成，而是由多个槛木原种共同进化而 成，但是存在着主次之分。也就是说红楹木的进化是一个复杂的过程，这其中存 应刀 认一笋/nl去 那乡 之 生 一 毕 .淤 j皆 灵1鑫总浓内分厂 你i t! 在楹木原种与楹木原种间的作用，红攫木与槛木原种间的作用，还有红租木各品 种之间的相互作用。 四.对e r p a d结果的讨论 在我们得到的实验结果中，延长引物之后的扩增结果大多数明显增强了特异 性， 而仅仅只有 s 2 - g + s 2 - c获得了比r a p d结果更多的扩增产物， 与王晓武等“ 延 长引物虽然保证大多数扩增效果，不排除个别扩增效率显著下降”的情况相似。 说明添加一个碱基的 e r p a d在将特定多态性带进一步提高特异标记的同时，由 于3 碱基的改变有可能使结合位点改变， 有可能出现基本r a p d不曾有的分子标 记， 但通过图谱比 较， 可以找出一种引物组合进行的e r a p d带型与原来的r a p d 相似。 根据s 2 - g + s 2 - c和其基本引 物s 2 的 扩增结果中1 . 5 k b 片段 ( 命名为s 2 15 o o , 以 下命名方式相同)的带型，发现在 1 - 1 0 和 1 3 , 1 4号材料的d n a中都存在这 个片段，其中 1 - -4 , 6 - 1 0 , 1 3 和 1 4号的叶色为红储色，5 号为紫色;1 1 , 1 2 , 1 5 和1 6 号红槛木材料没有s 2 ,5 。 片段， 其中1 1 与1 2 号的叶色为紫红，1 5 和1 6 号 为 绿色，结 合这些形 态特征我们认为 s 2 1 5 o 。 片段 很有可能与 控制叶 色 性状的 基因 有关。 在1 0 3 1 b p 处两个结果的1 1 号都有一条d n a谱带， 尤其在延伸引物对s 2 - g + s 2 - c的扩增结果中 亮度很高， 这条s 2 , o 3 . 很有可能 就是一条非常重要的 特异性 谱带， 如 果能 够继续延叫 1 引 物使获 得到单一的s 2 10 3 。 扩增带， 就 将对这一重 要标 记 更加清楚。在s 3 5 - a 十 s 3 5 - c的扩增结果中可以发现3 条重要的d n a差异带， 这三条差异带都有可能在继续延伸引物之后变为单一的特异带而成为某个性状的 重要标记p 仅仅添加一个碱基的 e r a p d 中没有得到单一的特异带.是因为引物序列的 特异性还不够 结果的分析， 继续延长引物就有可能得到单一的d n a特异带。 根据对 我们认为对 s 2 - g 十 s 2 - c继续添加碱基进行深一步的研究更加有意 义。 如果在继续添加碱基的e r p a d中 仍然可以 得到s 2 1 5 o o 片段， 那么我们对于这 个片段的推侧就更加能够得到成立。 放刀 一 犬 li ! _l - ll f sl c j l i e 7 y l 立楷浓b j 分 7 t f 君 五.r a p d技术的应用前景 r a p d技术在多年利用中不断地得到充实，己经形成一套成熟的操作过程。 在这一过程i i i 也不断表现出自 身的适应性和生命力，其应川己 涉及生命科学的很 多领域。正是由于 r a p d技术是一门非常成熟的分子标记技术，所以必然在未来 较长的时间里为人们所利用。 在过去的研究中，研究人员利用其它相关技术与r a p d结合来弥补其自 身的 不足， 如 s c a r 、 变性电泳、 银染等技术， 同时也利用如 b s a等方法来扩展r a p d 技术。由 此可见， r a p d的发展和长期利用必须与其它新技术相结合， 虽然有些 只是细小的改进，但也许就会对 r a p d技术起到巨大的推动作用。比如我们可以 利用双随机引物进行 r a p d ，这样一定会增加 r a p d的重复性，而且可以用有限 的引物得到更多的标记。又如本文使用的 e r p a d技术，在成本低、复杂程度不 高的条件下将 r a p d标记转化为稳定的标记。 虽然r a p d在未来较长时间里还有应用的价值和潜力， 但是由于其自 身的因 素如显性标记、多位点扩增和对反应条件敏感使其利用的价值受到影响。新方法 的结合和r a p d技术的改进虽然可以 弥补它的缺陷， 但是如果新的分子标记技术 出现， r a p d技术的利用就会受到极大的影响。 分子生物学理论与技术的迅猛发展，必将不断地开发出分析速度更快、成本 更低、信息量更大的分子标记技术。而分子标记技术与 d n a提取程式化、电泳 胶片分析自 动化、信息 ( 数据)处理计算机化的结合，已经使一些有重要理论、 应用价值的物种的分子作图工作取得了很大进展，一些有价值的基因相继被定位 克隆，有的甚至经转化已获得转丛因植株。由 此可见，分子标记 技术的应用价值 依然巨大，山 此研究人员必然会积极地研究开发新的分子标记技术以 适应不断发 展的生命科学。而正是如此，又加之 r a p d技术自 身的缺陷，将来其很有可能会 被新的技术所取代。 戒获式 学砰 _t 醉夕 i i e 戈 . 1 立世不公 夕 分7-an 心 参考文献 程须珍、 陈德富、 然科学) ， 陈新平、 4 2 ( 2) : 杨又迪。 r a p id 分析在绿豆亲缘关系研究中的应用。 遗传，1 9 9 8 , 2 0( 增刊) : 2 7 - 2 9 陈喜文、 侯志波等. 黄瓜随机扩增多态d n a ( r a p d ) 研究初报。 南开大学学报 ( 自 1 9 9 9 , 3 2 ( 4 ) : 4 75 0 门玲、丁毅。中国近缘野生大麦的 r a p d分析与进化途径探讨。植物学报，2 0 0 0 , cl a r k m s 1 7 9 1 8 3 ( u k ) 主编，顾红雅、 瞿礼嘉等泽。 植物分子生物学实验手册 。高等教育出版社， 1 9 9 8 戴思兰、陈俊愉、李文彬。 菊花起源的r a p d分析。植物学报，1 9 9 8 , 4 0 ( 1 1 ) : 1 0 5 3 - 1 0 5 9 戴思兰。 d n a遗传标记技术在林业生产中 应用。生物工程进展，1 9 9 6 , 1 6 ( 3 ) : 4 4 - 4 8 傅骏弊、李连城、 刘新芝等。 玉米 r a p d程序优化研究及其初步探讨。作物学报，1 9 9 7 , 2 3 ( 1 ) : 5 6 - 6 1 傅俊江、 李麓芸、徐湘等。一种提高r a p id 技术扩增效率的有效方法。遗传， 2 0 0 0 , 2 2 ( 4 ) : 2 5 1 - 2 5 2 胡志昂、挥锐、 钟敏等。检测植物d n a扩增多态性方法的比较和改进。植物学报，1 9 9 7 , 3 9 ( 2 ) : 1 4 4 - 1 4 8 黄瑞康，杨金桂，贺中 华， 等。 红租木资源调查研究。 湖南农业科学，1 9 9 8 , 4 : 4 4 - - 4 5 贾建航、王萍、 金德敏等。 r a p d标记在紫菜遗传多样性检测和种质鉴定中的 应用。植物学 报，2 0 0 0 , 4 2 ( 4 ) : 4 0 3 - 4 0 7 柯枫英、 石永刚、 郑川琏等。 玉米淀粉修饰基因d u 的r a p d 标记 研究。 作物学报，1 9 9 9 , 2 5 ( 1 ) :1 - 7 孔令让、董玉深、 贾继增。 粗山 羊草随机扩增多态性d n a研究.1 9 9 8 , 4 0 ( 3 ) : 2 2 3 - 2 2 7 李宽钮、 黄敏仁、 王明麻。 用r a p d 探讨毛白 杨起源。 植物分类学报，1 9 9 7 , 3 5 ( 1 ) : 2 4 - 3 1 李汝刚。分子标记在苹果品种鉴定中的应用。生物技术通报，1 9 9 7 , 1 : 1 7 - 2 1 黎裕、贾继增、王 天宇。分子标记的种类及其发展。生物技术通报，1 9 9 9 , 4 : 1 92 2 效以 春、 左开井、张献龙等。 r a p d标记在棉属种间杂种后代检测中的 应用。中国农业科学， 2 0 0 0 , 3 3 ( 5 ) : 2 5 - 2 9 林同香、陈振光、 戴思兰等。 r a p d技术在龙眼品种分类中的应用研究。 植物学报，1 9 9 8 , 4 0 ( 1 2 ) : 1 1 5 9 - 1 1 6 5 刘春林、官春云、李 木旬 ( s h u n ) .植物 r a p d标记的可靠性研究。生物技术通报，1 9 9 9 2 : 3 1 - 3 4 路安民 主编。 种子植物科属地理 。 科学出 版社，1 9 9 9 马渐新、 周荣华、 董玉深等。小麦抗条锈病基因定位及分子标记研究进展。生物技术通报， 1 9 9 9 1 : 1 - 6 之 士 梢世老灵7 之超 i功i l 7存心 马小军、 江小全、徐昭玺等。人参不同栽培群体遗传关系的 r a p d分析。植物学报， 2 0 0 0 , 4 2 ( 6 ) : 5 8 7 - 5 9 0 彭建营、 束怀瑞、 孙仲序等。 中国 枣种质资 源的r a p id 分析。 园艺学报， 2 0 0 0 , 2 7 ( 3 ) : 1 7 1 - 1 7 6 乔爱民、 刘佩瑛、 雷建军。 芥菜1 6 个变种的r a p id 研究。 植物学报， 1 9 9 8 , 4 0 ( 1 0 ) : 9 1 5 - 9 2 1 钱迎倩。生物多样性的儿个问题。植物学通报，1 9 9 8 , 5 钱韦、葛颂、洪德元。采用 r a p id和 i s s r标记探讨中国疵粒野生稻的遗传多样性。植物学 报，2 0 0 0 , 4 2 ( 7 ) : 7 4 1 - 7 5 0 邱丽娟、 n e l s o n r l , we l k i n l o 。利用r a p id标记鉴定大豆种质。作物学报，1 9 9 7 , 2 3 ( 4 ) : 4 0 8 - 41 7 上海科学院编著。 上海植物志一 h 卷， 经济植物。上海科学技术文献出 版社，1 9 9 9 施苏华、 唐绍清、 陈月琴等。 1 、 种金花茶植物的r a p d分析及其系统学意义。 植物分类学报 1 9 9 8 , 3 6 ( 4 ) : 3 1 7 - 3 2 2 石永刚、 郑用琏、 李建生等。 玉米s 组c ms 育性恢复基因的分子标记定位。 作物学报， 1 9 9 7 , 2 3( 1 ) :1 - 6 涂金星、郑用琏、 傅廷栋。 甘蓝型油菜核不育材料育性基因的 r a p id标记。 华中 农业大学学 报，1 9 9 7 , 1 6 ( 2 ) : 1 1 2 1 1 7 吴敏生、戴景瑞、 王守才。 r a p id在玉米品种鉴定和纯度分析中的应用。 作物学报，1 9 9 9 , 2 5 ( 4 ) : 4 8 9 - 4 9 3 汪小全、 邹喻苹、 张大明等. r a p id应用于遗传多样性和系统学研究中的问题。 植物学报， 1 9 9 6 , 3 8( 1 2 ) : 9 5 2 - 9 6 2 江永庆、徐来祥、张知彬。r a p id 技术的 标准化问 题。 动物学杂志， 2 0 0 0 , 3 5 ( 4 ) : 5 7 - 6 0 王西平、王跃进、周鹏等。中国野生葡萄抗黑痘病基因特有的 r a p id标记。中国农业科学， 2 0 0 0 , 3 3 ( 6 ) : 1 3 - 1 8 王晓武、 方智远、 孙培田 等。甘蓝显性雄性不育基因的延长 随机引物扩增 d n a ( e r p a d ) 标记。园艺学报，1 9 9 9 , 2 6( 1 ) : 2 3 - - 2 7 w . r , l a w s o n 等。通过分析 d n a的随机扩增多态性来揭示向日 葵的遗传变异。国 外农学 一 油料作物，1 9 9 6 , 2 : 3 - 5 吴燕民、斐东、奚声坷等。运用 r a p id对核桃属种间亲缘关系的研究。园艺学报， 2 0 0 0 ， 2 7 ( 】 ) :1 7 - - 2 2 吴殿星、舒庆尧、 夏英武等。一个新的水稻转绿型白 化突变系、 n 2 5 的叶色 特征及遗传。 浙江 农业学报，1 9 9 6 . 8 ( 6 ) : 3 7 2 - 3 7 4 解新明。r a p d技术在系统与进化植物学中的 应用。生物学通报， 2 0 0 0 ， 3 5 ( 4 ) : 1 1 - 1 6 尹伶明、黄敏仁。a f 1 , p分子标记及其在植物育种上的应用。生物工程进展，1 9 9 7 ， 1 7 ( 1 ) : 6 -1 1 沪 西 万大学4 0 全解乡 之 兰毕业价丈i 厂 断司 衰力行、傅骏弊、 w a r b u rt o n m等。 利用r f l p , s s r , a f l p 不 ii r a p d标记分析玉米白 交系 遗传多样性的比 较研究。 遗传学报， 2 0 0 0 , 2 7 ( 8 ) : 7 2 57 3 3 张俊卫 ，、 包满珠。分子标记在观赏植物分类中的 应用。 北京林业大学学报，1 9 9 8 , 2 0 ( 2 ) : 8 5 - - 8 9 张太平。分子标记及其在生态学中的应用。生态科学，2 0 0 0 , 1 9 ( 1 ) : 5 1 - 5 8 朱保葛、 柏惠伙、张艳。大豆突变基因的遗传分析及窄叶突变基因的r a p d分析。 遗传学报， 2 0 0 1 , 2 8( 1 ) :6 4 - 6 8 邹喻苹、蔡美琳、王晓东等。古代“ 太子莲” 及现代红花中国莲种质资 源的 r a p d分析。 植 物学报，1 9 9 8 , 4 0 ( 2 ) : 1 6 3 - 1 6 8 邹喻苹、 蔡美琳、王子平。芍药属牡丹组的系统学研究基于r a p d分析。植物分类学报， 1 9 9 9 , 3 7 ( 3 ) : 2 2 0 - 2 2 7 左开井、 孙济中、张金发等。 用r a p d标记 评估我国棉花1urn . 种遗传多 样性。 遗传学报， 2 0 0 0 , 2 7 ( 9 ) : 8 1 7 - 8 2 3 张维平。生物多样性与可持续发展的关系。环境科学，1 9 9 8 , 4 : 9 2 - 9 6 b e c k m a n n j s , s t i l l e r m. r e s t r i c t i o n f r a g m e n t l e n g t h p o l y m o r p h i s m s i n g e n e t i c i m p r o v e m e n t : m e t h o d o l o g i e s , m a p p i n g a n d c o s t . t a g , 1 9 8 3 , 6 7 : 3 5 - 4 3 d e v o s k m, g a l e m d . t h e u s e o f r a n d o m a m p l i f i e d p o l y m o r p h i c d n a m a r k e r s i n w h e a t . t a g , 1 9 9 2 , 8 4 : 5 6 7 - 5 7 2 d w e ik a t 1 , ma c k e n z i e s , l e v y m, e t a l . p e d i g r e e a s s e s s m e n t u s e r a p d - d g g e i n c e r e a l c r o p s p e c i e s . t a g , 1 9 9 3 , 8 5 : 4 9 7 - 5 0 5 e l l e s w o rt h d l , r i t t e r h o u s e k d , h o n e y c u t t r l . a rt i f i c i a l v a r i a t i o n i n r and o m ly a m p l i f i e d p o l y m o r p h i c d n a b a n d i n g p a tt e r n s . b i o t e c h n i q u e s , 1 9 9 3 , 1 4 : 2 1 42 1 7 e s s e l m a n e j , c r a w f o r d d j , b r a u n e r s , e t a l . r a p d m a r k e r d iv e r s i t y w i t h i n a n d d i v e r g e n c e a m o n g s p e c ie s o f d e n d r o s e r is ( a s t e r a c e a e : l a c t u c e a e ) . a m e r ic a n j . o f b o t a n y , 2 0 0 0 , 8 7 ( 4 ) : 5 9 1 - 5 9 6 f i s c h e r m , h u s i r , p r a t i d , e t a l . r a p d v a r ia t i o n a m o n g a n d w i t h i n s m a l l and l a r g e p o p u l a t i o n s o f t h e r a r e c lo n a l p l a n t r a n u n c u l u s r e p t a n s ( r a n u n c u l a c e a e ) . a m e r i c an j . o f b o t a n y , 2 0 0 0 , 8 7 ( 8 ) : 1 1 2 8 -1 1 3 7 g a w e l nj , j o h n s o n g r , s a u v e r . i d e n t i f i c a t i o n o f g e n e t i c d i v e r s i t y a m o n g l o r p e t a l u m c h i n e n s e v a r . r u b r u m i n t r o d u c t io n s . j . e n v i r o n . h o rt . 1 9 9 6 , 1 4 ( 1 ) : 3 8 - 4 1 g i o v a n n o n i j j , wi n g r a , g a n a l m w , e t a l . i s o la t i o n o f m o le c u l a r m a r k e r s f r o m s p e c i f i c c h r o m o s o m a l i n t e rv a l s u s i n g d n a p o o l s f r o m e x s it i n g m a p p i n g p o p u l a t i o n s . n u c l a c i d s r e s . , 1 9 9 1 , 1 9 : 6 5 5 3 - 6 5 5 8 g o n z a l e z j m, f e r r e r e . r a n d o m a m p l i f i e d p o ly m o r p h i c d n a a n a ly s i s i n h o r d e u m s p e c i e s . g e n o m e , 1 9 9 3 , 3 6 : 1 0 2 9 - 1 0 3 1 ii 3 认笋硬 l iv f 9 i: 14 ktg 戈i f f 麟农加分厂 f i 旧 g u i d e t fa p o w e r f u l n e w t e c h n i q u e t o q u i c k l y p r e p a r e h u n d r e d s o f p la n t e x t r a c t s f o r p c r a n d r a p d a n a ly s i s . n u c l a c i d s r e s ., 1 9 9 4 , 2 2 ( 9 ) : 1 7 7 2 - 1 7 7 3 h a l w a r d t , s t a l k e r h t , l a r u e e , e t a l . u s e o f s i n g le - p r i m e r d n a a m p l i f i c a t i o n s i n g e n e t i c s t u d i e s o f p e a n u t ( a r a c h is h y p o g e a l .) . p l a n t m o l . b i o l . 1 9 9 2 , 1 8 : 3 1 5 - 3 2 5 h u j , v a n e y s d e n j , q u i r o s c f . g e n e r a t i o n o f d n a - b a s e d m a r k e r s i n s p e c i f i c g e n o m e r e g i o n s 妙 t w o - p r i m e r r a p d r e a c t i o n s . g e n o m e r e s . , 1 9 9 5 , 4 : 3 4 6 - 3 5 1 h u a n g h , d a n e f , k u b i s i a k t l . a l l o z y m e a n d r a p d a n a l y s is o f t h e g e n e t i c d i v e r s it y a n d g e o g r a p h i c v a r i a t i o n i n w i l d p o p u l a t i o n s o f t h e a m e r i c a n c h e s t n u t ( f a g a c e a e ) . a m e r ic a n j . o f b o t a n y , 1 9 9 8 , 8 5 ( 7 ) : 1 0 1 3 - 1 0 1 9 h u n t g j , p a g e r e . p a t t e r n s o f i n h e r it a n c e w i t h r a p d m o l e c u l a r m a r k e r s r e v e a l n o v e l t y p e s o f p o l y m o r p h i s m s i n t h e h o n e y b e e . t a g , 1 9 9 2 , 8 5 : 1 5 - 2 0 l a i n a , b h a t i a s , b a n g a s s , e t a l . p o t e n t i a l u s e o f r a n d o m a m p l i f i e d p o l y m o r p h ic d n a ( r a p d ) t e c h n i q u e t o s t u d y t h e g e n e t i c d i v e r s i t y i n i n d i a n m u s t a r d ( b r a s s i c a j u n c e a ) a n d i t s r e l a t i o n s h i p t o h e t e r o s i s . t a g , 1 9 9 4 , 8 8 : 1 1 6 - 1 2 2 j o u r d r e n c , b a r r e t p , h o r v a i s r , e t a l . i d e n t i f i c a t i o n o f r a p d m a r k e r s l i n k e d t o l i n o l e n i c a c i d g e n e i n r a p e s e e d . e u p h y t i c a , 1 9 9 6 , 9 0 : 3 5 1 - - 3 5 7 k o l l e r b , e t a l . i d e n t i f i c a t i o n o f a p p l e c u l t i v a r s u s i n g r a p d m a r k e r s . t a g , 1 9 9 3 , 8 5 : 9 0 1 - 9 0 4 l a m b o y w f . c o m p u t i n g g e n e t i c s i m i l a r it y c o e f f i c i e n t s f r o m r a p d d a t a : t h e e ff e c t o f p c r a rt i f a c t s . g e n o m e r e s . , 1 9 9 4 , 4 ( 1 ) : 3 1 - 3 7 l a m b o y w f . c o m p u t i n g g e n e t i c s i m i l a r i t y c o e ff i c i e n t s f r o m r a p d d a t a : c o r r e c t i n g f o r t h e e ff e c t s o f p c r a rt i f a c t s c a u s e d b y v a r i a t i o n i n e x p e r i m e n t a l c o n d i t i o n s . g e n o m e r e s . , 1 9 9 4 , 4 ( 1 ) : 3 8 - 4 3 l a n n e r c , b ry n g e l s s o n t , g u s t a f s s o n m. g e n e t i c v a l i d it y o f r a p d m a r k e r s a t t h e i n t r a - a n d i n t e r - s p e e i f i c l e v e l i n w i l d b r a s s i c a s p e c i e s w i t h n - 9 . t a g , 1 9 9 6 , 9 8 : 9 - 1 4 k u m a r l s . d n a m a k e r s i n p l a n t i m p r o v e m e n t : a n o v e r v i e w . b i o t e c h n o l o g y a d v a n c e s . 1 9 9 9 , 1 7 : 1 4 3 -1 8 2 ma r i l l i a ees c o l e s g j . t h e u s e o f r a p d m a r k e r s i n h o r d e u m p h y l o g e n y . g e n o m e , 1 9 9 6 , 3 9 : 6 4 6 - 6 5 4 m a r s h a l l p , m a r c h a n d m - c , l i s i e c z k o z , e t a l . a s i m p l e m e t h o d t o e s t i m a t e t h e p e r c e n t a g e o f h y b r i d i t y i n c a n o l a ( b r a s s i c a n a p u s ) f i h y b r i d s . t